脐带血重建造血潜能的母体及新生儿因素分析

脐带血作为一种备选的移植用造血干细胞,能否成功植入与输入受者体内的总有核细胞（total nucleated cells,TNC）数、CD34＋细胞数及粒-巨噬细胞集落形成单位（colony-forming unit-granulocyte-macrophage,CFU-GM）有关。本研究探讨影响脐带血造血潜能的母体及新生儿因素。按照广州脐血库标准化操作常规（SOP）,对脐带血样本进行筛选、处理、检测及冷冻,回顾性分析已保存的4615份脐带血样本的造血细胞参数及其与母体及新生儿特征的相关性。结果表明：脐带血采集量（Mean±SD：95.23±22.42ml;Median：91.85ml）与处理前TNC[Mean±SD：（1.34±0.49）×109;Median：1.25×109]及处理后TNC[Mean±SD：（1.21±0.42）×109;Median：1.14×109]、CD34＋细胞数[Mean±SD：（5.14±4.55）×106;Median：4.08×106]、CFU-GM[Mean±SD：（9.72±8.66）×105;Median：7.53×105]三者均显著相关（p〈0.001）。在供者因素中,只有婴儿出生体重与脐带血采集量及造血细胞参数均呈显著正相关（p〈0.001）,较大婴儿的脐带血在采集量、TNC、CD34＋细胞数及CFU-GM方面均呈现优势（p〈0.001）。母亲年龄与上述各项参数均无显著相关。孕龄与处理前/后TNC正相关（p〈0.001;p〈0.001）,与CD34＋细胞数呈负相关（p=0.04）,而与采集量及CFU-GM均无显著相关。剖宫产时采集的脐带血量虽然高于阴道分娩（Mean±SD：97.05ml±22.23mlvs.92.53ml±22.43ml;Median：94.08mlvs.88.82ml;p〈0.001）,但各细胞参数均低于阴道分娩（p〈0.001）。男婴脐带血的采集量和CD34＋细胞数高于女婴（Mean±SD：96.41ml±22.31mlvs.93.95ml±22.47ml;Median：93.27mlvs.90.14ml;p〈0.001）;[Mean±SD：（5.28±5.04）×106vs.（5.00±3.94）×106;Median：4.18×106vs.3.94×106;p=0.042]、但处理前TNC及处理后TNC均低于女婴[Mean±SD：（1.31±0.50）×109vs.（1.37±0.47）×109;Median：1.22×109vs.1.28×109;p〈0.001];[Mean±SD：（1.18±0.42）×109vs.（1.24±0.41）×109;Median：1.10×109vs.1.17×109;p〈0.001],二者CFU-GM的差异无统计学意义。结论：本研究数据有助于优化脐带血供者筛选及提高脐血库资源利用率。脐血库应侧重选择体重较大、阴道分娩的新生儿供者,优先处理采集量大、TNC高的脐带血样本。     

G-CSF对供者外周血CD34+细胞黏附分子表达的影响

目的通过观察健康供者外周血CD34+细胞黏附分子表达的变化,探讨粒细胞集落刺激因子(G-CSF)动员的机制及其对供者的影响。方法应用流式细胞仪分析15名健康供者在接受G-CSF10μg.kg-1.d-1动员前(Pre-G)、动员d4和停止动员后7d(Pro-G)外周血CD34+细胞比例及其表面黏附分子非常延迟抗原-5(VLA-5,CD49e)和L-选择素(CD62L)的表达情况。结果G-CSF动员后供者外周血CD34+细胞比例较动员前增高5-10倍,停止动员后恢复至动员前水平。G-CSF动员后CD34+CD49e+细胞比例(97.74%)明显高于动员前(79.95%),停止动员后7d CD34+CD49e+细胞比例基本恢复至动员前水平;CD34+CD62L+细胞比例在G-CSF动员过程中无明显改变;CD34+细胞表面CD49e与CD62L的平均荧光强度于动员后呈减弱趋势,但无显著统计学意义。结论G-CSF动员后d4可显著增加供者外周血CD34+细胞比例,可致CD34+CD49e+细胞比例一过性增加,但不影响CD34+CD62L+细胞群的比例。     

多家实验室体外测定比较脐带血造血干细胞的特征

背景由于用于移植的脐血广泛分布于世界各地,故了解多家实验室测定结果的变异很重要。研究设计与方法通过4个试验对多家实验室的变异情况实施评估,有核细胞(NC)、单个核细胞(MNC)测定用血液分析仪[HAs],CD34 细胞的测量用流式细胞仪。试验1为评价实验室内细胞数测量结果的重     

原核表达重组人白介素-3及其对脐带血造血干细胞体外增殖的影响

目的研究原核表达重组人白介素-3(rhIL-3)及其对脐带血造血干细胞体外增殖的影响。方法构建pET-43.1-rhIL-3表达载体,克隆至BL21菌株,并进行中试发酵生产,所得包涵体经透析复性后,采用阳离子交换柱纯化,纯化产物送N-端测序。Ficoll密度梯度离心结合免疫磁珠法富集人脐带血中CD34+细胞,以不同浓度rhIL-3及干细胞因子(SCF)、Fms样酪氨酸激酶受体-3配体(FL)和促血小板生成素(TPO)因子组合培养1周,测定细胞总数,计算CD34+细胞增殖倍数。结果在SCF和FL存在下,rhIL-3可明显促进造血干祖细胞增殖,但较无rhIL-3时CD34+细胞占细胞总数的比例有所下降。与SCF、FL共同作用时的最佳浓度在15 ng/mL左右,与SCF、FL、TPO共同作用时的最佳浓度在50 ng/mL左右。结论高效表达及纯化的rhIL-3与SCF、FL和TPO细胞因子组合对脐带血造血干细胞具有良好的增殖作用。     

当前造血干细胞研究面临的挑战

在新千年到来的时刻 ,综观一下造血干 /祖细胞基础和临床研究当前面临的众多难题 ,会有益于探讨我国实验和临床血液学如何赶上国际先进水平的。造血干细胞究竟是CD3 4阳性还是阴性 ?近年来国际文献中有些报告发现CD34/Lin阴性细胞具有长期重建造血的活性 ,引起了广泛的注意。从发育生物学观点来看 ,CD34 Lin- 细胞来自CD34- Lin- 的论点是合理可信的。已定向发育为造血系统的干细胞 (即造血干细胞 )都来自尚未定向的胚胎中胚层干细胞 ,所以CD34 Lin- 细胞起源于CD34- Lin- 细胞。当干细胞分化为各系的祖细胞 ,出现髓 /淋巴各系的专一…     

供者及脐血采集相关的变量对脐血库的产品质量的影响[英]／AskanS…／／Transfusion

背景目前，优化脐血库产品质量问题已成为焦点。本文研究选择供者及脐血采集相关变量的影响因素。研究设计和方法作者对2001年2月1日～2002年2月28日期间采集的脐带血单位(CBUs)作回顾性调查。以预处理的容量和总的有核细胞(TNC)计数以及处理后的CD34细胞计数作为产品质量指标。结果2084单位CBUs中，1628单位作了容量测定和TNC计数，1124单位CBUs作了CD34 细胞计数。     

健康供者特征对rhG-CSF预激的骨髓采集物CD34+细胞和T细胞亚群的影响

目的 探讨健康供者特征对rhG-CSF预激的骨髓(G-BM)采集物造血和免疫细胞成分的影响.方法 150名健康供者体内应用rhG-CSF 5 μ·kg-1·d-1连续4～5 d,第4,5天采集骨髓和外周血,用流式细胞术测定G-BM采集物中的CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD14+、CD34+细胞以及CD3+CD4-CD8-调节性T细胞的数量,并分析供者性别、年龄、体重、是否妊娠等特征对G-BM成分的影响.结果 150名健康供者G-BM所含有核细胞,淋巴细胞,CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD14+、CD34+细胞以及CD3+CD4-CD8-调节性T细胞的中位值分别为31 050(12 200～58 100)、2122(506～6618)、1344(307～4791)、692(145～3038)、616(112～2575)、986(265～2958)、63(11～505)和83(9～390)/μl.年龄≤38岁的供者G-BM中的有核细胞、CD34+细胞以及CD3+ CD4-CD8-调节性T细胞的数量分别为33800(18600～57100)、76(22～505)和97(11～380)/μl,显著高于年龄＞38岁的供者[分别为28 000(12 200～58 100)、49(11～220)和65(9～389)/μl],P值分别为＜0.05,＜0.001和0.001.外周血单核细胞计数＞0.37×109 /L的供者G-BM中有核细胞的数量[33550(12 200～57 100)/μl]显著高于≤0.37×109 /L的供者[27 150(13 800～58 100)/μl](P=0.005).多因素分析显示年龄和外周血单核细胞是G-BM中有核细胞采集量的影响因素[HR值分别为0.41和2.87;P值分别为0.01和0.003];年龄是G-BM中CD34+细胞采集量的唯一影响因素(HR=0.26;P值=0.001);年龄还是G-BM中CD3+ CD4-CD8-调节性T细胞数量的影响凶素[HR值为0.31;P=0.001].结论 年龄是影响G-BM中有核细胞、CD34+细胞和CD3+ CD4-CD8-调节性T细胞采集数量的因素,年龄≤38岁的供者更易采集满足临床需要的有核细胞和CD34+细胞;外周血单核细胞＞0.37×109 /L的供者采集的G-BM含有较多数量的有核细胞.     

胎儿骨髓基质细胞协同外源性细胞因子对脐带血CD34^＋细胞的体外扩增作用

SCF和FL可促进造血干 祖细胞的增殖 ,是强有力的共刺激因子 ,而骨髓基质细胞所产生的c kit及Flk 2水平很低 ,因此基质细胞培养结合含有SCF或FL的细胞因子组合可提高造血干 祖细胞的扩增效率[1 ] 。SCF IL 3 IL 6 G CSF EPO和SCF IL 3 IL 6 FL EPO二种组合可高效扩增造血干 祖细胞[2 ] ,因此我们拟以上述二种细胞因子组合结合胎儿骨髓基质细胞培养以观察对脐带血CD3 4 细胞的体外扩增作用。材料与方法脐带血样品采自本院妇产科 ,胎儿骨髓采自 5 - 6月水囊引产的健康胎儿的四肢骨。胎儿骨髓基质细胞贴壁层的建立采用…     

健康供者异基因外周血造血干细胞移植采集因素分析

目的干细胞的足量采集是异基因外周血造血干细胞(allo-PBSCs)成功移植的重要因素。本研究分析比较了健康供者异基因外周血造血干细胞动员是否良好的采集相关因素。方法回顾性分析了71例于新桥医院在2017—2019年进行的异基因外周血造血干细胞采集的临床数据。分析以CD34+细胞作为研究指标,包括年龄、动员前和采集前血常规结果、干细胞产品相关数据等。CD34+细胞数量>4.0×10 ⁶/Kg被认为是异基因外周血造血干细胞成功移植的最小剂量,也是本研究的靶剂量。本文以此为界,分为两组健康供者。结果 CD34+细胞相关因素是年龄、WBC、Plt,动员良好的健康供者采集产品中所获得的单个核细胞(mononuclear cells,MNC)数量和CD34+数量较高。结论本研究认为年轻的健康供者、采集前有较高的WBC和Plt数量,能获得较高的CD34+细胞数量,对成功进行异基因外周血造血干细胞移植有重要意义。     

CS-3000PLUS血细胞分离机采集37名供者外周血造血干细胞效果的分析

近年来，异基因外周血造血干细胞移植技术发展迅速并广泛应用于临床，是治疗多种血液病和实体瘤的有效方法，但采集物的特性和数量直接影响移植的效果。我们对CS-3000plus血细胞分离机应用单个核细胞（MNC）采集程序采集干细胞效果进行了观察和分析，现报告如下。     

脐血CD34+细胞与单个核细胞的体外扩增特性研究

目的　探讨CD34+ 富集细胞和单个核细胞 (MNC)的体外扩增特性。方法　利用Min iMACS系统富集CD34+ 细胞 ,在相同条件下与同批MNC进行对照培养 ;观察了再次富选和MNC培养上清 (MNC SN)对CD34+ 富集细胞扩增的影响 ;并尝试了MNCCD34- 细胞的培养。结果　虽然CD34+ 富集细胞具有很高的扩增潜力 ,但在培养过程中 ,其集落密度和CD34 + 细胞含量却始终呈下降趋势 ,而MNC在培养中却出现了一个上升的趋势 ,集落密度和CD34+ 细胞含量分别由第 0天的 (4 12± 16 7) 10 5细胞和 (1.12± 0 .4 2 ) %增至第 7天的 (116 2± 5 6 6 ) 10 5细胞和 (4 .17± 1.4 4 ) % ;再次富选可以使培养过的CD34+ 富集细胞的总细胞和CD34+ 细胞扩增能力大大提高 ;MNCCD34- 细胞具有集落形成和转化为CD34+ 细胞的能力 ;MNC SN对CD34+ 富集细胞的集落形成有促进作用 ,而同时又对CD34+ 细胞有促分化作用。结论　CD34+ 富集细胞在体外大量扩增的同时存在大量分化 ,其在培养过程中产生的CD34-细胞对CD34+ 细胞的扩增有抑制作用 ;脐血MNC中大量的CD34- 细胞含有造血干 祖细胞 ,其分泌的细胞因子有促进CD34+ 细胞向较为成熟的集落形成祖细胞分化的作用。     

Associations among birth weight, placental weight, gestational period and product quality indicators of umbilical cord blood units

Introduction

Numbers of CD34+ cell and total nucleated cell (TNC) and cord blood volume are commonly used as indicators for haematopoietic potential of umbilical cord blood (UCB) units. The purpose of this study was to investigate the relationship between donor-related factors and the quality indicators of UCB.

Methods

Obstetric and neonatal clinical laboratory data of a total of 1549 UCB units were obtained from Buddhist Tzu Chi Stem Cells Center (BTCSCC) Cord Blood Bank. A retrospective multivariate analysis was conducted to analyze the data.

Results

Our results showed that birth weight had positive correlations with each of the clinical features of CD34+ cell number, TNC count and unit volume of UCB, followed by the placental weight. Longer gestational period would decrease CD34+ cell number and volume of UCB. Female baby and mode of vaginal delivery of neonates were found to have larger amount of TNC in UCB.

Conclusion

Our results would be helpful and beneficial in building up standard criteria for evaluating stored UCB units.     

混合脐血血浆对脐血CD34^＋细胞体外扩增的作用

采用两步法分离出脐血CD34~ 细胞,比较研究了混合脐血血浆联合IL-3,IL-6,GM-CSF,Epo 4种中、晚期造血因子和单纯的4种造血因子情况下脐血CD34~ 细胞的体外扩增。结果表明,混合脐血血浆联合造血因子对粒-巨噬细胞集落形成单位(granulocyte-macrophage colony-forming unit,CFU-GM),红系爆式集落形成单位(burst-forming unit of erythriod,BFU-E),混合集落形成单位(minxed colony-forming unit,CFU-mix)3种集落的扩增效果明显优于单纯的4种造血因子联合组,差异具有统计学意义(P<0.01),但单纯混合脐血血浆扩增效果较差。脐血造血细胞扩增对子成人脐血移植有重要意义。上述结果提示,混合脐血血浆的扩增成功,可代替或弥补早期造血生长因子的作用,用于脐血造血细胞的体外扩增。     

Potential role of N-Succinyl-Chitosan in immune reconstitution after umbilical cord blood transplantation in mice

How to shorten the immune convalescence required after transplantation in recipients is still an austere medicinal problem. Speed-up recovery means less infection opportunity and high survival. In this study, an immune-deficient mouse model was developed by lethally irradiation to evaluate the immune reconstitution effect of N-Succinyl-Chitosan (NSC), a water soluble low molecular weight chitosan derivative, after umbilical cord blood stem cells transplantation, including hematopoiesis parameters detection, T-cell phenotype analysis and pathological comparison; effects of NSC on proliferation of umbilical cord blood stem cell has also been evaluated in vitro. By comparison and analysis, we found the combination of NSC and hematopoietic growth factors could dramatically shorten the time required for the recovery of hematopoiesis, T-cell phenotype and injured spleen after transplantation, suggesting that NSC may hasten the immune recovery and therefore may shorten the time of exposure to life-threatening opportunistic infections in transplant recipients. Moreover, we demonstrated that NSC was effective on the proliferation and clone of umbilical cord stem cell in vitro, suggesting NSC could speed up the immune reconstitution in umbilical cord blood transplantation by enlarge the number of umbilical cord blood stem cell.     

脐血造血干细胞低温保存方法的探讨

目的 探讨脐血造血细胞的低温保存方法。方法 分别用程控降温液氮保存法、非程控降温液氮保存法和-80℃非程控降温保存法保存脐血有核细胞。结果 3种方法保存脐血有核细胞均获得较满意的结果。结论 用羟乙基淀(HES)自然沉淀法和低速离心法分离脐血有核细胞，获得较满意的回收率；用-80℃非程控降温保存法保存脐血有核细胞，可降低二甲基亚砜(DMSO)对细胞的毒性作用，适用于短期保存造血细胞。     

脐带血采集新方法的研究

对脐带血采集新方法的研究旨在为研究脐带血造血细胞移植的可行性和为临床造血干细胞移植的来源服务。实验结果显示采用改良的封闭式采血法（优化法）收集脐带血。血量均可达１２０ｍｌ以上，平均１３２．２±１２．１３ｍｌ，最多一份达１５８ｍｌ。病原学检测结果均为阴性，无凝集现象发生。同时检测单份脐带血造血细胞数量为：有核细胞１８．９×１０±１７×１０，单个核细胞８．２×１０±０．８×１０。故采用优化法是一种可取的好方法，其脐带血采集量和单份脐带血造血细胞数量可达到移植所需的范围。而保证脐带血数量和质量的关键是及早断脐和及时穿刺脐带血管。     

HLA不全相合无关脐血移植治疗急性淋巴细胞白血病

目的 研究HLA不全相合无关脐血移植治疗血液系统恶性肿瘤的疗效、造血重建、免疫重建情况及移植相关并发症。方法 对1例急性淋巴细胞白血病首次缓解的5岁女性患儿行HLA一个位点不合无关男性供体的脐血移植。预处理方案采用BU/CY(BU 16mg·kg~(-1),CY 120mg·kg~(-2),移植物抗宿主病(GVHD)的预防采用CSA 骁悉(MMF)方案:CSA 3mg·kg~(-1)·d~(-1),MMF 250mg·d~(-1)。移植有核细胞数14.6×10~7/kg(受者体重),CD34~ 细胞7.24×10~5/kg(受者体重)。结果 移植后 6天～ 8天外周血白细胞(WBC)降至0, 27天WBC为1.2×10~9/L,中性粒细胞绝对计数(ANC)>0.5×10~9/L, 39天血小板计数(Plt)>20×10~9/L, 53天Plt>50×10~9/L, 60天Plt>100×10~9/L、Hb>100g·L~(-1)。 12天多聚酶链反应(PCR)检测Y染色体基因阳性; 39天受者外周血VNTR法检测DNA指纹图显示为供者型; 44天受者HLA-DRB1为:0701、0901,为供者白细胞抗原表达; 49天外周血及骨髓染色体核型结果为:46,XY,100％嵌合。 26天出现皮疹及肝肿大,诊断为Ⅱ°GVHD,使用甲基强的松龙2mg·kg~(-1)·d~(-1),症状控制。 98天康复出院。结论 开展HLA不全相合无关供体脐血移植在中国是可行的、有效的、较安全的,脐血的免疫学特性值得深入探讨。     

液氮冻存时间对605份脐血造血干细胞质量和临床移植效果的影响

目的 探讨液氮冻存时间对脐血造血干细胞质量和临床移植效果的影响.方法 对上海脐血库已经应用于临床移植的605份脐血进行研究,脐血平均冻存时间为820(88～ 2651)d,测定脐血复苏之后的有核细胞、CD34+细胞数量、细胞回收率、细胞活力,粒-单核细胞集落形成单位(CFU-GM),结合脐血冻存时间、临床移植效果进行统计分析.结果 复苏后细胞回收率、细胞活力与冻存时间无显著相关性,CFU-GM平均(109.6～ 105.7)个/1×105,随冻存时间延长逐渐降低(P=0.011).临床移植患者的造血重建时间、植入失败率、急性移植物抗宿主病、总体生存率与脐血冻存时间长短无显著相关性.结论 深低温冻存时间长短对脐血复苏后细胞回收率、细胞活力、临床移植效果无显著影响,冻存时间较长的脐血复苏后CFU-GM在正常标准范围内略有下降,保存3～7年的脐血仍能维持正常细胞活性和功能、达到良好的临床移植效果.     

脐带血单个核细胞体外培养分化为肝细胞的实验观察

目的探讨脐带血单个核细胞在体外定向分化为肝细胞的条件及能力,为建立脐血干细胞移植治疗慢性肝衰竭提供实验依据。方法采集脐带血分离单个核细胞后,在实验组加入成纤维细胞生长因子(FGF)及促肝细胞生长因子(HGF)、或FGF加胎肝上清液培养,对照组只加FGF培养,观察细胞生长分化状况,免疫组化检测两组人甲胎蛋白(AFP)和白蛋白(Alb)。结果实验组可见类圆形及多边形细胞,呈类肝细胞形态,对照组大多为梭形细胞,未见多边形细胞;实验组细胞AFP、Alb免疫组化染色为阳性,对照组未见AFP,Alb阳性细胞。HGF的诱导分化效果优于胎肝上清液。结论脐带血单个细胞在HGF或胎肝上清液的诱导下可以定向分化为能分泌Alb及AFP的类肝细胞。     

人骨髓基质细胞协同外源性细胞因子对脐血CD34+细胞的体外扩增作用

目的　探讨人骨髓基质细胞 (hBMSC)协同以干细胞因子和FL为主的细胞因子对脐血CD3 4 + 细胞的体外扩增作用。方法　采用免疫磁珠法分选脐血CD3 4 + 细胞 ,以SCF +IL 3+IL 6 +FL +EPO组合高效扩增CD3 4 +细胞[1] ,并结合该细胞因子组合接种到预先照射 (2 0Gy)的hBMSC上 ,d10结束培养 ,收获细胞分别作细胞计数、集落培养和流式细胞术检测CD3 4 + 细胞数。结果　本法获得的脐血CD3 4 + 细胞纯度较高 (92± 0 .0 4 ) % ,在hBMSC组培养的d2 ,造血细胞几乎都粘附到hBMSC上 ,随着培养时间的延长 ,CD3 4 + 细胞比例不断下降。hBMSC组与无hBMSC组相比 ,除细胞总数扩增倍数外 ,CFU GM、BFU E、CD3 4 + 细胞扩增倍数差异有显著性意义 (P <0 .0 5 )。结论　①脐血来源的CD3 4 + 细胞粘附于滋养层上形成造血灶 ,且 10d后造血细胞仍具有体外集落形成能力 ,表明骨髓基质细胞可支持并维系体外造血 ;②hBMSC协同外源性细胞因子可能是扩增造血干 /祖细胞的较理想方案