人皮肤血管瘤组织中TGF-β1、CyclinD1的表达及相关性分析

目的:探讨TGFβ1、CyclinD1在血管瘤发生、发展过程中的表达状况及其意义。方法:采用免疫组织化学方法(SP法)检测人皮肤血管瘤增生期、退化期及其正常皮肤组织中TGFβ1、CyclinD1的表达水平,并进行相关性分析。结果:退化期血管瘤内皮细胞中TGFβ1表达水平明显高于增生期血管瘤组织,差异有显著性(P<0.05);增生期血管瘤内皮细胞CyclinD1表达水平高于退化期,差异有显著性(P<0.05);增生期和退化期TGFβ1和CyclinD1的表达均呈负相关(P<0.05)。结论:TGFβ1、CyclinD1通过影响血管瘤内皮细胞的增殖和血管生成而在血管瘤的病理演变过程中起着重要作用。     

细胞间黏附分子1和血管细胞黏附分子1在血管瘤组织中表达的意义

目的：探讨细胞间黏附分子1（ICAM-1）和血管细胞黏附分子1（VCAM-1）在小儿血管瘤增殖退化病理生理演变过程中的表达及作用机制.方法：应用SABC免疫组化法检测28例增殖期血管瘤及22例退化期血管瘤的ICAM-1、VCAM-1在血管内皮细胞上的表达情况,同时以血管畸形及正常皮肤为对照.结果：ICAM-1在增殖期血管瘤强阳性表达,退化期阳性表达,两时期差异十分显著（P＜0.01）;VCAM-1在增殖期和退化期血管瘤均为阳性表达,两时期无明显差异;ICAM-1和VCAM-1在血管畸形和正常皮肤几乎均为阴性表达,与不同时期血管瘤相比差异均十分显著（P＜0.01）.结论：ICAM-1可能在血管形成早期发挥作用,介导内皮细胞间黏附,参与血管瘤发病和消退的病理过程.     

P57~(kip2)在皮肤血管瘤中的表达及意义

目的:探讨P57kip2蛋白在血管瘤发生、发展及退化过程中的表达状况及意义。方法:采用免疫组织化学方法(SP法)检测人皮肤血管瘤增生期、退化期及正常皮肤组织中P57kip2的表达水平,并结合第Ⅷ因子相关抗原的免疫组织化学染色证实表达P57kip2的细胞是血管内皮细胞。利用计算机图像分析技术测量不同时期血管瘤组织和正常皮肤组织P57kip2表达的平均光密度和平均阳性面积率。结果::P57kip2在增生期血管瘤内皮细胞的表达低于退化期,差异有显著性(P<0.005);退化期血管瘤内皮细胞P57kip2表达水平与正常组织相比,差异有显著性(P<0.05)。结论:P57kip2蛋白在血管退化期可能发挥抑制血管瘤内皮细胞增殖的作用,与血管瘤的消退有一定的关系。     

皮肤血管瘤的组织学分型和鉴定

目的 :探讨皮肤血管瘤的组织学分型标准。方法 :采用组织学常规切片技术和HE染色法对临床皮肤血管瘤标本进行病理复检 ,用免疫组织化学方法检测复检后各期血管瘤和血管畸形中血管内皮生长因子 (vascularen dothelialgrowthfactor,VEGF)的表达 ,结合图像分析技术对组织学分型后的标本进行分析鉴定。结果 :将 35例标本分为血管瘤 2 0例 ,其中增生期 8例 ,退化期 12例 ;血管畸形 15例。增生期血管瘤表现出明显的血管内皮细胞增殖、血管生成 ,VEGF表达强阳性 ;退化期血管瘤血管管腔扩张、退化 ,管壁细胞数减少 ,VEGF表达极弱 ;血管畸形中血管极度扩张 ,VEGF表达极弱。结论 :血管瘤和血管畸形组织形态学上的变化反映了各自的功能活动状态     

血VEGF和尿bFGF在血管性疾病鉴别诊断中的应用价值

目的 探讨血清血管内皮细胞生长因子(VEGF)和尿碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)在血管性疾病鉴别诊断中的应用价值.方法 采用ELISA法测364例各种血管性疾病患儿(增生期血管瘤组146例,消退期血管瘤组106例,血管畸形组112例)及阴性对照组111例患儿的血清VEGF浓度和440例各种血管性疾病患儿(增生期血管瘤组154例,消退期血管瘤组148例,血管畸形组138例)及阴性对照组115例患儿的尿bFGF相对浓度;对测得的数值以SAS 6.12软件进行统计分析,并绘制受试者工作特征曲线(ROC曲线),确定诊断界点.结果 增生期血管瘤组的血VEGF浓度、尿bFGF相对浓度均显著高于消退期血管瘤组、血管畸形组和阴性对照组,差异均有统计学意义(均P＜0.01),而后三组之间差异均无统计学意义(均P＞0.05);血VEGF、尿bFGF鉴别增生期血管瘤与消退期血管瘤、血管畸形和阴性对照的诊断界点分别为99.6 pg/mg和0.16 ng/mmol;血VEGF和尿bFGF的ROC曲线下面积、诊断灵敏度及特异度分别为99.7%、99.3%、99.7%和91.9%、98.7%、71.1%;血VEGF与尿bFGF的ROC曲线下面积差异无统计学意义(P＞0.05).结论 血VEGF、尿bFGF均有助于血管性疾病的鉴别诊断,在临床诊断中均具有较高的应用价值.

Abstract：

Objective To evaluate the role of serum vascular endothelial growth factor(VEGF)and urine basic fibroblast growth factor(bFGF)in the differential diagnosis of vascular anomalies by receiver operating characteristic curve.Methods Using the method of enzyme linked immunosorbent assay (ELISA),364 cases of various vascular anomalies(proliferating hemangiomas,n=146;hemangiomas,n=106;vascular malformations,n=112)and 440 cases of various vascular anomalies(proliferating hemangiomas,n=154;involuting hemangiomas,n=148;vascular malformations,n=138)subjects were examined for the serum levels of VEGF and the urine bFGF respectively.Nonparametric statistical tests were used for data analysis.The VEGF levels of proliferating hemangioma,involuting hemangioma,vascular malformation and control groups were analyzed by the Kruskal-Wallis test.When there was significance (P＜0.05),a subgroup analysis was performed by the Mann-Whitney U test. A receiver operator characteristic(ROC)curve was constructed for both the serum levels of VEGF and urine bFGF to determine the optimal diagnostic cut-off to differentiate proliferating hemangioma from involuting hemangioma,vascular malformation and controls.Results The serum level of VEGF and the urine bFGF in proliferating hemangiomas were significantly higher than those in involuting hemangiomns,vascular malformations and negative controls(P＜0.01). And the differences among the latter three groups were not statistically significant(P＞0.05).The optimal diagnostic cut-off point of serum VEGF and urine bFGF to differentiate proliferating hemangioma from involuting hemangioma,vascular malformation and controls was 99.6 pg/mg and 0.16 ng/mmol respectively. The area under ROC curve,the sensitivity and specificity were 99.7%,99.3%,99.7% and 91.9%,98.7%,71.1% respectively. The differences of the area under ROC curve of serum VEGF and urine bFGF showed no statistical significance(P＞0.05).Conclusion Serum VEGF and urine bFGF are helpful for differentiating proliferating hemangioma from involuting hemangioma,vascular malformation and controls.Both parameters have higher values of clinical application.     

PTEN与Survivin在人皮肤血管瘤组织中的表达及意义

目的 探讨PTEN与Survivin在血管瘤发生、发展过程中的表达及意义.方法 应用免疫组织化学方法和RT-PCR法检测了皮肤血管瘤增生期、退化期以及正常皮肤组织中PTEN和Survivin的表达水平.结果 ①免疫组织化学结果:PTEN在增生期血管瘤内皮细胞的表达低于退化期,差异有显著性意义(P<0.05);退化期血管瘤内皮细胞PTEN表达水平高于正常皮肤组织,差异有显著性意义(P<0.05).Survivin在增生期血管瘤内皮细胞的表达明显高于退化期血管瘤内皮细胞和正常皮肤组织血管内皮细胞(均P<0.01),而Survivin在正常皮肤组织血管内皮细胞的表达与退化期血管瘤内皮细胞的表达差异无显著性意义(P>0.05).②RT-PCR结果:在退化期血管瘤和正常皮肤组织中均有明显的PTEN mRNA表达,而增生期血管瘤中PTEN mRNA的表达较弱;在增生期血管瘤中有明显的Survivin mRNA表达,而退化期血管瘤和正常皮肤组织中Survivin mRNA均无表达.结论 PTEN和Survivin参与了血管瘤的发生、发展和退化,PTEN通过诱导内皮细胞凋亡而促进血管瘤由增生向退化的转变,Survivin通过抑制内皮细胞凋亡而促进血管瘤的增生,两者在血管瘤的发生发展中发挥协同效应.     

P27在人皮肤血管瘤不同时期的表达及意义

目的 :探讨P2 7蛋白在血管瘤发生、发展及退化过程中的表达状况及其意义。方法 :采用免疫组织化学方法 (SP法 )检测人皮肤血管瘤增生期、退化期及正常皮肤组织中P2 7的表达水平 ,并结合第Ⅷ因子相关抗原的免疫组织化学染色证实表达P2 7的细胞是血管内皮细胞。利用计算机图像分析技术测量不同时期血管瘤组织和正常皮肤组织P2 7表达的平均光密度和平均阳性面积率。结果 :增生期血管瘤内皮细胞P2 7表达水平低于退化期 ,差异有显著性 (P <0 .0 0 5 ) ,退化期血管瘤内皮细胞P2 7表达水平与正常皮肤组织相比 ,差异有显著性 (P <0 .0 0 1)。结论 :P2 7通过抑制血管瘤内皮细胞增殖和血管生成而在血管瘤的退化过程中起重要作用。     

反义寡核苷酸对血管瘤内皮细胞VEGF表达的影响

目的探讨反义寡核苷酸(AS-ODN)对培养的血管瘤内皮细胞中血管内皮生长因子(vascular endothelialgrowth factor,VEGF)表达的影响。方法将VEGF反义寡核苷酸(AS-ODN)、正义寡核苷酸(S-ODN)和错义寡核苷酸(M-ODN)分别转染至体外培养的皮肤血管瘤内皮细胞中,采用RT-PCR技术检测各组细胞中VEGF mRNA的表达水平;ELISA法检测各组细胞培养上清液中VEGF蛋白分泌的改变。结果 RT-PCR结果显示:AS-ODN组VEGF mR-NA表达水平较空白对照组明显下降,而S-ODN组、M-ODN组与空白对照组比较,其VEGF mRNA表达未见明显改变。ELISA结果显示:AS-ODN组细胞培养上清液中的VEGF蛋白分泌浓度较空白对照组明显下降,而S-ODN组、M-ODN组与空白对照组比较,VEGF浓度未见明显变化。结论 VEGF AS-ODN转染可以有效地抑制血管瘤内皮细胞VEGF mRNA表达,降低VEGF蛋白分泌,从而有效地抑制血管瘤内皮细胞的生长。     

婴幼儿皮肤血管瘤组织中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3和内皮抑素的表达

目的检测婴幼儿皮肤血管瘤不同病理时期血管瘤组织中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3 （caspase-3）和内皮抑素的表达,了解血管瘤的生物学特性,探讨血管瘤的增生及消退机制。方法采用免疫组化链霉菌亲生物素蛋白过氧化物酶连接法检测43例手术切除的婴幼儿皮肤血管瘤标本及6例正常皮肤组织标本中caspase-3和内皮抑素的表达情况,同时用末端脱氧核苷酸转移酶介导的脱氧尿嘧啶核苷三磷酸生物素缺口末端标记法测定同一标本的细胞凋亡情况。结果消退期血管瘤中caspase-3和内皮抑素阳性表达以及凋亡指数均高于增生期（P〈0.05）,增生期二者的阳性表达均高于正常皮肤组织表达（P〈0.05）。caspase-3与内皮抑素的阳性表达呈正相关（r=0.753,P〈0.01）。结论caspase-3和内皮抑素可能通过促进和诱导内皮细胞的凋亡使血管瘤由增生期进入消退期,内皮抑素可增加caspase-3的活性,caspase-3和内皮抑素在血管瘤的发生发展中发挥重要协同作用,有利于血管瘤的自然消退。     

原位RT-PCR检测血管瘤组织Ang2 mRNA及其受体Tie2 mRNA的表达

目的:探讨Ang2及其受体Tie2与血管瘤发生、发展的关系.方法:采用原位RT-PCR方法,对临床收集的62例手术切除的先天性皮肤血管标本(其中增生期血管瘤26例,消退期血管瘤24例,静脉型血管畸形12例)进行Ang2 mRNA,Tie2 mRNA表达水平的检测.结果:增生期、消退期血管瘤及静脉型血管畸形均有Ang2 mRNA,Tie2 mRNA的阳性信号,但是三者阳性信号强弱有显著性差异(P﹤0.01),即静脉型血管畸形Ang2 mRNA,Tie2 mRNA的表达较不同生长时期血管瘤低,增生期血管瘤二者的表达高于消退期.结论:Ang2及其受体Tie2可能与血管瘤及静脉型血管畸形的发生、发展有关.     

FAK在人皮肤血管瘤组织中的表达及意义

目的:探讨黏着斑激酶(FAK)在血管瘤发生、发展过程中的表达及意义。方法:应用免疫组织化学方法(SP)检测人皮肤血管瘤增生期、退化期及其正常皮肤组织中FAK的表达水平,并进行统计学分析。结果:FAK在增生期血管瘤内皮细胞的表达明显高于退化期血管瘤内皮细胞和正常皮肤组织血管内皮细胞(P<0.05)。结论:FAK的表达与血管瘤的发生、发展密切相关。     

血管瘤患儿血清VEGF、E2及尿bFGF的检测及其意义

探讨血管瘤患儿血清血管内皮生长因子(VEGF)、雌二醇(E2)及尿碱性成纤维细胞生长因子(bF-GF)水平的变化,以鉴别血管瘤和血管畸形,并为血管瘤临床分期提供依据。方法选择血管瘤及血管畸形患儿138例,其中增生期血管瘤(增生期血管瘤组)60例,消退期血管瘤(消退期血管瘤组)38例,血管畸形(血管畸形组)40例。采用ELISA法检测各组血清VEGF及尿bFGF水平,采用电化学发光法、使用自动免疫分析仪检测各组血清E2水平,并与正常对照组进行对照。结果增生期血管瘤组患儿血清VEGF、E2及尿bFGF水平显著高于消退期血管瘤组、血管畸形组、正常对照组(均P<0.01)。消退期血管瘤组、血管畸形组患儿血清VEGF水平与正常对照组比较差异均无统计学意义(均P>0.05)。消退期血管瘤组患儿血清E2水平显著高于血管畸形组、正常对照组(P<0.05)。消退期血管瘤组、血管畸形组患儿尿bFGF水平与正常对照组比较差异均无统计学意义(均P>0.05)。增生期血管瘤组女性血清VEGF、E2及尿bFGF水平均显著高于男性,但差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论采用ELISA法检测血清VEGF、尿液bFGF及应用电化学发光法检测血清E2简便、易行、可靠,可为临床鉴别血管瘤和血管畸形,并为临床划分血管瘤分期提供依据。     

雌激素受体与组织蛋白酶D在皮肤血管瘤和血管畸形中的表达

目的 :探讨雌激素受体与组织蛋白酶D(CathepsinD)在皮肤血管瘤中的表达。 方法 :采用HE染色法对临床皮肤血管瘤标本进行分类 ,并应用免疫组织化学方法检测 4 0例不同时期婴幼儿各类皮肤血管瘤及 2 0例周围正常皮肤组织内雌激素受体 (estrogenreceptor,ER)与CathepsinD的表达。 结果 :在皮肤血管瘤增生期及退化期中 ,ER及CathepsinD均有较高表达 ;在皮肤血管畸形和正常皮肤中 ,ER和CathepsinD表达极弱。 结论 :血管瘤和血管畸形在组织学上有较大区别。雌激素可以通ER促进血管瘤的病理发展 ,同时也增强CathepsinD的表达 ,对血管瘤的病理发展发挥作用。雌激素对血管畸形没有作用。     

白血病抑制因子受体在婴幼儿血管瘤组织中的表达及意义

目的:探讨白血病抑制因子受体(LIFR)在婴幼儿血管瘤增殖、消退中的作用。方法:应用SP免疫组织化学方法检测LIFR与CD133、Ki67在血管瘤52例(按Takahashi等的标准分类,其中增生期A组30例,消退期B组22例)、血管畸形16例、正常包皮皮肤15例中的表达水平。所有资料应用软件包进行统计分析,P<0.05具有统计学意义。结果:增殖期血管瘤组LIFR、CD133、Ki67表达水平分别高于消退期血管瘤组、血管畸形组及正常皮肤组,差异具有统计学意义(P<0.01);消退期血管瘤组LIFR、CD133、Ki67阳性细胞率与血管畸形及正常皮肤组织相比,差异无统计学意义(P>0.05)。LIFR与CD133、Ki67在血管瘤组织中表达的阳性率有统计学意义(P<0.01)。结论:①LIFR的表达与血管瘤的增殖与退化过程有着密切关系;②CD133表达阳性的细胞参与了血管瘤的发生与发展过程;③LIFR与CD133、Ki67三者在小儿血管瘤的发生、发展过程中可能具有相互调节和协同的作用。     

基质金属蛋白酶(MMP-1、MMP-9)在小儿血管瘤增生退化中的临床意义研究

目的：通过检测小儿血管瘤基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)的表达，探讨其发病机理。方法：取小儿血管瘤标本60例，其中增殖组30例，退化组30例。另取12例正常组织标本作为对照。用原位杂交方法观察血管瘤微血管内皮细胞中MMP-1mRNA的表达。用免疫组化方法(SABC法)观察MMP—9蛋白的表达。并通过图像分析技术进行定量研究。结果：通过计数方法显示各组MMP—lmRNA阳性表达率差异均无显著性(P＞0．05)。增生组MMP—9蛋白阳性表达率明显高于退化组及正常组，差异有显著性意义(P＜0．05，P＜0．05)。图像分析结果显示MMP-1mRNA阳性面积表达率各组之间差异均无显著性(P＞0．05)。增生组MMP—9蛋白表达明显高于退化组及正常组，差异有显著性意义(P＜0．05，P＜0．05)。结论：MMP—9可能通过促进新生血管形成在血管瘤发病机制中具有重要作用。MMP—l可能通过转录后调控促进血管瘤增生。     

CDK2及其抑制因子P57~(kip2)在血管瘤中的表达和意义

目的:探讨细胞周期素依赖性激酶2(CDK2)及其抑制因子P57kip2在血管瘤发生、发展过程中的表达及意义。方法:应用免疫组织化学方法(SP法)检测人皮肤血管瘤增生期、退化期及其正常皮肤组织中CDK2及P57kip2的表达水平。结果:CDK2在增生期血管瘤内皮细胞的表达明显高于退化期血管瘤内皮细胞和正常皮肤组织血管内皮细胞(P<0.001),而后两组比较差异无统计学意义。P57kip2在增生期血管瘤内皮细胞的表达显著低于退化期血管瘤内皮细胞(P<0.005),退化期血管瘤内皮细胞P57kip2表达水平与正常组织相比,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:CDK2的高表达及P57kip2的低表达或缺失可能在血管瘤的发生发展中起重要作用。     

血管瘤组织中Bcl-2的表达及其意义

目的:探讨Bcl 2与血管瘤发生、发展的关系。方法:采用免疫组织化学和原位杂交的方法,对临床收集的49例血管瘤标本(包括增生期血管瘤27例,退化期血管瘤22例)以及正常皮肤对照 5 例进行 Bcl 2 表达水平的检测。结果:发现Bcl 2在血管瘤增生期的表达高于退化期,差异有显著意义(P<0.01)。结论:Bcl 2 可能在血管瘤的内皮细胞的异常过度增生中起着重要的作用。     

血管内皮生长因子165b对人肝癌HepG2细胞生物学特性的影响

目的：探讨血管内皮生长因子165b（VEGF165b）对人肝癌HepG₂细胞生物学特性的影响,并初步研究其作用机制。方法：HepG₂细胞分为空白组（仅加转染试剂）、对照组（转染阴性对照PcDNA3.0表达载体）和PcDNA-VEGF165b组（转染VEGF165b表达载体PcDNA-VEGF165b）。MTT法检测各组HepG₂细胞生存率,RT-PCR法和Western blotting法检测HepG₂细胞中VEGF165b和VEGF165 mRNA和蛋白表达水平,Transwell小室法检测HepG₂细胞迁移能力。结果：与空白组比较,对照组HepG₂细胞中VEGF165b和VEGF165 mRNA和蛋白表达水平无明显变化（P>0.05）。与空白组比较,PcDNA-VEGF165b组细胞中VEGF165b mRNA和蛋白表达水平明显升高（P<0.05）,VEGF165 mRNA和蛋白表达水平明显降低（P<0.05）。空白组和对照组细胞生存率比较差异无统计学意义（P>0.05）;与空白组和对照组比较,PcDNA-VEGF165b组细胞生存率有所降低,但差异无统计学意义（P>0.05）。细胞迁移实验,空白组和对照组细胞迁移率比较差异无统计学意义（P<0.05）;与空白组和对照组比较,PcDNA-VEGF165b组HepG₂细胞迁移率明显降低（P<0.05）。结论：VEGF 165b能抑制VEGF165基因和蛋白的表达,VEGF165b对肝癌细胞增殖无明显影响,但可降低肝癌细胞的迁移能力。     

Expression of glucocorticoid receptor isoforms in cutaneous hemangiomas and vascular malformations

Background Hemangiomas are the most common tumors in children. Some hemangiomas may require intervention because of their location, size, behavior, or potential for important complications. Pharmacological therapy with glucocorticoids is the mainstay treatment, but there is no consensus on therapeutic regimens or candidate selection, therapeutic efficacy vaires, and the mechanism mediating the beneficial effects of glucocorticoids remains unclear. This study was performed to investigate the expression patterns of the glucocorticoid receptor (GR) and its α isoform (GRα) in cutaneous hemangiomas and vascular malformations.Methods SP immunohistochemical technique was used to examine the expression of GR(e-20) (GR) and GR (p-20) （GRα） on vascular endothelial cells in 80 specimens that included 33 proliferating hemangiomas, 32 involuting hemangiomas, 7 vascular malformations as well as 8 normal skin tissues, all obtained from infants and children. GR and GRα expression in prepared tissue slides were examined using automated computer-assisted microscopic analysis. Mean gray scale values were compared among the various tumor types.Results The mean gray scale values of GR were 127.0±6.4 and 121.4±6.6 in hemangiomas and vascular malformations respectively, but this difference was not statistically significant (P=0.104). However, these values were all markedly higher than that of normal skin, which was only 108.6±6.8 (P=0.001 and P=0.000 for comparison with hemangiomas and vascular malformations respectively). The gray scale of GR in proliferation and involuting hemangiomas were 127.9±4.8 and 126.0±5.8 respectively, but this difference was not significant (P=0.146). However, GRα expression in hemangiomas, vascular malformations and normal skin declined gradually in stepwise fashion (127.3±5.4, 120.4±6.1 and 109.9±5.3 respectively; P&lt;0.001). GRα expression was higher in proliferating hemangiomas than in involuting hemangiomas (127.2±6.3 and 122.5±6.3; P=0.004).Conclusions GR and GRα are strongly expressed in hemangiomas and vascular malformations. The expression of GRα is closely related to the phase of the hemangioma. Determination of GR and GRα may be a positive significance to understand the information of hemangiomas and vascular malformations and may further help determining proper strategies of steroid therapy for hemangiomas and vascular malformations.