棘球蚴3种抗原在包虫病斑点酶联免疫吸附试验中特异性和敏感性比较

用羊源细粒棘球蚴囊液、原头蚴及生发层３种抗原,用酶标记羊抗人ＩｇＧ,对９４例包虫病患者、４４例非包虫患者及５０例健康人血清进行了斑点酶联免疫吸附试验。结果用囊液、原头蚴、生发层３种抗原的敏感性分别为９２．６％、９３．６％和９３．６％,５０例健康人血清均未出现假阳性反应,与各种肿瘤、各种炎症、各种肝病及结核患者血清有一定的交叉反应     

高强度聚焦超声波辐照细粒棘球蚴包囊的热效应

目的通过检测高强度聚焦超声波(HIFU)照射棘球蚴包囊后囊液、囊壁、包囊周围肝组织温度和原头蚴死亡率,了解HIFU处理后不同部位的升温效应,探索HIFU杀伤棘球蚴的方法和效果。方法采集感染细粒棘球绦虫的新鲜羊肝,选取囊壁较薄,触摸弹性较好,直径介于10mm到45mm之间的包囊42个。采用随机区组设计的方法分组,对照组用普通超声照射,实验组用200W声功率HIFU直线扫描的方法照射,照射时间分别为2min,4min,6min,8min,10min。照射后立即测定囊液、囊壁、距包囊5mm部位肝组织的温度。抽取囊液、涂片,经台盼兰染色后计数原头蚴的死亡率。结果HIFU照射后,棘球蚴囊壁、囊液、包囊周围肝组织的温度均有升高,其中囊壁的温度升高最为明显,且与囊液、包囊周围肝组织之间有显著差异;囊液中的原头蚴死亡率增加。结论HIFU照射使棘球蚴包囊的囊壁产生明显的升温效应,HIFU照射对原头蚴有杀伤作用。     

棘球蚴3种抗原在包虫病斑点酶联免疫吸附试验中特异性？…

用羊源细粒棘球蚴囊液,原头蚴及生发层３种抗原,用酶标记羊抗人ＩｇＧ,对９４例包虫病患者,４４例非包虫患者及５０例健康人血清进行了斑点酶联免疫吸附试验。结果用囊液,原头蚴,生发层３种抗原的敏感性分别为９２．６％、９３．６％和５０例健康人血清均未出现假阳性反应,与各种肿瘤、各种炎症,各种肝病及结核患者血清有一定的交叉反应。     

放射线对体外细粒棘球蚴原头蚴成囊及Gadd45α基因的影响

目的探讨放射线对体外培养细粒棘球蚴原头蚴成囊过程及凋亡相关基因Gadd45α的影响。方法体外培养自然感染的羊肝中的原头蚴,分别采用0、10、20、30、40、50Gy剂量的6MV-X线照射1次,继续培养14d后在光镜及电镜下观察原头蚴成囊情况并计算成囊率。取原头蚴,分别采用0、30、45、60Gy剂量的6MV-X线照射后继续培养14d,RT-PCR检测包囊细胞Gadd45α基因的表达情况。结果放射线照射后,能发育成囊的原头蚴囊在光镜及电镜下可见明显的放射损伤,对照组成囊发育良好,照射组可见钩突崩解,正常结构消失,且剂量越高,包囊结构异常越明显。0、10、20、30、40、50Gy剂量照射后的成囊率分别为(81.83±0.027)%、(50.62±0.021)%、(33.17±0.014)%、(27.71±0.024)%、(23.06±0.011)%和(20.65±0.009)%,成囊率与放射剂量呈负相关(r=-0.898,P0.01)。RT-PCR检测30、45、60Gy剂量照射后的Gadd45αmRNA相对转录水平分别为1.46±0.190、3.21±0.369和4.26±0.524,与0Gy剂量下的相对表达水平(1±0)比较差异有统计学意义(P0.01),mRNA相对表达水平与放射剂量呈显著正相关(r=0.949,P0.01)。结论放射线照射对原头蚴的成囊有抑制作用,以高剂量组改变和破坏程度更显著。凋亡相关基因Gadd45α可能在放射线抑制原头蚴成囊的机制中发挥重要作用。     

新疆绵羊和黄牛棘球蚴囊液几项生化指标的比较

新疆绵羊和黄牛棘球蚴囊液几项生化指标的比较新疆八一农学院动医系黄燕，徐显曾棘球蚴囊液是棘球蚴的重要组成部分，亦是原头蚴刺以生存的内环境，组织发生学上的特点使得棘球蚴囊液的成分极为复杂。近年来，许多学者研究发现，细粒棘球绦虫存在明显种内分化或变异导致流...     

细粒棘球绦虫微囊对小鼠腹腔巨噬细胞活化及炎症因子水平的影响

目的探索细粒棘球绦虫微囊感染对小鼠腹腔不同表型巨噬细胞活化及腹腔灌洗液中炎症因子水平的影响。方法体外培养细粒棘球绦虫原头蚴形成微囊,通过腹腔注射微囊和原头蚴,分别建立BALB/c小鼠细粒棘球蚴继发感染模型,对照组小鼠腹腔注射等体积的磷酸盐缓冲液(PBS)。于感染后的第8、30、60、90、180、240 d,收集各组小鼠的腹腔灌洗液和腹腔细胞,流式细胞术检测F4/80~+ CD16/32~+(M1型)与F4/80~+ CD206~+(M2型)巨噬细胞比例变化,流式细胞微球阵列法(Cytometric Bead Array, CBA)检测6种炎症因子IL-12p70、TNF-α、IFN-γ、MCP-1、IL-10、IL-6水平。结果感染后240 d,微囊感染组(微囊组)存活囊泡和囊团数分别为(237.67±4.5)、(10.33±1.21)个,与原头蚴感染组(原头蚴组)的囊泡和囊团数(70.33±3.5)、(7.17±1.17)个比较差异有统计学意义(均P0.01)。微囊组和原头蚴组小鼠腹腔M1型巨噬细胞比例均在感染早期开始升高,8～30 d逐渐升高达峰值,后逐渐下降,在240 d有一定程度回升。感染后30、60、90、180 d,微囊组M1型巨噬细胞比例分别为(78.6±7.52)、(72.95±3.07)、(63.33±3.89)、(28.7±4.84)%,与原头蚴组(66.30±3.47)、(64.03±2.67)、(47.42±2.46)、(18.00±6.77)%比较差异有统计学意义(均P0.05)。而微囊组和原头蚴组的M2型巨噬细胞细胞比例均在感染早期第8 d处于较高水平,8 d后下降但在感染晚期90～240 d持续升高。感染后8、30、180和240 d,微囊组M2型巨噬细胞比例分别为(60.24±1.35)、(78.6±7.52)、(28.7±4.84)、(51.93±9.49)%,与原头蚴组(56.70±4.25)、(66.30±3.47)、(18.00±6.77)、(43.92±2.66)%比较差异有统计学意义(均P0.05)。CBA显示,微囊组和原头蚴组腹腔灌洗液中促炎因子IL-12p70和TNF的水平均在8～90 d升高,90 d后下降,其中8、30、60和90 d,微囊组IL-12p70和TNF水平均与原头蚴组比较差异有统计学意义(均P0.01)。微囊组和原头蚴组促炎因子MCP-1、IL-6均在8～180 d升高,180 d后降低,其中8、30、60、90和180 d,微囊组MCP-1和IL-6水平与原头蚴组比较差异均有统计学意义(均P0.01)。微囊组IL-6水平在感染晚期240 d下降为(503.89±97.62)pg/ml,但仍与原头蚴组比较差异有统计学意义(179.34±30.31)pg/ml(P0.01)。微囊组IFN-γ水平在感染早期在8、30 d分别为(25.34±1.94)、(25.90±1.71)pg/mL,与原头蚴组(21.32±3.15)、(21.22±2.46)pg/ml比较差异有统计学意义(均P0.05),但在30 d后下降,而原头蚴组IFN-γ水平升高至90 d出现峰值为(38.16±3.13)pg/ml,与微囊组(20.22±2.08)pg/ml比较差异有统计学意义(P0.01)。抑炎因子IL-10水平变化缓慢,增长至90 d达峰值后下降,其中8、30、60、90、240 d时两感染组比较差异无统计学意义(均P0.05)。结论微囊感染在棘球蚴继发感染寄生虫免疫逃避及宿主早期腹膜炎症反应中发挥重要作用,导致M1型巨噬细胞比例及促炎细胞因子水平表达较原头蚴感染更显著。     

用Cetrimide~(R)治疗细粒棘球蚴囊

本文报道用Cetrimide~(R)(溴化十六烷三甲铵)治疗动物和人的细粒棘球蚴囊的体外,体内试验评价研究。作者从牛和羊的肺及肝内获得新鲜的棘球蚴囊,有些蚴囊的原头蚴按Meymarian等(1963)的方法收集。并用生理盐水悬浮及沉淀洗涤3次,然后取1滴约含500个原头蚴的悬浮液分别加至4支盛装2ml Cetrimi-de~(R)溶液(浓度为0.05%、0.1%、0.5%和1%)的试管中充分混匀,保温在37℃水浴中,孵育10,5和1分钟后,再用生理盐水悬浮沉淀洗涤3次,保温在37℃中约30分钟。     

细粒棘球绦虫原头蚴及囊液miRNA测序与生物信息学分析

目的通过对绵羊肝、肺来源的细粒棘球绦虫原头蚴(protoscoleces,PSC)及囊液miRNA测序及表达谱分析,筛选差异表达miRNAs,并对其调控的靶基因进行初步预测,以期了解细粒棘球绦虫原头蚴生物学特征研究奠定基础,同时为细粒棘球蚴病的综合防控提供理论依据。方法采用TRIZOL法分别提取细粒棘球绦虫原头蚴及囊液总RNA,构建sRNA测序文库,采用Illumina HiSeq2500高通量测序技术进行深度测序,分别比较肝、肺原头蚴组及肝、肺囊液组miRNAs的表达差异。对显著差异表达的miRNAs进行筛选与靶基因预测,并进行GO和KEGG功能富集分析,初步探讨差异表达miRNAs。结果原始测序数据一系列数字化过滤后,得到的sRNAs长度分布在18-26nt之间。本次测序筛选出764个miRNAs,包括保守miRNAs 134个,新miRNAs 537个。筛选出显著差异表达的miRNAs共计61个,其中肝、肺原头蚴组4上调表达,56个下调表达,囊液组仅有1个miRNA且上调表达。GO分析其在生物过程中多富集在转录及调控、蛋白磷酸化、氧化还原反应等;在分子功能上多集中于ATP、蛋白、核酸及离子的结合和转运等。KEGG显示,受显著差异miRNAs调控的靶基因参与了2条信号通路,主要在细胞的增殖、分化、凋亡、代谢和抵抗氧化应激等方面发挥作用。结论肝、肺原头蚴组及其囊液存在特异miRNAs表达谱,包括数量和种类及其表达水平的不同,可为包虫病筛选新的药物靶点,评估包虫转移风险提供理论参考。     

棘球蚴病的免疫学诊断研究进展

囊型包虫病(cystic echinococcosis;CE)或棘球蚴病是由细粒棘球绦虫(Echinococcus granulosus;Eg)的续绦期幼虫寄生在人体肝、肺等脏器引起的一种严重危害健康的人畜共患寄生虫病.Eg幼虫称棘球蚴(hydatid cyst),为圆型或不规则的囊状体,由囊壁、生发囊、原头蚴、囊砂和囊液组成,有的还有子囊和孙囊,囊壁外由宿主的纤维组织包绕.患者以儿童和青壮年居多,在人体内生长缓慢,往往在感染后5～10年才出现症状,其主要危害为压迫所寄生的器官、破坏周围组织和毒性作用.一旦棘球蚴囊破裂,可引起继发性感染或休克,甚至死亡[1].     

细粒棘球绦虫水通道蛋白9的多肽特征及免疫定位研究

目的 研制细粒棘球绦虫水通道蛋白9 (EgAQP9)的特异性多肽抗体,并用于检测其在棘球蚴囊壁、生发细胞及原头蚴中的组织分布情况。 方法 根据EgAQP9特异氨基酸序列设计合成B细胞抗原多肽,再用合成的多肽偶联KLH作为免疫原注射免疫新西兰兔以制备多克隆抗体。酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测多肽抗体滴度,蛋白免疫印迹法(Western blot)测定多肽抗体免疫活性,免疫荧光实验分析EgAQP9的亚细胞定位,免疫组化实验分析EgAQP9组织定位。 结果 免疫新西兰兔成功制备出多肽抗体;间接ELISA检测其多肽抗体效价高达1∶256 000;Western blot结果显示多肽抗体能够特异识别细粒棘球绦虫中36 kDa处的条带,与EgAQP9预测的相对分子量大小相符;免疫荧光实验结果显示EgAQP9分布于棘球蚴生发细胞的胞质、胞膜中;免疫组化实验显示该蛋白主要分布在原头蚴表面及棘球蚴囊泡生发层。结论 本研究以制备的EgAQP9兔源多克隆抗体定位了AQP9在棘球蚴生发细胞、原头蚴及棘球蚴囊壁中的分布状况。     

Dot-Elisa for evaluation of hydatid cyst wall, protoscoleces and hydatid cyst fluid antigens in the serodiagnosis of cystic echinococcosis

The aim of the present study is to evaluate cyst wall and protoscolex as an alternate source of antigen in serodiagnosis of cystic echinococcosis (CE). A total of 90 blood samples, 30 each of confirmed CE cases, disease controls and healthy controls were collected. Dot-ELISA using cyst wall, protoscolex and cyst fluid were used to demonstrate anti-hydatid antibodies. The sensitivity of Dot-ELISA using cyst wall, protoscolex and cyst fluid was 96.66%, 86.66% and 93.33% respectively and the specificity of the assay was 70% for Dot-ELISA using cyst fluid, protoscolex and cyst wall antigens. Results of the present study show that cyst wall and protoscolex can also be an useful source of antigen in detection of hydatid antibodies in the serodiagnosis of CE.     

小鼠细粒棘球蚴体外促血管生成作用研究

目的分析细粒棘球蚴体外对人脐静脉内皮细胞血管生成能力的影响及其促血管生成因子转录水平,初步探讨细粒棘球蚴的促血管生成作用。方法将继发感染小鼠体内的细粒棘球蚴体外培养后的上清作用于体外培养的人脐静脉内皮细胞,观察其成管现象并用NIH Image J软件的Angiogenesis模块进行分析。同时,在细粒棘球蚴基因组中寻找同宿主(小鼠)的基质金属蛋白酶9(Matrix metalloproteinase-9,MMP-9)和高迁移率族蛋白B1(High mobility group box B1,HMGB1)的同源蛋白,并对其转录水平进行分析。结果鼠源细粒棘球蚴囊培养上清能显著促进人脐静脉内皮细胞的成管(F=73.03,P0.001),在细粒棘球蚴囊壁和原头节中存在小鼠MMP-9和HMGB1同源蛋白的表达,且MMP-9在原头节中的转录水平高于棘球蚴囊(t=-11.65,P0.001),而HMGB1在棘球蚴囊中的转录水平高于原头节(t=6.43,P=0.003)。结论细粒棘球蚴囊培养上清可能含有促进血管生成的虫源分子,但其确切机制还有待进一步研究。     

细粒棘球绦虫原头节在NIH株小鼠体内发育的组织学及宿主细胞反应观察

本文的观察结果表明:接种后1周,原头节的皮层内已有实质细胞长入,虫周有较大空隙,宿主细胞反应轻微。死亡原头节则已被大量炎细胞紧密包围;2～4周,大部分原头节的实质组织消失而形成细粒棘球蚴生发层,宿主细胞反应基本消失。而死虫周围则有夏科-雷登氏结晶体出现;2个月后,生发层外均已出现角质层,死亡崩解虫周的细胞反应开始减轻;4～6个月,细粒棘球蚴囊不断增大,并在生发层内陆续出现不育囊结构,虫周纤维组织较少,而解体的原头节内均已有大量胶原及网状纤维长入。对生发层的组织发生学以及适宜中间宿主对原头节的细胞反应特点进行了简要讨论。     

棘球蚴囊液,头节和囊壁抗原的二维电泳初步研究

本文采用二维电泳和银染色法对棘球蚴囊液、头节和囊壁抗原进行了初步研究。结果表明:三者分别显示多肽斑点111、116和123个,其中特异斑点74、67和60个,共有斑点37、49和63个。在共有斑点中,三者共有斑点7个;两者共有斑点在囊液和头节为8个,囊液和囊壁22个,头节和囊壁34个。本文对多肽斑点和抗原的关系作了讨论。本结果可望对抗原的纯化提供参考。     

酯酶同工酶鉴定细粒棘球蚴细胞系(13G-5)种属来源

目的　鉴定细粒棘球蚴细胞系细胞的种属来源。方法　应用SDS凝胶电泳测定细粒棘球蚴细胞系酯酶同工酶 (EST) ,并和E granulosus原头节、囊液及包虫病人血清作比较。结果　细粒棘球蚴细胞系、E granulosus原头节、囊液含有相同的酯酶同工酶谱 ,在同一位点出现相同的一条酶带。结论　实验结果表明从包虫病人培育的 13G - 5细胞确系来源于E granulosus细胞。     

棘球蚴感染中的免疫逃避相关分子

棘球蚴可以依赖有效的免疫逃避机制在宿主体内长期生存,并造成慢性感染。包囊囊壁、原头节和囊液等所含抗原物质多而复杂,在逃避宿主的免疫应答中起重要作用。棘球蚴逃避宿主免疫反应机制分为主动免疫逃避与免疫调节两种:棘球蚴通过抑制补体的激活,耗竭特异性抗体,影响T细胞活性,下调B细胞功能等有效地避开宿主的免疫反应。棘球蚴的EgTeg蛋白和囊液中的抗原B等能明显抑制中性粒细胞的趋化作用;刺激宿主产生TH2型细胞因子,激发非保护性的免疫应答;干扰单核细胞分化和调节树突状细胞的表型,逃逸宿主免疫监视。     

细粒棘球蚴在NIH小鼠体内发育的组织学及组织化学的进一步观察

本文继续观察感染后6～24个月的细粒棘球蚴在NIH小鼠体内发育的组织学及组织化学变化。结果表明,在鼠体内出现育囊的时间为感染后7～8个月,囊液内见到游离原头节及子囊的时间分别为8及10个月,并发现细粒棘蚴体内的糖原、DNA、RNA、碱性蛋白质的含量,AKP、ACP及ATP酶的活力,均以生发层的芽状突起部分及原头节内的较丰富和较强。     

细粒棘球蚴和多房泡球蚴在人体内蛋白质表达谱初步分析

目的 初步掌握流行于青海省细粒棘球绦虫幼虫棘球蚴(原头节、囊壁、囊液)和多房棘球绦虫幼虫泡球蚴在中间宿主人体内蛋白质表达情况。方法 利用SDS-PAGE和 Western-blot分析棘球蚴原头节、囊壁、囊液蛋白质和泡球蚴总蛋白表达谱。结果 细粒棘球蚴原头节的蛋白质浓集在分子量72 kDa处,囊壁的蛋白质浓集在72 kDa、26 kDa和17 kDa 处,囊液的蛋白浓集在72 kDa、43~55 kDa、26 kDa和17 kDa;泡球蚴总蛋白质浓集在分子量72 kDa、55~72 kDa和26 kDa处。结论 不同地区细粒棘球蚴在人体内蛋白的表达存在差异;不同亚种泡球蚴原头节蛋白的表达存在差异。     

Serodiagnosis of human hydatidosis with an ELISA developed based on antigens derived from sheep hydatid cysts and comparison with a commercial human ELISA kit

ObjectiveTo explore the serodiagnosis of hydatid cyst in human using different antigens of sheep (hydatid fluid, Somatic and Excretory/secretory antigens of protoscolex) by ELISA and compares this result with commercial human ELISA kit.MethodsOne hundred blood samples from patients with history of severe abdominal pain and eosinophilia were obtained. Ten serum samples were obtained from surgically and pathologically confirmed cystic echinococcosis patients from Mashhad university hospital as positive control and 5 serum samples from infant under one year old as negative control. Blood samples were centrifuged at 3 000μg at 20 °C for 15 min and sera were stored at ?20 °C. First, these samples were tested for the presence of antibody by commercial human ELISA. Then, ELISA was developed on microplates coated with hydatid fluid, Somatic and Excretory/secretory antigens of protoscolex of sheep.ResultsThe results of this study as analyzed by Kappa test showed that, hydatid fluid antigen could be used as a precise source of detection in indirect ELISA test.ConclusionsHydatid fluid in comparison with Excretory-secretory and somatic antigens showed more compatibility agreement in kappa test which can be used for further studies in development of any ELISA test for diagnosis of human hydatidosis.