大肠癌患者外周血细胞CD133的表达

背景：近期有报道称在肿瘤患者外周血中检测出了高于正常值的CD133阳性细胞.目的：观察CD133 mRNA和蛋白在大肠癌患者外周血中的表达并探讨其临床意义.方法：应用流式细胞技术与RT-PCR反应检测29例大肠癌患者和20例正常对照外周血中CD133 抗原与mRNA的表达.结果与结论：发生转移的大肠癌患者外周血中CD133阳性细胞比例显著高于正常对照及无转移的大肠癌患者（P 〈 0.01）.正常健康人群和无转移大肠癌患者外周血中CD133mRNA表达为阴性,发生转移的部分大肠癌患者外周血中CD133mRNA表达阳性,阳性率为35.7%（5/14）,在超过38个以上循环时表达为弱阳性.结果表明,无转移大肠癌患者外周血中CD133 mRNA和蛋白表达与正常对照无区别,发生转移的大肠癌患者外周血中CD133 mRNA和蛋白高于正常对照和未发生转移者.     

干细胞相关因子在大肠癌组织及SW620细胞株的表达

背景：肿瘤细胞有多种干细胞标记的表达,深入研究其表达规律有助于揭示肿瘤发病机制、完善肿瘤干细胞理论。目的：检测大肠癌实体组织中干细胞相关分子标记CD133、CD166、Oct4、Sox2、C-myc、Klf4、Bmi-1与癌旁组织的表达差异,以及CD133免疫磁珠分选阳性与阴性SW620细胞中上述基因的表达差异。方法：选临床病理诊断清楚的29例大肠癌组织标本提取RNA,RT-PCR检测CD133、CD166、Oct4、Sox2、C-myc、Klf4、Bmi-1在大肠癌组织与癌旁对照组织中的表达。CD133免疫磁珠分选SW620,提取CD133细胞与CD133阴性细胞RNA,RT-PCR检测分选后上述基因的表达差异。结果与结论：29例标本均诊断为低、中分化腺癌或黏液腺癌,干细胞相关分子标记癌组织与癌旁组织表达灰度相对值癌组织表达均高于癌旁组织（P〈0.05）。RT-PCR检测分选后CD133＋细胞CD133,CD166,Oct4,Sox2,C-myc,Klf4,Bmi-1表达,结果均高于CD133-细胞。提示,CD133、CD166、Oct4、Sox2、C-myc、Klf4、Bmi-1相关干细胞标记可作为大肠癌肿瘤干细胞标记并有望用于诊断检测。     

干细胞相关因子在大肠癌组织及SW620细胞株的表达

背景:肿瘤细胞有多种干细胞标记的表达,深入研究其表达规律有助于揭示肿瘤发病机制、完善肿瘤干细胞理论。目的:检测大肠癌实体组织中干细胞相关分子标记CD133、CD166、Oct4、Sox2、C-myc、Klf4、Bmi-1与癌旁组织的表达差异,以及CD133免疫磁珠分选阳性与阴性SW620细胞中上述基因的表达差异。方法:选临床病理诊断清楚的29例大肠癌组织标本提取RNA,RT-PCR检测CD133、CD166、Oct4、Sox2、C-myc、Klf4、Bmi-1在大肠癌组织与癌旁对照组织中的表达。CD133免疫磁珠分选SW620,提取CD133细胞与CD133阴性细胞RNA,RT-PCR检测分选后上述基因的表达差异。结果与结论:29例标本均诊断为低、中分化腺癌或黏液腺癌,干细胞相关分子标记癌组织与癌旁组织表达灰度相对值癌组织表达均高于癌旁组织(P<0.05)。RT-PCR检测分选后CD133+细胞CD133,CD166,Oct4,Sox2,C-myc,Klf4,Bmi-1表达,结果均高于CD133-细胞。提示,CD133、CD166、Oct4、Sox2、C-myc、Klf4、Bmi-1相关干细胞标记可作为大肠癌肿瘤干细胞标记并有望用于诊断检测。     

高糖状态通过WIF1-Wnt/β-catenin通路调控结肠肿瘤细胞的增殖

目的 分析高糖状态对结肠肿瘤细胞增殖的影响,并探讨Wnt抑制因子1（WIF1）通过Wnt/β-连环蛋白（β-catenin）通路影响高糖状态下结肠肿瘤细胞增殖的机制。方法 用不同浓度的D-葡萄糖处理结肠肿瘤细胞株SW620细胞,通过实时荧光定量PCR（qPCR）和蛋白免疫印迹法测定增殖相关基因的表达,行细胞增殖活性检测、细胞计数实验,用细胞平板克隆形成实验检测细胞增殖情况,采用qPCR和蛋白免疫印迹法测定WIF1和β-catenin的表达。转染siRNA和过表达质粒调控WIF1的表达后,检测WIF1对SW620细胞增殖能力和β-catenin表达水平的影响。结果 随着糖浓度的增加,SW620细胞的增殖能力增强（P均< 0.05）,WIF1的表达下降而β-catenin的表达增高（P均< 0.05）。下调WIF1的表达,SW620细胞的增殖能力增强且β-catenin的表达增高（P均< 0.05）,而过表达WIF1后,SW620细胞的增殖能力受到抑制且β-catenin的表达下降（P均< 0.05）。结论 高糖状态下WIF1表达的下降,可能通过活化Wnt/β-catenin通路促进高糖状态下结肠肿瘤细胞的增殖。     

大肠癌患者外周血细胞CD133的表达

背景:近期有报道称在肿瘤患者外周血中检测出了高于正常值的CD133阳性细胞.目的:观察CD133 mRNA和蛋白在大肠癌患者外周血中的表达并探讨其临床意义.方法:应用流式细胞技术与RT-PCR反应检测29例大肠癌患者和20例正常对照外周血中CD133 抗原与mRNA的表达.结果与结论:发生转移的大肠癌患者外周血中CD133阳性细胞比例显著高于正常对照及无转移的大肠癌患者(P < 0.01).正常健康人群和无转移大肠癌患者外周血中CD133mRNA表达为阴性,发生转移的部分大肠癌患者外周血中CD133mRNA表达阳性,阳性率为35.7%(5/14),在超过38个以上循环时表达为弱阳性.结果表明,无转移大肠癌患者外周血中CD133 mRNA和蛋白表达与正常对照无区别,发生转移的大肠癌患者外周血中CD133 mRNA和蛋白高于正常对照和未发生转移者.     

清解扶正颗粒对大肠癌SW620细胞增殖、凋亡和迁移的影响

目的:探讨清解扶正颗粒(QFG)对大肠癌SW620细胞增殖、凋亡和迁移的影响及作用机制。方法:体外培养人大肠癌SW620细胞,用不同浓度的QFG(0、0.5、1、2 mg/mL)作用于细胞,采用MTT法检测24、48 h后QFG对细胞增殖的抑制能力;在倒置显微镜下观察24 h后细胞形态变化;采用流式细胞术检测24 h后细胞周期;通过Hoechst 33258染色实验检测24 h后细胞凋亡情况;采用划痕实验检测0、6、12、24 h后细胞的迁移能力;通过Western blot方法检测24 h后细胞Ki-67、MMP-2及Cleaved-Caspase-3蛋白的表达。结果:①0、0.5、1、2 mg/mL浓度范围内,QFG对大肠癌SW620细胞增殖抑制率随时间及浓度的增加而增大,明显高于同一时间点对照组的细胞,差异具有统计学意义(P0.05)。②0.5、1、2 mg/mL QFG作用SW620细胞24 h后,细胞形态发生明显的改变,随着给药浓度的增高,细胞密度逐渐减少,悬浮细胞增多,部分细胞皱缩变圆。③流式细胞术检测细胞周期发现,0.5、1、2 mg/mL QFG组细胞G1期降低,S期增高,而G2期并没有明显的变化,各时期百分比与对照组比较差异有统计学意义(P0.01),但并不呈剂量依赖关系。④Hoechst33258染色结果显示,随着QFG作用浓度增加,SW620细胞凋亡的形态学表现越明显。⑤划痕实验发现,0.5、1、2 mg/mL QFG能降低SW620细胞的迁移能力,划痕愈合率随着作用时间和QFG浓度增加而逐渐降低,呈现明显的时间和剂量依赖作用;与对照组比较,12 h和24 h划痕愈合率差异有统计学意义(P0.01)。⑥与对照组比较,0.5、1、2 mg/mL QFG能显著降低Ki-67和MMP-2的蛋白表达,增加Cleaved-Caspase-3的蛋白表达,且呈现明显的剂量依赖性,差异有统计学意义(P0.01)。结论:QFG具有抑制大肠癌SW620细胞增殖、诱导凋亡及抑制迁移的作用,其作用机制可能与下调Ki-67和MMP-2蛋白表达及上调CleavedCaspase-3蛋白表达有关。     

因子Ⅶa依赖组织因子激活PAR2/ERK/NF-κB抑制结肠癌SW620细胞caspase-3表达

摘要：目的：探讨凝血因子Ⅶa对结肠癌SW620细胞增殖能力以及表达凋亡分子天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3（caspase-3）的影响及其作用机制。 方法：用一定剂量的蛋白酶激活受体2激动剂（PAR2-AP）、凝血因子Ⅶa等刺激物处理SW620细胞,观察细胞生长情况;western blot和定量PCR分别检测细胞表达caspase-3蛋白质及mRNA水平;利用相关抗体、拮抗剂和抑制剂等观察因子Ⅶa对caspase-3表达的效应变化。 结果：PAR2-AP（100 μmol/L）及因子Ⅶa（10 nmol/L）能够明显促进SW620细胞的生长,减少细胞caspase-3蛋白质和mRNA的表达;抗组织因子（TF）抗体（а-TF）、PAR2拮抗剂（PAR2-аAP）、ERK1/2抑制剂U0126以及NF-κB抑制剂PDTC均能逆转因子Ⅶa对SW620细胞caspase-3表达的抑制效应,而p38MAPK抑制剂SB203580对caspase-3的表达无明显的干预作用。 结论：因子Ⅶa依赖TF活化PAR2,经ERK1/2和NF-κB信号通路,抑制SW620细胞caspase-3表达,从而促进细胞的增殖与生长。     

三氧化二砷对HL-60细胞增殖、分化和凋亡的影响及其作用机制探讨

目的:观察三氧化二砷(As2O3)对HL-60细胞增殖、分化和凋亡的影响,并探讨其相关作用机制。方法:不同浓度As2O3处理HL-60细胞,应用MTS/PES方法检测细胞增殖,NBT实验测定细胞分化,流式细胞术检测细胞凋亡和分化相关抗原CD11b的表达,SYBR Green real-time RT-PCR方法检测C-FES、BCL-2、BAX、Survivin、P21和P27 mRNA水平变化。结果:As2O3能明显抑制HL-60细胞增殖,其效应呈剂量依赖和时间依赖性(r=-0.967;r=-0.954);低浓度(0.1、0.5和1.0μmol/L)As2O3能明显促进细胞分化,NBT阳性率和CD11b表达水平均有不同程度的增高;较高浓度As2O3(2.5和5.0μmol/L)能明显诱导细胞凋亡,抑制细胞分化。HL-60细胞经1.0和5.0μmol/L浓度As2O3处理后,C-FES mRNA表达均明显上调,但以1.0μmol/L组更为明显,证实C-FES mRNA表达水平与细胞分化程度成正比。此外,5.0μmol/L浓度As2O3显著下调了HL-60细胞BCL-2和Survivin的表达,相反明显上调了BAX、P21和P27的表达。结论:As2O3能明显抑制HL-60细胞增殖、促使细胞分化成熟及诱导细胞凋亡,其机制可能涉及C-FES以及细胞周期和凋亡相关基因的调控。     

As_2O_3对Jurkat细胞株hdpr1基因去甲基化作用机制的研究

本研究探讨三氧化二砷（arsenic trioxide,As2O3）对急性T淋巴细胞白血病Jurkat细胞株hdpr1抑癌基因去甲基化的影响及其作用机制。采用CCK8法检测As2O3对Jurkat细胞的增殖抑制作用,流式细胞术检测As2O3作用前后细胞周期的变化,甲基化特异性PCR（MSP）检测As2O3对hdpr1基因甲基化模式的影响,用半定量RT-PCR检测As2O3对hdpr1基因、DNA甲基转移酶基因dnmt1、dnmt3a、dnmt3b mRNA表达水平的影响。结果表明：As2O3可明显抑制Jurkat细胞的增殖并呈时间-浓度依赖性;As2O3阻滞Jurkat细胞周期于G0/G1期（p〈0.05）,呈浓度依赖性;As2O3能够逆转Jurkat细胞株hdpr1基因的高甲基化并诱导其mRNA重新表达,同时下调dnmt1、dnmt3a、dnmt3b mRNA的表达水平,亦呈浓度依赖性。结论：As2O3抑制Jurkat细胞的增殖,阻滞细胞周期于G0/G1期,其机制可能为下调dnmt1、dnmt3a、dnmt3b基因的表达,诱导Jurkat细胞中异常甲基化的hdpr1基因去甲基化并使其恢复表达。     

三氧化二砷诱导MUTZ-1细胞凋亡的端粒酶调控研究

为了研究三氧化二砷（As2O3）诱导人类骨髓增生异常综合征难治性贫血伴原始细胞过多型（MDS—RAEB）细胞株MUTZ-1细胞凋亡的端粒酶调控机制，采用端粒重复序列扩增-酶联免疫吸附试验（TRAP—ELISA）检测端粒酶活性；RT—PCR法检测端粒酶逆转录酶（hTERT）、TRF1（TTAGGG repeat binding factor 1）、TRF2（TTAGGG repeat binding factor 2）、bcl-2、bax等基因mRNA水平的表达；磷脂酰丝氨酸（PS）转位等方法检测细胞凋亡，结果表明：1—8μmol／L As2O3诱导MUTZ-1细胞凋亡呈时间、浓度依赖关系。在该浓度范围内，As2O3可下调细胞端粒酶活性。且端粒酶活性下调与凋亡细胞阳性率呈明显负相关（r=一0．938，P=0．018）。MUTZ-1细胞经As，01作用后，hTERT基因mRNA表达下调，并与端粒酶活性变化呈正相关（r=0．783，P=0.022），但As2O3对TRF1及TRF2基因mRNA表达没有明显影响.MUTZ-1细胞端粒酶活性受抑制同时，伴有bcl-2 mRNA表达下调及bcl-2／bax比值下降结论：As2O3可能通过抑制细胞端粒酶活性及hTERT表达，诱导MUTZ-1细胞凋亡。As2O3抑制MUTZ-1细胞端粒酶活性可能是诱导该凋亡机制之一。     

三氧化二砷对人胃癌裸鼠移植瘤VEGF—C及其受体VEGFR-3表达的影响

本研究探讨As2O3对肿瘤VEGF—C和VEGFR-3表达的影响，揭示As2O3在肿瘤淋巴道形成和转移中的作用。建立人胃腺癌裸鼠移植瘤模型，实验分2．5mg／kgAs2O3组，5mg／kgAs2O3组和注射等体积生理盐水的对照组。采用免疫组织化学方法检测VEGF—C和VEGFR-3表达，并采用图像信号采集与分析系统进行图像扫描分析。结果表明：治疗组VEGF—C和VEGFR-3的表达均较对照组明显减弱；高剂量As2O3组VEGF—C和VEGFR-3的表达明显弱于低剂量组，图像灰度统计分析显示差异具有显著性意义。结论：As2O3对人胃癌移植瘤细胞VEGF—C及其受体VEGFR-3表达均有抑制作用．提示As2O3可能通过抑制VEGF—C及其受体表达抑制肿瘤淋巴管的生成。     

乳腺癌病理参数与CD133和Ki-67关系的研究

目的研究跨膜蛋白CD133和细胞增生核抗原Ki-67与乳腺癌病理参数的关系。方法在105例乳腺癌病理标本中,应用免疫组织化学方法(SP)检测CD133和Ki-67的表达,分析其与临床病理参数的关系。结果 105例乳腺癌组织标本中CD133阳性50例(47.62%)、KI-67阳性69例(65.71%);随着肿瘤分化降低、癌周浸润加大、淋巴结转移、临床分期递增CD133和Ki-67表达逐渐增高(P0.05);CD133与Ki-67具有强关联性。结论 CD133和Ki-67在乳腺癌的发生、发展和转移中发挥重要作用,可将它们作为乳腺癌诊断、治疗和预后评估的标志。     

CD133 在乳腺癌新辅助化疗后的表达及其临床意义简

目的探讨分化抗原簇蛋白133（CDl33）表达与新辅助化疗（NAC）化学敏感性的关系。方法对51例原发性乳腺癌患者在NAC治疗前后分别采用免疫组化方法检测CDl33表达,观察NAC治疗前后CDl33的差异性。结果CDl33与病理完全缓解率（pCR）存在明显相关性（P=0．023）。NAC治疗后临床完全缓解率及部分缓解率（cCR4-cPR）达到82．4％（42／51）,病理反应2级＋3级达到54．9％,pCR31．3％（16／51）。CDl33表达与乳腺癌淋巴结转移有关（P=0．042）;CDl33（＋）在pCR方面明显低于CDl33（-）（P=0．035）;病理1级者较2级或3级更易出现CDl33（＋）（P=0．002）。CDl33（＋）在NAC治疗后57．1％（20／41）高于NAC治疗前47．1％（24／51）,NAC治疗前后均为CDl33（-）与病理反应有效率（2级）呈正相关关系（P〈0．001）。同样,经NAC治疗后,8例CDl33（4-）转为CDl33（-）,其与病理有效率亦呈正相关关系（P=0．019）。结论CDl33可以作为一种有效标志物来预测NAC治疗乳腺癌的化学敏感性。     

紫杉醇联合三氧化二砷作用人结肠腺癌LS-174T细胞增殖及凋亡的实验研究

目的以人结肠腺癌LS-174T细胞系作为体外模型,研究紫杉醇与三氧化二砷联合作用抑制肿瘤细胞增殖及凋亡双重作用的机理。方法采用不同浓度的紫杉醇与三氧化二砷联合作用于体外培养的人结肠腺癌LS-174T细胞,以MTT比色法和形态学观察检测其对人结肠腺癌LS-174T细胞的抑制作用。以TUNEL法和Annexin V-Fife、PI染色、共聚焦显微镜检测其对人结肠腺癌LS-174T细胞系的凋亡诱导作用。结果不同浓度的紫杉醇与三氧化二砷联合组对人结肠腺癌LS-174T细胞增殖的抑制作用均强于紫杉醇或三氧化二砷单用药组。联合用药组从形态学观察及应用TUNEL法和Annexin V-FITC、PI染色结果显示联合用药组可检测到大量凋亡结肠腺癌细胞,明显多于单用药组。结论紫杉醇与三氧化二砷联合应用于人结肠腺癌LS-174T细胞可协同抑制其增殖,并可明显诱导肿瘤细胞凋亡发生。     

VEGF-C和VEGFR-3在大肠癌中的表达及意义

目的探讨血管内皮生长因子-C(VEGF-C)和血管内皮生长因子受体-3(VEGFR-3)在大肠癌中的表达,分析表达结果与肿瘤淋巴结转移及临床分期的关系。方法采用免疫组化SP法检测65例大肠癌及20例正常大肠黏膜中的VEGF-C和VEGFR-3的表达。结果65例大肠癌组织中VEGF-C和VEGFR-3阳性表达率分别为41.5%(27/65)和27.7%(18/65),正常黏膜表达率分别为15%(3/20)和0(0/20),肿瘤与正常黏膜比较,差异有统计学意义(P0.05和P0.01)。VEGF-C和VEGFR-3阳性表达率在有、无淋巴结转移组之间差异有统计学意义(P0.01和P0.05);两者的表达随临床分期升高而增多,其中VEGF-C的表达在不同临床分期组间差异有统计学意义(P0.05);微淋巴管计数在VEGF-C表达阳性组和阴性组之间的差异有统计学意义(P0.01)。结论VEGF-C和VEGFR-3在大肠癌中的表达与肿瘤淋巴结转移及临床分期的关系密切。     

Galectin-1在大肠癌细胞系中的表达及意义

目的探讨Galectin-1在大肠癌细胞系中的表达情况,以及与大肠癌侵袭、转移的关系。方法用Real time-RT PCR法和免疫组织化学法分析Galectin-1mRNA及蛋白在5种大肠癌细胞系的表达情况;用Boyden小室法比较5种大肠癌细胞系的侵袭转移能力。结果 Galectin-1在大肠癌转移灶来源的细胞系中的表达高于大肠癌原发灶来源的细胞系(P<0.01);Boyden小室的结果显示大肠癌转移灶来源的细胞系的侵袭,转移能力高于大肠癌原发灶来源的细胞系。结论 Galectin-1的高表达可能与大肠癌的侵袭转移有一定关系。     

E-cadherin、CD44V6和HIF-1α在结肠癌组织中表达的意义

目的探讨E-eadherin、CD44V6和HIF．1d在结肠癌组织中的表达及意义。方法应用免疫组织化学SP法检测90例结肠癌及癌旁正常结肠组织中E-eadherin、CD44V6和HIF-1α的表达。结果（1）E-eadherin在结肠癌中的高表达率为58．89％,低于在癌旁正常结肠组织中的高表达率90．00％（P〈0．05）,CD44V6在结肠癌中表达阳性率为57．78％,高于在癌旁正常结肠组织中的表达阳性率5．56％（P〈0．05）,HIF-1α在结肠癌中表达阳性率为61．11％,高于在癌旁正常结肠组织中的表达阳性率6．67％（P〈0．05）。（2）E-cadherin、CD44V6和HIF-1口的表达均与结肠癌有无淋巴结转移及结肠癌的Dukes分期有关（P〈0．05）。E-eadherin的表达还与结肠癌的分化程度有关（P〈0．05）。（3）结肠癌中CD44V6与E-cadherin的表达呈负相关（P〈0．05）。结论E-cadherin、CD44V6和HW-1α与结肠癌的发生、发展有关,并且在结肠癌的侵袭和转移中起重要作用,可作为判断结肠癌预后的重要指标。