乙醇、乙醛对原代培养星形胶质细胞神经甾体合成的影响

 目的研究长时程乙醇、乙醛处理对原代培养大鼠大脑皮质星形胶质细胞神经甾体合成的影响。方法采用MTT法测定不同浓度乙醇、乙醛对星形胶质细胞活性和存活率的影响,并采用HPLC-MS分离测定游离型神经甾体孕烯醇酮(PREG)、脱氢表雄酮(DHEA)、别孕烯醇酮(AP)及结合型神经甾体脱氢表雄酮硫酸酯(DHEAS)、孕烯醇酮硫酸酯(PREGS)的含量,观察不同浓度乙醇、乙醛处理72 h后,原代培养的大鼠大脑皮质神经星形胶质细胞中各类神经甾体合成释放的变化。结果不同浓度乙醇、乙醛处理72 h后,各处理组星形胶质细胞活性及存活率与对照组相比无显著性差异。与PBS对照组比较,低浓度(25 mmol·L^-1)和中浓度(50 mmol·L^-1)乙醇分别使DHEAS和DHEA水平显著下降(P<0.05);中、高(100 mmol·L^-1)浓度乙醇可使AP水平显著升高(P<0.05,P<0.001)、PREGS水平显著下降(P<0.05),高浓度乙醇还可显著降低PREG的水平(P<0.05);低浓度(12.5 mmol·L^-1)乙醛可使PREG水平显著降低(P<0.05),而中(25 mmol·L^-1)、高(50 mmol·L^-1)浓度乙醛可使DHEA水平显著增高(P<0.05)。结论乙醇和乙醛对神经星形胶质细胞神经甾体的合成均有一定影响,但二者的作用特点有所不同。     

LC-MS和LC-NMR在中药三萜和甾体类成分快速鉴定中的研究进展

三萜和甾体类化合物作为具有多方面生物活性的化学成分,一直是中药活性和质量控制研究的重点。文章对近十年运用LC-MS和LC-NMR联用技术鉴定、分析中药中三萜类和甾体类成分的前沿方法进行综述。两种联用技术的特点是将HPLC的高效分离能力和MS、NMR精确的结构表征能力巧妙结合起来,方法更具选择性和灵敏性。与此同时,笔者讨论了LC-MS和LC-NMR在中药三萜和甾体结构指认中的适用性并进行了展望,期望为实现中药中复杂成分结构的快速鉴定提供借鉴。     

红参皂苷组分对大鼠血浆中神经化学物质的影响

目的考察红参皂苷组分A和B对大鼠血浆中15种神经化学物质水平的影响。方法将红参总皂苷经大孔吸附树脂分离纯化制备得到皂苷组分A和B,采用高效液相色谱-质谱法(UPLC-Q-TOF-MS/MS)测定其中皂苷成分的组成和量,并采用超高效液相色谱-三重四级杆质谱(UPLC-QQQ-MS/MS)测定大鼠血浆中多巴胺(DA)、肾上腺素(E)、去甲肾上腺素(NE)、5-羟色胺(5-HT)、5-羟吲哚乙酸(5-HIAA)、酪氨酸(Tyr)、甘氨酸(Gly)、谷氨酸(Glu)、谷氨酰胺(Gln)、天冬氨酸(Asp)、牛磺酸(Tau)、丝氨酸(Ser)、色氨酸(Try)、乙酰胆碱(Ach)、组胺(His)共15种神经化学物质的量及其变化情况。结果通过对皂苷组成和量与神经化学物质之间的内在联系分析,发现组分A和B在皂苷成分组成方面存在明显差异,极性较大皂苷类成分主要集中在组分A中,而组分B中含有的皂苷成分极性相对较小。组分A各剂量组的大鼠血浆中Ach、Tau、Glu、Gln、Asp、Tyr、E、NE、DA的量升高,组分B各剂量组的大鼠血浆中Gly、His、5-HT、Ser、5-HIAA、Try的量显著升高,并且与给药剂量呈正相关趋势,提示极性较大皂苷组分可提高兴奋性神经化学物质的量,而极性较小皂苷组分表现为提高抑制性神经化学物质的量。结论红参皂苷对中枢神经化学物质的量具有调节作用,极性较小的皂苷组分与保持大脑活动、改善记忆功能、防止脑部疲劳、维持觉醒状态和神经系统抗衰老等作用相关性较大,而极性较大的皂苷组分与调节精神节律、削弱应激反应和改善睡眠等作用相关性较大。     

吗啡依赖大鼠额叶皮质内神经甾体水平的变化

 目的探讨吗啡依赖和戒断对雄性大鼠额叶皮质内神经甾体水平的影响。方法腹腔注射递增剂量吗啡建立大鼠吗啡躯体依赖模型,纳洛酮诱发戒断症状;条件性位置偏爱实验建立吗啡精神依赖模型。高效液相色谱-质谱法测定大鼠额叶皮质和血浆中脱氢表雄酮(DHEA)及其硫酸酯(DHEAS)、孕烯醇酮(PREG)及其硫酸酯(PREGS)和别孕烯醇酮(AP)的含量。结果与对照组比较,大鼠吗啡躯体依赖形成时额叶皮质内DHEA水平显著升高(P<0.05),精神依赖形成时额叶皮质内DHEA,PREG水平显著升高(P<0.05);与纳洛酮对照组比较,纳洛酮催促吗啡戒断时大鼠额叶皮质内PREG,AP的含量显著升高(P<0.01),DHEAS水平显著降低(P<0.05)。结论吗啡依赖、戒断可影响大鼠额叶皮质内某些神经甾体的水平,表明内源性神经甾体可能参与吗啡依赖的形成。     

甾体皂苷TSA对局灶性脑缺血大鼠神经发生的影响

目的：探讨甾体皂苷TSA对脑缺血损伤大鼠神经发生的影响。方法：建立大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型,随机分为模型对照组,TSA15mg/kg、30mg/kg、60mg/kg剂量组,安宫牛黄400mg/kg阳性对照组以及假手术组。于恢复早期3～14d给药,术后3,7,10,14d观察运动功能的动态变化,免疫组化法检测侧脑室下区brdu阳性细胞数以及梗死周围区巢蛋白的表达。结果：与模型对照组比较,TSA30mg/kg、60mg/kg给药组能够促进脑缺血大鼠横木行走的能力,增加侧脑室brdu阳性细胞数以及Nestin的表达。结论：TSA可改善大鼠脑缺血后神经功能的恢复,可能与其诱导脑缺血后神经发生有关。     

UPLC-Q-TOF-MSE结合相对保留时间在线快速鉴定麦冬中甾体皂苷类成分

目的:采用超高效液相色谱-飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF-MSE)表征并快速在线鉴定麦冬中甾体皂苷类成分;结合呋甾皂苷在反向色谱上的保留规律,鉴别同分异构体。方法:运用2种反相色谱柱(ACQUITY UPLC HSS T3和Agela Venusil XBP C18-2),在2种溶剂系统(0.1%甲酸/水-0.1%甲酸/乙腈,丙酮-水)和3个洗脱条件下对系列呋甾皂苷的色谱保留规律进行总结。利用UPLC-Q-TOF-MSE对麦冬成分进行分析,获得质谱数据。结果:3种色谱条件下呋甾皂苷的相对保留时间一致,呈现如下保留规律:甾体皂苷中糖链结构相同,苷元上羟基的数目越多保留时间越短;仅羟基位置不同时,保留时间为1位羟基17位羟基14位羟基;仅C-26位糖链糖基连接位置不同时,葡萄糖-(1→6)-葡萄糖葡萄糖-(1→2)-葡萄糖;从麦冬表征的图谱中共鉴定了21个色谱峰,其中14个呋甾皂苷,7个为螺甾皂苷。结论:色谱保留时间能为呋甾皂苷同分异构体的液质联用在线鉴定提供有益的数据支持。     

丹皮酚对大鼠离体海马神经元NMDA受体的影响

目的:研究丹皮酚对大鼠海马神经元缺糖缺氧的保护作用。方法:以原代培养的新生大鼠海马神经元作为研究对象,建立缺糖缺氧损伤模型,倒置相差显微镜下进行一般形态学的动态观察,用MTT法测定神经元存活率。通过放射配基结合实验测定海马NMDA受体结合力变化。结果:丹皮酚可显著降低神经元缺糖缺氧时细胞死亡率,减弱NMDA受体结合力。结论:丹皮酚对离体培养的大鼠海马神经元缺糖缺氧具有保护作用,其作用机制与减弱NMDA受体结合力有关。     

基于9个甾体皂苷成分含量的多元统计分析区分正品重楼及其混淆品

目的 探究正品重楼及其混淆品中9个皂苷类有效成分含量差异,为重楼鉴别及扩充重楼资源提供理论依据。方法 采用高效液相色谱法测定重楼皂苷Ⅰ、重楼皂苷Ⅱ、重楼皂苷Ⅲ、重楼皂苷Ⅳ、重楼皂苷Ⅴ、重楼皂苷Ⅵ、重楼皂苷Ⅶ、重楼皂苷D、重楼皂苷H的含量,进一步采用多元统计方法对其含量结果进行分析。结果 长柱重楼和南重楼分别与云南重楼与七叶一枝花相似,但含量不及2种正品;白花重楼的9个皂苷含量明显低于2种正品重楼,但也有一定的入药价值;毛重楼与凌云重楼中皂苷含量极低,药用价值低。结论 基于9个甾体皂苷能够通过高效液相色谱法对重楼正品及混淆品进行初步鉴别,并且该研究为重楼的质量评价提供了一定的数据支持,也为缓解野生重楼资源紧缺现状提供了思路。     

应激诱发吗啡条件性位置偏爱重现大鼠伏隔核和血浆中神经甾体水平的变化

 目的检测吗啡条件性位置偏爱(conditioned place preference,CPP)重现大鼠伏隔核和血浆中神经甾体水平的变化。方法建立大鼠对吗啡的CPP,CPP消退后用足底电击(footshock)诱发CPP的重现。将大鼠断头取血并取出伏隔核,制备组织匀浆,采用液-液萃取和固相萃取法提取脑组织和血浆中的神经甾体,经衍生化后,采用高效液相色谱-质谱法测定神经甾体含量。结果与对照组相比,重现组大鼠伏隔核中的脱氢表雄酮(dehydroepiandrosterone,DHEA)水平升高50%(P<0.05)。与消退组相比,重现组大鼠伏隔核中的别孕烯醇酮(allopregnanolone,AP)水平升高75%(P<0.05);吗啡CPP重现组大鼠血浆中的脱氢表雄酮硫酸酯(dehydroepiandrosterone sulfate,DHEAS)水平下降33%(P<0.01)。结论足底电击应激所致的CPP重现时,大鼠伏隔核中的DHEA,AP和DHEAS水平的变化不依赖于外周血中相应甾体水平的变化,其中枢作用可能与应激诱发的吗啡CPP重现行为有关。足底电击使伏隔核DHEA和AP水平升高可能是应激诱发吗啡CPP重现的神经机制之一。     

炮制对苦杏仁中苦杏仁苷在大鼠体内代谢的影响

目的:研究炮制对苦杏仁中主要成分苦杏仁苷在大鼠体内代谢的影响。方法:分别给SD大鼠注射和灌胃苦杏仁苷,灌胃苦杏仁生品及炮制品后,于不同时间点采血,高效液相色谱-质谱联用法分析血浆中苦杏仁苷及其代谢产物,绘制药时曲线。结果:苦杏仁苷注射给药后在血浆中以原型形式存在,而苦杏仁苷、苦杏仁生品和炮制品灌胃给药后均未检测到原型,其代谢产物经质谱鉴定为野樱苷;且炮制后代谢产物野樱苷在大鼠体内的药时曲线与生品有明显不同。结论:炮制对苦杏仁在大鼠体内的代谢过程有较大影响。     

隐丹参酮对谷氨酸致大鼠神经细胞氧化应激的影响

 目的 观察隐丹参酮（CT）对谷氨酸（Glu）损伤大鼠皮层神经元的保护作用。方法 体外培养大鼠皮层神经细胞,建立Glu损伤模型,采用MTT法检测细胞活力,比色法检测超氧化物歧化酶（SOD）活性和丙二醛（MDA）含量;荧光法检测细胞内Ca2+的变化,Western blot检测caspase 3蛋白的表达。结果 CT能显著提高Glu损伤神经细胞的存活率,提高SOD的活性,降低MDA的生成,抑制细胞内［Ca2+］i的变化以及caspase 3蛋白表达,抑制神经细胞凋亡。结论 CT对培养神经细胞谷氨酸兴奋毒性具有显著的保护作用,其机制可能与CT拮抗Glu诱导的氧化应激以及抑制细胞内［Ca2+］i作用有关。     

脱氢表雄酮对原代培养大鼠大脑皮质神经元谷氨酸释放的影响

 目的观察脱氢表雄酮对大鼠大脑皮质神经元谷氨酸释放的影响。方法原代培养的SD大鼠大脑皮质神经元经不同浓度(1×10^-7、1×10^-6、1×10^-5mol·L^-1)和不同作用时间(0.5,1,1.5,2,5,24,36,48,72h)的脱氢表雄酮处理后,采用OPA-巯基乙醇柱前衍生,荧光检测-高效液相色谱法测定细胞培养液中谷氨酸的含量。结果与对照组相比,不同浓度的脱氢表雄酮处理后,细胞培养液中谷氨酸的水平均下降(P<0.05或P<0.01);与对照组相比,脱氢表雄酮处理组1,1.5,2,5,24,36,48,72h细胞培养液中谷氨酸的水平均下降(P<0.05或P<0.01)。结论脱氢表雄酮可抑制神经元谷氨酸的释放,这可能介导了其对抗谷氨酸兴奋性毒性的作用。     

β-细辛醚对谷氨酸所致脑皮层神经元损伤的保护作用

目的:研究β-细辛醚对谷氨酸所诱导的离体培养皮层神经细胞损伤的保护作用。方法:运用新生乳鼠皮层神经细胞体外原代培养技术建立神经细胞谷氨酸损伤模型,观察β-细辛醚对其细胞形态、损伤程度、存活力、细胞内钙离子浓度和细胞凋亡的影响。结果:40 mmol/L谷氨酸作用皮层神经细胞16h,出现明显损伤,凋亡率和死亡率升高,培养上清液中LDH含量增加;7.5、15、30μg/mlβ-细辛醚可有效改善谷氨酸损伤引起的神经细胞形态改变,提高细胞存活力、减少LDH渗漏、降低细胞凋亡率;15、30μg/mlβ-细辛醚能降低由谷氨酸引起的细胞内钙离子含量。结论:β-细辛醚对谷氨酸所致的皮层神经细胞损伤具有保护作用,其作用机制可能与钙拮抗作用有关。     

番茄红素改善D-半乳糖致衰大鼠抗氧化功能的研究

 目的研究番茄红素对D-半乳糖致衰老大鼠抗氧化能力的影响、方法用D-半乳糖注射Wistar雄性大鼠5个月,建立衰老模型。对模型组、番茄红素组肝脏、肾脏、心脏、脑和前列腺等脏器丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化酶(GSH-Px)活性进行测定及比较。结果番茄红素组各脏器MDA含量均比模型组有显著降低(P<0.01),而SOD、GSH-Px酶活性比模型组有显著升高(P<0.01)。结论摄入适量番茄红素可以有效地增强大鼠机体抗氧化能力,从而延缓D-半乳糖诱发的大鼠衰老。     

人参皂甙Rb3对NMDA引起的大鼠海马神经元钙增加的影响

目的:探讨人参皂甙Rb3对海马神经元NMDA受体的影响.方法:对大鼠胚胎脑海马神经元进行体外培养,经Fluo-3/AM孵育后,采用激光共聚焦技术测定神经元内钙荧光强度,计算相对荧光强度.结果:100μMNMDA能使胞内钙增加124±53.9%,同时加不同浓度的人参皂甙Rb3后能降低NMDA引起的钙增加,其中300μMRb,+100μMNMDA组与100μMNMDA组相比差异有显著性意义(P＜0.01).结论:人参皂甙Rb3对NMDA引起的钙内流具有抑制作用,且这一作用与所用的剂量有关.     

人参炔醇对氧应激诱导大鼠海马神经细胞凋亡的影响

 目的探讨人参炔醇对原代大鼠海马神经细胞氧应激的保护作用。方法通过MTT和LDH法、AO/EB双染色法检测人参炔醇对神经元氧应激诱导凋亡的影响;通过使用信号转导阻断剂研究人参炔醇抗凋亡涉及的信号转导通路。结果人参炔醇对H₂O₂造成的海马神经细胞损伤有浓度依赖性的保护作用,可促进细胞存活,减少细胞的凋亡率;人参炔醇的神经保护作用可被RpcAMPs和wortmannin阻断,可被genistein和H7部分阻断,而PD98059对人参炔醇的神经保护作用无显著影响。结论人参炔醇保护神经元对抗氧应激,主要与细胞内cAMP及PI3K系统活性增高有关。     

杞椇饮乙醇提取物对小鼠酒精性肝损伤的?ぷ饔?

目的:观察杞椇饮乙醇提取物(EEQY)对小鼠酒精性肝损伤的保护作用。方法:昆明种小鼠随机分为EE-ZY75、150、300mg/kg组,益肝灵70mg/kg组和模型组,给药的同时,灌胃56度白酒12mL/kg,连续30天。以血清中谷氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)和丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)和超氧化物歧化酶(SOD)的水平作为指标,观察EEZY物对酒精性肝损伤的保护作用。结果:EEZY150、300mg/kg组小鼠血清ALT、AST和MDA水平明显低于模型组(P<0.05~0.01);GSH和SOD的水平明显高于模型组(P<0.05~0.01)。结论:EEZY对酒精性肝功能损伤有显著的保护作用。     

茵陈蒿汤对乙醇诱导的大鼠急性肝损伤的保护作用研究

目的:系统评价茵陈蒿汤对乙醇诱导的大鼠急性肝损伤的保护作用。方法:75只Wistar大鼠随机分为5组,模型组给予生理盐水,给药组按体重分别给予茵陈蒿汤冻干粉,连续给药14天,于第10日起模型组和给药组同时灌胃给予乙醇50%（v/v）连续5天（5g/kg）,空白组给予生理盐水;于第15日处死大鼠,分离血清及肝组织匀浆液,检测谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、甘油三酯（TG）、乙醇脱氢酶（ADH）、γ-L-谷氨酰转肽酶（γ-GT）、谷胱甘肽（GSH）和丙二醛（MDA）的活性和效价,观察肝脏组织学情况。结果:模型组血清ALT、AST、ADH、γ-GT及TG活性明显高于正常对照组,有显著性差异（P<0.01）,表明模型复制成功;与正常对照组相比,治疗组上述指标仅轻度升高,与模型组比较有显著性差异（P<0.01）;模型组MDA含量明显高于正常对照组,具有显著性差异,治疗组低剂量和中剂量也明显升高,与模型组比较差异无显著性意义（P<0.05）;治疗组高剂量轻微升高,与模型组比较有显著性差异（P<0.01）;模型组GSH含量明显低于正常对照组,有显著性差异（P<0.01）,其在治疗组低剂量和中剂量中也明显降低,与模型组比较无显著性差异,而在治疗组高剂量中轻微降低,与模型组比较有显著性差异（P<0.01）,同时,组织病理学也得出上述相同的结论。结论:茵陈蒿汤对乙醇诱导的大鼠急性肝损伤具有良好的保护作用。