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改进SDS-Phenol法快速提取细胞总RNA 总被引:12,自引:2,他引:10
比较改进SDS-Phenol法与常用的AGPC法提取细胞之总RNA优缺点,方法:同时采用两种方法对同批稳定培养的一株淋巴瘤细胞系进行总RNA提取,以收获RNA拉量和纯度为比较指标,并用甲醛变性电泳验证SDS-Phenol法提取RNA的完整性。 相似文献
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肺吸虫和血吸虫总RNA的提取及电泳分析 总被引:3,自引:0,他引:3
目的为构建肺吸虫cDNA文库,获得目的重组抗原,用以肺吸虫病的诊断,而制备卫氏肺吸虫的总RNA。方法采用改进的一步法(A和B)提取了卫氏肺吸虫成虫的总RNA,同时提取了日本血吸虫成虫及其虫卵、小鼠肝脏的总RNA。结果人睾丸组织的总RNA经琼脂糖凝胶电泳,观察到方法A所提取的肺吸虫、血吸虫及其虫卵的总RNA在凝胶上只有一条略大于18S的条带。用方法B提取的肺吸虫以及血吸虫的总RNA则出现2条条带,其中1条色淡,并略小于28S,另1条色深,并略大于18S。结论肺吸虫的L-rRNA中也存在切口现象。 相似文献
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目的:研究人胞苷转移酶(CT)cDNA在鼠巨噬细胞中的表达。方法:按照T.Maniatis等人的方法人转染的巨噬细胞中提取总RNA,电泳分离RNA,转移RNA至尼龙膜并固定,制备32p标记的胞苷转移酶DNA探针,杂交及放射性自显影。结果:对照组无表达,同类转染的细胞均有不同程度的表达。结论:制备探针前应用电泳法确定CTcDNA片段的浓度比紫外光吸收法更准确适用。Quickspin柱(Sephade 相似文献
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精细胞及血单个核细胞中丙型肝炎病毒RNA及其负链检测 总被引:4,自引:0,他引:4
用聚合酶链反应(PCR)方法对8例慢性丙型肝炎患者的血浆、外周血单个核细胞(PBMC)、精液和精细胞中的正链和负链丙型肝炎病毒(HCV)RNA进行检测,以了解HCV在肝外细胞中是否存在,有否复制。结果血浆中正链HCVRNA均阳性,而负链HCVRNA全部阴性;PBMC中正链HCVRNA阳性者5例,其中2例检出负链HCVRNA。在3例留取精液的患者中1例精液和精细胞中检出正链HCVRNA。精细胞未次洗液HCVRAN阴性,精细胞负链HCVRNA阴性。上述结果提示:(1)血浆中可能仅有正链HCVRNA存在;(2)HCV可在PBMC中存在,并可能在其中复制;(3)精液中有HCV存在,因此通过性交传播丙型肝炎的可能性确实存在,但HCV可能不在精细胞中复制 相似文献
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槲皮素对人早幼粒白血病细胞体外核转录活性影响 总被引:5,自引:0,他引:5
分别用4,20,100μmol/L槲皮素处理培养的HL-60细胞2d,或用20μmol/L槲皮素处理0-4d。分离纯化细胞核进行体外核转录实验,测定总RNA聚合酶活性和RNA聚合酶Ⅱ活性。结果显示这项槲皮素处理HL-60细胞后,体外核转录活性降低,总RNA聚合酶活性尤其是RNA聚合酶Ⅱ活性受抑制,并呈时间和剂量依赖关系。推测槲皮素抑制HL-60细胞RNA聚合酶活性,特别是抑制RNA聚合酶Ⅱ活性,可 相似文献
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目的:获取新生隐球菌总RNA。方法:异硫氰酸胍一步法。结果:成功法获得了高质量的[(1.23±0.03)μg/10^5细胞]新生隐球菌总RNA。结论:将异硫氰酸胍一步法应用于新生隐球菌总RNA的抽提,适用于大样本或小样本量的新生隐球菌RNA的分离,可以满足各种分离生物学研究的需要。 相似文献
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为了解感染丙型肝炎病毒后的外周血单个核细胞中是有丙肝病毒的存在及其意义。采用逆转录套式聚合酶链反应对28例丙型肝炎病毒感染血清、外周血单个核细胞及其末次洗液中的HCVRNA进行了检测。结果表明:28例血清的HCVRNA全部阳性;26例外血单个核的HCVRNA为阳性;28例末次洗液的HCVRNA全部为阴性。HCV可以感染外周血单个核细胞。提示外周血单个细胞中存在的HCVRNA在丙肝传播、复发、慢性化 相似文献
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为了解感染丙型肝炎病毒后的外周血单个核细胞中是否有丙肝病毒的存在及其意义。采用逆转录套式聚合酶链反应对28例丙型肝炎病毒感染者血清、外周血单个核细胞及其末次洗液中的HCVRNA进行了检测。结果表明:28例血清的HCVRNA全部阳性;26例外周血单个核细胞的HCVRNA为阳性;28例末次洗液的HCVRNA全部为阴性。HCV可以感染外周血单个核细胞。提示外周血单个核细胞中存在的HCVRNA在丙肝传播、复发、慢性化及抗病毒治疗方面有重大意义。 相似文献
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反义RNA对培养的红系细胞βIVS—2—654C→T基因剪接缺陷的纠正 总被引:1,自引:0,他引:1
目的观察反义RNAA2对培养的红系细胞中βIVS-2-654C→T(β654)突变基因剪接异常的纠正作用。方法将构建的反义核酸真核表达载体通过脂质体介导转染培养的成人红系细胞(hAE),应用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)定量测定β珠蛋白mRNA及微量珠蛋白生物合成技术分析转染前后hAE细胞内珠蛋白基因表达的变化。结果β654/β41-42基因型hAE细胞内,正常剪接的βmRNA占总βmRNA的比例从转染前的0.024上升到第8天的0.380;β654/βA基因型hAE细胞从0.396上升到0.883;与此相应,新合成的β珠蛋白链也出现升高:β654/β41-42基因型hAE细胞β/α比值从0.052升至0.359,β654/βA基因型hAE细胞从0.624升至0.820;正常人hAE细胞珠蛋白基因表达不受反义RNA的影响。结论反义RNAA2能有效地纠正hAE细胞内β654mRNA前体异常剪接,进而明显地升高β珠蛋白链的合成,为β654地中海贫血的反义RNA治疗提供了科学依据。 相似文献
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目的 本实验拟建立一种更经济、实用、简便又快速的RNA制备方法。方法 利用改进后的方法及试剂盒提取烧伤后小鼠小肠潘式结组织中的RNA,紫外分光光度计测定Dλ值、电泳、然后进行RT-PCR。结果 1紫外分光光度计测定所提RNA D260/D280比值均在2.0左右。第1g小鼠小肠潘氏结组织RNA的平均产量为300~500μg。(2)RNA甲醛变性琼脂糖凝胶电泳显示所提总RNA完整性好。(3)RT-P 相似文献
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用两种方法制备生物素c-myc癌基因探针,通过RNA-DNA斑点杂交技术,检测了白血病30例和2种白血病细胞株中c-myc原癌基因的RNA表达水平。结果显示,白血病细胞株、急性白血病和慢性粒细胞性白血病急性变患者的c-myc的RNA表达水平明显高于正常人和患其它血液病的患者,提示c-mycRNA水平的判定可提供一些有意义的临床信息;同时探讨了生物素和光敏生物素标记核酸探针的优越性。 相似文献
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从小鼠不同组织有效提取总RNA的一种简单方法 总被引:6,自引:0,他引:6
从小鼠不同组织有效提取总RNA的一种简单方法宋军,张鸣镝,张学,金春莲,孙开来(中国医科大学基础医学院医学遗传学教研室)唐小任(日本筑波理化学研究所DNA银行)关键词总RNA;Northern印迹在研究动物的基因及某些人类遗传病基因的过程中,常需分析... 相似文献
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为探讨兔网织红细胞RNA对人白血病细胞K562分化的影响。方法运用细胞生物学方法,将兔网织红细胞RNA与人白血病K562细胞共同培养4天,测定细胞密度,进行联苯胺染色,计数阳性细胞的百分化。结果生长在含有100μg/ml兔网织红细胞RNA培养液中的人白血病细胞K562,首先表现为细胞逐渐失去无限增殖能力,发生向终末期定向分化、合成和积累血红蛋白,出现终末期的表现型。K562细胞与RNA共同培养4天时联苯胺阳性终末细胞达60%,最后期达100%。结论哺乳类红细胞胞质中的RNA具有限制K562细胞无限的分裂和增殖,使K562细胞发生终末分化,并使其恶性表型逆转的作用。 相似文献
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对体外传代培养的人血管起源平滑肌肉瘤细胞进行直接和脂质体Tfx-50包裹的人心钠素(ANF)基因表达质粒pcDAN3/ANF转染,并以非同位素地高辛标记的RNA分子探针,对转染细胞中的ANFmRNA水平进行RNADotBlot分子杂交检测;同时,利用... 相似文献
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构建能在哺乳动物细胞中表达尿激酶受体(uPAR)反义RNA的表达质粒pURAS。方法采用RT-PCR方法扩增并克隆尿激酶受体(uPAR)cDNA5’端-46~454bp一段长500bp的顺序,利用DNA重组技术将该片段反向插入表达载体pcDNA3的CMV启动子下游。结果限制性内切酶分析和DNA顺序分析证实RT-PCR获得的uPARcDNA片段与文献报道相吻合;重组质粒pURAS转染肺癌细胞株95D,NorthernBlot证实转染细胞克隆有uPAR反义RNA的表达。结论重组质粒pURAS能在肺癌细胞株95D中表达尿激酶受体反义RNA,尿激酶受体(uPAR)反义RNA表达质粒的构建获得成功。 相似文献
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本文建立了一种简便、快速的去除牛血清白蛋白(BSA)中微量核糖核酸(RNA)酶的方法。未经高岭土处理的BSA有RNA酶活性,于一定量RNA37℃温浴2小时后部分RNA被水解;而应用高岭土吸附后BSA中RNA酶的活性明显降低,37℃2小时内未表现出RNA酶活性。BSA回收率达66.3%。 相似文献
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视黄酸对人卵巢癌细胞系3AO增殖分化的影响 总被引:2,自引:0,他引:2
观察不同浓度的高黄酸对人卵巢癌细胞系增殖及分化的影响。方法:以不同浓度RA处理培养的3AO细胞后,采用活细胞计数法细胞观察细胞增殖情况,用氨基安替比林法测定碱性磷酸酶活性;用酶联免疫法测定3AO细胞标志抗原CA125水平的变化。结果;RA对3AO细胞的增殖有明显抑制作用,10^-6mol/L RN作用5d后活细胞计数为对照的42.3%;用不同浓度的RA处理细胞5d后,ALP活性均有不同程度增加,呈 相似文献