改进SDS-Phenol法快速提取细胞总RNA

比较改进ＳＤＳ－Ｐｈｅｎｏｌ法与常用的ＡＧＰＣ法提取细胞之总ＲＮＡ优缺点,方法：同时采用两种方法对同批稳定培养的一株淋巴瘤细胞系进行总ＲＮＡ提取,以收获ＲＮＡ拉量和纯度为比较指标,并用甲醛变性电泳验证ＳＤＳ－Ｐｈｅｎｏｌ法提取ＲＮＡ的完整性。     

肺吸虫和血吸虫总RNA的提取及电泳分析

目的为构建肺吸虫ｃＤＮＡ文库，获得目的重组抗原，用以肺吸虫病的诊断，而制备卫氏肺吸虫的总ＲＮＡ。方法采用改进的一步法（Ａ和Ｂ）提取了卫氏肺吸虫成虫的总ＲＮＡ，同时提取了日本血吸虫成虫及其虫卵、小鼠肝脏的总ＲＮＡ。结果人睾丸组织的总ＲＮＡ经琼脂糖凝胶电泳，观察到方法Ａ所提取的肺吸虫、血吸虫及其虫卵的总ＲＮＡ在凝胶上只有一条略大于１８Ｓ的条带。用方法Ｂ提取的肺吸虫以及血吸虫的总ＲＮＡ则出现２条条带，其中１条色淡，并略小于２８Ｓ，另１条色深，并略大于１８Ｓ。结论肺吸虫的Ｌ－ｒＲＮＡ中也存在切口现象。     

Northern杂交法分析转染的胞苷酶

目的：研究人胞苷转移酶（ＣＴ）ｃＤＮＡ在鼠巨噬细胞中的表达。方法：按照Ｔ．Ｍａｎｉａｔｉｓ等人的方法人转染的巨噬细胞中提取总ＲＮＡ，电泳分离ＲＮＡ，转移ＲＮＡ至尼龙膜并固定，制备３２ｐ标记的胞苷转移酶ＤＮＡ探针，杂交及放射性自显影。结果：对照组无表达，同类转染的细胞均有不同程度的表达。结论：制备探针前应用电泳法确定ＣＴｃＤＮＡ片段的浓度比紫外光吸收法更准确适用。Ｑｕｉｃｋｓｐｉｎ柱（Ｓｅｐｈａｄｅ     

精细胞及血单个核细胞中丙型肝炎病毒RNA及其负链检测

用聚合酶链反应（ＰＣＲ）方法对８例慢性丙型肝炎患者的血浆、外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）、精液和精细胞中的正链和负链丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）ＲＮＡ进行检测，以了解ＨＣＶ在肝外细胞中是否存在，有否复制。结果血浆中正链ＨＣＶＲＮＡ均阳性，而负链ＨＣＶＲＮＡ全部阴性；ＰＢＭＣ中正链ＨＣＶＲＮＡ阳性者５例，其中２例检出负链ＨＣＶＲＮＡ。在３例留取精液的患者中１例精液和精细胞中检出正链ＨＣＶＲＮＡ。精细胞未次洗液ＨＣＶＲＡＮ阴性，精细胞负链ＨＣＶＲＮＡ阴性。上述结果提示：（１）血浆中可能仅有正链ＨＣＶＲＮＡ存在；（２）ＨＣＶ可在ＰＢＭＣ中存在，并可能在其中复制；（３）精液中有ＨＣＶ存在，因此通过性交传播丙型肝炎的可能性确实存在，但ＨＣＶ可能不在精细胞中复制     

槲皮素对人早幼粒白血病细胞体外核转录活性影响

分别用４，２０，１００μｍｏｌ／Ｌ槲皮素处理培养的ＨＬ－６０细胞２ｄ，或用２０μｍｏｌ／Ｌ槲皮素处理０－４ｄ。分离纯化细胞核进行体外核转录实验，测定总ＲＮＡ聚合酶活性和ＲＮＡ聚合酶Ⅱ活性。结果显示这项槲皮素处理ＨＬ－６０细胞后，体外核转录活性降低，总ＲＮＡ聚合酶活性尤其是ＲＮＡ聚合酶Ⅱ活性受抑制，并呈时间和剂量依赖关系。推测槲皮素抑制ＨＬ－６０细胞ＲＮＡ聚合酶活性，特别是抑制ＲＮＡ聚合酶Ⅱ活性，可     

快速分离新生隐球菌RNA

目的：获取新生隐球菌总ＲＮＡ。方法：异硫氰酸胍一步法。结果：成功法获得了高质量的［（１．２３±０．０３）μｇ／１０＾５细胞］新生隐球菌总ＲＮＡ。结论：将异硫氰酸胍一步法应用于新生隐球菌总ＲＮＡ的抽提，适用于大样本或小样本量的新生隐球菌ＲＮＡ的分离，可以满足各种分离生物学研究的需要。     

丙型肝炎病人外周血单个核细胞中HCVRNA的检测及临床意义

为了解感染丙型肝炎病毒后的外周血单个核细胞中是有丙肝病毒的存在及其意义。采用逆转录套式聚合酶链反应对２８例丙型肝炎病毒感染血清、外周血单个核细胞及其末次洗液中的ＨＣＶＲＮＡ进行了检测。结果表明：２８例血清的ＨＣＶＲＮＡ全部阳性；２６例外血单个核的ＨＣＶＲＮＡ为阳性；２８例末次洗液的ＨＣＶＲＮＡ全部为阴性。ＨＣＶ可以感染外周血单个核细胞。提示外周血单个细胞中存在的ＨＣＶＲＮＡ在丙肝传播、复发、慢性化     

丙型肝炎病人外周血单个核细胞中HCV RNA的检测及临床意义

为了解感染丙型肝炎病毒后的外周血单个核细胞中是否有丙肝病毒的存在及其意义。采用逆转录套式聚合酶链反应对２８例丙型肝炎病毒感染者血清、外周血单个核细胞及其末次洗液中的ＨＣＶＲＮＡ进行了检测。结果表明：２８例血清的ＨＣＶＲＮＡ全部阳性；２６例外周血单个核细胞的ＨＣＶＲＮＡ为阳性；２８例末次洗液的ＨＣＶＲＮＡ全部为阴性。ＨＣＶ可以感染外周血单个核细胞。提示外周血单个核细胞中存在的ＨＣＶＲＮＡ在丙肝传播、复发、慢性化及抗病毒治疗方面有重大意义。     

反义RNA对培养的红系细胞βIVS—2—654C→T基因剪接缺陷的纠正

目的观察反义ＲＮＡＡ２对培养的红系细胞中βＩＶＳ－２－６５４Ｃ→Ｔ（β６５４）突变基因剪接异常的纠正作用。方法将构建的反义核酸真核表达载体通过脂质体介导转染培养的成人红系细胞（ｈＡＥ），应用逆转录－聚合酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）定量测定β珠蛋白ｍＲＮＡ及微量珠蛋白生物合成技术分析转染前后ｈＡＥ细胞内珠蛋白基因表达的变化。结果β６５４／β４１－４２基因型ｈＡＥ细胞内，正常剪接的βｍＲＮＡ占总βｍＲＮＡ的比例从转染前的０．０２４上升到第８天的０．３８０；β６５４／βＡ基因型ｈＡＥ细胞从０．３９６上升到０．８８３；与此相应，新合成的β珠蛋白链也出现升高：β６５４／β４１－４２基因型ｈＡＥ细胞β／α比值从０．０５２升至０．３５９，β６５４／βＡ基因型ｈＡＥ细胞从０．６２４升至０．８２０；正常人ｈＡＥ细胞珠蛋白基因表达不受反义ＲＮＡ的影响。结论反义ＲＮＡＡ２能有效地纠正ｈＡＥ细胞内β６５４ｍＲＮＡ前体异常剪接，进而明显地升高β珠蛋白链的合成，为β６５４地中海贫血的反义ＲＮＡ治疗提供了科学依据。     

烧伤后小鼠小肠潘氏结RNA的快速制备

目的 本实验拟建立一种更经济、实用、简便又快速的ＲＮＡ制备方法。方法 利用改进后的方法及试剂盒提取烧伤后小鼠小肠潘式结组织中的ＲＮＡ，紫外分光光度计测定Ｄλ值、电泳、然后进行ＲＴ－ＰＣＲ。结果 １紫外分光光度计测定所提ＲＮＡ Ｄ２６０／Ｄ２８０比值均在２．０左右。第１ｇ小鼠小肠潘氏结组织ＲＮＡ的平均产量为３００～５００μｇ。（２）ＲＮＡ甲醛变性琼脂糖凝胶电泳显示所提总ＲＮＡ完整性好。（３）ＲＴ－Ｐ     

一种从总RNA制备非放射性cDNA探针的方法

目的介绍一种从总ＲＮＡ制备ＤＩＧ标记的非放射性ｃＤＮＡ探针的方法。方法以总ＲＮＡ的反转录产物为模板,用随机引物延伸法掺入ＤＩＧ－１１－ｄＵＴＰ来制备ｃＤＮＡ探针。结果该方法标记的探针灵敏度较高,可达０．０１ｇｐ。结论这种ｃＤＮＡ探针可用于差异筛选的反向杂交及Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交。     

两种冻存方法在肿瘤微转移检测中的运用

目的 建立科学的外周血有核细胞的冻存方法,为肿瘤的微转移逆转录ＰＣＲ检测打好基础。方法 分离１５例ＣＥＡ分泌性肿瘤患者外周血有核细胞,分别用两种方法冻存,设为两组。对细胞进行总结ＲＮＡ的抽提,测定ＲＮＡ ＯＤ值并行１％琼脂糖凝胶电泳,进一步逆转录ＰＣＲ反应、聚丙烯酰胺凝胶电泳分析最终产物。结果 经两种方法冻存的细胞,其总ＲＮＡ ＯＤ值差异无显著性,电泳均见竹节样带。两组逆转录ＰＣＲ结果一致,阳性率     

生物素标记核酸探针检测白血病患者c－myc原癌基因的表达水平

用两种方法制备生物素ｃ－ｍｙｃ癌基因探针，通过ＲＮＡ－ＤＮＡ斑点杂交技术，检测了白血病３０例和２种白血病细胞株中ｃ－ｍｙｃ原癌基因的ＲＮＡ表达水平。结果显示，白血病细胞株、急性白血病和慢性粒细胞性白血病急性变患者的ｃ－ｍｙｃ的ＲＮＡ表达水平明显高于正常人和患其它血液病的患者，提示ｃ－ｍｙｃＲＮＡ水平的判定可提供一些有意义的临床信息；同时探讨了生物素和光敏生物素标记核酸探针的优越性。     

从小鼠不同组织有效提取总RNA的一种简单方法

从小鼠不同组织有效提取总ＲＮＡ的一种简单方法宋军，张鸣镝，张学，金春莲，孙开来（中国医科大学基础医学院医学遗传学教研室）唐小任（日本筑波理化学研究所ＤＮＡ银行）关键词总ＲＮＡ；Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹在研究动物的基因及某些人类遗传病基因的过程中，常需分析...     

兔网织红细胞RNA诱导K562细胞向终末期定向分化的研究

为探讨兔网织红细胞ＲＮＡ对人白血病细胞Ｋ５６２分化的影响。方法运用细胞生物学方法，将兔网织红细胞ＲＮＡ与人白血病Ｋ５６２细胞共同培养４天，测定细胞密度，进行联苯胺染色，计数阳性细胞的百分化。结果生长在含有１００μｇ／ｍｌ兔网织红细胞ＲＮＡ培养液中的人白血病细胞Ｋ５６２，首先表现为细胞逐渐失去无限增殖能力，发生向终末期定向分化、合成和积累血红蛋白，出现终末期的表现型。Ｋ５６２细胞与ＲＮＡ共同培养４天时联苯胺阳性终末细胞达６０％，最后期达１００％。结论哺乳类红细胞胞质中的ＲＮＡ具有限制Ｋ５６２细胞无限的分裂和增殖，使Ｋ５６２细胞发生终末分化，并使其恶性表型逆转的作用。     

外源性ANF基因在人血管平滑肌肉瘤细胞中的表达

对体外传代培养的人血管起源平滑肌肉瘤细胞进行直接和脂质体Ｔｆｘ－５０包裹的人心钠素（ＡＮＦ）基因表达质粒ｐｃＤＡＮ３／ＡＮＦ转染，并以非同位素地高辛标记的ＲＮＡ分子探针，对转染细胞中的ＡＮＦｍＲＮＡ水平进行ＲＮＡＤｏｔＢｌｏｔ分子杂交检测；同时，利用...     

反义RNA对地中海贫血红系细胞β-珠蛋白mRNA异常剪接的纠正作用

目的 研究反义ＲＮＡ对β－地中海贫血红系细胞ＩＶＳ２－６５４Ｃ→Ｔ（β＾６５４）突变ｍＲＮＡ异常剪接的纠正作用。方法 构建特异性针对β＾６５４ｍＲＮＡ 前体异常剪接位点的反义ＲＮＡ表达载体,和不针对上述位点的反义对照载体,转染培养的β＾６５４红系细胞后,抽提总ＲＮＡ;以ＲＴ－ＰＣＲ法作ｍＲＮＡ定量,检测正常和异常剪接的β－珠蛋白ｍＲＮＡ产物的比例［β／（β＋β＾＊）］;以珠蛋白肽链体外生物合成分析     

尿激酶受体反义RNA表达质粒的构建

构建能在哺乳动物细胞中表达尿激酶受体（ｕＰＡＲ）反义ＲＮＡ的表达质粒ｐＵＲＡＳ。方法采用ＲＴ－ＰＣＲ方法扩增并克隆尿激酶受体（ｕＰＡＲ）ｃＤＮＡ５’端－４６～４５４ｂｐ一段长５００ｂｐ的顺序，利用ＤＮＡ重组技术将该片段反向插入表达载体ｐｃＤＮＡ３的ＣＭＶ启动子下游。结果限制性内切酶分析和ＤＮＡ顺序分析证实ＲＴ－ＰＣＲ获得的ｕＰＡＲｃＤＮＡ片段与文献报道相吻合；重组质粒ｐＵＲＡＳ转染肺癌细胞株９５Ｄ，ＮｏｒｔｈｅｒｎＢｌｏｔ证实转染细胞克隆有ｕＰＡＲ反义ＲＮＡ的表达。结论重组质粒ｐＵＲＡＳ能在肺癌细胞株９５Ｄ中表达尿激酶受体反义ＲＮＡ，尿激酶受体（ｕＰＡＲ）反义ＲＮＡ表达质粒的构建获得成功。     

一种去除牛血清白蛋白中RNA酶的方法

本文建立了一种简便、快速的去除牛血清白蛋白（ＢＳＡ）中微量核糖核酸（ＲＮＡ）酶的方法。未经高岭土处理的ＢＳＡ有ＲＮＡ酶活性，于一定量ＲＮＡ３７℃温浴２小时后部分ＲＮＡ被水解；而应用高岭土吸附后ＢＳＡ中ＲＮＡ酶的活性明显降低，３７℃２小时内未表现出ＲＮＡ酶活性。ＢＳＡ回收率达６６．３％。     

视黄酸对人卵巢癌细胞系3AO增殖分化的影响

观察不同浓度的高黄酸对人卵巢癌细胞系增殖及分化的影响。方法：以不同浓度ＲＡ处理培养的３ＡＯ细胞后，采用活细胞计数法细胞观察细胞增殖情况，用氨基安替比林法测定碱性磷酸酶活性；用酶联免疫法测定３ＡＯ细胞标志抗原ＣＡ１２５水平的变化。结果；ＲＡ对３ＡＯ细胞的增殖有明显抑制作用，１０＾－６ｍｏｌ／Ｌ ＲＮ作用５ｄ后活细胞计数为对照的４２．３％；用不同浓度的ＲＡ处理细胞５ｄ后，ＡＬＰ活性均有不同程度增加，呈