转基因动物技术研究进展

转基因动物技术起始于上个世纪七十年代末,随着生物科学的飞速发展,此技术也得到很大的进步。转基因动物技术在生物医药、农业等领域具有重要的作用。本文就转基因动物技术的发展、方法、应用及面临的问题做一综述。     

电脉冲介导基因转移效率的实验研究

目的　研究电脉冲介导的基因转移效率及其最佳的基因转移的电脉冲参数。方法　用微量注射器将pcD2/LacZ质粒10μg,在昆明小鼠的股四头肌注射,1～2min内在注射部位给予不同参数的电脉冲刺激(不同的电脉冲参数每组10只小鼠),然后进行β-半乳糖苷酶活性的测定或酶组织化学染色。同时设空白对照组及单纯注射组。结果　电脉冲可明显增加LacZ基因的表达,电脉冲组的β-半乳糖苷酶活性（131.6U/mg±86.5U/mg蛋白）是单纯注射组（4.9U/mg±1.0U/mg蛋白）的30倍（P<0.05）。组织化学染色结果表明电脉冲组肌肉组织中β-半乳糖苷酶蓝色颗粒的数目和染色的程度均明显高于单纯肌肉注射组。当电脉冲参数电压200V/cm,波宽40ms,脉冲次数6次和频率1Hz时,可获得最高的基因表达效率。结论　在最佳的电脉冲参数条件下,电脉冲介导的基因转移可获得较高的基因表达。     

脂质体介导外源基因体外转染精子的研究

为探索精子作为外源基因的载体建立转基因小鼠的可行性。方法我们从性成熟小鼠的输精管及部分附睾管中取出精子，与阳离子脂质体包裹的ＤＮＡ混合孵育之后将其注入超排卵小鼠的阴道内，４８ｈ后收集Ⅱ细胞胚胎细胞。结果（１）精子可转染上外源ＤＮＡ，转染率达５３％；（２）转染有外源ＤＮＡ的精子可使Ⅱ细胞期胚胎携带上外源基因，携带率为１１．５％。结论小鼠输精管及附睾管内的精子可被脂质体包裹的外源ＤＮＡ转染并可作为载体     

受体介导的基因转移系统

目前，在非病毒的基因转穆方法中，受体介导的基因转移(receptor-mediated genetransfer，RMGT)受到特别广泛的重视，近几年来对该方法的研究逐渐深入使之成为具有潜在临床应用价值的基因转移方法。本文就RMGT系统的概况作一综述。     

HPV转基因动物研究进展

人乳头状瘤病毒(Human papillomavirus,HPV)可以引起人宫颈癌、肛门生殖器癌、尖锐湿疣等多种良、恶性肿瘤,严重威胁人类健康。然而,由于HPV严格的嗜人类上皮组织的特性,自然状态下不感染任何实验动物,给研究HPV的感染过程、致病机理,以及开发治疗HPV感染的药物等带来了困难,因此,研究HPV的动物模型显得尤为重要。     

受体介导TNFα基因转移的实验研究

目的检测受体介导基因转移人肿瘤坏死因子α基因的靶向性和表达效率.方法人转铁蛋白同多聚赖氨酸共价交联,盐键合成交联蛋白和外源基因质粒的超分子复合物,对表达转铁蛋白受体的肿瘤细胞株进行β-半乳糖苷酶和人肿瘤坏死因子α基因转移.结果检测到外源基因表达;转染人肿瘤坏死因子α基因后细胞上清液检测到一过性人肿瘤坏死因子α活性升高.结论受体介导基因转移肯有良好的靶向性,但表达效率低.     

脱唾液酸糖蛋白受体介导的肝靶向性基因转移方式的研究进展

受体介导的基因转移方式是近几年来发展起来的一种新的基因转移策略，和目前用于基因治疗的其他基因转移方式相比，具有其独特的特点。其中脱唾液酸糖蛋白是肝细胞表面独有的脱唾液酸糖蛋白受体的天然配体，其介导的肝靶向性基因转移在肝脏的遗传性疾病的临床前研究中发挥了重要作用。本文就脱唾液酸糖蛋白受体介导的基因转移及相关的某些肝靶向性的受体介导的基因转移的优、缺点作了综合性的评价，并总结了制备有效的配体-DNA复合物的常见方法和影响因素，及其在体内运输过程中的药物动力学特点。     

肌肉介导心钠素基因转移对肾性高血压大鼠的作用

目的：观察肌肉介导心钠素基因转移对肾性高血压大鼠的治疗作用。方法：利用基因克隆技术克隆和构建了高表达效率的人ＡＮＦ ｃＤＮＡ基因真核表达质粒,应用肌肉缝线法将质粒转移到大鼠骨骼肌中。结果：ＡＮＦ基因可以在骨骼肌中表达,并可释放人血,明显降低肾性高血压大鼠的血压,并产生利钠利尿效应,其作用可维持４￣６周。结论：应用基因缝线进行肌肉介导的基因转移,可在肌肉内有效表达效应蛋白质,且可释放入血,产生药物治     

转基因动物研究进展

转基因动物就是指通过人工的方法将外源基因导入动物染色体基因组，使之稳定表达并能遗传给后代的一类动物。目前制备转基因动物的方法主要有显微注射法、反转录病毒感染法、胚胎干细胞法等。转基因动物的迅速发展使医药、农业、环保、生物材料等领域发生了巨大变革。本文主要对转基因动物的研究进展及其常用的各种转基因方法、转基因动物的应用和研究前景进行概述。     

转基因动物技术的进展

转基因动物技术自八十年代初建立以来，对生命科学的发展起到了重大的推动作用。它使动物和人体基因工程研究由以往的单基因离体水平的操作，发展到了离体和在体相配合的，分子和细胞水平操纵的，由动物整体水平产生效应的崭新阶段。建立转基因动物的方法有显微注射法及逆转录病毒感染法等。逆转录病毒感染法由于病毒感染力高，不需特殊仪器，易于操作，并且是单拷贝整合而被视为高效基因转移技术。     

Neprilysin基因转染对阿尔茨海默病防治的研究进展

脑中性内肽酶(NEP)是M13锌金属蛋白酶家族的一种Ⅱ型整合细胞膜糖蛋白,广泛存在于中枢神经系统及外周各种组织中。近年来,有研究表明NEP基因转染可对神经毒物β淀粉样蛋白发挥降解或清除作用,因此在阿尔茨海默病(AD)的防治中具有重要意义。迄今,关于NEP基因转染对AD防治方面的研究综述尚未见报道,该文将较系统地阐述NEP基因转染及其方法在AD疾病防治研究中的重要作用,为今后AD基础与临床研究提供借鉴。     

RNA干扰及其在动物基因功能研究中的应用

RNA干扰（RNAi）是指具有同源性的双链RNA分子导八细胞后，使促进与之同源的mRNA发生特异性降解的现象。随着对RNAi分子机制研究深入，它将成为研究动物基因功能、蛋白质功能、基因治疗、基因药物的强有力的工具。     

心力衰竭动物模型研究进展

心力衰竭动物模型研究心力衰竭的发病机制、病理改变及疾病的诊断和治疗起着重要作用,但不同造模方法对研究心力衰竭的领域有所差异,并且方法的选择还要考虑实验设备、技术、经费、时间等问题。为能更好地研究心力衰竭,现对近年来常用心力衰竭模型的制作方法及其应用,以及基因技术在心力衰竭研究中的应用等方面予以综述。     

转基因动物研究进展

转基因动物就是指通过人工的方法将外源基因导入动物染色体基因组,使之稳定表达并能遗传给后代的一类动物。目前制备转基因动物的方法主要有显微注射法,反转录病毒感染法,胚胎干细胞法等。转基因动物技术已广泛渗透于分子生物学、免疫学、生物制药、畜牧育种以及器官移植等研究领域中。本文通过对当前转基因动物的研究进展做出分析,以探讨当前转基因动物的发展方向和展望未来转基因动物的前景。     

实验动物伦理研究进展

近年来,人们开始加深对实验动物的伦理问题展开研究,与过去从不关心实验动物相比,如今人们对动物实验制定了一系列的原则、措施和法律法规,这说明目前对实验动物伦理的研究取得了长足的进步。该文首先叙述了近年来研究者们对于动物实验伦理的总体认识,然后从动物实验的争论出发,总结了目前对于实验动物伦理的审查工作及其进展,最后在此基础上提出"三个加大"的展望,希望可以为今后实验动物伦理工作的发展提供帮助。     

学习和记忆基因工程动物模型研究进展

以学习和记忆的分子基础为线索综述了近年来与学习和记忆相关的基因工程动物模型的研究进展，阐明各种模型制作技术的过程及利弊，探讨和预测未来研究方向，为深入进行学习和记忆分子机制研究及应用提供基础。     

基因打靶技术在人类疾病动物模型研究中的应用

人类疾病动物模型在医学研究中起着非常重要的作用，而自然发生的人类疾病已远远不能满足医学研究的需要。利用基因打靶技术开展人类疾病动物模型的研究具有广阔的应用前景。本文就基因打靶技术及其在人类疾病动物模型研究中的应用做一介绍。     

心包穿刺简易装置在基因转染中的应用

目的探讨自制心包穿刺装置转染心脏的安全性、可行性。方法应用磷酸钙沉淀方法制备携带大肠杆菌LacZ基因复制缺陷的重组腺病毒(Ad-LacZ),将12头中国小型猪分为实验组和对照组,采用球囊堵塞前降支第一对角支远端,心肌梗死模型建立后即刻,采用自制简易心包腔穿刺装置经皮剑突下穿刺,成功后置中心静脉导管于心包腔内并行转染,28 d后处死。实验组:胶原酶1200 U及透明质酸酶3000 U预处理心包后,在心包腔内注射Ad-LacZ基因2.0×109p.f.u;对照组:同样方法预处理心包后,在心包腔内注射生理盐水1 mL。于注射后3、7及28 d分别对缺血心肌进行染色及病理观察。结果冠状动脉造影证实前降支远端完全闭塞,病理显示心肌有缺血和梗死;实验组注射Ad-LacZ基因后第3、第7天及28d后X-gal染色有阳性细胞,以第7天最明显,对照组无阳性细胞。结论自制的心包腔简易穿刺装置将腺病毒载体转染至缺血心肌是安全的,可行的,并且腺病毒可持续表达4周。     

肝纤维化动物模型研究进展

肝纤维化动物模型的建立对全面研究肝纤维化的病因机制及临床肝纤维化的早期诊断、治疗及预防手段发展有重大意义。但是由于人和动物种属差异及肝纤维化的病因多样性,肝纤维化动物模型的建立还处于不断研究和探索中。本文就近期研究领域中较成熟的肝纤维化模型进行了简要综述,以供基础及临床研究参考。     

Lipofectin介导转移的外源性ADA基因在小鼠T淋巴细胞中的表达

本文选择小鼠T淋巴细胞系（YAC-I）为基因转移的靶细胞，采用Lipofectin介导的基因转移方法，将载有人腺苷脱氨酶（ADA）基因的真核表达载体和载有Neo~R基因的真核表达载体共转化导入体外培养的YAC-I细胞，然后对转化筛选后的YAC-I细胞进行了ADA的定性定量分析。实验结果表明：经转化筛选的YAC-I细胞中的ADA活性为未转化YAC-I细胞中内源ADA活性的l．6倍，且转化筛选的YAC-I可经电泳分离出两条迁移率不同的人、鼠ADA同工酶带，提示Lipofectin介导转移的外源性人ADA基因在小鼠淋巴细胞中获得了表达，从而为以后开展基因治疗研究提供了一定的实验依据。