Taqman技术检测NG、CT、Uu的临床研究

目的：评价Taqman技术检测临床标本中主要性病病原体的应用价值。方法：应用Taqman技术、常规PCR技术及培养法检测100份性病科门诊患者生殖泌尿道拭子标本，比较三种方法检测淋病奈瑟菌（NG），沙眼衣原体（CT），解脲支原体(Uu)的灵敏度。500份性病科门诊患者生殖泌尿道拭子标本同时经Taqman技术及常规PCR技术检测，结果不符者使用培养法验证，以比较Taqman技术及常规PCR技术的特异性。结果：在100份临床标本检测中，Taquman技术、常规PCR及培养法检出阳性率分别为41％，35％，21％。在500份送检标本中，Taqman技术检出阳性标本204份，常规PCR检出阳性标本181份，其中结果不符的41份标本经重复培养验证，37份与Taqman技术检测结果相符。结论：Taqman技术具有良好的敏感性和特异性，集PCR扩增、杂交及荧光自动化检测于一体，实验过程简便、快速、易于质控，是检测性病病原体的有效方法。     

检测淋病柰瑟菌、沙眼衣原体、解脲支原体的临床方法评价

目的：评价Taqman技术检测临床标本中主要性病病原体的应用价值。应用：Taqman技术，常规PCR技术及培养法检测100份性病科门诊患者生殖泌尿道拭予标本，比较3种方法检测淋病票瑟菌（NG）、沙眼衣原体（CT）、解脲支原体（Uu）的灵敏度。500份性病科门诊患者生殖泌尿道拭子标本同时经Taqman技术及常规PCR技术检测，结果不符者使用培养法验证，以比较Taqman技术及常规PCR技术的特异性。结果：在100份临床标本检测中，Taqman技术，常规PCR及培养法检出阳性率分别为41％，35％，21％，在500份送检标本中，Taqman技术检出阳标本204份。常规PCR检出性标本181份，其中结果不符的41例分标本经重复培养验证。37例与Taqman技术测结果相符。结论：Taqman技术具有良好的敏感性和特异性，集PCR扩增，杂交及荧光自动化检测于一体，实验过程简便，快速，易于质控，是检测性病病原体的有效方法。     

利用寡核苷酸芯片快速检测结核分枝杆菌利福平耐药rpoB基因突变

目的:开发快速检测结核分枝杆菌利福平耐药rpoB寡核苷酸突变的基因芯片。方法:根据结核杆菌rpoB基因序列设计探针和引物并制备基因芯片,从临床痰标本中提取结核菌的基因组DNA,PCR扩增含有rpoB基因突变位点的特异DNA片段,荧光标记后与芯片上的特异性寡核苷酸探针进行杂交,同时与DNA测序法比较。结果:22株临床痰标本有18株可用寡核苷酸芯片检测出来,正确率可达82%;患者痰液中少量DNA足够进行芯片检测,无须细菌培养。结论:利用寡核苷酸芯片检测结核菌对利福平的耐药性具有较高的准确性和敏感性,可以应用于临床耐药性诊断。     

结核分枝杆菌荧光PCR试剂盒的研制及临床试验

目的：用荧光PCR(fluorescence PCR,F-PCR)方法研制结核分枝杆菌（TB）DNA检测试剂盒，通过临床试验评价其性能，并与其他方法进行比较。方法：F－PCR是PCR和荧光探针杂交技术结合所产生的PCR方法。由于采用完全闭管荧光检测，避免了PCR后处理导致的假阳性污染；又采用了荧光检测技术，可以提高检测的灵敏性。应用F－PCR检测了297份肺结核病人和249份非结核对照者的痰液标本，以改良罗氏培养法、金胺荧光染液涂片法、Abbott公司LCx试剂盒检测作为对照。结果：设计合成了TB F－PCR诊断试剂盒。检测阳性率49．1％，灵敏性89．2％，特异性98．8％，符合率93．6％。结论：F－PCR在灵敏上显著优于培养法和涂片法，与LCx试剂盒检测无显著差异。F－PCR试剂盒可以检测TB的真实感染情况，对于临床诊断和疗效考察有一定的指导意义。     

实时荧光PCR和RT—PCR方法检测登革病毒的比较研究

目的通过2种检测登革病毒方法的比较，以提高检测登革病毒的灵敏度和特异性。方法利用Taqman MGB技术，根据登革病毒3’端非编码区的一段高度保守序列，设计登革1～4型荧光PCR通用引物和TaqmanMGB探针，以登革热毒株作为标准，以乙脑毒株作对照，建立实时荧光PCR检测登革病毒的快速方法。并对10份ELISA法检测阳性的临床血清标本进行RT—PCR及荧光PCR扩增。结果RT—PCR检测10份临床血清标本，2份阳性，阳性率为20％。实时荧光PCR检测登革病毒与乙脑病毒无交叉反应，检测10份临床血清标本，5份阳性，阳性率为50％。从RNA提取到检测结果仅需4h。结论Taqman MGB实时PCR检测方法快速、敏感性高、特异性强，可作为登革病毒的快速检测方法，应用于登革热的临床早期诊断。     

荧光定量PCR和抗酸染色在联合诊断结核病及其疗效考核中的应用

目的探讨荧光定量PCR法和抗酸染色检测技术在结核病联合诊断中的价值。方法对89例临床确诊的结核病患者和22例非结核呼吸系统疾病患者的痰标本同时应用荧光定量PCR法和痰涂片抗酸染色法检测结核杆菌,并检测外周血血清结核抗体,对3种检测方法的结果进行分析比较。结果治疗前后荧光定量PCR阳性率为60.67%、25.84%,涂片抗酸染色法阳性率为23.60%、6.74%,结核抗体阳性率为71.91%和86.51%。痰标本的荧光定量PCR法阳性率均要高于抗酸染色法阳性率,比较差异有统计学意义（P〈0.01）。结论荧光定量PCR技术对肺结核诊断方面灵敏度和特异性较高,同时反映抗结核治疗过程中痰标本中结核杆菌数量的变化,不仅提高了结核菌检出的阳性率,同时对抗结核药物有一定的疗效考核效果。     

聚合酶链反应结合DNA探针杂交在结核杆菌检测中的应用

应用PCR和Southern转移、光敏生物素标记DNA探针杂交技术进行了结核杆菌检测的应用研究。实验结果表明PCR结合探针杂交可将PCR敏感性提高100倍,但不影响其特异性。106例结核性痰标本PCR检测阳性率为46.2％,结合探针杂交达76.4％,涂片阴性的标本差异尤为明显,因而显著提高了结核阳性诊断变率。21例非结核性痰标本PCR和探针杂交未发现假阳性。对临床可疑而PCR阴性标本有必要合用DNA探针杂交。     

荧光定量PCR检测结核分枝杆菌

目的比较荧光定量PCR与抗酸染色、结核抗体检测结核分枝杆菌的灵敏度和特异性,评价荧光定量PCR检测临床标本中结核杆菌的应用价值。方法对48例临床确诊的结核病患者和21例非结核呼吸系统疾病患者的痰标本应用荧光定量PCR法和痰涂片抗酸染色法检测,并分离患者外周血血清检测结核抗体,对3种检测方法的结果进行分析比较。结果抗酸染色法检测结核杆菌阳性率为22.9%,特异性为100%;血清结核抗体检测阳性率为77.1%特异性为85.7%;荧光定量PCR检测阳性率为52.1%,特异性为100%。结论荧光定量PCR是一种快速、防污染、敏感性高、特异性强的结核分枝杆菌辅助诊断方法,在临床上有重要应用价值。     

聚合酶链反应-微孔板杂交技术检测临床标本中结核分枝杆菌

目的评价聚合酶链反应 (PCR) -微孔板杂交技术检测临床标本中结核分枝杆菌的价值。方法 :应用结核病细菌学涂片、培养常规检测方法及PCR -微孔板杂交技术检测 138例结核病患者痰标本 ,4 2例非结核呼吸系统疾病患者痰标本。结果 :用常规细菌学方法检测临床标本中结核杆菌敏感度为 37% (5 1/ 138) ,用PCR-微孔板杂交技术检测敏感度为 5 6 % (77/ 138) ,高于常规检测法 19%。用PCR -微孔板杂交技术检测临床标本特异性为 10 0 %。结论 :PCR -微孔板杂交技术将PCR扩增、核酸杂交的技术及酶免技术相结合 ,简便、快速、敏感度高、特异性强 ,是结核病辅助诊断的有效方法之一。     

结核分支杆菌荧光PCR试剂盒的研制及临床试验

目的用荧光PCR(fluorescence PCR,F-PCR)方法研制结核分支杆菌(TB)DNA检测试剂盒,通过临床试验评价其性能,并与其他方法进行比较。方法F-PCR是PCR和荧光探针杂交技术结合所产生的PCR方法。由于采用完全闭管荧光检测,避免了PCR后处理导致的假阳性污染;又采用了荧光检测技术,可以提高检测的灵敏性。应用F-PCR检测了297份肺结核病人和249份非结核对照者的痰液标本,以改良罗氏培养法、金胺荧光染液涂片法、Abbott公司的LCx试剂盒检测作为对照。结果设计合成了TB F-PCR诊断试剂盒。检测阳性率49.1%,灵敏性89.2%,特异性98.8%,符合率93.6%。结论F-PCR在灵敏性上显著优于培养法和涂片法,与LCx试剂盒检测无显著差异。F-PCR试剂盒可以检测TB的真实感染情况,对于临床诊断和疗效考察有一定的指导意义。     

荧光定量PCR在结核分枝杆菌快速诊断中的研究

目的 在痰液标本中,探讨荧光定量PCR技术快速检测结核分枝杆菌应用的诊断价值。方法 选取210例初诊的疑似结核病患者的痰液标本,分别进行痰涂片、MGIT960液体培养以及荧光定量PCR的检测,其中103例标本还进行了Xpert MTB/RIF检测,通过比较来分析荧光定量PCR在检测结核分枝杆菌方面的敏感度和特异性。结果 荧光定量PCR方法从痰液中检出结核分枝杆菌的阳性率高达28%,显著高于痰涂片15.2%的检出率,并且与结核培养的30.9%检出率相接近。以MGIT960液体培养为金标准,荧光定量PCR方法检测痰液标本中的结核分枝杆菌的敏感度和特异度分别为67.7%、 89.7%,阳性预测值和阴性预测值分别为74.6%和86.1%,两者之间差异没有统计学意义。将荧光定量PCR方法与Xpert MTB/RIF诊断方法相比较,分析发现荧光定量PCR方法的敏感度和特异度分别为85.9%、94.9%,阳性预测值和阴性预测值分别为96.5%和80.4%,两者之间差异没有统计学意义。结论 荧光定量PCR方法在检测结核分枝杆菌时具有较好的敏感度和特异度,效果优于传统的痰涂片方法,并且与Xpert MTB/RIF方法具有较好的一致性。荧光定量PCR检测成本较低,且结果准确,在快速检测结核菌方面具有比较好的应用前景。     

Evaluation of PCR with culture for the diagnosis of pulmonary tuberculosis

Tuberculosis (TB) is a major public health problem in most developing countries. The present study was carried out among 100 clinically suspected pulmonary TB patients. One hundred sputum specimens were collected one from each of the suspects attending DOT'S corner of Mymensingh Medical College Hospital, Mymensingh, Bangladesh. The aim of the study was to evaluate the sensitivity and specificity of a polymerase chain reaction (PCR) based method detecting IS6110 sequence present in all Mycobacterium tuberculosis strains using sputum samples in comparison to culture on Lowenstein-Jensen mediums. The PCR was done using primers mtb1 & mtb2 which commonly target an insertion sequence of the organism (IS6110). Out of 100 samples, 18 (18%) showed PCR positive, whereas culture in Lowenstein-Jensen media were positive in 19(19%). In PCR 1 was false negative but none was false positive. In present study, sensitivity and specificity of PCR found 94.74% and 100% respectively. Analyzing the findings of the present study, it can be concluded that the PCR technique is a rapid and alternative method of culture on Lowenstein-Jensen medium for the diagnosis of pulmonary tuberculosis. In the present study, only presence or absence of M. tuberculosis was determined.     

Xpert 技术对痰液和纤支镜洗液标本中结核分枝杆菌检测价值

目的 评价GeneXpert MTB/RIF（Xpert）技术在肺结核病实验室诊断中的应用价值。方法 收集2018年1月—12月苏州市第五人民医院收治的疑似肺结核患者标本566份,其中痰标本421份,纤支镜洗液145份,分别采用Xpert 法、荧光定量PCR法、痰涂片抗酸染色法、结核培养法进行检测,收集数据,分析比较Xpert 技术在检测结核分枝杆菌时的敏感度和特异度,并与结核培养结果做比较,评价Xpert技术的检测效能。结果 对痰标本的检测,Xpert 技术、荧光定量PCR法、痰涂片法、结核培养法检测的阳性率分别为36.8%、24.0%、19.0%、32.1%;对纤支镜洗液标本的检测,四种检测方法的阳性率分别为54.5%、33.1%、12.4%、41.4%,可见Xpert 技术的阳性检出率明显高于其他三种检测方法。以培养法作为金标准,Xpert 方法检测痰标本的敏感性和特异性分别为77.0%和82.2%,阳性预测值和阴性预测值分别为67.1%和88.3%,符合率为80.5%,Kappa值为0.57。Xpert 方法检测纤支镜洗液标本的敏感性和特异性分别为93.3%和72.9%,阳性预测值和阴性预测值分别为70.9%和93.9%,符合率为81.4%,Kappa值为0.633。结论 Xpert 技术在检测结核分枝杆菌时具有较高的敏感性和特异性,能显著提高结核病的诊断效率,在肺结核的早期诊断、早期治疗等方面具有较高的临床应用价值。     

聚合酶链反应对肺结核的诊断价值

对７０例肺结核和２０例其它肺部疾病患者行痰及血标本ＰＣＲ检测、痰培养和涂片镜检结核菌。结果表明肺结核组痰ＰＣＲ阳性率为６４．３％，血ＰＣＲ阳性率为１１．４％，培养阳性率为３０．０％，涂片阳性率为２４．３％。其它肺部疾病ＰＣＲ阳性率为１０％，血ＰＣＲ为０，涂片阳性率为０，培养阳性率为０，表明痰ＰＣＲ特异性好，敏感性高，且快速，与临床符合率较高，不失为结核病的诊断和鉴别诊断的一种可靠的方法。     

荧光PCR熔解曲线法对痰样本结核分枝杆菌耐药性检测价值及耐药特征分析

目的：评估荧光PCR熔解曲线法（熔解曲线法）检测肺结核患者涂阳痰样本结核分枝杆菌（MTB）对一线抗结核药物耐药性价值及耐药特征分析。方法：收集涂阳且培养阳性肺结核患者痰样本和相应MTB菌株各142例,采用熔解曲线法检测痰样本MTB对抗结核药物链霉素（SM）、异烟肼（INH）、利福平（RFP）、乙胺丁醇（EMB）耐药情况,同时采用液体药敏法对相应MTB菌株耐药性检测,对两种检测结果行方法学比较。结果：以液体药敏法为标准,熔解曲线法检测痰样本MTB对4种抗结核药物耐药性结果差异无统计学意义（P>0.05）,熔解曲线法检测SM、INH、RFP、EMB耐药性的敏感度分别为：78.57% (11/14),70.00% (14/20),100.00% (12/12),71.43% (5/7);特异度分别为：92.97%(119/128),96.72%(118/122),97.69%(127/130),100%(135/135);两者符合率分别为：91.55%(130/142),92.96%(132/142),97.89%(139/142),98.59%(140/142);Kappa值分别为：0.601,0.696,0.877,0.826。结论：与传统液体药敏检测相比,熔解曲线法检测痰样本MTB对抗结核药物SM、INH、RFP、EMB的耐药性效能一致,特异度和符合率均较高。该法对结核患者涂阳痰样本MTB耐药性检测有较好临床参考价值。     

聚合酶链反应在结核病诊断中的临床价值探讨

目的：探讨聚合酶链反应对结核诊断的临床价值。方法：采用聚合酶链反应检测痰，纤维支气管镜抽吸物，胸水和血液标本中结核杆菌DNA。结果：聚合酶链反应检测法的敏感性为40．1％，特异性为92．9％，总的阳性预测值，阴性预测值和诊断效率分别为87．2％，60．78％和67％；不同标本敏感性有较大的差异。结论：聚合酶链反应不失为结核病快速诊断的方法，但其敏感性，特异性尚不能完全满足临床的需要，有待进一步完善。     

GeneXpert Mtb/RIF检测技术在结核病诊断中的应用评价

目的 评估GeneXpert Mtb/RIF检测技术对肺结核诊断和耐利福平肺结核筛查的效果,为筛选最佳实验室检测方法提供依据。方法 收集三亚市定点医院结核病门诊2015年5月—2016年12月243例临床诊断为肺结核的痰标本,分别进行涂片镜检、痰培养和GeneXpert Mtb/RIF检测,分析三种方法的敏感度和特异度。以比例法药敏为标准,分析GeneXpert检测利福平耐药的敏感度和特异度。结果 涂片镜检与GeneXpertMtb/RIF对比,GeneXpertMtb/RIF检测结核菌的敏感度为93.7%,特异度为28.9%,GeneXpertMtb/RIF检测与涂片镜检一致率为83.5%。痰培养与GeneXpertMtb/RIF对比,GeneXpert检测结核菌的敏感度为96.7%,特异度为56.6%,GeneXpert检测与痰培养的一致率为91.8%。利福平耐药大多与rpoB基因突变有关,GeneXpertMtb/RIF检测利福平耐药与比例法药敏一致率为98.1%, 敏感度为88.9%,特异度为98.9%,并且可检测出利福平耐药基因位点。结论 GeneXpert Mtb/RIF 检测技术适用于结核分枝杆菌及耐药结核分枝杆菌的快速筛查,在痰涂片和痰培养上补充GeneXpertMtb/RIF检测可提高病原学检出率,尽早发现耐多药病患。     

荧光定量聚合酶链反应诊断结核病临床应用研究

目的探讨荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）技术诊断结核病临床应用价值。方法应用FQ-PCR技术检测患者痰、外周血、体液（包括各种渗出液及脑脊液）中结核分枝杆菌DNA（TB-DNA），并与定性PCR、常规细菌学涂片法和培养法比较。结果112例结核病患者FQ-PCR、定性PCR、涂片法和培养法检测各类标本阳性率为59．82％，88．82％，25．89％，29．46％，非结核组43例FQ-PCR法阳性率是2．32％，PCR法是18．60％，FQ-PCR检测其标本TB-DNA的特异性为97．67％，敏感度为59．82％，阳性预测值为98．53％。结论FQ-PCR检测TB-DNA是一种快速简便、敏感性、特异性、可信性较高的方法，对诊断结核病具有临床意义，且适用于临床检验实验室，其含量变化对判断疗效有一定的提示作用。