用生物传感器测定重组人α2a—干扰素单克隆抗体的亲和？…

测定抗重组人α２ａ－干扰素单克隆抗体的抗原识别表位其亲和常数。方法：借助于生物传感器技术进行抗原抗体相互作用的动力学分析。结果：抗体的亲和常数介于１０＾－５－１０＾－７之间,５株抗体识别干扰素分析上４种不同的抗原表位。结论：生物传感器在研究抗原抗体相互作用中确为一个理想的工具,适合于抗原抗体结合与解离的动力学分析及预测表位的构像关系。     

用生物传感器测定重组人肿瘤坏死因子-α单克隆抗体的亲和力及抗原识别表位

目的 测定重组人肿瘤坏死因子-α(TNF-α)单克隆抗体的抗原识别表位及其亲和常数.方法 借助于生物传感器技术进行抗原抗体相互作用的动力学分析.结果 10株TNF-α单抗的亲和常数介于105～107 M-1之间,其中所测的5株抗体识别肿瘤坏死因子上3种不同的抗原表位.结论 生物传感器在研究抗原抗体相互作用中确为一个理想的工具,适合于抗原抗体结合与解离的动力学分析及预测表位的构象关系.     

用生物传感器测定重组人肿瘤坏死因子—α单克？…

目的 测定重组人肿瘤坏死因子－α（ＴＮＦ－α）单克隆抗体的抗原识别表位及其亲和常数。方法 借助于生物传感器技术进行抗原抗体相互作用的动力学分析。结果 １０株ＴＮＦ－α单抗的亲和常数介于１０＾５～１０＾７Ｍ＾－１之间，其中所测的５株抗体识别肿瘤坏死因子上３种不同的抗原表位。结论 生物传感器研究抗原抗体相互作用的中确为一个理想的工具，适合于抗原抗体结构与解离的动力学分析及预测表位的构象关系。     

小鼠抗人C5aR短肽（9—30）单克隆抗体制备及鉴定

目的获得有生物功能的小鼠抗人 C5 a R短肽单克隆抗体。方法对 C5 a受体 (CD88)二级结构和 B细胞表位进行分析研究 ,采用 Fmoc方案固相合成 C5 a R N-端第 9～ 30位氨基酸残基的 2 2 -肽 ,以此为抗原免疫 Balb/ c小鼠。结果建立了 1株小鼠抗人 C5 a R短肽杂交瘤细胞系 E3,其平均染色体数目为 10 2条 ,所分泌抗体为 Ig G1,κ型 ,腹水抗体效价为 1×10 - 4 ～ 1× 10 - 6 ,可识别 U 937、人脐静脉内皮细胞 (VEC)和 PMN等表达 C5 a R细胞。 E3单抗的亲和常数 Ka=2 .5× 10 5 ,其结合表位为 C5 a R第 15～ 2 1位氨基酸基序 D1 5 DKDTL2 0 D。结论 B细胞表位多肽具有免疫原性 ,可制作单克隆抗体 ,为 C5 a-C5 a R相互作用的研究以及 AL I、ARDS等 C5 a相关疾病的研究提供实验材料。     

抗重组人白细胞介素18单克隆抗体的制备与特性研究

目的 :获得有生物活性的小鼠抗重组人白细胞介素 18(rhIL 18)单克隆抗体。方法 :采用重组hIL 18免疫BALB C小鼠 ,应用杂交瘤技术 ,ELISA法筛选阳性杂交瘤细胞株并经多次克隆化。结果 :建立了 2株小鼠抗hIL 18单克隆抗体杂交瘤细胞 1C7和 1F5 ,染色体数目分别为 92条和 90条 ,所分泌的抗体分别为IgG2a和IgG1,轻链均为κ型 ,腹水IgG抗体经亲和层析法纯化后纯度达 95 %以上 ,效价为 1× 10 - 4和 1× 10 - 5,Westernblot显示 2株单抗均能特异性识别 18 3kD处的rhIL 18蛋白。 1C7单抗的亲和常数Ka=1 7× 10 5,1F5的亲和常数Ka=1 3× 10 5。 2株单抗识别不同抗原表位。结论 :制备的 2株单抗为进一步研究IL 18的分子结构、生物学功能及其与免疫相关性疾病的关系提供了实验材料。     

BSA免疫动物过程中抗原抗体亲和动力学特性的研究

目的 本课题使用牛血清白蛋白(BSA)作为抗原,通过对小鼠和家兔进行连续多次免疫和间隔长久免疫,探讨不同免疫周期下抗体产生及亲和力成熟的动力学变化规律.方法 采用ELISA和毛细管电泳测定抗体抗原的亲和常数.结果 伴随免疫次数的增加,特异性抗体效价持续增强.抗体亲和力水平在二次免疫应答时存在一个明显的突变过程,小鼠的抗体亲和常数从1.6×108 L/mol上升到6.9×108 L/mol.随后免疫次数虽然继续增加,但亲和力变化趋于稳定,最终稳定于7.2×108 L/mol,而B细胞对抗原的亲和力会持续增强.结论 抗体抗原亲和力随免疫次数的增加趋向饱和,BSA的线性表位为优势表位,随免疫次数的增加比重逐渐增强.     

人C5a B细胞表位的设计与其单克隆抗体的结合

我们在分子设计的基础上 ,采用B细胞优势表位预测并结合实测的方法 ,设计合成人C5a的B细胞表位多肽 ,以此为抗原按常规方法免疫BALB c小鼠 ,制作表位多肽单克隆抗体 ,在传统ELISA鉴定的基础上 ,利用生物传感器分析方法 ,分别研究单克隆抗体与表位多肽和全长C5a分子的结合动力学规律。材料和方法软件 :GOLDKEY核酸蛋白质分析软件 (军事医学科学院吴加金等 )和PC Gene软件系统 (BairochA等编制 ,UniversityofGeneva ,Switzerland)。生物相互作用实时分析系统IAsysPlus(美国 ) ;CMD(羧甲基葡聚糖生物传感片 ,Thermo公司 )。主要…     

抗rhNDPK-A单克隆抗体的制备及鉴定

目的 :研制抗rhNDPK A (recombinanthumannucleosidediphosphatekinase A)单克隆抗体 (mAb) ,并鉴定其特性。 方法 :以纯化的rhNDPK A免疫BALB/c小鼠 ,采用杂交瘤技术制备抗rhNDPK AmAb ;用免疫双扩散鉴定Ig亚类 ;West ernblot鉴定mAb的特异性 ;间接ELISA检测mAb的腹水效价、亲和常数 ,并进行表位分析。结果 :获得 6株可分泌特异性mAb的抗rhNDPK A的杂交瘤细胞系 2D9、8C7、13E2、15D9、15E3和 2 0D9,Ig亚类均为IgG1;其效价为 1× 10 -4～5× 10 -6;亲和常数为 4 .5× 10 -9～ 2 .8× 10 -10 mol/L ;共有3个抗原表位。结论 :获得抗rhNDPK A的mAb ,为进一步用于临床诊断和实验研究创造了条件     

抗死亡受体-5单克隆抗体的制备及特性鉴定

目的:研制抗DR5单克隆抗体(mAb),并鉴定其特性。方法:以纯化的DR5免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备抗DR5mAb。用Ig亚类ELISA试剂盒鉴定抗DR5mAb的亚类。用ELISA法测定sDR5对抗DR5mAb与DR5结合的阻断作用及流式细胞术检测与Jurkat细胞膜上DR5结合的阻断作用,以鉴定mAb的特异性。用间接ELISA法检测腹水mAb的效价、亲和常数并进行表位分析。结果:获得4株可分泌抗DR5mAb的的杂交瘤细胞系YM366EC、YM366ED、YM369F5和YM369E6。4株mAb的Ig亚类均为IgG1;腹水mAb效价为1×10-4~5×10-6;亲和常数为1×109水平,4株mAb可识别2种不同的抗原表位。结论:获得4株抗DR5的mAb,为进一步用于临床诊断和实验研究创造了条件。     

生物电化学传感器的进展

2 亲和型生物电化学传感(Affinityelectrochmical biosensor) 它是利用分子特有的亲和力作成的传感器,不仅能简便地测定许多其他方法难于测定的生物样品,且灵敏度、专一性也相对提高。故它目前是医学生物传感器中最受人青睐、也最有发展前途的一类课题。新加坡举行的第一届生物传感器学术会议上,它是三个中心议题之一。 这类传感器的典型反应为: S R(?)SR(6) S:抗原、配体(激素,药物等)、生物素 R:抗体 受体 抗—生物素 SR:复合物 K:亲和常数,其值愈大表示复合物愈稳定,电极选择性愈强。 用以上各种复合物膜与基础电极组成的传感器分别称为免疫电极、受体电极,生物素电极。     

利用光学生物传感技术筛选C5a拮抗多肽

目的 :筛选人过敏毒素C5a的拮抗反义多肽 ,并进一步研究其分子间相互作用的动力学特性。方法 :借助于生物分子相互作用分析技术 (BIA) ,筛选可与C5a特异性结合的反义肽 ,并对其分子间的相互作用进行动力学分析。结果 :在设计合成的 4条反义肽中 ,筛选出一条反义多肽 (R4 ) ,其与C5a分子间相互作用的解离平衡常数值 (KD)o 6 6 2× 10 -6mol/L ;与其对应的功能活性区片段L2间的KD 值为 7 0 2× 10 -7。结论 :光学生物传感器是一种研究生物大分子间相互作用的理想工具 ,可用于弱亲和力分子间结合与解离的动力学分析及拮抗效应多肽的筛选。     

丙基硫氧嘧啶诱发的小血管炎和原发性小血管炎抗髓过氧化物酶抗体亲和力的比较

目的　比较丙基硫氧嘧啶(PTU)相关性小血管炎和原发性小血管炎抗髓过氧化物酶(MPO)抗体亲和力的大小及其与临床表现的关系。方法　以纯化的人MPO为抗原,采用抗原抑制性酶联免疫吸附法对我院确诊的13例PTU相关性小血管炎和19例原发性显微镜下多血管炎(MPA)的患者血清中抗MPO抗体的亲和力进行检测,分析其与临床表现的关系,并对两组抗体的亲和力大小进行比较。亲和常数(aK)的值以使血清抗MPO抗体百分结合率下降5 0 %所需的抑制抗原的摩尔浓度的倒数表示。结果　PTU组不同患者血清抗MPO抗体百分结合率下降5 0 %所需的抑制抗原量差异较大,从<0 .1μg ml到>5 0 μg ml不等。亲和常数的范围为<0 .2 8×10 7mol L到>14 0×10 7mol L ,其中位数为0 .75×10 7mol L。血清中抗 MPO抗体的亲和常数与伯明翰小血管炎活动性评分(BVAS)呈正相关(r=0 .5 83,P =0 .0 37) ,与抗体滴度、受累器官数、血红蛋白(Hb)、血沉(ESR)、C反应蛋白(CRP)、血肌酐(Scr)浓度均没有相关性(P >0 .0 5 )。MPA组不同患者血清抗MPO抗体百分结合率下降5 0 %所需的抑制抗原量差异较PTU组小,从<0 .1μg ml到1.5 6 μg ml不等,亲和常数的范围为8.97×10 7mol L到大于14 0×10 7mol L ,其中位数为5 6 .0×10 7mol L。血清中抗MPO抗体的亲和常数与血     

电化学生物传感器的应用

电化学生物传感器是基于传感器表面抗体和抗原相互作用的生物传感器,将抗体(抗原)固定在传感器表面后再分别用来检测抗原(抗体)。相比其他生物传感器,电化学传感器具有较好的选择性和较高的灵敏度,因此在不同的科学领域具有广泛的应用前景。本文综述了电化学生物传感器的工作原理、分类、抗原抗体的固定方法,以及在食品安全、临床医学和环境监测领域的应用,并进一步指出目前生物传感器存在的不足之处以及今后研究的重点方向。     

应用噬菌体随机肽库技术研究干扰素-α2b抗原表位

目的应用噬菌体随机肽库技术，研究干扰素-α2b高抗原性表位。方法利用结合有干扰素-α2b多克隆抗体的免疫磁性微球，对噬菌体随机肽库进行生物淘筛，以ELISA方法鉴定阳性克隆。阳性克隆测序后与干扰素氨基酸序列进行了同源性分析，研究干扰素-α2b分子中高抗原性表位。结果经4轮淘筛后噬菌体克隆的阳性率为57．6％，据随机挑选的12个阳性克隆的同源性分析结果将其分为3组，分别对应干扰素-α2b 3个高抗原性表位与预测的结果吻合，其中第2组与干扰素受体结合区AB环接近。结论利用噬菌体随机肽库技术，成功筛选出3个与抗原性预测相符合的干扰素-α2b抗原表位，为研究干扰素分子的作用机理、制备抗特定表位的单克隆抗体以及设计和开发干扰素的小分子模拟肽奠定了基础。     

一组抗肿瘤单克隆抗体相对亲和常数的测定

本文用ABC-ELISA夹心法测定的终点浓度值分析了一组15种抗人结肠癌McAbs的相对亲和常数。结果是各McAb的相对亲和力各有不同,最高达4.15×10~(-12),最低为6.25×10~(-10)。实验表明本法用于针对复杂而微量的肿瘤抗原的测定是可行的,而且本法可一次测定多个这样的McAbs的相对亲和常数。亦不需标记被测抗体或抗原。故方法简便;且灵敏度高,重复性好,这对有关的研究具有参考价值。     

抗rhEndoglin单链抗体的可溶性表达、纯化及活性鉴定

目的 研制抗rhEndoglin-scFv(single chain variable fragment)抗体.方法 将具有抗原结合活性的抗rhEndoglin.scFv噬菌体感染大肠杆菌E-coli HB2151,经IFIG诱导表达,SDS-PAGE和Westem Blot鉴定分析.用HiTrap Anti.E Tag柱亲和层析纯化scFv抗体,HiTrap Desahing柱行缓冲液更换.用间接ELISA测scFv抗体的亲和常数,用竞争性ELISA和间接免疫荧光检测scFv抗体的抗原结合活性.结果 成功诱导表达和纯化抗rhEndoglin-scFv抗体,表达产物主要位于周质腔中,相对分子质鼍约为2.9×104.测定scFv的亲和常数为(2.14±0.84)×107L/mol,它能与抗rhEndo~in单抗竞争性结合同一抗原表位,且竞争作用随scFv浓度增加而加强.间接免疫荧光实验证实该scFv抗体能识别HUVEC胞膜表达的Endnglin抗原.结论 制备的抗rhEndoglin-scFv抗体具有与rhEndoglin和天然Endoglin结合的能力,可望将其用作肿瘤诊断和治疗的靶向载体.     

以DNA免疫和细胞抗原加强制备抗DAF单克隆抗体及特性分析

目的:联合应用DNA免疫和细胞抗原加强制备抗DAF单克隆抗体(mAb)并鉴定其特性。方法:利用分子克隆的方法构建重组质粒pcDNA3.1/DAF。以其免疫BALB/c小鼠股四头肌3次,并在融合前用表达DAF分子的HPB-ALL细胞为抗原加强免疫1次,制备抗DAFmAb。以ELISA法测定mAb的Ig亚类。采用流式细胞术和Westernblot鉴定mAb的特异性和结合活性。以非免疫竞争法测定mAb的亲和常数。结果:成功地获得2株可识别DAF分子不同抗原表位的mAbB6E和2B6B,其Ig亚类均为IgG2a。mAb2B6E的亲和常数为1.81×10-7mol/L,与天然的细胞膜蛋白、变性的膜蛋白以及重组DAF蛋白都有良好的结合活性和特异性。结论:先以pcDNA3.1/DAF肌肉内免疫,再应用细胞抗原加强免疫的方法制备特异性的mAb,为在无法获得纯化蛋白质的情况下开拓了研制特异性抗体的新途径,也为日后改造抗DAFmAb进行靶向治疗研究打下了基础。     

人甲状旁腺激素N端肽中一个含有B细胞新表位的hPTH13-27片段的研究

目的研究并证明人甲状旁腺激素（hPTH）N端肽内的hPTH^13-27片段是一个新的B细胞抗原表位。方法计算机辅助分析预测hPTH^1-37和hPTH^1-84多肽片段内hPTH^13-27抗原表位的特征;制备大鼠抗hPTH^13-27-KLH多克隆抗体;酶联免疫测定（ELISA）研究hPTH^13-27抗原表位和抗体的免疫特征。结果蛋白质结构分析预测在hPTH^13-27区域含有B细胞抗原表位。hPTH^13-27单表位多克隆抗体制备成功。ELISA分析证明hPTH^13-27片段含有B细胞抗原表位,与抗体的结合效果依次为：抗hPTH^13-27抗体〉抗hPTH^1-84抗体〉抗hPTH^1-37抗体。hPTH^13-27片段与固相板结合对免疫原性影响不大。抗hPTH^13-27抗体与含hPTH^13-27片段的多肽结合良好;与不含hPTH^13-27片段的多肽无交叉反应。结论hPTH^13-27可能是制备hPTH N端肽抗体的核心表位片段。     

幽门螺杆菌黏附素A抗原H-2~d(I-A)限制性免疫优势Th表位的筛选与鉴定

目的鉴定幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)黏附素A抗原(HpaA)H-2d限制性免疫优势Th表位,为H.pylori表位疫苗的研究提供候选表位。方法采用体外扩增的HpaA抗原特异性T细胞和步移重叠合成肽筛选鉴定HpaA抗原的免疫优势Th表位,再利用抗体阻断实验对其H-2d限制性进行分析。结果 18mer氨基酸肽段筛选发现肽段H154-171、H184-201、H190-207、H202-219和H220-237能够激发HpaA特异性CD4+T细胞产生γ-干扰素。其中H154-171激发的应答最强。13mer氨基酸短肽鉴定结果显示:仅H158-170能刺激产生强于18mer氨基酸短肽H154-171的应答反应。同时,抗体阻断试验结果表明:抗H-2d(I-A)抗体能有效阻断该表位激发的应答。结论 H154-171、H184-201、H190-207、H202-219和H220-237是HpaA的小鼠H-2d限制性Th表位,其中H154-171为免疫优势表位肽,该表位的核心氨基酸序列为H158-170,并存在H-2d(I-A)限制性。该研究将为H.pylori表位疫苗研究提供了可能的候选分子。     

光学生物传感器在研究正、反义肽间选择性相互作用中的应用

目的　观察生物分子间相互作用动力学、亲和力及特异性 ,研究C5a与其反义肽的相互作用规律。方法　应用生物分子相互作用实时分析系统IAsysPlus,以反义肽R4为固定相 ,L2和rhC5a为流动相 ,采用FASTplot软件对选择结果优化的反应模式 ,计算各动力学参数值。结果　反义肽R4与配体rhC5a相互结合的KD=6 .6 2× 1 0 -6mol,直线在Y轴上的截距(解离常数 )Kdiss为 0 .0 2 2 5s-1 ;与L2的KD=4 .5 0 8× 1 0 -6mol。结论　生物传感器技术可以用于正义 反义肽之间相互作用的研究中 ,且反义肽R4可与其正义肽、与rhC5a发生特异性相互作用