小鼠颌下腺组织培养上清液影响红系造血的实验研究

为了研究颌下腺是否合成造血因子以及合成的造血因子的可能种类,进一步研究颌下腺对血发生的调控,采用造血祖细胞体外培养和流式细胞术检测细胞表面标记物。结果显示,小鼠颌下腺组织培养上清液（ＳＧＣＭ）在体外培养中,对早期和晚期红系造血祖细胞有促进增殖和分化的作用,实验组集落数远远高于阴性对照组（Ｐ〈０．０５）;晚期红系祖细胞（ＣＦＵ－Ｅ）培养体系雄性小鼠颌下腺组织培养上清液组集落数明显高于雄性组（Ｐ〈０．０５）,早期红系祖 细胞（ＢＦＵ－Ｅ）培养体系没有明显差异（Ｐ〉０．０５）,贫血模型小鼠颌下腺促进ＢＦＵ－Ｅ和ＣＰＵ－Ｅ增殖和分化的活性高于正常小鼠（Ｐ〈０．０５）,ＩＬ－３与ＳＧＣＭ有协同刺激作用,说明小鼠颌下腺确能合成和分泌促进红系造血的细胞因子,雄性小鼠颌下腺促进ＣＦＵ－Ｅ增殖和分化细胞因子的活性高于雌性小鼠。本     

小鼠颌下腺组织培养上清液影响红系造血的实验研究

为了研究颌下腺是否合成造血因子以及合成的造血因子的可能种类 ,进一步研究颌下腺对血发生的调控 ,采用造血祖细胞体外培养和流式细胞术检测细胞表面标记物。结果显示 ,小鼠颌下腺组织培养上清液(SGCM)在体外培养中 ,对早期和晚期红系造血祖细胞有促进增殖和分化的作用 ,实验组集落数远远高于阴性对照组 (P<0 .0 5 ) ;晚期红系祖细胞 (CFU- E)培养体系雄性小鼠颌下腺组织培养上清液组集落数明显高于雌性组 (P<0 .0 5 ) ,早期红系祖细胞 (BFU- E)培养体系没有明显差异 (P>0 .0 5 ) ,贫血模型小鼠颌下腺促进 BFU- E和 CFU- E增殖和分化的活性高于正常小鼠 (P<0 .0 5 ) ,IL- 3与 SGCM有协同刺激作用 ,说明小鼠颌下腺确能合成和分泌促进红系造血的细胞因子 ,雄性小鼠颌下腺促进 CFU- E增殖和分化细胞因子的活性高于雌性小鼠。本实验为进一步研究小鼠颌下腺合成造血因子和其与造血调控的关系提供了实验依据。     

小鼠颌下腺组织培养上清液促进粒—单系和巨核系造血的实验研究

目的 证实颌下腺是否合成影响造血的细胞因子,并探讨其对粒－单系和巨核系造血细胞增殖分化有何影响,为重新认识颌下腺的生理功能提供实验证据。方法 采用造血祖细胞体外培养和流式细胞术检测CD13膜抗原及细胞周期,研究小鼠颌下腺组织培养上清液（SGCM）对小鼠粒－单系和巨核系造血发生的影响。结果 SGCM对粒－单系祖细胞（CFU－GM）集落生长有明显促进作用,能明显促进巨核系造血祖细胞（CFU－M eg）集落生成,而且雄性SGCM刺激活性高于雄性SGCM,IL－3与雌性SGCM有叠加作用,贫血雄性SGCM对CFUGM和CFU－Meg的刺激活性高于正常小鼠,SGCM能促进小鼠骨髓细胞进入增殖活跃期（S／G2）。结论 颌下腺能合成与粒－单系、巨核系造血相关的造血因子。提示颌下腺与造血调控可能有关。     

小鼠颌下腺组织培养上清液促进粒-单系和巨核系造血的实验研究

目的　证实颌下腺是否合成影响造血的细胞因子 ,并探讨其对粒 -单系和巨核系造血祖细胞增殖分化有何影响 ,为重新认识颌下腺的生理功能提供实验证据。方法　采用造血祖细胞体外培养和流式细胞术检测 CD13膜抗原及细胞周期 ,研究小鼠颌下腺组织培养上清液 (SGCM)对小鼠粒 -单系和巨核系造血发生的影响。结果　 SGCM对粒 -单系祖细胞 (CFU- GM)集落生长有明显促进作用 ,能明显促进巨核系造血祖细胞 (CFU- Meg)集落生成 ,而且雄性 SGCM刺激活性高于雌性 SGCM,IL- 3与雌性 SGCM有叠加作用 ,贫血雄性 SGCM对 CFU-GM和 CFU- Meg的刺激活性高于正常小鼠 ,SGCM能促进小鼠骨髓细胞进入增殖活跃期 (S/G2 )。结论　颌下腺能合成与粒 -单系、巨核系造血相关的造血因子。提示颌下腺与造血调控可能有关     

RunX3对小鼠骨髓造血干细胞功能的影响

目的研究RunX3基因对造血干细胞自我更新和分化能力的影响。方法流式细胞术测定小鼠骨髓干细胞和外周血单个核细胞的比例;通过竞争性骨髓移植实验检测RunX3转基因小鼠骨髓干细胞的功能。结果移植后来源于RunX3-/-小鼠骨髓干细胞供体的外周血细胞占总外周血细胞的比例与野生对照鼠相比无明显差异,移植后来源于RunX3-/-小鼠骨髓干细胞供体的外周血中髓系细胞占总外周血髓系细胞的比例较野生型对照鼠高。结论RunX3基因缺失对骨髓造血干细胞的自我更新没有影响,但其可能参与了骨髓造血干细胞的分化过程。     

Cramp过表达对小鼠骨髓造血干细胞功能的影响

目的 研究Cramp蛋白过表达对小鼠骨髓造血干细胞自我更新和分化能力的影响.方法 应用流式细胞仪分析Cramp过表达转基因小鼠及同龄野生型小鼠的骨髓、脾脏、胸腺等组织器官中各种细胞的比例;分选 骨髓造血干细胞,体外培养,观察其克隆形成能力.结果 与野生型小鼠相比,Cramp过表达转基因小鼠的骨髓、脾脏、胸腺等组织器官中各种细胞的比例、骨髓造血干细胞的克隆形成能力等均无明显变化.结论 本研究中,Cramp过表达转基因小鼠骨髓造血干细胞的分化能力、克隆形成能力无明显变化.     

冬虫夏草对小鼠造血干细胞的影响

本文采用造血干细胞（CFU-S）脾结节形成方法观察冬虫夏草醇提结晶制剂（CS-Cr)对LACA小鼠骨髓CFU-S的影响。结果表明，CS-Cr腹腔注射给药后可使小鼠率和自杀率均明显增高，提示CS-Cr经体内作用可以促进小鼠CFU-S增殖，更多的CFU-S由G0期进入S期。     

几种组织培养上清液对造血祖细胞体外增殖分化的比较

目的：寻求既经济又有效的造血生长因子样活性物质。方法：采用造血祖细胞体外培养与造血生长因子生物活性检测等实验血液学技术,检测胎肌培养上清液、骨液基质细胞培养上清液、胸腺细胞培养上清液与脾细胞培养上清液对造血祖细胞ＣＦＵ－ＧＭ、ＢＦＵ－Ｅ和ＣＦＵ－Ｍix增殖分化的影响。结果胎肌培养上清液和对ＣＦＵ－ＧＭ和ＣＦＵ－Ｍix的体外地产殖与分化有明显刺激作用。而胸腺与脾细胞条件培养上清液对ＢＦＵ－Ｅ的生长有显著促进作用。结论：胎肌培养上清液中可能含ＧＭ－ＣＳＦ样活性物质。而胸腺与脾细胞培养上清液具有较高ＩＬ－３样活性,可以利用组织与细胞培养上清液替代重组造血生长因子进行造血细胞的实验研究和临床诊断。     

Cramp基因敲除对小鼠骨髓造血干细胞的影响

目的研究Cramp基因敲除在衰老过程中对小鼠造血干细胞的作用。方法应用流式细胞仪分析3月龄及12月龄Cramp基因敲除小鼠及同窝野生型小鼠的骨髓造血干细胞的比例及不同发育阶段B淋巴细胞的比例。结果与野生型小鼠相比,12月龄Cramp基因敲除小鼠的骨髓长期造血干细胞增多,多潜能造血祖细胞减少;前体B淋巴细胞和未成熟B淋巴细胞减少,成熟B淋巴细胞增多。结论在衰老过程中,Cramp基因敲除对骨髓造血干细胞及B淋巴细胞发育有重要影响。     

冬虫夏草对小鼠造血干细胞的影响

本文采用造血干细胞(CFU-S)脾结节形成方法观察冬虫夏草醇提结晶制剂(CS-Cr)对LACA小鼠骨髓CFU-S的影响。结果表明,CS-Cr腹腔注射给药后可使小鼠CFU-S产率和自杀率均明显增高,提示 CS-Cr经体内作用可以促进小鼠CFU-S增殖,更多的CFU-S由G_0期进入S期。     

骨髓间质干细胞体外增殖及诱导分化成肌样细胞实验研究

目的比较SD大鼠、Wistar大鼠和C57BL/6J小鼠骨髓间质干细胞在体外的增殖及在体外将骨髓间质干细胞诱导分化成肌样细胞的情况。方法体外分离成年SD大鼠、Wistar大鼠和C57BL/6J小鼠的骨髓干细胞,培养增殖,用5-氮杂胞苷诱导分化,使其向肌细胞定向分化。结果SD大鼠和Wistar大鼠的原代骨髓间质干细胞约10 d可达90%以上融合,平均3 d左右传代,C57BL/6J小鼠的骨髓间质干细胞在1周内可迅速增殖,1周后基本处于停滞状态,且细胞集落很少,难传代。SD大鼠的骨髓间质干细胞在含5-氮杂胞苷、两性霉素B和5%马血清的分化培养基作用下,可以分化为肌肉特异性抗原desmin和-αsarcomeric actin染色阳性反应的肌样细胞。结论不同种系的骨髓干细胞在体外用相同的培养基培养,可以具有截然不同的增殖能力;5-氮杂胞苷可以促使骨髓干细胞定向分化为肌样细胞。     

骨髓成纤维细胞条件培养液对体外巨核系细胞生成的促进作用

目的：探讨骨髓成纤维细胞条件培养液对体外巨核系细胞生成的促进作用。方法：制备骨髓成纤维细胞条件培养液(bone marrow fibroblasts conditioned medium ,BMF-CM),分别观察BMF-CM或BMF-CM联合IL-11对体外培养条件下成熟巨核细胞生成的影响及BMF-CM对巨核系祖细胞生成的影响,并用RT-PCR的方法检测Meg-01人巨核细胞系细胞NF-E2 mRNA的表达。结果：BMF-CM促进成熟巨核细胞生成。BMF-CM联合IL-11促进成熟巨核细胞生成的效果更佳。BMF-CM能促进巨核系祖细胞的生成。将30％BMF-CM加入Meg-01人巨核细胞系培养体系培养4　h,与对照组相比,NF-E2表达增强。结论：骨髓成纤维细胞条件培养液对体外巨核系细胞生成有促进作用。     

异基因人骨髓间充质干细胞与外周血单个核细胞体外共培养的相互影响

目的：探讨异基因骨髓间充质干细胞（BMSC）与外周血单个核细胞（PBMC）在体外共培养的相互影响。方法将异基因成人来源的BMSC与PBMC在体外分别按1：10混合共培养,采用氚胸腺嘧啶核甙掺入方法检测PHA刺激PBMC增殖的活性,采用ELISA方法检测培养液中分泌的IL-6、IL-8和PGE2水平。结果 BMSC与PBMC共培养组的PBMC增殖率明显减少（P〈0.01）,抑制率均超过50%。加入PBMC共培养后,BMSC分泌IL-6、IL-8和PGE2显著增加（P〈0.01）。结论 BMSC可以抑制PHA刺激引起的PBMC增殖,PBMC可以促进BMSC分泌免疫活性因子,BMSC可能具有双向的免疫调控作用。     

大鼠骨髓间充质干细胞分化为肝样细胞的实验研究

目的探讨大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)体外诱导分化为肝样细胞的能力。方法利用密度梯度离心法分离、纯化培养大鼠骨髓间充质干细胞,在特定的培养液中加入肝细胞生长因子(HGF)和表皮细胞生长因子(EGF)联合培养进行定向诱导,分别于1周和2周后通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)鉴定经诱导后细胞甲胎蛋白(AFP)和白蛋白(ALB)的表达。结果诱导1周后RT-PCR检测MSCs示AFP表达,诱导2周后的MSCs AFP呈阴性,而ALB检测结果呈阳性。结论MSCs在体外特定的条件下可定向诱导分化为肝样细胞。     

诱导人骨髓间充质干细胞向软骨细胞分化的实验研究

目的 探讨人骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells，MSCs)向软骨细胞诱导分化的能力。方法 选用不同代次的MSCs，使用条件培养基，观察细胞的形态变化，同时采用细胞化学和免疫组化的方法检测糖胺多糖的分泌和Ⅱ型胶原的表达。结果 MSCs在转化生长因子-β1、维生素C的作用下，7天后可见细胞多变为圆形或随圆形，糖胺多糖和Ⅱ型胶原染色阳性，表现出软骨细胞的分化特点。结论 在一定培养条件下成功诱导人MSCs向软骨细胞分化。MSCs作为骨组织工程学方面的种子细胞具有潜在的应用价值。     

自体骨髓间充质干细胞经皮注射修复骨缺损的实验研究

目的 比较骨髓间充质干细胞(BMSCs)、成骨诱导后的BMSCs以及二者联合经皮移植后体内成骨能力的差异,为骨组织工程选择种子细胞提供依据.方法 取第2代BMSCs进行成骨诱导.分别将BMSCs、成骨诱导的BMSCs、BMSCs联合成骨诱导后的BMSCs、生理盐水经皮注入兔桡骨中段骨缺损处.通过组织学、放射学、生物力学方法在不同时相比较骨缺损区修复情况.结果 BMSCs与成骨诱导后的BMSCs联合移植组在12周内骨缺损区新生骨的数量和质量显著优于BMSCs移植组和成骨诱导的BMSCs移植组(F=226.6,P＜0.01),空白组骨缺损主要由纤维结缔组织填充.结论 BMSCs与成骨诱导后的BMSCs联合移植存在协同效应,具有更强的成骨能力,可作为种子细胞应用于骨组织工程.     

人参多糖对小鼠造血干/祖细胞的动员作用

目的:探讨人参多糖(GPS)对小鼠造血干/祖细胞(HSPC)的动员作用,为从植物多糖中寻找造血干细胞动员剂提供实验依据.方法:采用WBC、MNC计数、免疫细胞化学、流式细胞术和造血祖细胞体外培养检测经GPS动员后外周血WBC、MNC、CD34 细胞和CFU-Mix产率的变化.结果:给小鼠尾静脉注射GPS 2mg/kg后4h外周血WBC、MNC升高达到峰值,为NS组的3倍和3.5倍;外周血中CD34 细胞百分率和CFU-Mix产率分别为0.0079±0.0010和(25.0±9.1)cfu/2×105MNC,显著高于NS组;GPS和G-CSF联合动员时外周血WBC、MNC数量,CD34 细胞百分率和CFU-Mix产率都明显优于单用GPS的效果.结论:人参多糖对小鼠HSPC有一定动员作用,与G-CSF联合应用有协同作用.     

巴桑母酥油丸对放射线-化学复合损伤小鼠造血干细胞移植后重建造血能力的影响简

目的 研究藏药巴桑母酥油丸对放射线-化学复合损伤后机体骨髓造血干细胞功能的影响,探究其“补益”作用机制.方法 将经60Co γ射线照射＋环磷酰胺腹腔注射方法得到的放射线-化学复合损伤小鼠分为巴桑母酥油丸组、生理盐水组、空白组,分别灌胃巴桑母酥油丸、生理盐水及自然恢复14d后,将其骨髓作为供体移植给受致死剂量γ射线照射的同种受体小鼠,再检测受体小鼠外源性脾集落、骨髓造血祖细胞集落产率、骨髓细胞造血干细胞抗原-1（Sca-1）阳性细胞率,并与灌胃.结果 巴桑母酥油丸组的外源性脾集落、骨髓早期红系祖细胞集落（BFU-E）、粒-巨噬系祖细胞集落（CFU-GM）产率均显著高于空白组和生理盐水组（P＜0.05）,而晚期红系祖细胞集落（CFU-E）、巨核系祖细胞集落（CFU-Meg）、骨髓细胞Sca-1＋细胞率并不离于自然恢复的空白组（P＞0.05）.结论 巴桑母酥油丸可以提高放射线-化学复合损伤小鼠骨髓造血干细胞移植后造血重建能力,提示巴桑母酥油丸可经改善骨髓造血干细胞功能发挥其对放射线-化学复合损伤机体“补益”作用.     

骨髓间充质干细胞体外扩增和向心肌细胞分化的实验研究

①目的 探讨兔骨髓间充质干细胞的体外分离纯化、培养扩增和向心肌细胞诱导分化的条件。②方法 取兔股骨骨髓。利用密度为1．073s／mL的Percoll分离骨髓细胞，以含10％胎牛血清的低糖DMEM培养基培养与扩增骨髓间质干细胞。取第二代和第三代的骨髓间质干细胞，以含有不同浓度的5-氮杂胞苷诱导培养基向心肌细胞诱导分化。③结果 诱导后的细胞呈现典型的心肌细胞样改变，免疫组化染色显示其α-横纹肌动蛋白阳性。④结论骨髓间质干细胞在体外具有向心肌细胞分化的潜能。     

骨髓间充质干细胞培养液对牙周组织再生的影响

目的 观察大鼠骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells, BMMSCs）培养液对牙周组织再生的影响。方法 原代培养SD大鼠BMMSCs,取细胞培养液（conditioned media, CM）。采用ELISA检测培养液里与成骨相关的IGF-1、VEGF、PDGF-BB、BMP-2的含量;利用BMMSCs培养液对牙周膜细胞（periodontal ligament cells, PDLCs）进行培养后,RT-PCR法检测PDLCs矿化相关基因核心结合因子2（Runx2）、骨桥素（OPN）、骨钙素（OCN）的变化;Western印迹法检测Runx2、OPN、OCN蛋白的表达变化。将BMMSCs培养液及种子细胞分别制备成凝胶,在大鼠左下第一磨牙颊侧及根分叉处制备牙周缺损,放入制备好的凝胶。分别在术后第4、8周,处死大鼠,取出左侧下颌骨,进行Micro-CT扫描及组织学分析。结果 BMMSCs培养液中含有大量IGF-1和VEGF;RT-PCR和Western印迹法均能检测到牙周膜细胞OPN、OCN、Runx2的表达,且利用BMMSCs培养液培养的PDLCs表达高于常规培养的PDLCs(P＜0.05)。8周时,BMMSCs培养液凝胶组相比于对照组生成了更多的牙槽骨(P＜0.05)。结论 同等条件下,BMMSCs培养液比种子细胞能更好地修复缺失的牙周组织。