芦荟苦素对非小细胞肺癌A549细胞增殖及凋亡的影响

目的:研究芦荟苦素诱导人非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC) A549细胞发生凋亡,从而抑制其增殖的作用机制。方法:取对数生长期的A549细胞,用细胞计数试剂(cell counting kit,CCK-8)检测考察不同浓度的芦荟苦素(0,2,4,8,16,32,64,128μmol·L~(-1))对A549细胞增殖的影响,5μmol·L~(-1)的顺铂作为阳性对照。用结晶紫染色测定芦荟苦素(0,16μmol·L~(-1))对A549细胞克隆形成的数目以及克隆形成的大小的作用;磷脂酰丝氨酸结合蛋白V/碘化丙啶(annexin V/propidium iodide,PI)凋亡试剂盒染色检测芦荟苦素对A549细胞凋亡的影响;赫斯特(Hoechst)染色检测细胞凋亡核固缩现象;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测芦荟苦素对A549细胞中的B细胞淋巴瘤-特大型蛋白(B-cell lymphoma-extra large,Bclxl),B细胞淋巴瘤-特大型/B细胞淋巴瘤-2联合死亡促体(Bcl-xl/Bcl-2 associated death promoter,Bad),裂解半胱天冬酶-3[cleaved-Caspase3,cl-Caspase-3(Asp175)],半胱天冬酶-3(Caspase-3),裂解核糖聚合酶(cleaved-poly ADP-ribose polymerase,clPARP),核糖聚合酶(poly ADP-ribose polymerase,PARP)凋亡相关蛋白表达的影响。体内实验将5周龄裸鼠皮下接种2×106个A549细胞,并随机分为用药组和空白组,连续4周每天分别进行芦荟苦素或生理盐水腹腔注射,每周测量裸鼠肿瘤体积和小鼠体质量,并观察裸鼠的外观表现(精神、毛发、食欲、睡眠等)。结果:芦荟苦素呈浓度依赖性抑制A549细胞增殖及克隆形成的数量和大小(P 0. 05)。经芦荟苦素处理后,A549细胞凋亡的数量以及细胞发生核固缩的现象明显增加(P 0. 01),同时,芦荟苦素还明显下调了凋亡相关蛋白Bcl-xl的表达(P 0. 05),增加Bad蛋白表达(P 0. 01),同时还明显升高了cl-PARP(P 0. 01)和cl-Caspase-3(P 0. 05)表达水平。此外,在体内,芦荟苦素可明显缩小小鼠皮下肿瘤的体积,减轻肿瘤质量,并且小鼠外观表现优于空白组。结论:芦荟苦素可能通过诱导A549细胞凋亡从而达到抑制NSCLC的作用,并且用药安全。     

橙皮苷诱导人非小细胞肺癌A549/DDP细胞凋亡的实验研究

目的 观察橙皮苷对人非小细胞肺癌A549/DDP细胞凋亡的影响.方法 培养耐顺铂的人非小细胞肺癌A549/DDP细胞,分别用6,12,24,48和96 mg/L橙皮苷作用A549/DDP细胞24 h,在荧光显微镜下观察细胞形态变化,采用流式细胞计量仪检测细胞凋亡情况.结果 经不同浓度的橙皮苷作用A549/DDP细胞24h后,镜下见A549/DDP细胞核缩小变形,致密浓染,荧光成团块分布;流式细胞计量仪检测结果显示,6mg/L橙皮苷即可促使A549/DDP细胞出现早期凋亡,且凋亡率随橙皮苷剂量增大而逐渐增加,呈现出明显的剂量依赖关系(P＜0.05).结论 橙皮苷可以诱导A549/DDP细胞凋亡.     

地参多糖对非小细胞肺癌A549细胞抗肿瘤作用及机制

目的:观察地参多糖(LLP)的体外抗肿瘤活性及机制。方法:细胞增殖与活性检测(CCK-8)法检测LLP(0,5,10,15,20 g·L-1)对A549细胞不同作用时间(24,48,72 h)的增殖抑制作用;采用细胞划痕,transwell实验检测LLP(10,20 g·L-1)作用24,48 h后A549细胞的迁移侵袭能力;碘化丙啶(PI)单染法检测LLP(10,20 g·L-1)对A549细胞周期的影响;异硫氰酸荧光素(Annexin V-FITC)/PI凋亡试剂盒检测LLP(10,20 g·L-1)诱导A549细胞的凋亡作用;实时荧光定量聚合酶链式反应(Realtime PCR)检测LLP(10,20 g·L-1)对A549细胞中半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3(Caspase-3),半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-8(Caspase-8),半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9(Caspase-9),细胞周期依赖性激酶-1(CDK-1),细胞周期蛋白B1(Cyclin B1)mRNA表达的影响;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测LLP对A549细胞中Caspase-3,Caspase...     

猫爪草总皂苷体外抗人非小细胞肺癌A549细胞活性研究

目的：观察猫爪草总皂苷体外对人非小细胞肺癌A549细胞活性的影响,初步探讨其可能的作用机制。方法：采用系统溶剂法提取猫爪草总皂苷,3H-TdR掺入法和集落形成实验观察猫爪草总皂苷对A549细胞增殖的影响;流式细胞仪检测其对A549细胞凋亡和周期的影响。结果：猫爪草总皂苷对A549细胞增殖和集落形成均有较好的抑制作用,呈现较好的量效关系,可促进A549细胞的早期凋亡,细胞周期出现G0/G1期的阻滞。结论：猫爪草总皂苷能较好的抑制A549细胞增殖,其机制可能与诱导凋亡、G0/G1期阻滞有关。     

花椒抗肺癌A549细胞作用及其机制的研究

目的:研究花椒挥发油抗肺癌A549细胞作用及其可能的机制.方法:花椒挥发油按不同时间(24h、48h、72h)及不同浓度(0.5～8mg/ml)分别处理A549细胞,MTs法分析细胞的增殖速度,用流式细胞仪测定细胞凋亡及细胞周期.结果:4mg/ml花椒挥发油处理A549细胞72h可显著地抑制A549细胞增殖,1mg/ml花椒挥发油处理A549细胞72h即可导致亚凋亡峰的出现.结论:花椒挥发油可抑制A549细胞增殖并诱导细胞凋亡.     

花椒抗肺癌A549细胞作用及其机制的研究

目的：研究花椒挥发油抗肺癌A549细胞作用及其可能的机制。方法：花椒挥发油按不同时间（24h、48h、72h）及不同浓度（0.5～8mg/ml）分别处理A549细胞,MTS法分析细胞的增殖速度,用流式细胞仪测定细胞凋亡及细胞周期。结果：4mg/ml花椒挥发油处理A549细胞72h可显著地抑制A549细胞增殖,1mg/ml花椒挥发油处理A549细胞72h即可导致亚凋亡峰的出现。结论：花椒挥发油可抑制A549细胞增殖并诱导细胞凋亡。     

灯盏花素联合川芎嗪对NSCLC的抑制作用及其机制研究

目的 探讨灯盏花素联合川芎嗪对NSCLC的抑制作用及其机制。方法 将非小细胞肺癌A549细胞分为对照组,灯盏花素组（60μmol/L）、川芎嗪组（40μmol/L）、灯盏花素联合川芎嗪组（灯盏花素：60μmol/L;川芎嗪：40μmol/L）,使用MTT法检测细胞存活率、流式细胞术检测细胞凋亡、Transwell试验检测细胞迁移能力、Western Blot实验检测相关通路变化。结果 对照组、灯盏花素组、川芎嗪组、灯盏花素联合川芎嗪组A549细胞24 h后的细胞存活率依次呈降低趋势（P<0.05）;与对照组相比,给药后的A549细胞出现明显的凋亡情况,且灯盏花素和川芎嗪联合用药组肺癌细胞凋亡最明显;Transwell实验结果显示,与对照组相比,给药后穿膜细胞数量显著减少,且灯盏花素联合川芎嗪抑制细胞穿膜效果最显著;Western Blot实验显示,给药后p-JAK2和p-STAT3的表达降低,且灯盏花素联合川芎嗪组中两种蛋白表达量最低。结论 灯盏花素联合川芎嗪可抑制非小细胞肺癌细胞系A549的增殖、迁移和侵袭,其机制可能与JAKSTAT通路被抑制有关。     

番酯素诱导人肺癌A549细胞凋亡及其分子机制的实验研究

目的研究番酯素抑制人肺腺癌细胞A549增殖和诱导凋亡的作用及其机制。方法①MTT法观察番酯素对人肺腺癌A549细胞株、人肺腺癌NCI-H460细胞株体外增殖的影响;②流式细胞仪检测番酯素对细胞凋亡的影响。结果番酯素在体外对人肺腺癌细胞A549有一定的抑制作用,且这种抑制作用具有量-效关系,剂量越大,抑制作用越强;细胞经过番酯素处理72 h后,与对照组比较,番酯素各剂量线细胞均出现不同程度的凋亡,且总凋亡随着剂量的增加而增加。结论番酯素具有抑制人肺腺癌细胞A549增殖的作用,可以诱导其凋亡。     

芒柄花素对人非小细胞肺癌细胞增殖、凋亡的影响及相关机制探讨

目的:探讨芒柄花素对人非小细胞肺癌(NSCLC)细胞增殖、凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法:培养人NSCLC细胞株A549,分别按10,20,40,80,160μmol·L~(-1)梯度浓度加入芒柄花素,另设不含药物空白组,培养48 h后采用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖活力,利用Annexin V-FIFC/碘化丙啶(PI)双标法检测细胞凋亡情况,利用流式细胞仪检测细胞周期,利用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)和免疫印迹法(Western blot)分别检测细胞中周期蛋白E_1(cyclin E_1),B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)mRNA和蛋白表达。结果:40,80,160μmol·L~(-1)芒柄花素组细胞生长抑制率和细胞凋亡率均高于空白组(P0.05)。与空白组比较,40,80,160μmol·L~(-1)芒柄花素组G_0/G_1期细胞比例上升,S期细胞比例下降,80,160μmol·L~(-1)芒柄花素组下降更为明显(P0.05);40,80,160μmol·L~(-1)芒柄花素组cyclin E_1,Bcl-2 mRNA和蛋白表达量均较空白组降低,Bax mRNA和蛋白表达量升高,与40μmol·L~(-1)芒柄花素组比较,80,160μmol·L~(-1)芒柄花素组cyclin E_1,Bcl-2 mRNA和蛋白表达量均降低,Bax mRNA和蛋白表达量升高(P0.05)。结论:芒柄花素可抑制NSCLC细胞增殖,加速细胞凋亡发生,可能通过下调cyclin E_1表达而影响细胞周期,并通过调控Bcl-2和Bax表达而促使细胞凋亡发生。     

木犀草素诱导非小细胞肺癌细胞株A549 凋亡和G2 周期阻滞

目的:研究木犀草素诱导非小细胞肺癌细胞株A549细胞凋亡和抑制其细胞周期(G2期)的分子机制。方法:MTT法分析木犀草素对A549细胞的生长抑制作用和半数抑制率IC50。Hoechst 33258核染色,Annexin V-FITC/PI双染,流式细胞术检测细胞周期和凋亡,Western blot分析木犀草素引起的周期相关蛋白和凋亡相关蛋白的变化。Western blot和免疫细胞化学推测可能存在的分子机制。结果:木犀草素对A549细胞有显著的生长抑制作用,48 h的IC50为45.2μmol.L-1,流式细胞术检测细胞周期发现A549细胞经木犀草素处理后主要阻滞在G2期,周期蛋白cyclin A,p-CDC2和p-Rb都呈低表达。Hoechst 33258核染色,Annexin V-FITC/PI双染发现木犀草素处理组细胞凋亡率明显高于未处理组。Western blot发现木犀草素可上调JNK的磷酸化,下调NF-κB(p65)的磷酸化水平。免疫细胞化学显示木犀草素可抑制TNF-α刺激的p65入核,抑制其入核发挥转录因子的作用,促进细胞凋亡。结论:木犀草素能显著诱导人非小细胞肺癌细胞A549细胞凋亡和细胞周期阻滞,其可能的分子机制是通过上调JNK磷酸化继而激活线粒体凋亡途径,同时抑制NF-κB入核使其不能发挥转录活性。     

丹参素对非小细胞肺癌A549细胞内氧化还原状态及相关核转录因子的影响

目的:探讨丹参素(DSS)抗肿瘤作用的分子机制,重点在于是否与其抗氧化作用及改变非小细胞肺癌A549细胞内氧化还原状态及影响相关核转录因子和信号通路有关。方法:通过体外DPPH自由基清除、高铁还原、亚铁螯合实验和DCFH-DA荧光探针标记ROS,检测DSS的抗氧化活性及对A549细胞内ROS水平的影响;采用MTT法测定DSS对A549细胞增殖能力的时效与量效关系;采用Western blot技术检测DSS对A549细胞内缺氧诱导因子HIF-1α及氧化还原调节转录因子Nrf2蛋白表达的影响,以及上游Akt,ERK1/2 MAPK信号磷酸化水平的影响。结果:DSS能够剂量依赖性降低A549细胞内ROS水平,与其较强的自由基清除和抗氧化活性有关;DSS能以时间和剂量依赖性的方式抑制A549细胞生长,进一步机制研究发现,DSS能降低Nrf2表达,与抑制Akt以及ERK1/2的磷酸化水平有关,但对HIF-1α的表达没有影响。结论:DSS具有治疗非小细胞肺癌的作用,机制在于通过清除ROS进而抑制Akt,ERK1/2的磷酸化而下调Nrf2的表达并最终抑制A549细胞的生长。     

健脾益肾方对非小细胞肺癌细胞体外增殖凋亡作用的实验研究

目的:探讨健脾益肾方对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞体外增殖凋亡的作用。方法:人NSCLC细胞系A549分为四组:空白对照组(仅加入细胞培养液)、阴性对照组(加入细胞,不进行中药处理)、实验组(加细胞加中药处理)。荧光定量PCR和Western blot分别检测Survivin、Bcl-2和Caspase-3的mRNA和蛋白表达。MTT检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡。结果:与空白对照组相比,阴性对照组细胞在24、48、72 h的吸光度值明显升高,细胞凋亡率下降,Survivin和Bcl-2 mRNA和蛋白相对表达量上调,Caspase-3 mRNA和蛋白相对表达量下调,组间比较差异有统计学意义(P<0.05);而健脾益肾方处理的实验组24、48、72 h的吸光度值均显著降低,细胞凋亡率显著上升,Survivin和Bcl-2 mRNA和蛋白相对表达量下调,Caspase-3 mRNA和蛋白相对表达量上调,与空白对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论:健脾益肾方可通过下调Survivin和Bcl-2、上调Caspase-3表达诱导NSCLC细胞凋亡,并抑制肿瘤细...     

秦皮甲素通过抑制Ras/ERK通路诱导人肺癌细胞A549凋亡

目的探讨秦皮甲素通过抑制Ras/ERK通路诱导人肺癌细胞A549凋亡的作用。方法 MTT法检测肺癌细胞A549的增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,分光光度法检测半胱氨酸蛋白酶caspase3、8、9的活性,免疫印迹法检测K-Ras、细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)、磷酸化细胞外信号调节激酶1/2(p-ERK1/2)蛋白表达的变化。结果秦皮甲素可抑制人肺癌细胞A549的增殖,IC50值为0.4 mmol/L,并诱导凋亡;caspase3和caspase9表达增强,caspase8表达无明显改变。p-ERK1/2和K-Ras蛋白表达减弱,而ERK1/2蛋白表达无明显变化。结论秦皮甲素通过显著抑制K-Ras的表达和ERK1/2的磷酸化水平诱导人肺癌细胞A549凋亡。     

南方红豆杉水提物对人肺癌A549细胞增殖抑制作用的研究

目的:研究南方红豆杉水提物对人肺癌A549细胞增殖的抑制作用和机制。方法:采用MTT法检测南方红豆杉水提物对A549细胞增殖的抑制作用;生长曲线法观察其抑制A549细胞的时间-效应曲线;流式细胞仪检测其对A549细胞周期及凋亡的影响;倒置显微镜及电镜观察其对A549细胞形态的影响。结果:南方红豆杉水提物对A549细胞的增殖有抑制作用;其抑制作用机制为使A549细胞周期出现明显的G0/G1期阻滞,诱导细胞凋亡。结论:南方红豆杉水提物对人肺癌A549细胞的增殖有抑制作用。     

芹菜素诱导肺癌A549细胞凋亡及其机制研究

目的 研究芹菜素诱导肺癌A549细胞凋亡效应及其机制.方法 常规培养肺癌A549细胞,分别用10、20、40、80 μnol/L芹菜素作用于A549细胞;MTT法检测A549细胞增殖率;Western blotting检测聚二磷酸腺苷核糖聚合酶(PARP)、Bcl-2的蛋白表达水平;RT-PCR检测bcl-2 mRNA的表达;Annexin V/PI双染法检测A549细胞凋亡率.结果 随着芹菜素浓度的增高,A549细胞的增殖抑制率明显增高,具有统计学意义(P＜0.05);Western blotting显示PARP的剪切带逐渐增加,Bcl-2表达呈减少趋势;RT-PCR结果显示bcl-2 mRNA转录减少;0、10、20、40、80 μmol/L芹菜素对A549细胞凋亡率分别为(2.41 ±0.072)%、(10.56±0.054)%、(15.32±0.071)%、(28.98±0.012)%、(78.24±0.064)%,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 芹菜素通过抑制Bcl-2的表达有效地诱导肺癌A549细胞凋亡.     

丹参-人参组分配伍对肺癌A549增殖、凋亡和骨架的影响

中药组分配伍抗肿瘤研究是近年来治疗恶性肿瘤的新方向。该研究通过正交设计优选丹参-人参活性组分抗肺癌A549的有效配伍,并探讨其对肺癌A549细胞增殖、凋亡和骨架的影响。研究发现,正交设计优选出丹参-人参组分配伍抗肺癌的最佳组合为丹参总酚酸、人参总皂苷和人参多糖的最佳配伍剂量为5,10,5 mg·L-1。并利用CCK-8法结合实时细胞分析技术检测丹参-人参组分配伍对肺癌细胞增殖的量效和时效关系,结果显示丹参-人参组分配伍能以时间和剂量依赖性的方式显著抑制肺癌A549细胞的增殖。进一步采用流式细胞术分析丹参-人参组分配伍对肺癌细胞凋亡的影响和高内涵细胞成像系统分析丹参-人参组分配伍对肺癌细胞骨架蛋白F-actin表达的影响,结果显示丹参-人参组分配伍能够显著诱导肺癌A549细胞凋亡和显著降低肺癌A549细胞骨架的面积,且呈一定的剂量依赖性。综上表明丹参-人参组分配伍能抑制肺癌A549细胞的增殖和生长,具有治疗肺癌的应用前景,其机制与诱导肿瘤细胞凋亡及减少微丝形成相关。     

20(S)-原人参二醇对肺癌A549细胞增殖和荷瘤裸小鼠肿瘤生长的抑制作用

目的研究20(S)-原人参二醇对小细胞肺癌A549细胞增殖和荷瘤裸小鼠肿瘤生长抑制作用。方法采用噻唑蓝(MTT)法观察20(S)-原人参二醇对小细胞肺癌A549细胞增殖的抑制作用,流式细胞术测定20(S)-原人参二醇对小细胞肺癌A549细胞凋亡及周期的影响,并在裸小鼠人肺癌模型上观察20(S)-原人参二醇对荷瘤裸小鼠肿瘤生长的抑制作用。结果20(S)-原人参二醇对A549细胞具有明显的抑制作用并有剂量时间依赖关系,并且流式细胞仪检测时均出现典型凋亡峰,24小时凋亡率分别为32.47%、32.75%、33.51%。荷瘤裸小鼠动物实验表明,20(S)-原人参二醇对裸小鼠的肿瘤生长也具有明显的抑制作用,抑瘤率分别为18.78%、34.37%、50.02%。结论20(S)-原人参二醇对A549细胞的增殖和荷瘤裸小鼠肿瘤的生长具有明显的抑制作用。     

苦参碱诱导肺腺癌A549细胞凋亡及对人端粒酶逆转录酶表达的影响

目的观察苦参碱诱导肺腺癌A549细胞凋亡及对人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因表达的影响。方法以终质量浓度为0.1、0.2、0.4、0.6 mg/mL的苦参碱作用肺腺癌A549细胞48 h后,通过台盼蓝拒染法计数细胞的生长抑制率;以终质量浓度为0.2 mg/mL的苦参碱作用A549细胞48、72、96 h后,经透射电镜和DNA Ladder实验了解到细胞凋亡的发生,PCR-TRAP法检测端粒酶活性,实时RT-PCR检测hTERT的mRNA表达水平。结果各种质量浓度的苦参碱作用A549细胞48 h后,均显著抑制细胞的增殖且呈浓度依赖性;0.2 mg/mL的苦参碱作用A549细胞不同时间后,经透射电镜形态学检测和DNA Ladder实验,均显示A549细胞发生了凋亡改变;0.2 mg/mL的苦参碱作用A549细胞48 h后,端粒酶活性明显受抑,hTERT mRNA表达显著降低。结论苦参碱能抑制肺腺癌A549细胞的生长并诱导其凋亡,其机制可能与下调hTERT基因表达,抑制端粒酶活性,破坏端粒稳定性有关。     

消岩汤对肺癌A549细胞及肺癌干细胞迁移及侵袭的影响

目的探讨消岩汤对非小细胞肺癌转移的作用机制。方法通过划痕实验,观察消岩汤对肺腺癌A549细胞的迁移能力的影响;通过侵袭实验,观察消岩汤对肺癌干细胞(SP细胞)侵袭能力的影响。结果划痕实验中消岩汤组肺腺癌A549细胞在24、48、72 h的迁移距离明显短于各时刻对照组细胞(P0.05);侵袭实验中消岩汤干预下的SP细胞穿出Transwell小室的细胞数明显少于对照组(P0.05)。结论消岩汤可有效抑制肺腺癌A549细胞的迁移及SP细胞的侵袭。     

厚朴酚对人小细胞肺癌H446细胞增殖的影响

目的：研究厚朴酚对H446细胞增殖和凋亡的影响。方法：MTT法测定厚朴酚对H446细胞的细胞毒作用。结果：厚朴酚可明显抑制H446细胞增殖,作用呈明显的时间和剂量依赖性。结论：厚朴酚可抑制H446细胞增殖。