成纤维细胞活化蛋白在瘢痕疙瘩组织中的表达及意义

 目的:了解成纤维细胞活化蛋白（FAP）在瘢痕疙瘩组织中的表达情况,探讨FAP在瘢痕疙瘩发病机制中的作用。方法:采用免疫组化染色技术检测30例瘢痕疙瘩组织（病例组）和20例正常皮肤组织（对照组）中FAP的表达强度,并比较两组间及瘢痕疙瘩不同临床分级之间FAP表达阳性率的差异。结果:病例组瘢痕疙瘩组织中FAP在成纤维细胞和血管内皮细胞内表达,阳性率为73.33％;对照组正常皮肤组织中未见FAP表达,两组间FAP表达阳性率比较,差异有统计学意义（  X²=26.19,P=0.001）;瘢痕疙瘩临床分级中,轻度与重度之间及中度与重度之间比较,FAP表达阳性率差异均有统计学意义（P值分别为0.002、0.006）。结论:瘢痕疙瘩组织中FAP表达阳性率明显高于正常皮肤组织;瘢痕疙瘩临床分级越严重,FAP表达阳性率越高;FAP可能参与瘢痕疙瘩的发病机制,针对FAP的干预可能有助于瘢痕疙瘩的治疗。     

瘢痕疙瘩成纤维细胞胶原合成的实验研究

目的 探讨瘢痕疙瘩中胶原过度聚集的原因.方法 从正常皮肤与活跃增生瘢痕疙瘩标本分别培养真皮成纤维细胞,采用³H-脯氨酸掺入法分别检测单层培养及胶原凝胶三维培养体系中成纤维细胞的胶原合成量.用斑点杂交法检测单层培养细胞的人前.α1(Ⅰ)型胶原mRNA水平.结果 瘢痕疙瘩成纤维细胞Ⅰ型胶原mRNA水平升高,其胶原合成量也显著高于正常真皮成纤维细胞(P<0.01).结论 在增生活跃瘢痕疙瘩中,成纤维细胞胶原合成功能处于活化状态,胶原合成增加是导致胶原过度积聚的重要原因.     

人瘢痕疙瘩成纤维细胞裸鼠荷瘤模型的建立

目的 建立一种简单、成功率高的人瘢痕疙瘩裸鼠荷瘤模型。 方法 27只雌性BALB/c裸鼠随机分为5组,A、B、C组每组5只,在每只裸鼠腋窝下接种人瘢痕疙瘩成纤维细胞和Matrigel胶混悬液0.1 ml,细胞浓度分别为1.0 × 104个/μl Matrigel胶（A组）、3.0 × 104个/μl Matrigel胶（B组）、5.0 × 104个/μl Matrigel胶（C组）。取C组成形瘤块修剪成若干个5 mm × 5 mm × 5 mm大小的组织块移植于D组裸鼠（8只）的腋窝皮下;E组裸鼠（4只）皮下注射100 μl Matrigel胶作为对照组。A、B、C组出瘤后30 d、D组瘤块移植后30 d肉眼观察瘤体的形成过程及变化,并在第31天处死裸鼠进行组织病理学检查,分析其移植后成形的瘤体组织学变化及裸鼠的心、肝、脾、肺、肾组织的变化。 结果 A、B、C组裸鼠成瘤率为100%,出瘤时间分别为（90.20 ± 3.96） d、（61.00 ± 2.92） d、（39.60 ± 3.20） d。出瘤30 d时3组瘤体体积分别为（288.34 ± 25.29） mm3、（1 370.63 ± 105.24） mm3、（1 940.98 ± 184.37） mm3,3组差异有统计学意义（F = 138.74,P < 0.05）。D组裸鼠成形瘤块移植后瘤块体积先略增大后逐渐减小,移植第14天始持续增大,8只中7只成瘤。E组裸鼠未见瘤体形成。组织病理学检查,各组瘤体的组织形态在镜下一致,与人瘢痕疙瘩组织相似,未见其他脏器组织学改变及转移瘤灶。结论 裸鼠皮下接种人瘢痕疙瘩成纤维细胞可建立瘢痕疙瘩裸鼠荷瘤模型,而且已成瘤组织修剪成一定体积再次移植于裸鼠皮下也可以建立瘢痕疙瘩裸鼠荷瘤模型。     

瘢痕疙瘩成纤维细胞研究进展

近10年来瘢痕疙瘩发病机制的研究有了很大的进展，对组织标本及体外培养的成纤维细胞生长、胶原代谢的分析研究，充分说明了瘢痕疙瘩成纤维细胞的异常性，通过对瘢痕疙瘩成纤维细胞的进一步研究，并随着细胞生物学、分子生物学、免疫学等在创面愈合领域的不断深入，有望在不久的将来揭开瘢痕疙瘩形成之谜。     

槲皮素对瘢痕疙瘩成纤维细胞胶原合成的影响

目的研究槲皮素对瘢痕疙瘩成纤维细胞胶原合成的影响,探讨其作用机理。方法体外培养瘢痕疙瘩及正常皮肤成纤维细胞,应用羟脯氨酸比色法对不同药物浓度处理后成纤维细胞胶原合成量进行分析;RT-PCR及Real-timePCR检测Ⅰ、Ⅲ型胶原及TGFβ-1基因表达水平。结果槲皮素可抑制体外培养瘢痕疙瘩成纤维细胞胶原合成,该作用呈剂量依赖效应;槲皮素可降低Ⅰ、Ⅲ型胶原和TGFβ-1基因mRNA水平。结论槲皮素对于瘢痕疙瘩成纤维细胞胶原合成有显著抑制效应,其作用机制之一为通过抑制TGFβ-1基因在转录水平降低了前胶原mRNA水平,因而使成纤维细胞胶原合成减少。     

几丁糖对瘢痕疙瘩成纤维细胞形态及增殖的作用

目的：探讨几丁糖对瘢痕疙瘩成纤维细胞形态及生长增殖的作用，为临床应用几丁糖治疗瘢痕疙瘩提供理论基础：方法：用组织块法进行瘢痕疙瘩、正常皮肤成纤维细胞的体外培养；用光学显微镜和电子显做镜观察细胞的形态结构；用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法和流式细胞仪检测不同浓度几丁糖对不同来源的成纤维细胞生长增殖和细胞周期的影响．结果：随着几丁糖浓度的增高，瘢痕疙瘩来源的成纤维细胞细胞器萎缩，4值减小，C0 G1期的细胞百分比增多，S期G2 M期的细胞百分比减少．结论：几丁糖对正常皮肤和瘢痕疙瘩来源的成纤维细胞的生长增殖均有抑制作用，几丁糖可能在瘢痕疙瘩的防治中有一定的作用．     

瘢痕疙瘩组织中内皮素—1及碱性成纤维细胞生长因子mRNA的 …

目的 了解内皮素－１和碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）在瘢痕疙瘩组织的表达情况。方法 组织活检标本分为３组,瘢痕疙瘩、萎缩性瘢痕和正常皮肤。用地高辛标记的ｃＤＮＡ探针,采取冰冻切片原位杂交的方法检测内皮素－１和ｂＦＧＦｍＲＮＡ的表达。结果 瘢痕疙瘩真皮组织内内皮素－１ｍＲＮＡ的表达明显强于萎缩性瘢痕和对照组。阳性染色主要位于真皮浅层血管和部分真皮成纤维细胞。瘢痕疙瘩组６／８例真皮成纤维细胞内皮素     

病理性瘢痕成纤维细胞的研究进展

成纤维细胞是瘢痕形成的效应细胞,瘢痕疙瘩和肥厚性瘢痕成纤维细胞存在着广泛的异质性。成纤维细胞胶原合成增加、降解减少导致病理性瘢痕中胶原过度积聚。成纤维细胞的增殖异常是病理性瘢痕过度增生和持续存在的主要原因。成纤维细胞对细胞因子等因素反应性有明显异常。肥厚性瘢痕的收缩性和成纤维细胞的异质性有直接关系。     

田积颗粒对瘢痕疙瘩成纤维细胞凋亡的影响

以四甲基偶氮唑(MTT)法,琼脂糖凝胶电泳检测田积颗粒对瘢痕疙瘩成纤维细胞凋亡的影响.田积颗粒低、中、高剂量组与空白组比较,DNA的含量均有不同程度的下降,随着浓度的增加,DNA含量亦随之降低,表明田积颗粒对瘢痕疙瘩成纤维细胞的凋亡有一定程度的促进作用.     

4-羟苯基维胺在不同载体中对人瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖及凋亡影响

目的 探讨4-羟苯基维胺(4-HPR)在不同载体中对人瘢痕疙瘩成纤维细胞(HKF)增殖及凋亡的影响.方法 采用薄膜-超声分散法制备4-HPR脂质体溶液及4-HPR微泡溶液.用不同浓度(0～80 mg/L)4-HPR脂质体溶液作用原代HKF 6～48 h后,噻唑蓝(MTF)法检测细胞增殖情况.将部分HKF分成3组,分别用15 mg/L 4-HPR溶液、4-HPR脂质体溶液、4-HPR微泡处理,每组再分成两个亚组,一个亚组在给药后接受超声处理,另一亚组不做超声处理.作用24 h后,噻唑蓝(MTT)法检测HKF的增殖情况.流式细胞仪检测15 mg/L 4-HPR脂质体或4-HPR微泡处理24 h后HKF的凋亡情况.结果 成功制备4-HPR脂质体溶液及4-HPR微泡溶液.MTT检测显示,4-HPR脂质体溶液在1 ～ 80 mg/L浓度范围内对HKF增殖有抑制作用,且增殖抑制率与药物浓度呈正相关(r=0.633,P＜0.01).超声处理后4-HPR微泡组与4-HPR溶液及4-HPR脂质体组对HKF的增殖抑制作用差异均有统计学意义(P＜0.01).4-HPR脂质体组和4-HPR微泡组HKF凋亡率分别为(21.81±3.73)％和(39.79±1.61)％,较对照组(6.18±0.61)％均显著增加(均P＜0.01).结论 成功制备4-HPR微泡,不同载体中4-HPR可促进HKF凋亡,进而抑制增殖,其中4-HPR微泡结合超声抑制作用较4-HPR脂质体强.     

咪喹莫特对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和胶原产生的影响

目的 探讨咪喹莫特对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和胶原产生的影响.方法 从手术切除的瘢痕疙瘩组织中培养成纤维细胞,加入不同浓度的咪喹莫特作用后,观察细胞的形态学变化,MTT法检测细胞的活性.免疫组化和蛋白免疫印迹法检测咪喹莫特对瘢痕疙瘩成纤维细胞Ⅰ型、Ⅲ型前胶原产生的影响.结果 在10～100μg/mL范围内,咪喹莫特能显著抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖,且存在剂量和时间依赖性;进一步检测到咪喹莫特作用后瘢痕疙瘩成纤维细胞Ⅰ型、Ⅲ型前胶原表达减弱.结论 咪喹莫特能有效抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖和Ⅰ型、Ⅲ型前胶原的产生.     

瘢痕疙瘩组织中ICAM-1、VEGF、c-fos表达的免疫组化检测

采取免疫组化SP方法检测了细胞间粘附分子 1(ICAM 1)、血管内皮细胞生长因子 (VEGF)、以及原癌基因 (c fos)在瘢痕疙瘩、普通瘢痕、正常皮肤组织中的表达。结果表明ICAM 1、VEGF、c fos在瘢痕疙瘩中表达皆增强。ICAM 1主要表达在真皮浅层血管、浸润的炎细胞、成纤维细胞 ;VEGF、c fos主要表达在表皮、真皮血管、皮肤附属器 ;部分瘢痕疙瘩标本成纤维细胞c fos染色阳性 ,提示瘢痕疙瘩组织中血管内皮细胞处于一种激活状态 ,瘢痕疙瘩组织血管内皮细胞和成纤维细胞增殖异常。     

生存素在瘢痕疙瘩组织中的表达及其意义

目的 探讨生存素在瘢痕疙瘩组织中的表达及在瘢痕疙瘩发病中的作用。方法 采用免疫组化SABC法，检测25例瘢痕疙瘩（病例组）及15例正常皮肤（对照组）组织内生存素的表达情况。结果 25例瘢痕疙瘩组织中生存素表达阳性20例，阳性率80.0%，表达部位主要在成纤维细胞和血管内皮细胞内，正常皮肤组织内均表达阴性，两组比较差异有统计学意义（χ2 ＝ 24.00，P < 0.01）。瘢痕疙瘩临床分级低度、中度、重度生存素表达阳性率分别为57.14%（4/7）、81.81%（9/11）、100%（7/7），差异无统计学意义（P ＝ 0.133）；瘢痕疙瘩复发组与未治疗组生存素表达阳性率分别为90.91%（10/11）、71.43%（10/14），差异亦无统计学意义（P ＝ 0.341）。结论 生存素可能参与瘢痕疙瘩的发病。     

肥大细胞在瘢痕疙瘩发病机理中作用的研究

为探讨肥大细胞在瘢痕疙瘩发病机理中的作用,用透射电镜观察活跃增生瘢痕疙瘩的超微结构。用组胺分别处理体外培养正常皮肤与瘢痕疙瘩成张纤维细胞,采用^3H-脯氨酸掺入、胃蛋白酶消化法检测其胶原合成量。结果：瘢痕疙瘩中有大量含有高度发达粗面内质网的成纤维细胞,还可见有脱颗粒的肥大细胞。瘢痕疙瘩成纤维细胞在胶原合成量已有增加的基础上,经一定浓度组胺作用,其胶原合成量仍有显著增加。结果示肥大细胞可有助于瘢痕疙瘩成纤维细胞胶原合成功能的活化及其活化表型的维持。     

Insufficient expression of the melanocortin‐1 receptor by human dermal fibroblasts contributes to excess collagen synthesis in keloid scars

Activation of the α‐melanocyte‐stimulating hormone (αMSH)/melanocortin‐1 receptor (MC1R) signalling pathway exerts antagonistic actions on cutaneous inflammatory and fibrogenic responses in addition to promoting pigment production. Herein, the expression of MC1R by keloid‐derived fibroblasts and keloid scar tissue was investigated using a range of techniques. MC1R mRNA expression levels in five different keloid fibroblast cell lines were significantly reduced to less than half compared with five normal fibroblast cell lines (P < 0.05). Immunohistological analysis of tissue samples indicated that MCR1 immunoreactivity in both epidermal and dermal compartments of five keloid tissue samples was dramatically decreased compared with normal skin (P < 0.05). Insufficient expression of MC1R on human dermal fibroblasts might abolish the αMSH‐mediated suppression of collagen production and myofibroblast transformation elicited by the profibrotic cytokine‐transforming growth factor‐β1. Restoration of reduced MC1R by dermal fibroblasts may lead to novel scar‐reducing therapeutic approaches for treating this refractory fibrotic disease.     

Multilineage differentiation potential of human dermal skin-derived fibroblasts

Dermal skin-derived fibroblasts from rodent and human have been found to exhibit mesenchymal surface antigen immunophenotype and differentiation potential along the three main mesenchymal-derived tissues: bone, cartilage and fat. Human dermal skin-derived mesenchymal stem cells constitute a promising cell source in clinical applications. Therefore, we isolated fibroblastic mesenchymal stem-cell-like cells from human dermis derived from juvenile foreskins, which share a mesenchymal stem cell phenotype and multi-lineage differentiation potential. We could show similar expression patterns for CD14(-), CD29(+), CD31(-), CD34(-), CD44(+), CD45(-), CD71(+), CD73/SH3-SH4(+), CD90/Thy-1(+), CD105/SH2(+), CD133(-) and CD166/ALCAM(+) in well-established adipose tissue derived-stem cells and fibroblastic mesenchymal stem-cell-like cells by flow cytometry. Immunostainings showed that fibroblastic mesenchymal stem-cell-like cells expressed vimentin, fibronectin and collagen; they were less positive for alpha-smooth muscle actin and nestin, while they were negative for epithelial cytokeratins. When cultured under appropriate inducible conditions, both cell types could differentiate along the adipogenic and osteogenic lineages. Additionally, fibroblastic mesenchymal stem-cell-like cells demonstrated a high proliferation potential. These findings are of particular importance, because skin or adipose tissues are easily accessible for autologous cell transplantations in regenerative medicine. In summary, these data indicate that dermal fibroblasts with multilineage differentiation potential are present in human dermis and they might play a key role in cutaneous wound healing.     

ROCK1基因对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖与迁移及相关分子表达的影响

目的研究ROCK1基因对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和迁移能力及相关分子表达的影响。方法免疫组化检测人瘢痕疙瘩和正常皮肤组织中ROCK1蛋白的表达, Western印迹检测人瘢痕疙瘩组织中ROCK1、转化生长因子β1(TGF-β1)和E钙黏附蛋白(E-Cad)的表达。体外培养人瘢痕疙瘩成纤维细胞(HKF), 分为ROCK1基因过表达对照组(ROCK1 NC组, 转染ROCK1基因过表达对照载体)、ROCK1基因过表达组(ROCK1 OE组, 转染ROCK1基因过表达载体)、ROCK1基因干扰对照组(sh NC组, 转染ROCK1基因干扰对照载体)、ROCK1基因干扰组(shROCK1组, 转染ROCK1基因干扰载体)共4组。细胞计数试剂盒8(CCK8)检测ROCK1基因对HKF存活率的影响;Transwell小室检测ROCK1基因对HKF迁移的影响;实时荧光定量PCR、免疫印迹检测ROCK1、TGF-β1和E-Cad基因mRNA和蛋白的表达。结果免疫组化检测显示, 人瘢痕疙瘩组织中ROCK1表达较正常组织显著降低(t = 6.47, P = 0.003);Western印迹检测显示, 与正常...     

UVA致人皮肤成纤维细胞急性和慢性光损伤模型的建立

目的:探讨人皮肤成纤维细胞(human dermal fibroblasts,HDFs)急性和慢性光损伤模型建立的方法。方法:体外培养原代人皮肤成纤维细胞,选取第4~8代的细胞进行实验。用长波紫外线(UVA)单次照射建立HDFs急性光损伤模型,荧光倒置显微镜观察不同剂量UVA照射后第1、2、3天HDFs的形态变化;CCK-8法检测照射后HDFs的增殖活性。慢性光损伤HDFs模型采用8-甲氧沙林(8-MOP)避光孵育细胞24h,随后以含8-MOP的磷酸盐缓冲液(PBS)置换培养基,行9J/cm~2 UVA照射,照射完成后换Dulbecco改良Eagle培养基(DMEM)(含10%胎牛血清)避光传代培养,21d后显微镜下观察HDFs形态;衰老相关-β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色法计算衰老细胞率。结果:单次UVA照射导致HDFs增殖率下降,与UVA剂量呈正相关。UVA在剂量为≤10J/cm~2时,细胞存活率保持在85%;而UVA剂量≥15J/cm~2时细胞存活率明显降低;≥20 J/cm~2时存活率为50%左右,至25 J/cm~2时仅为约25%。慢性光损伤HDFs诱导组(即UVA+MOP组)几乎所有细胞均出现体积变大、细胞颗粒增加等细胞老化的特征性改变;SA-β-Gal染色细胞的阳性率95%。结论:UVA单次照射可成功建立HDFs急性光损伤模型,UVA联合8-MOP构建HDFs慢性光损伤模型。