黄芩素对绒毛滋养细胞侵袭的影响

目的:通过研究黄芩素对人类早孕期绒毛滋养细胞株HTR-8/SVneo的增殖活力、侵袭能力的影响,探讨中药黄芩作用于滋养细胞侵袭相关疾病的可能作用机制。方法:体外培养早孕期绒毛滋养细胞株HTR-8/SVneo细胞,以不同浓度(0.01,0.05,0.1,0.5,1μmol·L~(-1))黄芩素作用于细胞,设黄芩素0μmol·L~(-1)为空白组,采用细胞增殖、毒性活力实验法(cell counting kit-8,CCK-8)检测黄芩素对HTR-8/SVneo细胞增殖活力的影响,细胞侵袭实验(Transwell)检测黄芩素对HTR-8/SVneo细胞侵袭作用的影响。提取黄芩素处理后的细胞总RNA,蛋白,分别运用实时荧光定量PCR(Real-time PCR),蛋白免疫印迹法(Western blot)检测滋养细胞侵袭相关的重要因素-基质金属蛋白酶(MMP)-2,MMP-9的mRNA,蛋白表达水平;收集细胞上清,培养基采用明胶酶谱法检测黄芩素对MMP-2,MMP-9的分泌及酶活性的影响。结果:与空白组比较,0.01,0.05,0.1,0.5μmol·L~(-1)黄芩素能明显诱导增强滋养细胞HTR-8/SVneo的侵袭能力(P0.05),且侵袭率对剂量呈依耐性增长。0.01,0.05,0.1,0.5μmol·L~(-1)黄芩素可明显上调MMP-9蛋白和mRNA表达水平,增强其酶活性(P0.05)。结论:黄芩素能诱导增强滋养细胞HTR-8/SVneo的侵袭能力,可能是通过增强MMP-9 mRNA和蛋白表达及酶活性来发挥作用。     

款冬花多糖通过调控miR-99a/PI3K/Akt通路影响食管癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的探索款冬花多糖通过miR-99a/PI3K/Akt通路影响食管癌细胞增殖、迁移和侵袭。方法 MTT检测款冬花多糖(10、20、40、80、160 mg/L)对食管癌细胞Eca109细胞存活的影响;Transwell小室法检测细胞迁移和侵袭;Western blot检测MMP2、MMP9、Cyclin D1、p-PI3K和p-Akt蛋白表达;RT-PCR检测miR-99a表达。在Eca109细胞中转染miR-99a、anti-miR-99a并使用80 mg/L款冬花多糖进行处理,观察其在细胞增殖、迁移和侵袭中的作用。结果款冬花多糖抑制Eca109细胞增殖、迁移、侵袭及MMP2、MMP9、CyclinD1、p-PI3K、p-AKT蛋白表达(P0.05),促进miR-99a表达(P0.05)。过表达miR-99a抑制Eca109细胞中Cyclin D1、MMP2、MMP9蛋白表达,减少细胞存活率、迁移细胞数和侵袭细胞数(P0.05)。低表达miR-99a部分逆转款冬花多糖对细胞增殖、迁移、侵袭、CyclinD1、MMP2、MMP9、p-PI3K和p-AKT蛋白表达的抑制作用。结论款冬花多糖通过调控miR-99a/PI3K/Akt通路抑制食管癌细胞增殖、迁移和侵袭。     

知母皂苷AⅢ调控miR-494对原发性皮肤黑色素瘤生物学行为的影响

目的:探讨知母皂苷AⅢ调控miR-494对原发性皮肤黑色素瘤增殖、迁移和侵袭的影响。方法:体外培养人黑色素瘤A375细胞,分别用0、4、8、16 μmol/L的知母皂苷AⅢ处理A375细胞24 h。将miR-NC、miR-494转染至A375细胞,作为miR-NC、miR-494组; 将anti-miR-NC、anti-miR-494转染至A375细胞,再用知母皂苷AⅢ(16 μmol/L)干预,作为anti-miR-NC+16 μmol/L组、anti-miR-494+16 μmol/L组。细胞计数试剂盒-8(CCK-8)检测细胞增殖情况; 蛋白质印迹(Western blot)法检测细胞Cyclin D1、MMP-2、MMP-9蛋白表达; Transwell实验检测细胞迁移和侵袭情况; 实时荧光定量 PCR(RT-qPCR)检测细胞miR-494表达水平。结果:与对照组比较,8、16 μmol/L中、高剂量组的知母皂苷AⅢ明显下调组细胞A值、迁移数量和侵袭数量以及Cyclin D1、MMP-2、MMP-9蛋白表达(P<0.05)。与对照组比较,8 μmol/L中剂量组、16 μmol/L高剂量组的知母皂苷AⅢ明显上调细胞miR-494表达水平(P<0.05)。与miR-NC组比较,miR-494组细胞A值、迁移数量和侵袭数量以及Cyclin D1、MMP-2、MMP-9蛋白表达明显降低(P<0.05)。与anti-miR-NC+16 μmol/L组比较,anti-miR-494+16 μmol/L组细胞miR-494表达水平显著降低; 细胞A值、迁移数量和侵袭数量以及Cyclin D1、MMP-2、MMP-9蛋白表达显著升高(P<0.05)。结论:知母皂苷AⅢ上调miR-494抑制原发性皮肤黑色素瘤增殖、迁移和侵袭。     

槐角黄酮通过调控LncRNA FBXL19-AS1/miR-342-3p通路抑制肝癌细胞增殖、迁移及侵袭的机制研究

探讨槐角黄酮对肝癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响并分析其对长链非编码RNA FBXL19-AS1(LncRNA FBXL19-AS1)/微小RNA-342-3p(miR-342-3p)通路的调控机制。采用甲基噻唑基四唑(MTT)法与平板克隆试验检测不同质量浓度(1,5,10 mg·mL~(-1))的槐角黄酮对肝癌Huh7细胞增殖能力的影响;Transwell小室试验检测槐角黄酮对Huh7细胞迁移及侵袭能力的影响;实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测槐角黄酮对Huh7细胞中FBXL19-AS1和miR-342-3p表达水平的影响;双荧光素酶报告试验检测FBXL19-AS1是否靶向miR-342-3p;采用上述方法检测抑制FBXL19-AS1表达或FBXL19-AS1过表达后对Huh7细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响;明胶酶谱检测基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的活性;蛋白免疫印迹(Western blot)法检测细胞周期蛋白1(cyclinD1),p21,MMP-2,MMP-9蛋白表达量。槐角黄酮可明显抑制Huh7细胞增殖、迁移及侵袭(P0.05),促进p21蛋白表达(P0.05),抑制cyclinD1,MMP-2,MMP-9蛋白表达(P0.05),并可降低MMP-2和MMP-9活性(P0.05);槐角黄酮处理后Huh7细胞中FBXL19-AS1的表达水平显著降低(P0.05),miR-342-3p的表达水平显著升高(P0.05);双荧光素酶报告试验结果证实FBXL19-AS1靶向抑制miR-342-3p的表达;抑制FBXL19-AS1表达后细胞增殖抑制率显著升高(P0.05),细胞克隆形成数显著减少(P0.05),迁移细胞数与侵袭细胞数显著减少(P0.05),cyclinD1,MMP-2,MMP-9蛋白表达水平显著降低(P0.05),MMP-2和MMP-9活性显著降低(P0.05),p21蛋白表达水平显著升高(P0.05);FBXL19-AS1过表达可逆转槐角黄酮对Huh7细胞增殖、迁移及侵袭的抑制作用。槐角黄酮通过调控LncRNA FBXL19-AS1/miR-342-3p通路抑制肝癌细胞增殖、迁移及侵袭。     

益气活血方对乳腺癌MCF-7细胞系增殖侵袭能力及miR-100表达水平影响的研究

目的:探讨益气活血方对乳腺癌MCF-7细胞系增殖侵袭能力及microRNA-100(miR-100)表达水平的影响。方法:取对数生长期的MCF-7乳腺癌细胞,将益气活血方以培养液稀释调整为20、40、80 mg/L培养细胞,设置高、中和低浓度组,并以不含药物的相同培养液培养细胞为对照组。分别采用qRT-PCR检测miR-100的表达水平; MTT法检测细胞增殖; Transwell小室法检测细胞侵袭; 并采用Western blot法检测细胞增殖相关蛋白特异性周期蛋白D1(Cyclin D1)和侵袭相关蛋白基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达水平。结果:与对照组相比,实验组miR-100表达水平升高; 且与较低浓度组相比,较高浓度组miR-100表达水平亦呈上升趋势(均P<0.05)。与对照组相比,实验组细胞增殖抑制率和侵袭抑制率明显升高,且与较低浓度组相比,较高浓度组各抑制率均亦呈上升趋势(均P<0.05)。同时,与对照组相比,实验组Cyclin D1和MMP-9蛋白表达水平明显降低,且与较低浓度组相比,较高浓度组Cyclin D1和MMP-9蛋白表达水平亦呈下降趋势(均P<0.05)。结论:益气活血方可抑制乳腺癌细胞的增殖和侵袭。其机制可能与益气活血方可提高miR-100表达水平、降低Cyclin D1和MMP-9表达水平相关。     

华蟾素通过调控基质金属蛋白酶抑制人胃腺癌细胞MGC-803侵袭与迁移

目的:探讨华蟾素对人胃腺癌MGC-803细胞的侵袭与迁移的影响及其分子机制。方法:噻唑蓝(MTT)比色法检测华蟾素(10,20,40,80,160,320 mg·L~(-1))对人胃腺癌MGC-803细胞增殖的抑制影响;transwell小室法检测华蟾素对MGC-803细胞侵袭与迁移能力的影响;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测经华蟾素作用后的MGC-803细胞中基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinases-2,MMP-2),基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinases-9,MMP-9)和基质金属蛋白酶抑制因子-1(tissue inhibitors of metalloproteinases-1,TIMP-1),基质金属蛋白酶抑制因子-2(tissue inhibitors of metalloproteinases-2,TIMP-2)的蛋白表达水平;实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测经华蟾素处理后的MGC-803细胞中MMP-2,MMP-9,TIMP-1,TIMP-2的mRNA表达情况。结果:(1)MTT比色法结果显示,与空白组比较,华蟾素(10,20,40,80,160,320 mg·L~(-1))对胃腺癌MGC-803细胞的增殖具有显著抑制作用(P0.01),并且华蟾素对MGC-803细胞的抑制作用呈浓度和时间依赖。(2)transwell实验结果显示,与空白组比较,华蟾素(10,20,40 mg·L~(-1))对胃腺癌MGC-803细胞的侵袭与迁移能力具有不同程度的抑制作用(P0.05)(3)Real-time PCR和Western blot实验结果显示,与空白组比较,华蟾素(10,20,40 mg·L~(-1))能够下调MMP-2,MMP-9蛋白和mRNA的表达,上调TIMP-1,TIMP-2蛋白和mRNA的表达。结论:华蟾素能明显抑制胃腺癌MGC-803细胞的侵袭与迁移,其机制可能与上调TIMP-1,TIMP-2的转录水平,进而下调MMP-2,MMP-9蛋白水平有关。     

miR-451对肝癌细胞增殖、糖酵解及相关基因表达的影响

目的研究miR-451对肝癌细胞增殖、糖酵解及相关基因表达的影响。方法实验分为普通组、增强组和抑制组,增强组和抑制组肝癌MHCC97细胞分别转染miR-451的模拟物mimics和阻遏物inhibitors,普通组常规培养。采用RT-PCR法检测3组肝癌细胞中miR-451和AMPK/mT OR、Ki-67、血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、胰岛素样生长因子(IGF-1)表达情况,噻唑蓝(MTT)法检测3组肝癌细胞增殖情况,通过检测3组细胞葡萄糖摄取和乳酸分泌情况评估肝癌细胞糖酵解情况。结果增强组肝癌细胞中miR-451表达量明显高于普通组(P<0.05),抑制组肝癌细胞中miR-451表达量明显低于普通组(P<0.05)。MTT结果显示转染后各时间点增强组吸光度(OD)明显低于普通组和抑制组(P均<0.05)。转染后增强组肝癌细胞mT OR、Ki-67、MMP-9、VEGF、IGF-1mR NA表达量和葡萄糖消耗值、乳酸分泌值均明显低于普通组和抑制组(P均<0.05),而AMPK mR NA表达量明显高于普通组和抑制组(P均<0.05)。结论 miR-451参与调控肝癌细胞增殖及糖酵解,其调控机制可能通过影响AMPK/mT OR信号通路,进而影响细胞中Ki-67、MMP-9、VEGF、IGF-1的表达而实现。     

通幽汤对食管鳞癌细胞MMP-2、MMP-9及TIMP-1表达的影响

目的:探讨通幽汤对食管鳞癌细胞基质金属蛋白酶2、9(MMP-2、MMP-9)及基质金属蛋白酶组织抑制因子(TIMP-1)的影响。方法:体外培养食管鳞癌KYSE150细胞,通幽汤全方作用于细胞,CCK-8实验检测细胞增殖变化,细胞划痕实验观察细胞迁移情况,Transwell法观察细胞侵袭情况,荧光显微镜观察细胞凋亡情况,ELISA法测定食管鳞癌细胞培养上清液中MMP-2、MMP-9、TIMP-1含量,Western-blot法检测细胞MMP-2、MMP-9、N-钙黏联蛋白(N-cadherin)、TIMP-1、E-钙黏联蛋白(E-cadherin)表达量变化。结果:与对照组比较,研究组食管鳞癌细胞迁移速率和侵袭能力下降,MMP-2、MMP-9、N-cadherin蛋白水平降低,TIMP-1、Ecadherin蛋白水平升高。结论:通幽汤可能通过调控食管鳞癌细胞侵袭和转移中的关键分子MMP-2、MMP-9、TIMP-1及钙黏联蛋白的表达,抑制癌细胞的侵袭和转移。     

汉黄芩素抑制乳腺癌细胞增殖及侵袭的实验研究

目的：研究汉黄芩素对乳腺癌细胞MDA-MB-231生长和增殖的影响,同时观察汉黄芩素对MDA-MB-231细胞黏附、迁移和侵袭能力的影响,进一步探讨其分子作用机制。方法：MTT法检测汉黄芩素对MDA-MB-231细胞生长的影响;Ki-67法检测汉黄芩素对细胞增殖的影响;划痕实验、黏附试验和侵袭小室法检测对MDA-MB-231细胞迁移和侵袭能力的影响;Western blotting检测对增殖和转移相关蛋白及相关信号通路的影响。结果：汉黄芩素能明显抑制MDA-MB-231细胞生长和增殖;低浓度情况下明显抑制乳腺癌细胞的迁移、黏附和侵袭能力;汉黄芩素有效抑制MDA-MB-231细胞Survivin,Bcl-2,ICAM-1,MMP-2,MMP-9蛋白的表达。结论：汉黄芩素明显抑制乳腺癌细胞生长和增殖,并抑制MDA-MB-231细胞迁移、黏附、侵袭,其对MDA-MB-231细胞的侵袭和黏附影响可能与其降低ICAM-1,MMP-2,MMP-9表达有关。     

槲皮素对U937细胞迁移和侵袭能力及MMP-2,MMP-9表达的影响

目的:观察槲皮素(quercetin)对人急性髓系白血病(human acute myeloid leukemia)U937细胞增殖、凋亡、黏附力、迁移和侵袭能力及基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2),基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)表达的影响。方法:体外培养U937细胞,分别以0,10,20,40μmol·L-1槲皮素处理24,48,72 h,细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)检测槲皮素对U937细胞增殖的抑制作用。实验随机分为空白组,槲皮素10,20,40μmol·L-1组。末端脱氧核苷酸转移酶介导的d UTP缺口末端标记测定法(TUNEL)检测U937细胞凋亡情况;细胞黏附实验检测U937细胞黏附力;划痕修复实验检测U937细胞迁移能力;transwell小室体外侵袭实验检测U937细胞侵袭能力;蛋白质印迹法(Western blot)检测U937细胞MMP-2,MMP-9蛋白表达。结果:槲皮素可抑制U937细胞的增殖。与空白组比较,槲皮素10,20,40μmol·L-1组明显升高U937细胞凋亡指数(P0.05,P0.01)。与空白组比较,槲皮素10,20,40μmol·L-1组明显降低U937细胞黏附率,迁移率,侵袭细胞数及MMP-2,MMP-9蛋白表达(P0.05,P0.01)。结论:槲皮素可显著抑制U937细胞迁移和侵袭能力,其机制可能与其抑制MMP-2和MMP-9表达有关。     

马齿苋酰胺E干预肾癌的作用机制研究

目的探讨马齿苋酰胺E对人肾癌786-O细胞增殖、迁移和侵袭的作用及机制。方法体外培养786-O细胞,给予马齿苋酰胺E(10、20、40μmol/L)进行干预,采用CCK-8法检测细胞增殖情况;采用划痕实验检测细胞迁移能力;采用Transwell小室法检测细胞侵袭能力;采用AO/EB试剂盒检测细胞凋亡率。建立裸鼠移植瘤肾癌模型,给予马齿苋酰胺E(3、15mg/kg)进行干预,测定各组裸鼠肿瘤质量及体积,采用苏木素-伊红(HE)染色法观察肿瘤组织病理变化;采用Westernblotting法检测786-O细胞和荷瘤裸鼠瘤组织中细胞增殖标志物如Ki67、增殖细胞核抗原(proliferatingcellnuclear antigen,PCNA)及凋亡标志物如活化半胱氨酸蛋白酶-3(Cleaved Caspase-3)、Cleaved Caspase-9及侵袭相关蛋白如基质金属蛋白酶-2(matrixmetalloproteinase-2,MMP-2)、MMP-9及希佩尔-林道抑癌基因(VonHippel-Lindau,VHL)/缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible fact...     

理冲汤加减联合5-氟尿嘧啶对人肝癌细胞HepG2上皮间质转化的影响

目的:探讨理冲汤加减联合5-氟尿嘧啶(5-FU)对人肝癌细胞HepG2上皮间质转化(EMT)的影响。方法:采用噻唑蓝(MTT)比色法检测理冲汤加减及5-FU单独和联合使用对HepG2细胞生长影响;应用中效原理进行统计分析,确定联合用药时的药物效应-合用指数的关系,判定药物间的相互作用,确定后续实验给药浓度及时间;划痕实验检测理冲汤加减联合5-FU对HepG2细胞迁移能力的影响;细胞侵袭实验(transwell小室)检测理冲汤加减联合5-FU对HepG2细胞侵袭能力的影响;采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测理冲汤加减联合5-FU作用HepG2细胞24 h后对EMT相关基因上皮型钙黏蛋白(E-cadherin),神经型钙黏蛋白(N-cadherin),锌指转录因子(Snail,Twist) mRNA表达;采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测理冲汤加减联合5-FU作用HepG2细胞24 h后EMT相关蛋白E-cadherin,N-cadherin,Snail,波形蛋白(Vimentin)的表达。结果:MTT比色法结果显示,随着药物浓度增加,理冲汤加减,5-FU单药或联合用药对HepG2细胞生长的抑制效应也增加;应用中效原理进行统计分析显示,两药在低剂量合用24 h后对HepG2细胞可以产生较好的协同效应,故选用理冲汤加减,5-FU作用HepG2细胞24 h的25%抑制浓度(IC25)即800 mg·L-1理冲汤加减,3. 125 mg·L-15-FU;设空白组,5-FU组,理冲汤加减+5-FU组,理冲汤加减组进行后续实验;划痕和侵袭实验显示,理冲汤加减,5-FU单独及联合均能抑制HepG2细胞迁移侵袭能力(P 0. 05,P 0. 01),与5-FU组比较,理冲汤加减+5-FU组抑制能力更强(P 0. 05,P 0. 01)。与空白组比较,5-FU组,5-FU+理冲汤加减组E-cadherin mRNA表达上调,N-cadherin,Snail,Twist mRNA表达下调(P 0. 05,P 0. 01);与5-FU组比较,5-FU+理冲汤加减组E-cadherin mRNA表达上调,N-cadherin,Snail,Twist mRNA表达下调(P 0. 05,P 0. 01)。与空白组比较,5-FU组,5-FU+理冲汤加减组E-cadherin的表达上调,N-cadherin,Snail,Vimentin蛋白表达下调(P 0. 05,P 0. 01);与5-FU组比较,5-FU+理冲汤加减组E-cadherin的表达上调,N-cadherin,Snail,Vimentin蛋白表达下调(P 0. 05,P 0. 01)。结论:理冲汤加减方与5-FU在低剂量合用24 h后对HepG2细胞可以产生较好的协同效应,并且能明显抑制肝癌细胞的迁移和侵袭能力,上调肝癌细胞内EMT相关标志物E-cadherin的表达,下调N-cadherin,Snail,Vimentin,Twist的表达,据此推测,抑制肿瘤细胞增殖、迁移、侵袭能力及EMT相关mRNA的表达,从而增强化疗药物的疗效,可能是理冲汤加减方联合5-FU协同作用的机制之一。     

芒柄花苷的体外抗乳腺癌作用及机制研究

目的研究芒柄花苷对乳腺癌细胞MCF-7增殖、凋亡和侵袭的影响及作用机制。方法采用不同浓度芒柄花苷处理乳腺癌细胞MCF-7,噻唑盐(MTS)染色检测细胞活力,Ed U检测细胞增殖能力,Hoechst染色法检测细胞凋亡,Transwell小室实验检测细胞侵袭和迁移能力,Western-blotting检测增殖细胞核抗原(PCNA)、凋亡相关蛋白(Bax和Bcl-2)和基质蛋白酶(MMP)-9的表达。结果芒柄花苷剂量和时间依赖性的抑制MCF-7细胞的生长。MCF-7细胞经芒柄花苷干预后,Ed U阳性细胞数减少、侵袭及迁移细胞数减少和Hoechst阳性细胞数增加。芒柄花苷作用MCF-7细胞,可上调Bax的表达和下调Bcl-2、PCNA和MMP-9的表达。结论芒柄花苷可抑制乳腺癌细胞MCF-7的增殖、诱导凋亡和减少侵袭,其机制可能分别涉及调节PCNA、Bcl-2/Bax和MMP-9的表达。     

黄芪多糖体外对非接触共培养HUVECs细胞诱导SGC7901细胞转移的影响

目的探索黄芪多糖体外对人血管内皮细胞HUVECs诱导的胃癌细胞系SGC7901细胞EMT转化及其转移的影响。方法 MTT检测黄芪多糖对HUVECs、SGC7901细胞增殖抑制的影响。建立Transwell细胞共培养系统,并分为SGC7901组(单独培养SGC7901细胞)、HUVECs/SGC7901组(共培养HUVECs/SGC7901细胞)、黄芪多糖组(黄芪多糖干预共培养HUVECs/SGC7901细胞),Transwell实验检测各组SGC7901细胞侵袭能力,qRT-PCR检测各组细胞E-cadherin、Vimentin mRNA表达,免疫荧光检测各组细胞MMP-2、MMP-9蛋白表达,Western blot检测各组细胞LOX、Snail1蛋白表达。结果与单独培养的SGC7901细胞相比,共培养的SGC7901细胞侵袭能力,MMP-2、MMP-9、LOX、Snail1蛋白及Vimentin mRNA表达均升高(P<0. 01),E-Cadherin mRNA表达下降(P<0. 05)。经黄芪多糖干预后,共培养的SGC7901细胞侵袭能力、MMP-2、MMP-9、LOX、Snail1蛋白及Vimentin mRNA表达下降(P<0. 01),ECadherin mRNA表达升高(P<0. 05)。结论与HUVECs细胞共培养可激活SGC7901细胞EMT转化,促进SGC7901细胞转移,但黄芪多糖可通过抑制EMT转化阻止非接触共培养人血管内皮细胞诱导的SGC7901转移。     

苦参碱对白血病细胞株Jurkat侵袭转移的影响

目的 研究不同浓度苦参碱对人急性淋巴细胞白血病细胞株Jurkat侵袭转移的抑制作用。     

黄芩素上调miR-625-5p表达干预支气管哮喘小鼠的机制研究

目的:探讨黄芩素调控miR-625-5p表达对支气管哮喘小鼠气道平滑肌细胞(ASMCs)增殖、迁移及炎性因子的影响。方法:培养小鼠原代ASMCs细胞,作为对照组,重组小鼠血小板衍生生长因子(PDGF)诱导ASMCs增殖,作为PDGF组; 分别采用10、20、40 μmol/L的黄芩素处理PDGF诱导ASMCs细胞。将miR-NC、miR-625-5p转染至PDGF诱导的ASMCs细胞,作为PDGF+miR-NC、PDGF+miR-625-5p组; 将anti-miR-NC、anti-miR-625-5p转染至PDGF诱导ASMCs细胞,以40 μmol/L的黄芩素处理,作为PDGF+anti-miR-NC+40 μmol/L组、PDGF+anti-miR-625-5p+40 μmol/L组。CCK-8法检测细胞增殖; Transwell实验检测细胞迁移; 酶联免疫吸附实验检测细胞IL-4、IL-6、IL-8水平; 实时荧光定量PCR检测细胞miR-625-5p表达水平。结果:与对照组比较,PDGF组细胞增殖率、迁移率以及IL-4、IL-6、IL-8水平显著升高(均P<0.05); 与PDGF组比较,黄芩素低、中、高剂量组细胞增殖率、迁移率以及IL-4、IL-6、IL-8水平显著降低(均P<0.05)。与对照组比较,PDGF组细胞miR-625-5p表达显著降低(P<0.05); 与PDGF组比较,黄芩素低、中、高剂量组细胞miR-625-5p表达显著升高(均P<0.05)。与PDGF+miR-NC组比较,PDGF+miR-625-5p组细胞增殖率、迁移率以及IL-4、IL-6、IL-8水平显著降低(均P<0.05)。与PDGF+anti-miR-NC+40 μmol/L组比较,PDGF+anti-miR-625-5p+40 μmol/L组细胞miR-625-5p表达水平显著降低,细胞增殖率、迁移率以及IL-4、IL-6、IL-8水平显著升高(均P<0.05)。结论:黄芩素通过上调miR-625-5p表达抑制支气管哮喘小鼠的细胞增殖率、迁移率以及炎性因子水平。     

Brucea javanica oil inhibits proliferation of hepatocellular carcinoma cells and induces apoptosis via the PI3K/AKT pathway

Background:Brucea javanica oil(BJO),distributed primarily in Southeast Asia,has long been utilized as a therapeutic agent for treating malignancies.However,its anticancer mechanisms are not clearly understood.The objective of this study was to examine the mechanisms underlying its treatment of hepatocellular carcinoma cells.Methods:CCK8 assay was used to evaluate cell viability.Hoechst33342 staining and flow cytometry analyses were used to examine apoptosis.Mito-Tracker Red CMXRos kit was used to measure the membrane potential of mitochondria.ATP assay kit was used to evaluate ATP levels.Western blots were used to assess the presence of AKT,adenosine monophosphate-activated protein kinase,Caspase3,Caspase9,Bax,and Bcl-2.Results:BJO inhibited the proliferation of hepatocellular carcinoma cells HepG2 in a time-and dose-dependent manner.It induced apoptosis,with the percentage of cells treated with 50–150μg/mL BJO increasing from 8.01%to 28.02%in a concentration-dependent manner(P<0.05,when 50μg/mL of BJO group compared with the control group;P<0.001,when 100 or 150μg/mL of BJO group compared with the control group).After exposed to BJO,the expression of C-caspase3,C-caspase9 and Bax upregulated while that of Bcl-2 downregulated.BJO suppressed the PI3K/AKT pathway and promoted phosphorylation of adenosine monophosphate-activated protein kinase,while repressing the phosphorylation of mechanistic target of rapamycin.Compared with treatment by BJO alone,the PI3K/AKT agonist 740Y-P increased the survival rate of HepG2 cells(P<0.01)and attenuated the inhibitory effect of BJO on cell apoptosis(P<0.05).Conclusion:BJO is capable of inhibiting proliferation of HepG2 cells and inducing apoptosis via the PI3K/AKT pathway.     

阴阳攻积丸含药血清抑制HepG2细胞增殖、侵袭及促进其凋亡的作用

目的:探讨阴阳攻积丸(Yingyang Gongji Wan,YYGJ)对肝癌细胞株HepG2的体外作用,为临床应用提供依据。方法:制备YYGJ大鼠含药血清;四唑化合物(MTS)比色法检测YYGJ含药血清组和空白组抑制率;原位末端凋亡法(TUNEL)检测空白组,YYGJ含药血清和5-氟尿嘧啶(5-FU)组凋亡;实时荧光定量PCR(Real-time PCR)及蛋白免疫印迹法(Western blot)检测HepG2细胞上皮细胞钙黏蛋白(E-cadherin),波形蛋白(Vimentin),基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和Smad4 mRNA和蛋白表达;细胞迁移分析(transwell)检测HepG2细胞侵袭能力。结果:YYGJ含药血清呈浓度时间依赖性抑制HepG2细胞增殖,与空白组比较,第3天YYGJ 5%,10%,20%含药血清抑制率均明显升高(P 0. 05); YYGJ含药血清组凋亡率显著升高(P 0. 05),YYGJ 50%含药血清组凋亡率与5-FU组比较差异不显著。与空白组比较,YYGJ含药血清组E-cadherin,Smad4 mRNA和蛋白表达均明显升高,Vimentin,MMP-2 mRNA和蛋白均明显降低(P 0. 05),与5-FU作用一致;与空白组比较,YYGJ含药血清组HepG2细胞侵袭能力明显降低(P 0. 05),其中YYGJ 50%含药血清组与5-FU组细胞侵袭数目无显著差异。结论:阴阳攻积丸含药血清可抑制HepG2细胞增殖,诱导细胞凋亡,调节肿瘤细胞上皮间质转换(EMT)相关的E-cadherin,Vimentin,MMP-2,Smad4 mRNA和蛋白表达,并降低肿瘤侵袭能力,与化疗药物5-FU作用特点类似。该方可作为治疗肝癌寒湿证型的代表方,应深入研究其抗癌机制。