冬凌草甲素通过内质网应激诱导胰腺癌细胞凋亡的研究

目的 探讨冬凌草甲素通过内质网应激诱导胰腺癌细胞凋亡的机制。方法 选取胰腺癌SW1990和Panc-1细胞株作为研究对象。采用细胞计数试剂-8(cell counting kit-8,CCK-8)和流式细胞术分别检测细胞增殖和凋亡情况,蛋白印迹法检测内质网应激相关因子葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated protein 78 kD,GRP78)、环磷酸腺苷反应元件结合转录因子同源蛋白（C/EBP-homologous protein,CHOP）、裂解的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白水解酶-12(cleaved cystein aspartate specific proteinase-12,cleaved Caspase-12)、活化的（active）Caspase-3、cleaved Caspase-3、cleaved多腺苷二磷酸多聚酶[poly(ADP-ribose) polymerase,PARP]的蛋白表达水平,实时荧光定量RCR检测GRP78、CHOP、Caspase-12的m RNA表达水平。结果 冬凌草甲素浓度和时间相关性抑制SW1990和Panc-1细胞增...     

蛇床子素诱导内质网应激抑制SMMC7721人肝癌细胞增殖的机制研究＊

目的 研究蛇床子素抑制肝癌细胞增殖的机制。方法 采用20 - 100 μM蛇床子素干预SMMC7721人肝癌细胞24 h、48 h和72 h，运用MTT方法检测细胞增殖；采用20 - 80 μM蛇床子素干预SMMC7721肝癌细胞24 h，运用流式细胞术检测细胞凋亡及Western blot检测Bax和Bcl-2蛋白表达；采用 60 μM蛇床子素干预SMMC7721肝癌细胞48 h，运用流式细胞术检测细胞周期，以实时荧光定量PCR技术检测GRP78、DDIT3、GADD34、ATF4、EIF2A、GDF15、CDKN1B、FOXO3、RICTOR、SGK1基因表达，Western blot方法检测CyclinD1、CyclinE1、p27^Kip1和CDK4细胞周期蛋白及GRP78、GRP94、PERK、XBP-1s、CHOP、p-eIF2α(Ser51)内质网应激蛋白表达。各实验均以0.1% DMSO为对照组，并以0.1 μM毒胡萝卜素为内质网应激诱导剂组。结果 与对照组比较，100 μM蛇床子素干预24 h显著抑制SMMC7721肝癌细胞增殖，其抑制率为36.76%（P < 0.05）；60 - 100 μM蛇床子素干预48 h后显著抑制SMMC7721肝癌细胞增殖，抑制率为30.84%-52.49%（P < 0.05）；40 - 100 μM蛇床子素干预72 h后显著抑制SMMC7721肝癌细胞增殖，抑制率为32.7%-73.15%（P < 0.05）。大于60 μM蛇床子素可诱导SMMC7721肝癌细胞晚期凋亡且显著抑制促凋亡蛋白Bax表达（P < 0.05）。60 μM蛇床子素干预SMMC7721肝癌细胞48 h后，G1期细胞数增加、G2期和S期减少，且CyclinD1、CyclinE1和p27^Kip1蛋白表达显著被抑制（P < 0.05）。20 - 80 μM蛇床子素处理SMMC7721肝癌细胞24 h后，均显著促进GRP78、DDIT3（CHOP）、ATF4、FOXO3、RICTOR和SGK1基因表达（P < 0.05）； 20 μM蛇床子素显著促进GADD34和EIF2A基因表达（P < 0.05）；80 μM蛇床子素显著促进GDF15基因表达（P < 0.05），且CHOP、XBP-1s蛋白表达显著增强。结论 蛇床子素通过诱导内质网应激反应以抑制SMMC7721肝癌细胞增殖，从而发挥抗肝癌活性。     

左归降糖益肾方对MKR糖尿病肾病小鼠足细胞葡萄糖调节蛋白78、C/EBP同源蛋白表达的影响

目的观察内质网应激相关分子葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、C/EBP同源蛋白(CHOP)在MKR转基因糖尿病肾病(DN)小鼠足细胞的特异性表达及左归降糖益肾方的干预作用。方法以8周龄MKR小鼠为研究对象,随机分为空白组、模型组、左归降糖益肾方组、4-苯基丁酸组、格列喹酮片+贝那普利组,以C57野生鼠为正常组,每组10只。采用高脂喂养加单肾切除复制DN模型,各给药组予相应药物灌胃30 d。采用电化学法观察小鼠空腹血糖(FBG),ELISA测定尿微量白蛋白(Um Alb),RT-PCR及Western blot检测GRP78、CHOP基因和蛋白表达,电镜观察足细胞形态结构。结果与空白组比较,模型组FBG、Um Alb明显升高(P0.01),足细胞GRP78基因及蛋白表达明显下调(P0.01),CHOP基因及蛋白表达明显上调(P0.01);与模型组比较,各给药组FBG、Um Alb明显降低(P0.01),左归降糖益肾方组、4-苯基丁酸组GRP78基因及蛋白表达明显上调、CHOP基因及蛋白表达明显下调(P0.01)。电镜观察结果显示,各给药组小鼠肾小球足细胞结构、数量及密度较模型组明显改善。结论左归降糖益肾方能改善内质网应激介导的足细胞损伤,延缓DN进展。     

内质网应激介导的细胞凋亡途径及新靶点药物

 目的综述内质网应激介导的细胞凋亡信号转导途径,以及以各条途径中所涉及的关键酶为新靶点开发研制药物的进展情况。方法着重以近几年国外该领域有代表性的文献为依据,进行分析、归纳、总结。结果与结论Caspase,C/EBP homologous prote in(CHOP),Bc l-2,凋亡信号调节激酶(ASK1)等酶在内质网应激介导的细胞凋亡的信号转导途径中发挥着非常重要的作用,针对这些酶所设计的抑制剂或激活剂,可以抑制或促进细胞的凋亡,从而达到治疗相关疾病的目的。     

中医中药干预内质网应激及其诱导细胞凋亡研究进展

在内质网应激及其诱导的细胞凋亡中,中医中药已经作为新的研究热点进入人们的视野。目前的研究也表明在细胞和动物模型中,无论是中药单体、中成药、复方或中医针灸,都能有效影响相关信号因子的表达。该文主要介绍当前基于内质网应激(ERS)的中医中药研究。     

芪泽汤对慢性肾功能衰竭大鼠 内质网应激相关凋亡分子表达的影响

目的:探讨芪泽汤对慢性肾功能衰竭(CRF)大鼠内质网应激(ERS)相关凋亡分子表达的影响.方法:2.5％腺嘌呤ig24 d建立SD大鼠肾衰模型.分为5组:正常组、模型组、尿毒清组(2.5 g·kg-1·d-1)、芪泽汤高、低剂量组(50.4,12.6g·kg-1·d-1),每组10只.造模同时各治疗组ig给药,干预24 d后,观察体重变化,全自动生化分析仪检测大鼠血尿素氮(BUN)、血肌酐(SCr),应用TUNEL法检测肾组织细胞凋亡,Western blot检测CHOP( C/EBP-homologous protein)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶12( Caspase-12)肾内表达水平.结果:模型组BUN(17.21±4.63) mmol·L-1,SCr( 67.00±25.62) μmol·L-1较对照组BUN(4.19±0.77) mmol· L-1,SCr( 15.89±2.62)μmol·L-1明显升高(P ＜0.01);TUNEL结果显示空白组肾小管上皮细胞有少量凋亡,而模型组细胞凋亡数明显增多(P＜0.01);模型组CHOP,Caspase-12表达显著增强(P＜0.01).芪泽汤低剂量和尿毒清能抑制慢性肾功能衰竭大鼠肾小管上皮细胞凋亡和CHOP,Caspase-12表达(与模型组相比较P＜0.05).结论:芪泽汤低剂量能保护腺嘌呤导致的大鼠肾损害,可能与其抑制ERS相关凋亡分子CHOP,Caspase-12高表达有关.     

Salubrinal保护人结肠癌系HT29细胞内质网应激凋亡的实验研究

目的:探讨Salubrinal对毒胡萝卜素内酯(Thapsigargin,Tg)诱导的人结肠癌系HT29细胞凋亡的保护作用及机制。方法:以HT29细胞为研究对象,分别给予不同浓度的Salubrinal(1、10、50μg/mL)预处理,30 min后加入Tg(1μmol/L),继续培养24 h后通过流式细胞和TUNEL检测方法对HT29细胞凋亡进行检测;Western Blot法检测凋亡蛋白Caspase-12的表达变化。结果:通过流式细胞仪测定,HT29细胞早期凋亡率为(9.67±1.03)%,经1μmol/L Tg诱导24 h后HT29细胞凋亡率为(35.64±1.62),明显增加(P0.05);与模型组比较,加用Salubrinal(1、10、50μg/mL)干预后,随着剂量的增加,各组细胞凋亡率均明显降低(P0.05);且Salubrinal(50μg/mL)细胞凋亡率明显低于Salubrinal(10μg/mL)。TUNEL检测正常空白组细胞凋亡率为(6.94±0.97)%,经1μmol/L Tg诱导24 h后HT29细胞凋亡率为(34.56±1.45)%(P0.05);与模型组比较,加用Salubrinal(1、10、50μg/mL)干预后,各组细胞凋亡率均明显降低(P0.05);且Salubrinal(50μg/mL)细胞凋亡率明显低于Salubrinal(10μg/mL)(P0.05)。Western Blot检测结果表明,Caspase-12在正常空白组表达较低,HT29细胞经药物干预24后,在1μmol/L Tg诱导模型组表达增高(P0.05);通过不同浓度Salubrinal干预后,随着其浓度的增加凋亡蛋白Caspase-12表达逐渐降低(P0.05)。结论:Salubrinal对毒胡萝卜素内酯诱导的人结肠癌系HT29细胞凋亡具有保护作用,作用机制可能与抑制内质网应激凋亡通路有关。     

重楼皂苷Ⅱ通过线粒体与内质网应激途径诱导骨肉瘤细胞凋亡的研究

目的 探讨重楼皂苷Ⅱ(polyphyllinⅡ,PPⅡ)对骨肉瘤(osteosarcoma, OS)细胞凋亡的影响及作用机制。方法 选取OS的U2OS和HOS细胞株作为研究对象。细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法检测PPⅡ对细胞活力的影响;克隆形成实验检测PPⅡ对细胞克隆形成能力的影响;5-乙炔基-2′-脱氧尿苷(EdU)渗入实验检测PPⅡ对细胞DNA合成的影响;膜联蛋白V-异硫氰基荧光素/碘化丙啶(annexin V-FITC/PI)双染法检测PPⅡ对细胞凋亡率的影响;JC-1荧光探针检测PPⅡ对线粒体膜电位变化的影响;Western blot法检测PPⅡ对B淋巴细胞瘤2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein, Bax)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(cysteinyl aspartate specific proteinase 3,Caspase 3)、Caspase 7、Caspase 9、切割型半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(cleaved cysteinyl aspartate specific p...     

大黄素诱导人肾上皮HK-2细胞凋亡及内质网应激的介导作用

目的 研究大黄素诱导人肾小管上皮HK-2细胞凋亡的作用及其机制是否与内质网应激有关.方法 不同浓度大黄素处理HK-2细胞不同时间.MTT法检测细胞存活率,实时荧光定量PCR (RT-PCR)检测葡萄糖调节蛋白78 (GRP78)、CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)、转录激活因子3(ATF3)和X盒结合蛋白1(XBP1)的基因表达,Western blotting 法检测caspase-3、GRP78、CHOP、真核生物启动因子2α (eIF2α)的蛋白表达.结果 大黄素以浓度相关方式降低HK-2细胞存活率,诱导caspase-3剪切.RT-PCR检测表明,大黄素能诱导内质网相关基因GRP78、CHOP、ATF3基因表达,Westernblottinh检测结果进一步证实大黄素能诱导GRP78、CHOP的蛋白表达.大黄素还明显诱导eIF2α磷酸化和XBP1 mRNA剪切.在大黄素给药之前给予内质网应激干扰药4-苯基丁酸和salubrinal,能增加HK-2细胞的存活率.结论 大黄素能诱导HK-2凋亡,内质网应激参与了大黄素诱导HK-2细胞凋亡的作用.     

姜黄素可通过内质网应激途径诱导乳腺癌细胞MDA-MB-231凋亡

目的：探讨姜黄素诱导乳腺癌细胞MDA-MB-231凋亡的可能机制。方法：分别采用0,25,50,100,150,200 μmol·L^-1浓度的姜黄素对乳腺癌细胞MDA-MB-231进行干预,采用MTT法观察其对乳腺癌细胞增殖的影响,采用流式细胞术观察其对乳腺癌细胞凋亡的影响,采用实时定量PCR及Western blot检测乳腺癌细胞内葡萄糖调节蛋白78（GRP78）及C/EBP同源蛋白（CHOP）表达水平。结果：姜黄素可通过诱导乳腺癌细胞MDA-MB-231抑制其增殖能力,并呈现浓度依赖性;姜黄素可显著升高乳腺癌细胞内GRP78及CHOP表达水平。结论：姜黄素可通过内质网应激途径诱导乳腺癌细胞MDA-MB-231的凋亡。     

黄芪甲苷对急性肺损伤大鼠内质网应激介导影响

目的:探讨黄芪甲苷(ASIV)对脂多糖(LPS)诱导急性肺损伤(ALI)的保护作用,并初步探讨其抑制内质网应激介导的细胞凋亡的作用。方法:随机将50只SD大鼠分成5组,每组10只。对照组(静注生理盐水1mg/kg),ALI组(静注LPS,5mg/kg),ASIV组(注射LPS前,给药3、6、12mg/kg ASIV连续灌胃7天)。观察注射12h后肺组织湿干重(W/D)、western blotting检测葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、C/EBP环磷酸腺苷反应元件结合转录因子同源蛋白(CHOP)的蛋白表达。结果:ALI组W/D值较对照组上升(P0.01),GRP78、ChOP蛋白表达较对照组升高(P0.01);ASIV组W/D值较ALI组下降(P0.01),GRP78、ChOP蛋白表达较ALI组降低(P0.01),并呈一定的剂量依赖性。结论:黄芪甲苷对急性肺损伤大鼠有保护作用,其作用机制可能与内质网应激有关。     

水苏碱对单侧输尿管梗阻大鼠肾组织蛋白激酶R样内质网激酶表达的影响

目的 探讨水苏碱对单侧输尿管梗阻大鼠肾组织蛋白激酶R样内质网激酶（PERK）表达的影响。方法 建立单侧输尿管梗阻诱导大鼠肾间质纤维化的动物模型;将大鼠随机分为假手术组,模型组,依那普利组,水苏碱高、中、低剂量组;于术后第14天处死大鼠收集血清测定血肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）;采用HE染色观察肾脏的病理改变及评定肾小管损伤指数;Masson染色观察肾间质胶原沉积的面积,判断肾间质纤维化程度;采用免疫组织化学方法检测肾组织中PERK、激活转录因子4（ATF4）、C/EBP 同源蛋白（CHOP）的表达。结果 各治疗组与模型组比较,BUN、Scr均明显降低,肾小管损伤程度明显减轻,肾间质胶原相对面积和PERK、ATF4、CHOP的表达显著降低（P<0.05、0.01）。与依那普利组比较,水苏碱高剂量组的抗肾间质纤维化作用更为显著（P<0.05）。结论 水苏碱能够抑制PERK信号通路介导ATF4蛋白表达水平升高及ATF4激活CHOP的蛋白表达,阻止细胞凋亡,从而减缓了肾间质纤维化的发生和发展。     

玄参环烯醚萜苷对氧糖剥夺再灌注诱导的原代皮层神经元细胞内质网应激的作用研究

目的探讨玄参环烯醚萜苷通过内质网应激介导的细胞凋亡通路对氧糖剥夺再灌注(OGD/R)诱导的原代皮层神经元细胞的作用及机制。方法分离SD大鼠原代皮层神经元,用玄参环烯醚萜苷(50、100、200μg/mL)对原代皮层神经元进行预处理24 h,采用OGD/R诱导制备脑缺血再灌注细胞模型,倒置显微镜下鉴定细胞纯度,观察细胞形态变化;MTT法检测细胞存活率;试剂盒检测细胞内乳酸脱氢酶(LDH)水平和超氧化物歧化酶(SOD)活性;流式细胞术检测细胞凋亡率;Western blotting法检测C/EBP同源蛋白(CHOP)、葡萄糖调节蛋白-78(GRP78)和Caspase-12蛋白表达。结果培养的原代皮层神经元胞体饱满,状态良好,纯度较高。与对照组比较,经OGD/R处理后原代皮层神经元整体回缩变圆,胞体表面变粗糙;细胞存活率、SOD活性显著降低;LDH水平、细胞凋亡率显著升高;CHOP、Caspase-12和GRP78蛋白表达水平显著升高。与模型组比较,玄参环烯醚萜苷预处理能改善细胞损伤情况;提高细胞存活率、SOD活性;降低LDH水平和细胞凋亡率;降低CHOP、Caspase-12和GRP78蛋白表达水平。结论玄参环烯醚萜苷能拮抗OGD/R诱导的原代皮层神经元神经损伤,其作用机制与抑制内质网应激介导的细胞凋亡有关。     

基于内质网应激研究五子衍宗方对自然衰老大鼠睾丸生殖细胞凋亡的保护作用

基于内质网应激(ERS)研究五子衍宗方对自然衰老大鼠睾丸生殖细胞凋亡的保护作用。将16月龄SPF级SD雄性大鼠随机分为3组,自然衰老组(Ageing),五子衍宗方低剂量组(WZ,1 g·kg^-1)和五子衍宗方高剂量组(WZ,4 g·kg^-1),另购买2月龄SD雄性大鼠作为青年对照组(Adult),每组10只。给予普通饲料或含药饲料喂养4个月后,处死大鼠,取出睾丸组织备用。苏木素-伊红(HE)染色观察睾丸组织形态;Western blot法检测睾丸组织中内质网应激相关蛋白GRP78,p-PERK,p-eif2α,ATF4,p-IRE1,XBP1,ATF6及其介导的凋亡相关蛋白CHOP,caspase 12,p-JNK的表达水平。HE结果显示,五子衍宗方能明显改善自然衰老所致的睾丸组织形态变化。Western blot结果显示,与自然衰老组相比,五子衍宗方能显著升高自然衰老大鼠睾丸组织内质网应激相关蛋白GRP78,p-PERK,p-eif2α,ATF4,p-IRE1,XBP1,ATF6的表达水平;显著降低内质网应激介导的凋亡相关蛋白CHOP,caspase 12,p-JNK的表达水平。综上所述,五子衍宗方可通过调节内质网应激减轻自然衰老大鼠睾丸生殖细胞凋亡。     

糖络宁对高糖环境中雪旺细胞内质网应激IRE1通路的影响

目的 观察中药复方糖络宁对高糖环境下雪旺细胞的抗凋亡保护作用,探讨糖络宁对于内质网应激IRE1信号通路的调控作用.方法 在高糖环境中培养雪旺细胞,设置空白对照组、模型组、糖络宁组、不同阻断剂组.培养12、24小时后,应用流式细胞术检测糖络宁含药血清处理下的细胞凋亡水平,应用免疫印迹法(Western blot,WB)检...     

Formononetin attenuates cigarette smoke-induced COPD in mice by suppressing inflammation,endoplasmic reticulum stress,and apoptosis in bronchial epithelial cells via AhR/CYP1A1 and AKT/mTOR signaling pathways

Chronic obstructive pulmonary disease (COPD) is a chronic, progressive, and lethal lung disease with few treatments. Formononetin (FMN) is a clinical preparation extract with extensive pharmacological actions. However, its effect on COPD remains unknown. This study aimed to explore the effect and underlying mechanisms of FMN on COPD. A mouse model of COPD was established by exposure to cigarette smoke (CS) for 24 weeks. In addition, bronchial epithelial BEAS-2B cells were treated with CS extract (CSE) for 24 h to explore the in vitro effect of FMN. FMN significantly improved lung function and attenuated pathological lung damage. FMN treatment reduced inflammatory cell infiltration and pro-inflammatory cytokines secretion. FMN also suppressed apoptosis by regulating apoptosis-associated proteins. Moreover, FMN relieved CS-induced endoplasmic reticulum (ER) stress in the mouse lungs. In BEAS-2B cells, FMN treatment reduced CSE-induced inflammation, ER stress, and apoptosis. Mechanistically, FMN downregulated the CS-activated AhR/CYP1A1 and AKT/mTOR signaling pathways in vivo and in vitro. FMN can attenuate CS-induced COPD in mice by suppressing inflammation, ER stress, and apoptosis in bronchial epithelial cells via the inhibition of AhR/CYP1A1 and AKT/mTOR signaling pathways, suggesting a new therapeutic potential for COPD treatment.