蛇床子素对体外培养破骨细胞骨吸收及细胞凋亡的影响

研究蛇床子素对破骨细胞骨吸收的影响及其分子机制。采用体外分离、培养兔破骨细胞, 与盖玻片及骨磨片共同培养, 使用1×10⁻⁵ mol·L⁻¹蛇床子素刺激破骨细胞, 观察活体细胞并依据HE、TRAP、骨陷窝甲苯胺蓝染色鉴定破骨细胞; 进行骨吸收陷窝和面积定量分析, 吖啶橙染色统计凋亡细胞; real time PCR及Western blotting法检测相关基因和蛋白。与空白对照组比较, 1×10⁻⁵ mol·L⁻¹蛇床子素能够明显提高破骨细胞凋亡率并通过抑制RANKL和TRAP等相关基因及JNK1/2磷酸化水平抑制其骨吸收。结果提示, 蛇床子素可以通过RANK+RANKL/ TRAF6/Mkk/JNK途径刺激破骨细胞凋亡并抑制骨吸收。     

葡萄糖对大鼠骨髓破骨细胞分化的影响

目的观察葡萄糖对大鼠骨髓破骨细胞(OC)分化的影响,探讨糖尿病骨质疏松的发病机制。方法用巨噬细胞克隆刺激因子(M-CSF)、RANKL诱导大鼠骨髓单个核细胞分化为OC,同时给予不同浓度的葡萄糖(0、5.5、15、25mmol/L)干预,通过观察抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色阳性OC数、TRAP活性测定、OC膜表面RANKmRNA表达量来分析葡萄糖对OC分化的影响。结果高糖(25mmol/L)组培养7d时TRAP染色阳性OC数及TRAP活性测定均高于对照组(0mmol/L)、葡萄糖5.5mmol/L组(P<0.01);与对照组相比高糖组培养3d时TRAP染色阳性OC数明显增多(P<0.01);葡萄糖呈浓度依赖性上调OC膜表面RANKmRNA的表达,其中高糖组培养的各时间点与其他三组相比差异有显著性(P<0.01,P<0.05)。结论高糖可促进OC的分化,其促进作用始于诱导分化的早期;骨髓微环境中高糖可引起OC分化增多,可能是糖尿病骨质疏松的发病机制之一。     

骨疏康对1型糖尿病骨质疏松大鼠体外培养的破骨细胞影响

目的:观察骨疏康对1型糖尿病骨质疏松大鼠体外培养破骨细胞的影响。方法:雌性Wistar大鼠60只,2.5～3月龄,按照体重随机分为正常组(n=24)和1型糖尿病组(n=36)两大组,正常组又分为正常对照组(n=8)、正常假手术组(n=8)和正常双侧卵巢切除组(n=8);1型糖尿病组又分为糖尿病对照组(n=12)、糖尿病假手术组(n=12)和糖尿病双侧卵巢切除组(n=12)。单剂量腹腔注射链脲菌素(柠檬酸钠缓冲液制成2％溶液) 60 mg·kg-1制备1型糖尿病大鼠模型;无菌条件下切除大鼠双侧卵巢制备骨质疏松模型。在造模后第0,2,4,8周末时用sRANKL和巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)诱导大鼠骨髓进行体外破骨细胞培养,并观察骨疏康(20μg·mL-1)的影响。结果:糖尿病对照组破骨细胞明显高于对照组(P<0．01),糖尿病双侧卵巢切除组破骨细胞明显高于对照组(P<0．01),糖尿病骨质疏松组破骨细胞明显高于糖尿病对照组和正常双侧卵巢切除组(P<0．01)。经20μg·mL-1骨疏康干预后,各组破骨细胞数均明显减少(P<0．01)。结论:骨疏康明显抑制1型糖尿病骨质疏松大鼠体外培养的破骨细胞生成。     

破骨细胞凋亡的调节

骨量的维持依赖于骨吸收和骨形成之间的平衡。骨吸收率增加20％就能导致明显的骨量丢失,是导致骨质疏松的重要病因。破骨细胞是完成骨吸收过程的主要细胞,其凋亡率对维持破骨细胞群的大小和骨组织自身平衡至关重要。若破骨细胞凋亡过早,凋亡细胞数目增加破骨细胞数目减少,则骨吸收深度变浅;若破骨细胞凋亡过晚,则骨吸收深度加深。近7年来人们对细胞凋亡分子机制,特别是基因调节研究的深入为骨病的药物治疗和基因治疗奠定了基础。本文复习了近年来有关破骨细胞体外培养、细胞凋亡的形态     

舒芬太尼对体外培养HepG 2 细胞增殖及细胞凋亡的影响

目的了解阿片类镇痛药舒芬太尼对体外培养肝癌细胞株HepG2细胞增殖、细胞周期及细胞凋亡的影响。方法体外培养人肝癌HepG2细胞,实验组在RPMI-1640培养液中加入不同浓度舒芬太尼（0.0001,0.001,0.01,0.1,1,10,20μmol·L-）1,对照组RPMI-1640培养液中不加舒芬太尼,分别孵育48小时后,采用MTT比色法检测HepG2细胞增殖活性,采用流式细胞技术检测舒芬太尼对HepG2细胞周期的影响,用Hoechst33258染色方法分析鉴定舒芬太尼对HepG2细胞凋亡的影响。结果舒芬太尼浓度≥1μmol·L-1时,细胞增殖活性较对照组显著下降（P〈0.05）;随着舒芬太尼浓度增加,G1期细胞比例逐渐增高,S期细胞比例逐渐降低。用Hoechst33258方法染色后在表面荧光显微镜下发现实验组部分HepG2细胞发生凋亡,当舒芬太尼浓度≥0.1μmol·L-1时,荧光显微镜下一个视野内凋亡细胞占总细胞数的比例较对照组显著增加（P〈0.05）。结论舒芬太尼在临床常用剂量范围内对肝癌细胞株HepG2细胞增殖和凋亡无明显影响,当浓度≥1μmol·L-1时可以抑制人肝癌细胞株HepG2细胞增殖,主要将细胞周期阻滞在G1期,当舒芬太尼浓度≥0.1μmol·L-1时可引起肝癌HepG2细胞凋亡。     

槲皮素对宫颈癌细胞C33A增殖和凋亡的影响

目的 观察槲皮素对人宫颈癌细胞C33A增殖和凋亡的影响,初步探讨其相关作用机制。方法 用不同浓度槲皮素（空白对照、20、40、80 μmol/L）,顺铂（空白对照、5、10、15、20 μg/mL）以及两者联合（槲皮素40 μmol/L+顺铂 10 μg/mL）分别作用于C33A细胞24 h和48 h后,噻唑蓝（MTT法）检测细胞活力的变化;流式细胞术检测槲皮素对C33A细胞周期的影响;Western blot检测槲皮素对C33A细胞Cyclin D1、Caspase-3和Caspase-9蛋白表达的影响。结果 MTT结果显示,经过槲皮素处理24 h后,各组细胞活力分别为86.92±3.953）%（20 μmol/L组）、（66.54±3.932）%（40 μmol/L组）和 （52.21±2.970）%（80 μmol/L组）,均低于空白对照组的（98.35±1.230）% ;经过槲皮素处理48 h后,各组细胞活力分别为（65.19±7.071）%（20 μmol/L组）、（47.04±8.881）%（40 μmol/L组）和 （29.71±6.505）%（80 μmol/L组）,均低于空白对照组的（96.97±1.788）%。;此外,槲皮素40 μmol/L+顺铂 10 μg/mL联合作用于C33A细胞24h后,细胞活力下降为（31.12±2.835）%; 48 h后,细胞活力下降为（17.86±3.182）%,同空白对照组相比均出现了明显的下降,（31.12±2.835）%; 48 h后,细胞活力下降为（17.86±3.182）%（P<0.05）。细胞周期检测结果显示,槲皮素可增加C33A细胞G₀/G₁期数量,减少S期数量。Western blot结果显示,槲皮素可下调C33A细胞Cyclin D1蛋白的表达,还可上调Caspase-3和Caspase-9蛋白的表达。结论 槲皮素通过下调Cyclin D1蛋白的表达可以抑制C33A细胞的活力和增殖,槲皮素通过上调Caspase-3和Caspase-9蛋白的表达,可以诱导C33A细胞的凋亡。     

米非司酮对体外培养子宫肌瘤细胞增殖与凋亡的作用

目的研究米非司酮(mifepristone,MIF)对体外培养子宫肌瘤细胞(LSMCs)增殖与凋亡的作用。方法应用MTT比色法观察MIF对LSMCs生长的影响;采用DNA缺口原位末端标记法(TUNEL)观察MIF作用前后LSMCs细胞增殖与凋亡变化;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测细胞Bcl-2、Bax的mRNA水平。结果不同浓度MIF均能抑制LSMCs细胞生长,MIF≥1×10-7mol.L-1对细胞生长产生剂量依赖性抑制作用。用1×10-5mol·L-1的MIF处理72 h后,LSMCs细胞的增殖降低、凋亡率增加,P<0.05;且伴随Bax/Bcl-2表达的上升。结论 MIF具有抑制LSMCs增殖、诱导LSMCs凋亡的作用。     

维生素K对成骨细胞骨形成和破骨细胞骨吸收的影响

目的 比较维生素K₁(VK₁)、维生素K₂(MK₄)、维生素K₂(MK₇)和维生素K₃(VK₃)促进骨形成和抑制骨吸收的作用。方法 采用新生大鼠颅盖骨分离成骨细胞和以核因子κB受体活化因子配体(RANKL)诱导骨髓单核细胞的破骨细胞为模型,用磷酸苯二钠法检测成骨碱性磷酸酶(ALP)和抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)活性;用CellTilter试剂盒检测破骨细胞代谢活力;用Z-FR-MCA荧光底物和胶原底物降解检测组织蛋白酶K(CTSK)抑制作用。结果 MK₄和MK₇在0.1~1 μmol/L时显著促进成骨细胞增殖(P<0.05),1 μmol/L时显著提高ALP活性和骨结节形成面积,VK₃抑制了骨结节形成(P<0.05)。VK₁、VK₃、MK₄和MK₇在1 μmol/L时对破骨细胞代谢活力均无影响,MK₄和MK₇在0.1~1 μmol/L时显著抑制TRAP活性(P<0.05),而VK₁和VK₃无抑制作用。MK₄在25 μmol/L可对CTSK与Z-FR-MCA底物结合的抑制率达58.9%,在100 μmol/L对CTSK胶原降解的抑制率达73.2%。结论 相较于VK₁和VK₃,MK₇和MK₄有显著促进成骨细胞活性和抑制破骨细胞骨吸收的作用,MK₄能显著抑制破骨细胞CTSK酶活性。     

正常和OVX大鼠体外骨髓破骨细胞样细胞培养方法的建立

目的 建立正常和ＯＶＸ大鼠体外髓破骨细胞样细胞（ＯＣＬ）培养方法。方法 取不同时间大鼠骨髓，用αＭＥＭ和１，２５（ＯＨ）２Ｄ３在２４孔培养板上培养７天后观察ＯＬＣ形成。结果 体外ＯＬＣ细胞ＴＲＡＣＰ阳性，电镜下骨片有骨吸收现象。不同时间ＯＶＸ大鼠ＯＬＣ数明显高于正常大鼠（Ｐ〈０．０５）。结论 ＯＶＸ大鼠因雌激素明显降低，破骨细胞形成增多，骨吸收增加，导致骨质疏松发生。     

体外破骨细胞培养及研究进展

归纳总结了体外培养破骨细胞的方法及其应用方面的研究.     

染料木素和槲皮素体外抗肝纤维化作用

目的　研究染料木素和槲皮素对体外肝维化的保护作用。方法　细胞增殖和胶原合成分别用结晶紫染色法和3H 脯氨酸参入法。原胶原mRNA水平用RT PCR法测定。结果　染料木素 (2 5 - 70 μmol·L- 1 )和槲皮素 (6 2 5- 5 0 μmol·L- 1 )浓度依赖抑制PDGF促HSC T6细胞增殖和TGFβ1 刺激的胶原合成及I型原胶原mRNA的表达。结论　染料木素和槲皮素抑制PDGF和TGFβ1 对星状细胞的作用可能对肝纤维化有保护作用     

槲皮素在试管内对血小板功能和膜脂质流动性的影响

本文报道槲皮素对血小板聚集释放反应以及膜脂质流动性的影响。槲皮素浓度为300μmol时对PAF诱导和600μmol时对凝血酶诱导的大鼠血小板聚集几乎完全抑制;也明显地抑制ADP诱导的大鼠血小板聚集及凝血酶诱导的兔血小板~3H-5 HT释放;在槲皮素浓度为30μmol时,即明显降低血小板膜脂质流动性。     

槲皮素在试管内对血小板功能和膜脂质流动性的影响

本文报道槲皮素对血小板聚集释放反应以及膜脂质流动性的影响。槲皮素浓度为300μmol时对PAF诱导和600μmol时对凝血酶诱导的大鼠血小板聚集几乎完全抑制;也明显地抑制ADP诱导的大鼠血小板聚集及凝血酶诱导的兔血小板³H-5 HT释放;在槲皮素浓度为30μmol时,即明显降低血小板膜脂质流动性。     

海洋硫酸多糖DPS对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响及其机制的探讨

目的　研究海洋硫酸多糖 (DPS)对大鼠血管平滑肌细胞 (VSMC)增殖的影响及其作用机制。方法　建立碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)和白介素 1(IL 1)所诱导的VSMC增殖模型 ,以MTT法观察DPS对VSMC增殖的影响 ,分别用Griess重氮化反应法和放免法测定VSMC上清液中一氧化氮 (NO)、血管紧张素II(AngII)和内皮素 1(ET 1)的含量。结果　DPS在 0 0 1- 10 μg·mL-1浓度下 ,对bFGF或IL 1所致的VSMC增殖均有明显抑制作用。DPS呈剂量依赖性增加NO合成及降低AngII和ET 1的生成或释放。 结论　DPS对VSMC增殖有抑制作用 ,其机制可能与增加一氧化氮合成及降低血管紧张素II和内皮素 1的生成或释放有关。     

海洋硫酸多糖911体外对HIV-1作用的研究

采用体外细胞培养技术,研究了海洋硫酸多糖９１１以体外对ＨＩＶ－１感染ＭＴ４、Ｈ９细胞的影响及其细胞毒性作用,结果表明：９１１可明显抑制ＨＩＶ－１对ＭＴ４细胞的急性感染和Ｈ９细胞的慢性感染,地数有效浓度分别为４．４４μｇ．ｍＬ＾－１和０．３２μｇ．ｍＬ＾－１;     

THE EFFECTS OF COCAINE AND LIGNOCAINE ON THE RAT RIGHT VENTRICLE IN VITRO

• 1 The effects of cocaine and lignocaine on the contractile responses to field stimulation and to exogenously applied agents, in the absence of other stimuli, have been investigated in the rat right ventricle using methods we have recently described (Doggrell & Vincent, 1981a). In addition the effects of ³H accumulation from (?)-[³H]-noradrenaline and on the spontaneous and field stimulation-induced overflow of ³H, following preloading of the tissue with (?)-[³H]-noradrenaline, are reported.
• 2 Cocaine, but not lignocaine, inhibited the accumulation of ³H from (?)-[³H]-noradrenaline. The spontaneous overflow of ³H, following preloading of the tissue with (?)-[³H]-noradrenaline was not altered by cocaine, 10μ, or lignocaine, 100μM. 10μM Lignocaine had no effect on the overflow of ³H evoked by field stimulation at 5Hz. Lignocaine, 100μM, increased and cocaine, 1 and 10μM, reduced the decline in evoked release of ³H. This effect of lignocaine probably represents a decrease in nerve excitability and that of cocaine inhibition of neuronal uptake of noradrenaline.
• 3 Cocaine, μM, reduced the rate of beat response to tyramine, 1μM, alone, probably by inhibiting the neuronal uptake process.
• 4 Cocaine, 1 and 10μM, had no effect on the contractile responses to field stimulation (at 2 and/or 5Hz). The rate of beat to (?)-noradrenaline or (?)-isoprenaline, 1μM, alone was decreased by cocaine, 10μM. Lignocaine, 10μM, reduced the force of contractions to field stimulation at 5 Hz and the responses to (?)-noradrenaline or (?)-isoprenaline alone. It is suggested that the inhibitory effects of cocaine and lignocaine on responses to (?)-isoprenaline in the rat right ventricle are due to a decreased postjunctional membrane excitability. The inability of 10μM cocaine to potentiate contractile responses to endogenous or exogenous (?)-noradrenaline as a consequence of the inhibition of neuronal uptake is also probably due in part to decreased post-junctional excitability of the right ventricle.

     

异丙肾上腺素对大鼠心肌细胞凋亡相关基因表达的影响

目的　研究异丙肾上腺素(isoprenaline, Iso)诱导大鼠急性心肌缺血与心肌细胞凋亡相关基因表达的关系。方法　sc大剂量Iso建立大鼠急性心肌缺血模型。RT-PCR法检测凋亡相关基因Fas,CPP32,Bcl-2和Bax在心肌的表达。并用同样方法,观察苦豆碱(aloperine, Alo, 20 mg.kg^-1)和普萘洛尔(propranolol, Prop, 2 mg.kg^-1)对急性心肌缺血大鼠心肌细胞凋亡相关基因表达的影响。结果　急性心肌缺血模型大鼠心肌的Fas,CPP32和Bcl-2基因表达显著增加,Bax变化不明显;Alo和Prop能降低缺血心肌中Fas和CPP32基因的表达,增加Bcl-2基因的表达,且Prop对Bax表达有下调作用。结论　sc大剂量Iso可诱导大鼠心肌细胞凋亡相关基因异常表达;Alo和Prop对该模型大鼠心肌相应基因的异常表达亦有影响。     

HPLC测定沙棘膏中槲皮素和异鼠李素的含量

目的　建立沙棘膏中槲皮素、异鼠李素的含量测定方法。方法　采用Shim -packCLC -ODS色谱柱 (4 .6mm× 15 0mm ,5 μm) ;甲醇 - 0 .4%磷酸溶液 (3∶2 )为流动相 ;流速 1.0ml·min-1;检测波长 36 8nm。结果　槲皮素在0 .0 880～ 0 .44 0mg范围内 ,加样回收率 96 .48%,RSD =1.5 %(n =6 ) ;异鼠李素在 0 .0 986～ 0 .493mg范围内 ,加样回收率 97.6 6 %,RSD =1.4%(n =6 )。结论　该法操作简便、准确 ,重复性好。     

THE EFFECTS OF CLONIDINE ON ELECTRICALLY-INDUCED CONTRACTIONS OF RAT DETRUSOR STRIPS IN VITRO

• 1 Clonidine (10^–9–3 times 10^–6M) produced a concentration dependent inhibition of field stimulation-induced contractions of rat detrusor muscle strip at 0.1 and 1 Hz which were completely abolished by tet-rodotoxin (5 times 10^–7M) but were unaffected by hexamethonium (10^–5M).
• 2 Pretreatment with yohimbine (10^–8–10^–7M) did not modify the amplitude of contractions but produced a rightward parallel shift of clonidine's cumulative response curve without a depression of the maximal response. The corresponding pA₂ value for yohimbine was 8.44 ± 0.1.
• 3 Atropine (3 times 10^–6M) produced a partial inhibition of contractions at both frequencies. In the presence of atropine the cumulative response curve of clonidine was significantly reduced at 1 but not at 0.1 Hz.
• 4 Indomethacin (5 times 10^–5M) and theophylline (2 times 10^–4M) produced a partial inhibition of amplitude of contractions at both frequencies without any interference with the effect of a supramaximal concentration of clonidine.
• 5 Prazosin (10^–6M), propranolol (10^–6M), chlorpheniramine (10^–6M), ranitidine (10^–6M), haloperidol (10^–7M), pizotifen (10^–6M), naloxone (10^–6M), quinidine (10^–6M), strychnine (10^–5M) or picrotoxin (10^–5M) neither affected the amplitude of contractions at either frequency nor antagonized clonidine effects.
• 6 The contractile response of non stimulated strips to acetylcholine (10^–5M), carbachol (3 times 10^–6M) and ATP (10^–3M) were not significantly influenced by pretreatment with clonidine (3 times 10^–6M). 7 These results suggest that stimulation of prejunctional α₂-adrenoreceptors located on postganglionic nerve endings might reduce the output of excitatory neurotransmitter(s) in rat urinary bladder.