人外周血细胞DNA快速提取

外周血采集方便,是核酸筛查时常规取样途径。提取外周血DNA经典方法常需分离白细胞并经表面活性剂和蛋白酶K(SDS-PK)处理,操作比较繁琐。Bowtell等报告以浓盐酸胍(GHCL)溶液作为蛋白变性剂用于染色体DNA的提取,原方法未经酚抽提而将细胞裂解液与乙醇混合后,采用末端为“U”型的玻璃棒将线状DNA挑出,在实验室试用后发现,在体外培养细胞或组织DNA取样量较多时才易将DNA分子绕在玻璃棒上,且操作时体积大于20ml。为了适用于数毫升全血DNA快速提取。辅     

人多种组织中线粒体DNA存在13.1 kb片段缺失突变

目的:在人外周血细胞中筛选到新的线粒体DNA大片段缺失突变后,进一步探讨该缺失在稳定组织内的分布.方法:以人外周血细胞及人体多种组织DNA为模板,进行PCR扩增,筛选该突变.结果:在人外周血细胞及多种稳定组织中发现13.1 kb缺失突变的存在.结论:这种广泛分布于健康人多种组织中的线粒体DNA缺失突变可能与衰老有关.     

扩张型心肌病与线粒体DNA缺失片段的研究

通过对线粒体ＤＮＡ的分析试图从分子水平说明扩张型心肌病可能存在的发病机制。应用ＰＣＲ方法对１０例ＤＣＭ患者心肌组织ｍｔＤＮＡ进行检测，其中４例存在在７．４ｋｂ的；缺失；对照组中１例肥 厚型心肌病及２例心肌梗塞患者心肌组织中亦检验ｍｔＤＮＡ的异质性。     

线粒体DNA缺失与心肌病

研究线粒体ＤＮＡ缺失与心肌病发生的关系。方法用大片段ＤＮＡ体外扩增技术，扩增心肌病患者心肌，骨骼肌血液标本的ｍｔＤＮＡ，并与冠心病患者、正常人的标本对照。结论：ｍｔＤＮＡ缺失可能是心肌病发病的一个重要病因。     

肥厚型心肌病患者心肌线粒体DNA的大片段缺失

目的：研究肥厚型心肌病与线粒体ＤＮＡ（ｍｔＤＮＡ）缺失的关系。方法：应用ＬｏｎｇＰＣＲ技术扩增１例肥厚型心肌病（ＨＣＭ）患者心肌标本和血细胞ｍｔＤＮＡ。结果：在心肌ｍｔＤＮＡ中发现至少５ｋｂ缺失，而血细胞中未见缺失。结论：这支持ｍｔＤＮＡ缺失是心肌病的一个重要病因，且具有组织差异性。     

1800MHz电磁波辐射对大鼠外周血细胞DNA的损伤作用

目的探测1800MHz电磁波照射大鼠后对其外周血细胞DNA的损伤效应．方法72只Wistar大鼠随机分为4组（2个实验组和各自的对照组）．实验组大鼠在功率密度分别为0．5mW／cm^2（实验Ⅰ组）和1．0mW／cm：（实验Ⅱ组）的1800MHz连续电磁场条件下照射，对照组进行虚拟暴露，每天12h，连续21d后，用单细胞凝胶电泳试验检测大鼠外周血细胞DNA的损伤情况．结果照射后，两个实验组大鼠外周血细胞拖尾面积均高于对照组（P〈0．05）．结论大鼠经模拟手机辐射强度1800MHz辐射后，大鼠外周血细胞DNA有一定的损伤．     

非小细胞肺癌线粒体基因组大片段缺失突变研究

目的 明确mtDNA 4 977 bp大片段缺失在肺癌组织、癌旁正常组织及非癌患者肺组织中的分布频率,探讨mtDNA 4 977 bp大片段缺失与肿瘤的关系.方法 采用长距离PCR方法对37例肺癌组织和相应的癌旁正常组织、20例非癌患者正常肺组织mtDNA 4 977 bp缺失进行了检测.结果 肺癌组织、癌旁正常肺组织及非癌患者正常肺组织中均检测出存在有线粒体DNA 4 977 bp片段缺失.37例肺癌组织标本中有20例(54.1%)检测到4 977 bp缺失,37例相应的癌旁肺组织22例(59.5%)有缺失, 其中8例在肺癌组织中未显示而却在癌旁正常组织检测到缺失,20例非癌患者正常肺组织中也有6例出现 4 977 bp片段缺失.线粒体DNA 4 977 bp缺失与年龄、吸烟因素有关.结论 线粒体DNA 4 977 bp缺失并非肺癌特异性突变,在癌变过程中不太可能起重要的作用,而可能仅仅是肿瘤发生发展过程中环境和遗传因素作用的反映.     

老年大鼠大脑皮质,海马和小脑的线粒体DNA缺失突变

目的 测定老年人大鼠脑缺失型ｍＤＮＡ比例,探讨ｍｔＤＮＡ缺失与脑衰老的关系,为研究其分子机制提供基础资料。方法 用碱裂解法抽提青年（３个月）ＳＤ大鼠１０只和老年（２４个月）ＳＤ大鼠１７只的大鼠皮质、海马和小脑的ｍｔＤＮＡ。稀释ＰＣＲ法测ｍｔＤＮＡ的缺失比例。结果 青年鼠和老年鼠大脑皮质、海马和小脑均存在缺失型ｍｔＤＮＡ,缺失片段为４８３４ｂｐ。青年鼠各脑区缺失型ｍｔＤＮＡ比例分别为０．０００１５６     

线粒体脑肌病中线粒体DNA的部分缺失

在2例Kearns－Sayre综合征（KSS）和2例慢性进行性眼外肌麻痹（CPEO）患者的骨骼肌线粒体DNA（mtDNA）中发现存在单一的大片段缺失突变。缺失的长度2．5～5．5kb，突变只发生在部分线粒体DNA中，突变型mtDNA占全部mtDNA的60．5％～84．6％。在10例其它的线粒体脑肌病患者骨骼肌标本和外周血标本及数例正常骨骼肌和胎肝标本的mtDNA中均未发现缺失突变。上述发现支持mtDNA的缺失突变为KSS和CPEO主要病因的观点。     

Study on 4977-bp deletion mutation of mitochondrial DNA in lung cancer

Objective： To study the 4977-bp deletion of mitochondiral DNA in lung cancer, adjacent normal tissue and health lung and its significance in the development of cancer. Methods： Thirty-seven matched lung cancer/adjacent histologically normal and 20 ＂true＂ normal lung tissue samples from patients without lung cancer were analyzed by long PCR technique. Results： Mitochondrial DNA 4977-bp deletion was detected in 54.1% （20/37） of lung cancers, 59.5% （22/37） of adjacent normal and 30.0% （6/30） of ＂true＂ normal lung tissues. The correlation of 4977-bp deletion with age and smoking factors was present in our data. Conclusion.. Mitochondrial DNA 4977 bp deletion is not specific to lung cancer and unlikely to play an important role in carcinogenesis, and may only reflect the environmental and genetic influences during tumor progression.     

26例健康汉族人线粒体DNA region V 9 bp缺失多态性的检测

目的 测定中国汉族人线粒体DNA region V 9 bp缺失多态性频率.方法 抽取26例健康无血缘关系汉族人静脉血,提取总DNA,扩增线粒体DNA region V ,并测序,测序结果与剑桥修正序列比对.结果 中国汉族人线粒体DNA region V 9 bp缺失多态性出现频率为19.23%.结论 汉族人线粒体DNA region V 9 bp缺失多态性出现频率高于文献报道的维吾尔族人和蒙古族人该多态性出现频率.     

Detection of mitochondrial DNA deletion by a modified PCR method

Objective: To develop a simple and efficient method for detecting small populations of mitochondrial DNA deletion. Methods: Peripheral blood cell DNA was obtained from a victim who was aecidently exposed to a ^60Co radiation source 11 years ago. Using the DNA as template, PCR was performed to generate multiple products including true deletions and artifacts. The full length product was recovered and used as template of secondary PCR. The suspicious deletion product of mtDNA could be confirmed if it was only yielded by first PCR. Using either original primers or their nested primem, the suspicious deletion product was amplified and authenticated as true deletion product. The template was recovered and determined to be a deletion by sequencing directly. Results: A new mtDNA deletion, spanning 889 bp from nt11688 to nt12576, was detected in the peripheral blood cells of the victim. Conclusion: The new PCR-based method is more efficient in detecting small populations of mtDNA deletion than other routine methods. MtDNA deletion is found in the victim, suggesting there is relationship between the deletion and phenotypes of the disease.     

肺癌患者外周血白细胞线粒体DNA突变研究

目的分析mtDNA tRNAThr、tRNAPRO基因及非编码HVRⅠ区序列在肺癌患者及健康成人外周血中的突变情况并探讨其意义.方法一步法制备外周血白细胞mtDNA,结合PCR产物直接测序,对比分析mtDNA tRNAThr、tRNAPRO基因及非编码HVRⅠ区序列在17例肺癌患者和14例健康成人外周血白细胞中的突变情况.结果肺癌组和健康成人组中,仅1例健康成人mtDNA编码区tRNAThr基因中出现了1个碱基变异,碱基平均变异率为0.023 7%,而非编码HVRⅠ区共发现136个变异,碱基平均变异率为1.282 8%.肺癌组和健康成人组碱基平均变异率分别为1.238 4%和1.336 7%.肺癌组中腺癌、鳞癌、小细胞癌的碱基平均变异率分别为0.994 2%、1.202 1%和1.7544%.结论肺癌患者外周血白细胞mtDNA编码区序列趋于高度保守,主要碱基变异发生在非编码HVRⅠ区,与健康成人相应区域变异率总体上趋于一致,但肺癌组人均碱基变异随年龄增长有增高趋势,且小细胞肺癌外周血白细胞mtDNA非编码HVRⅠ区碱基平均变异率有增高趋势.     

线粒体肌病和脑肌病外周血细胞线粒体DNA的定量分析

目的：了解线粒体肌病／脑肌病患者外周血细胞线粒体ＤＮＡ的拷贝数量有无异常。方法：用分子杂交技术对１０例线粒体肌病／脑肌病患者和１６例正常对照者的外周血细胞线粒体ＤＮＡ进行定量分析。结果：在线粒体肌病／脑肌病患者及正常对照者中,均未发现外周血细胞线粒体ＤＮＡ的片段缺失;但前者线粒体ＤＮＡ的拷贝数量较后者明显增多。结论：在线粒体肌病／脑肌病患者的外周血细胞中,线粒体ＤＮＡ的数量较正常人明显增加,与其肌肉中线粒体的异常增生相一致。这一实验方法对线粒体肌病／脑肌病的初筛有一定价值。     

一种改进的提取人外周血和组织线粒体DNA的方法

目的：建立一种简便、快捷地从人外周血和组织中制备高质量线粒体DNA的方法。方法：以差速离心法分离线粒体,用碱性SDS法裂解线粒体膜,释放线粒体DNA后用酚／氯仿抽提,TE或ddH2O溶解。然后将所得线粒体DNA进行纯度鉴定并和其他现有方法制备的线粒体DNA用PCR进行长片段扩增,比较扩增效果。结果：用改进的方法制备的线粒体DNA中没有检测到核DNA,并能有效扩增8kb长的目的片段。结论：改进后的方法简便、快捷,制备的线粒体DNA纯度高,也有利于长片段PCR扩增。     

中国维吾尔族和苗族人群线粒体DNA 9-bp缺失频率

目的：了解了中国新疆维吾尔族和湖北恩施地区苗族线粒体DNACOⅡ／tRNA^Lys基因间小非编码区V串联重复序列9－bp缺失频率。方法：应用PCR及DNA序列分析技术。结果：研究发现，80例新疆维族人中有2例（2．5％）有mtDNA9-bp缺失；47例湖北恩施地区苗族人中有5例（10．6％）有mtDNA9－bp缺失。结论：研究结果表明中国少数民族的维族、苗族人群中存在mtDNA9－bp缺失多态性，而其缺失频率差别较大。     

线粒体DNA 4977 bp缺失与冠状动脉病变严重程度及稳定性的关系

目的:探讨人外周血线粒体DNA 4977 bp(mtDNA 4977)缺失与冠状动脉病变严重程度和稳定性的关系.方法:选择90例经冠状动脉造影(CAG)证实的无亲属关系的冠状动脉粥样硬化性心脏病(CAD)患者,包括心绞痛(AP)66例,急性心肌梗死(AMI)24例;冠脉病变支数单支病变32例,双支病变28例,3支病变30例;0＜Gensini积分＜20分22侧,20≤Gensini积分＜40分26例,Gensini积分≥40分42侧.另外选择60侧年龄和病例组相匹配的健康受试者作为对照组.所有受试者均采用巢式PCR法测定外周血mtDNA 4977缺失相对数量,检测超敏C反应蛋白(hsCRP)、白细胞(WBC)计教、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、空腹血糖(FPG)、餐后2 h血糖(2hPG)水平以及收缩压(SBP)、舒张压(DBP)、体质指数(BMI)等相关指标,同时询问吸烟史、高血压病史及糖尿病史.结果:CAD组吸烟者、高血压病者、糖尿病者、SBP、DBP、TG、FPG、2hPG、WBC及hsCRP显著高于对照组,HDL-C显著低于对照组(P＜0.05或0.01).CAD患者外周血mtDNA 4977缺失发生率和相对数量显著高于正常对照组(P＜0.01);mtDNA 4977缺失发生率和相对数量在AP和AMI患者间无显著差别;mtDNA 4977缺失发生率和相对数量随冠状动脉病变支数和Gensini积分的增加而升高;CAD组中mtDNA 4977缺失相对数量与病变支数和Gensini积分呈明显正相关(P＜0.01),与WBC计数、hsCRP无相关性.结论:外周血mtDNA 4977缺失能反映冠状动脉粥样硬化病变的严重程度,与冠状动脉病变的稳定性无关.