脑胶质瘤中ppENK基因启动子区的甲基化状态研究

目的 检测脑胶质瘤组织中候选抑癌基因ppENK基因启动子区的甲基化状态,探讨ppENK基因启动子的异常甲基化水平在脑胶质瘤发生发展中的作用以及与临床病理资料之间的关系.方法 采用巢式聚合酶链反应(nested polymerase chain reaction nPCR)方法和亚硫酸氢盐修饰后测序法(Bisulfite sequence polymerase chain reaction BSP),检测32例脑胶质瘤组织和10例正常脑组织中ppENK基因启动子区CpG岛的甲基化状态.结果 脑胶质瘤组织中ppENK基因启动子甲基化率为40.6％(13/32),明显高于正常脑组织中ppENK基因启动子甲基化率0％(0/10),两者差异存在统计学意义(P=0.015).在低级别(Ⅰ-Ⅱ级)组和高级别(Ⅲ- Ⅳ级)组脑胶质瘤中ppENK基因启动子甲基化率分别为21.1％(4/19)和69.2％ (9/13),通过分析表明两者差异存在统计学意义(P=0.006).结论 ppENK基因启动子的CpG岛在脑胶质瘤中存在高甲基化现象,可能与胶质瘤发生有关.ppENK基因启动子的甲基化状态与胶质瘤病理分级有关,与年龄、性别、病理分型无关.     

SOX9基因在脑胶质瘤中的表达及甲基化水平研究

目的探讨SOX9基因在人脑中的表达水平、甲基化状态,以及与胶质瘤病理分级间的关系。方法选取手术切除的人胶质瘤标本113例,正常脑组织34例。采用实时定量PCR方法检测SOX9基因的表达,甲基化特异性PCR方法检测甲基化水平,采用Kplan-Meier绘制病人生存曲线。结果 SOX9 m RNA在正常脑组织中的相对表达水平为0.203±0.097,在胶质瘤中为0.496±0.213,两组差异具有统计学意义(P0.01)。生存曲线显示:胶质瘤病人中,SOX9基因高表达者其生存时间明显低于低表达者(P0.01)。SOX9基因启动子区非甲基化比率在胶质瘤中分别为:Ⅰ级11.1%,Ⅱ级33.3%,Ⅲ级53.8%,Ⅳ级71.9%,高级别组(Ⅲ、Ⅳ级)与低级别组(Ⅰ、Ⅱ级)相比,差异具有统计学意义(P0.01)。结论胶质瘤组织中SOX9基因表达上调,其启动子区域甲基化水平降低;SOX9基因的表达水平与病人生存期有密切关联。     

脑胶质瘤中hMLH1、hMSH2基因启动子区的甲基化状态研究

目的探讨脑胶质瘤中hMLH1、hMSH2基因启动子区的甲基化状态，及其在肿瘤发生中的作用。方法采用甲基化特异性PCR（MSP）方法，检测42例脑胶质瘤hMLH1、hMSH2基因启动子区的甲基化状态。结果hMLH1启动子区甲基化2例（4．8％），hMSH2启动子区甲基化13例（31．0％），启动子区甲基化与性别、年龄、病理类型和病理分级无明显的相关性。结论hMSH2基因启动子的CpG岛在脑胶质瘤中有高甲基化现象，可能与胶质瘤的发生有关，而hMLH1基因启动子区甲基化少见。     

ILK及CD151在人脑胶质瘤中的表达及其意义

目的探讨整合素连接激酶(ILK)及CD151在人脑胶质瘤中的表达及意义。方法采用免疫组化SP法检测ILK及CD151在74例人脑胶质瘤及15例正常脑组织中的表达。按2007年WHO中枢神经系统肿瘤分类:低级别(Ⅰ、Ⅱ级)胶质瘤31例,高级别(Ⅲ、Ⅳ级)43例。结果高级别胶质瘤、低级别胶质瘤及正常脑组织ILK的阳性表达分别为83.72%、61.29%、20.00%,CD151阳性表达率分别为81.40%、54.84%、13.33%。ILK和CD151在胶质瘤中阳性表达明显高于正常脑组织(P0.05),在高级别胶质瘤中影响表达率显著高于低级别胶质瘤(P0.05);而且二者在胶质瘤组中的表达呈正相关(r=0.294,P0.05)。结论 ILK及CD151在人脑胶质瘤中的表达随胶质瘤恶性程度的增高而增高,二者可能共同促进胶质瘤的生长和浸润。     

恶性脑胶质瘤MGMT基因启动子甲基化状态与患者临床预后的相关性

目的 探讨恶性脑胶质瘤组织O6-甲基鸟嘌呤-DNA-甲基转移酶(MGMT)基因启动子甲基化状态及MGMT蛋白表达与患者生存预后的关系,评价MS-MLPA技术检测MGMT基因启动子甲基化状态对脑胶质瘤化疗的意义. 方法 选择自2006至2010年南方医科大学珠江医院神经外科手术治疗且病理证实为恶性脑胶质瘤(WHOⅢ级、Ⅳ级)的39例患者为研究对象,应用免疫组化染色法检测肿瘤组织MGMT蛋白表达,应用MS-MLPA技术检测MGMT基因启动子甲基化状态,并观察患者化疗后总生存时间. 结果 肿瘤组织中MGMT蛋白表达阳性、弱阳性者与表达阴性者生存时间比较差异有统计学意义(P=0.003),MGMT蛋白表达阳性者比表达阴性者预后更差.肿瘤组织中MGMT基因启动子未甲基化者、低度过甲基化者、中度过甲基化者、高度过甲基化者生存时间两两比较差异均有统计学意义(P＜0.05),MGMT基因启动子过甲基化率越高者预后越好.MGMT蛋白表达与MGMT基因启动子甲基化状态存在统计学相关性(r=0.697,P=0.000),基因甲基化程度越高者蛋白表达越低. 结论 MGMT蛋白表达与MGMT基因启动子甲基化状态均可以作为接受烷化剂化疗的恶性胶质瘤患者生存期的预测指标.MS-MLPA技术是一种可靠的检测MGMT基因启动子甲基化状态的方法.     

miRNA-449基因表达水平在神经胶质瘤中的研究

目的研究miRNA-449基因表达水平与神经胶质瘤的发生的相关性分析。方法选择神经胶质瘤患者66例(胶质瘤组),胶质瘤组再按分级分为2个亚组:低级别胶质瘤组(30例);高级别胶质瘤组(36例)。另选择颅内减压术脑外伤患者的正常脑组织标本10例为对照组。提取脑组织,经实时定量PCR扩增进行荧光定量分析miRNA-449基因表达,采用MS-PCR方法检测mi RNA-449甲基化水平。结果定量PCR检测结果显示:对照组患者脑组织miRNA-449基因表达水平高于胶质瘤组(P=0.000);高级别胶质瘤组miRNA-449基因表达水平低于低级别胶质瘤组(P=0.044)。对66例脑胶质瘤患者miRNA-449基因启动子区甲基化水平进行检测,并与其表达水平进行相关性分析,发现在高甲基化患者miRNA-449基因表达水平低于无甲基化患者(P=0.000 2)。结论 miRNA-449基因表达降低可能与miRNA-449基因启动子区甲基化水平有一定相关性,且可能参与神经胶质瘤的发生发展,为疾病进展的早期监测提供分子理论依据。     

MGMT基因对脑胶质瘤患者启动子甲基化变化的价值研究

目的探究MGMT基因表达、启动子甲基化与脑胶质瘤患者预后间的关联性。方法择取我院2012-06-2014-09收治的82例行脑胶质瘤个体化综合治疗的恶性胶质瘤患者为研究对象,依据脑胶质瘤MGMT基因表达与启动子甲基化状况进行分组,术后予以同步放化疗,分析各组患者近期疗效、安全性及无进展生存时间。结果 MGMT蛋白表达与恶性胶质瘤MGMT基因启动子甲基化状态呈负相关(P0.05),MGMT基因启动子甲基化组近期疗效(79.54%vs75.00%)高于MGMT蛋白低表达组(P0.05),MGMT甲基化低表达组1、2、3a生存率(90.62%vs 75.00%;56.25%vs41.66%;31.25%vs 16.66%)明显高于MGMT甲基化高低表达组(P0.05)。结果 MGMT基因表达、启动子甲基化与脑胶质瘤患者预后密切相关,临床上应引起足够重视。     

人脑胶质瘤CXCL12基因的甲基化分析研究

目的 检测胶质瘤CXCL12基因启动子区的甲基化状态及其mRNA表达水平,以及受体CXCR4、DNA甲基转移酶等基因的mRNA表达情况,分析甲基化在CXCL12/CXCR4生物轴参与胶质瘤恶性进展中的调控机制.方法 半定量RT-PCR和实时定量PCR检测CXCL12、CXCR4、DNMT1、DNMT3A和DNMT3B基闪在76例胶质瘤及10例正常脑组织中的表达情况;甲基化PCR检测CXCL12基因启动子区的甲基化状态.结果 (1)CXCR4 mRNA随胶质瘤恶性程度的增高而表达增加;(2)CXCL12基因在胶质瘤中的甲基化率为34.2%,甲基化率随胶质瘤恶性程度的增高而降低;(3)CXCL12基因的甲基化主要发生在低度恶性胶质瘤中,其甲基化状态与mRNA表达密切相关;(4)DNMT1、DNMT3A和DNMT3B在CXCL12基因甲基化胶质瘤中的表达明显高于未发生甲基化的胶质瘤.结论 CXCR4基因有望成为胶质瘤恶性程度的生物学标志;CXCL12基因启动子区的甲基化主要发生在低度恶性胶质瘤中,其CXCL12基因甲基化下调mRNA的表达;DNMT1、DNMT3A和DNMT3B的过表达可能参与CXCL12基因甲基化的调控.     

脑胶质瘤病人脑脊液Midkine表达的临床意义

目的探讨人脑胶质瘤脑脊液中期因子(MK)水平与胶质瘤病理学的关系。方法 2015年5~10月手术治疗并经病理证实的胶质瘤25例,其中高级别胶质瘤(WHOⅢ~Ⅳ级)10例,低级别胶质瘤(WHOⅠ~Ⅱ级)15例。同期手术切除颅内良性肿瘤23例,非肿瘤性颅脑手术18例。酶联免疫吸附试验法检测所有病人术中以及脑胶质瘤术后腰椎穿刺术留取的脑脊液MK水平。免疫组化染色法分析胶质瘤组织MK表达水平。结果胶质瘤组脑脊液MK浓度明显高于良性肿瘤组(P0.001)和非肿瘤组(P0.001),高级别胶质瘤脑脊液MK浓度显著高于低级别胶质瘤(P0.05);胶质瘤组织MK阳性程度与脑脊液MK的浓度呈显著正相关(r=0.75;P0.001)。根据受试者工作特征曲线,脑脊液MK浓度2.55 ng/ml区分胶质瘤和非肿瘤的敏感性和特异性分别为72.0%和83.3%。脑脊液MK浓度2.11 ng/ml区分胶质瘤和良性肿瘤的敏感性和特异性为76.0%和82.6%。术后7~14 d,脑胶质瘤病人脑脊液MK水平[(2.22±1.23)ng/ml]显著下降(P0.05)。结论胶质瘤级别越高,肿瘤组织和脑脊液MK表达水平越高;切除肿瘤后脑脊液MK随之下降;脑脊液MK对术前诊断胶质瘤的具有较高的敏感性和特异性,同时对手术效果的评价也有重要意义。     

神经从素A1在人脑胶质瘤中的表达与意义

目的探讨神经丛素A1在人脑胶质瘤中的表达及意义。方法取43例人脑胶质瘤标本,WHO病理分级:Ⅰ~Ⅱ级18例,Ⅲ级12例,Ⅳ级13例。采用免疫组织化学方法检测标本中神经丛素A1的表达,比较分析其在不同病理分级标本中的阳性表达及其意义。结果神经丛素A1在Ⅲ级和Ⅳ级肿瘤的阳性表达率分别是66.67%、76.92%,均明显高于Ⅰ~Ⅱ级肿瘤的22.22%(P0.05)。结论神经丛素A1在高级别的胶质瘤中的阳性表达率明显高于低级别胶质瘤,神经丛素A1的检测有助于对病人预后的评估。     

缝隙连接蛋白43和胰岛素样生长因子Ⅰ与脑胶质瘤恶性程度的相关性研究

目的 探讨缝隙连接蛋白43（cx43）、胰岛素样生长因子Ⅰ（IGF-Ⅰ）和细胞核相关抗原Ki-67在人脑胶质瘤中的表达及相关性。方法 采用免疫组织化学SP法检测45例胶质瘤组织和10例正常脑组织中Cx43、IGF-Ⅰ、Ki-67的表达。结果 Cx43在Ⅰ-Ⅱ级脑胶质瘤中阳性表达率为87．5％，Ⅲ-Ⅳ级中的阳性表达率为42．9％，两者间的差异有显著性（P〈0．01），且随Ki-67表达升高而降低（r=-0．893，P〈0．01）；IGFⅠ在Ⅰ-Ⅱ级脑胶质瘤中的表达（阳性率58．3％）与在Ⅲ-Ⅳ级（阳性率85．7％）中的表达差异有显著性（P〈0．05），且与Cx43的表达呈明显负相关（r=-0．688，P〈0．01）。结论 Cx43表达水平的下调或缺失不是胶质瘤发生的始动因素，可能是胶质瘤恶性演进过程中的一个重要分子事件，促使肿瘤细胞恶性增殖程度增加。     

恶性胶质瘤SPARC基因的甲基化状态及其表达水平分析

目的探讨胶质瘤组织中富含半胱氨酸的酸性分泌性糖蛋白（SPARC）基因甲基化状态和mRNA表达水平及两者相关性。方法2008年3月至2011年12月收集98例胶质瘤组织标本和98例正常脑组织标本（颅脑损伤患者术中切取）以及胶质瘤细胞系LN229,提取DNA和RNA,利用甲基化特异性聚合酶链反应（MSP）检测SPARC基因甲基化状态;利用实时荧光定量PCR检测SPARC基因mRNA表达水平。结果胶质瘤细胞系LN229中SPARC基因呈高度甲基化,其mRNA表达水平极低;去甲基化处理后,mRNA表达水平明显升高（P〈0．01）。胶质瘤组织中SPARC基因甲基化率（70．4％,69／98）明显高于正常脑组织（21．4％,21／98;P〈0．01）,但其mRNA表达水平明显低于正常脑组织（P〈0．01）。而且随着胶质瘤级别的增加,胶质瘤组织中SPARC基因甲基化率明显呈升高（P〈0．05）,但其mRNA表达水平却明显降低（P〈0．01）。伴有SPARC基因甲基化的胶质瘤组织SPARC基因mRNA表达水平明显低于非甲基化胶质瘤组织（P〈0．01）。然而,伴有SPARC基因启动子甲基化的胶质瘤患者生存期与非甲基化患者无统计学差异（P〉0．05）。结论胶质瘤组织中SPARC基因呈高甲基化状态,其mRNA呈低水平表达;SPARC基因mRNA表达水平受其甲基化的影响;SPARC基因高甲基化可能与胶质瘤的发生相关。     

雄激素受体在脑胶质瘤中的表达及意义

目的探讨雄激素受体（androgen receptor,AR）在不同级别脑胶质瘤的表达及意义。方法收集12例正常脑组织和73例不同级别脑胶质瘤组织标本．其中WHOⅠ级8例,Ⅱ级15例,Ⅲ级23例,Ⅳ27例。采用免疫组织化学染色法和实时荧光定量PCR检测AR蛋白及AR mRNA表达情况,并分析正常脑组织和不同级别胶质瘤间AR表达差异。结果各级别胶质瘤组织中的AR蛋白阳性率和mRNA水平均明显高于正常脑组织（均P〈0．05）。胶质瘤WHO分级与AR阳性细胞率呈显著正相关（m=0．584,P〈0．001）,胶质瘤WHO分级与AR mRNA表达呈显著正相关（rs=0．885,P〈0．001）。结论AR在胶质瘤组织中表达增加．其表达水平与病理级别密切相关,提示AR可能在脑胶质瘤的生物学行为中发挥重要作用。     

胶质瘤患者抑癌基因RASSF1A启动子区甲基化研究

目的探讨RASSF1A抑癌基因在胶质瘤组织及脑正常组织中甲基化程度及与临床特征的关系。方法46例脑胶质瘤组织及6例脑正常组织采自手术患者。用甲基化特异性聚合酶链反应（MS—PCR）方法检测46例胶质瘤（其中包括星形细胞瘤19例，室管膜瘤16例，胶质母细胞瘤11例）及6例脑正常组织中RASSF1A基因甲基化状态。并对RASSF1甲基化发生率与临床各因素之间的关系进行分析。结果（1）46例脑胶质瘤组织DNA标本中RASSF1A基因甲基化发生率为65．2％（30／46）；6例脑正常组织中RASSF1A基因启动子未发生甲基化；RASSF1A在胶质瘤和脑正常组织之间发生甲基化率比较差异有显著性，（P=0．017，P〈0．05）。在46例脑胶质瘤中RASSF1A有30例发生甲基化，其中低级别组14例（14／26），高级别组16例（16／20），两组之间甲基化率比较无明显差异，（P〉0．05）。其中星形细胞瘤，室管膜瘤，胶质母细胞瘤甲基化发生频率分别为63．2％（12／19），68．8％（11／16），63．6％（7／11）。在各组之间甲基化发生率比较均无统计学意义，（P〉0．05）。②RASSF1A基因甲基化程度与脑胶质瘤病理分型、肿瘤大小之间无显著相关性。结论RASSF1A在胶质瘤中有甲基化发生，在脑正常组织中未发生甲基化，检测胶质瘤中RASSF1A基因启动子区甲基化情况对临床判断肿瘤发生发展有指导意义。     

脑胶质瘤病人血清β2微球蛋白含量的变化

目的 探讨脑胶质瘤病人血清β2微球蛋白（β2-MG）含量的变化。方法 收集2015~2017年手术切除及病理确诊的胶质瘤标本124例，其中WHO Ⅰ级9例，Ⅱ级28例，Ⅲ级34例，Ⅳ级53例。术前2~3 d采取静脉血，通过胶乳免疫比浊法检测血清β2-MG含量；并使用石蜡包埋的胶质瘤组织分别通过毛细管电泳法检测基因异柠檬酸脱氢酶1（IDH1）突变和PCR荧光探针法检测06-甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶（MGMT）基因甲基化状态。结果 WHO Ⅳ级胶质瘤病人血清β2-MG含量显著高于其他级别（WHO Ⅰ~Ⅲ级）胶质瘤（P<0.05）。IDH1突变型胶质瘤病人血清β2-MG含量显著低于野生型病人（P<0.05）。MGMT甲基化胶质瘤病人血清β2-MG含量与非甲基化病人之间无明显差异（P>0.05）。结论 血清β2-MG含量对于WHO Ⅳ级胶质瘤与其他级别件胶质瘤的鉴别以及IDH1突变与野生型的鉴别中可能具有重要的参考意义。     

胶质瘤组织中Nanog基因的表达及其意义

目的探讨Nanog基因在不同病理级别胶质瘤组织中的表达及其意义。方法采用免疫组织化学染色法和逆转录酶-聚合酶链反应（RT-PCR）方法从蛋白和mRNA水平检测50例不同病理级别胶质瘤组织和7例正常脑组织标本中Nanog的表达。结果 Nanog蛋白在胶质瘤组织WHOⅡ级、Ⅲ级、Ⅳ级的阳性细胞率分别为18.3%±9.6%、37.9%±19.0%、53.4%±19.8%,差异有统计学意义（F=14.918,P=0.000）;NanogmRNA的相对含量在胶质瘤组织WHOⅡ级、Ⅲ级、Ⅳ级中分别为0.1824±0.0310、0.3730±0.0961、0.4594±0.0453,差异有统计学意义（F=65.901,P=0.000）,Nanog蛋白和mRNA表达强度随着病理级别增高而升高,而在正常脑组织中均未见表达。结论 Nanog在胶质瘤组织中高表达,其表达强度与病理级别密切相关,为进一步研究其与肿瘤干细胞关系及其在胶质瘤的生物学行为中所发挥的作用奠定基础。     

人脑胶质瘤中ING4和CTGF的表达及其意义

目的 探讨人脑胶质瘤中生长抑制因子4(ING4)及结缔组织生长因子(CTGF)的mRNA的表达及其意义.方法 采用荧光实时定量聚合酶链式反应法检测ING4和CTGF mRNA在30例脑胶质瘤组织和5例正常脑组织中的表达水平,统计分析表达水平和肿瘤级别之间的关系以及二者表达水平的相天性.结果 ING4 mRNA在Ⅰ～Ⅱ级...     

Stathmin／Oncoprotein18（Op18）在人脑胶质瘤中的表达研究

目的探讨Stathmin／oneoprotein18（Op18）基因在人脑胶质瘤中的表达规律及意义。方法分别采用免疫组化法和Westernblot法检测10例正常脑组织和56例脑胶质瘤中Stathmin蛋白的表达。结果免疫组化法检测Stathmin蛋白在正常脑组织、低级别胶质瘤（Ⅰ～Ⅱ级）及高级别胶质瘤（Ⅲ～Ⅳ级）中阳性表达率分别为20％、65％、100％。正常脑组织分别与Ⅰ～Ⅱ级组、Ⅲ～Ⅳ级组比较，均有显著性差异（P〈0．05）；Ⅰ～Ⅱ级组与Ⅲ～Ⅳ级组比较，有显著性差异（P〈0．05）。Westernblot法检测显示，Stathmin蛋白在胶质瘤中的表达明显增高，正常脑组织分别与Ⅰ～Ⅱ级组、Ⅲ～Ⅳ级组比较，差异均有显著性（P〈0．01），Ⅰ～Ⅱ级组与Ⅲ～Ⅳ级组比较，差异有显著性（P〈0．01）。结论Stathmin在脑胶质瘤中过表达，Stathmin可能为脑胶质瘤的生物治疗提供一个新靶点。     

不同病理类型和级别胶质瘤细胞IDH1基因突变情况分析

目的探讨国人不同病理类型和级别胶质瘤细胞中异柠檬酸脱氢酶1（IDH1）基因突变情况及其临床意义。方法应用mIDH1 R132H免疫组化学法检测87例国人不同病理类型和级别的胶质瘤标本中IDH1基因突变发生率,分析不同病理类型、不同WHO级别和不同年龄的IDH1基因突变情况。结果 87例国人胶质瘤标本中有45例（51.7%）检出IDH1基因突变,并与胶质瘤的病理类型、WHO分级以及年龄等具有相关性。结论 IDH1基因突变在WHOⅡ、Ⅲ级胶质瘤中的发生率较高,并在胶质瘤的发生、发展过程中起重要作用。