自体骨髓基质细胞与异体松质骨基质复合修复兔桡骨缺损的实验研究

目的：探讨自体骨髓基质细胞（MSCs）复合异体松质基质复合修复节段性骨缺损的效果。方法：将兔自体骨髓基质细胞于体外分离，培养，增殖，与异体松质骨基质复合，选用大白兔28只，造成桡骨干缺损12mm的动物模型，分别行自体骨髓基质细胞－异体松质骨基质复合物和单纯异体松质骨基质移植，术后3、6、9、12周取材，通过X线、大体和形态学观察，术线摄片进行计算机图像分析，计算骨缺损处的骨痂灰度。结果：自体骨髓基质细胞－异体松质骨基质复合物在骨缺损的愈合过程中其成骨量，成骨速度及时间均优于单纯异体松质骨基质，约在9周使骨缺损基本得到修复，结论：自体骨髓基质细胞－异体松质骨基质复合物经异体松质骨更能有效修复节段性骨缺损。     

牙槽骨缺损种植修复患者实施改良劈开技术联合引导骨再生术的效果

目的 探究改良劈开技术联合引导骨再生术在牙槽骨缺损种植修复患者中的应用可行性。方法 选取2021年3月-2023年3月本院收治的92例牙槽骨骨缺损种植修复患者,以随机数字表法将其分对照组和观察组,每组各46例。对照组实施引导骨再生术治疗,观察组实施改良劈开技术联合引导骨再生术治疗。对两组患者美学效果、骨吸收以及牙槽骨骨壁厚度进行比较。结果 修复术当日两组患者美学效果比较（P>0.05）,修复术后6个月后观察组PES与WES评分显著高于对照组（P<0.05）;观察组患者远中边缘和近中边缘骨吸收量均显著低于对照组（P<0.05）;术前两组患者种植处牙槽骨骨壁厚度比较（P>0.05）,术后观察组10 mm、7 mm、1 mm点位牙槽骨骨壁厚度显著高于对照组（P<0.05）。结论 牙槽骨骨缺损种植修复患者应用改良劈开技术联合引导骨再生术治疗,能够显著改善患者牙齿美学效果、降低骨吸收含量、增加牙槽骨骨壁厚度。     

自体骨髓基质细胞立体培养修复关节软骨缺损的实验研究

目的:探讨细胞载体Ⅰ型胶原海绵与骨髓基质细胞的组织相容性及利用自体骨髓基质细胞立体培养构建的组织工程软骨修复关节软骨的效果.方法:在24只4～6月龄新西兰大白兔股骨粗隆、胫骨下端进行骨穿,获取骨髓基质细胞进行体外培养、扩增,三代后获取足够细胞数量,制成108/ml细胞悬液,植入细胞载体Ⅰ型胶原海绵立体培养,2周后移植到直径 3.5 mm 的软骨缺损面上,于1、2、3个月处死动物检查.结果:骨髓基质细胞与细胞载体Ⅰ型胶原海绵有良好的组织相溶性,形成自体组织工程软骨能完成关节软骨缺损修复.第1个月修复组织具备纤维软骨特征,第2个月具备透明软骨特征,第3个月修复组织具备透明软骨的生物学特性.结论:细胞载体Ⅰ型胶原海绵与骨髓基质细胞体外培养形成的组织工程软骨,能完成关节软骨的修复,修复组织为透明软骨.     

培养自体骨髓基质细胞移植修复骨缺损的实验研究

目的：研究体外培养的骨髓基质细胞对骨缺损修复的作用。方法：从实验用新西兰大白兔股骨大转子处抽取2ml骨髓制成细胞悬液,体外培养14d。在双侧桡骨处形成1．5cm长的骨膜骨缺损。再将培养14d的骨髓基质细胞注射到一侧桡骨缺损处,另一侧桡骨缺损处注射培养液作为对照侧。移植后1、2、3、4周末．用X线分别检查双侧桡骨缺损处．摄X线侧位片。取第4周末的骨痂进行组织学检查。结果：移植后第2、3、4周末．实验侧骨痂形成明显快于对照侧,第4周末．实验侧的骨痂中已形成骨性骨小梁．为骨性骨痂。结论：体外培养的骨髓基质细胞可以促进骨缺损的修复。     

骨髓基质细胞修复猪膝关节非负重区软骨与骨复合缺损的实验研究

目的 探讨猪骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells,BMSC)复合聚羟基乙酸／聚乳酸(PGA／PIA)支架修复关节软骨与骨复合缺损的可行性。方法 杂交猪18只,抽取股骨骨髓,体外培养、扩增BMSC并分别经地塞米松诱导(A组)或地塞米松与转化生长因子β1(TGFβ1)联合诱导(B组),以免疫组织化学、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测其软骨分化表型。其中有2只猪部分BMSC经绿色荧光蛋白(GFP)基因转染标记。诱导后的细胞分别接种到PGA／PLA支架,体外培养1周后植入猪自体股骨下端非负重面软骨及骨复合缺损处,单纯支架植入(C组)及空白不处理(D组)作为对照。上述动物分别于3(6只)、6(10只)个月时取材,进行大体观察、修复结果分级、组织学检查、葡糖氨基聚糖(GAG)含量测定及生物力学测定。含GFP标记细胞的2只猪7个月时取材,共聚焦显微镜观察植入细胞的分布。结果 诱导后BMSC均能表达软骨特征性的Ⅱ型胶原与聚集蛋白聚糖(aggrecan),两组细胞均与支架材料黏附良好。术后大体观察与组织学检查显示：A组缺损以不完全修复为主,多数缺损软骨修复不良,而骨缺损基本修复,组织学主要为纤维性软骨及松质骨;B组缺损以完全修复为主,组织学表现为透明软骨及松质骨,少部分标本修复组织中含有纤维性软骨;两对照组缺损主要由纤维性组织修复或无明显新生组织,软骨与骨缺损均明显存在。3个月时,A、B组软骨修复组织弹性模量分别达到正常关节软骨的30．37％及43．82％,6个月时达到正常的62．69％及80．27％。6个月时,A组软骨修复组织GAG含量达到正常的78．03％,B组与正常组间差异无显著意义。含GFP标记细胞的修复标本经共聚焦显微镜观察可见：新生的软骨陷窝及松质骨小梁内均含有荧光标记的细胞。结论BMSC在关节缺损内可分别向软骨细胞与成骨细胞分化,同时修复软骨与骨复合缺损,恢复关节正常结构;TGFβ1与地塞米松联合诱导可促进BMSC向软骨细胞分化,改善其修复关节缺损的效果。     

体外培养骨髓基质细胞修复关节软骨缺损的实验研究

骨关节病、创伤性关节炎等均可造成关节软骨的破坏。由于软骨再生能力非常有限．软骨缺损修复一直是一个难题。多年以来，利用软骨移植、骨膜移植、软骨细胞移植等都未能取得良好的疗效，同时也存在着诸如供体来源有限、免疫排斥反应和移植物易退化等缺点，临床上不能广泛开展。关节形成术虽在一定程度上缓解了患者的痛苦，但该术创伤大、费用高、存在感染、植入关节松动等远近期并发症，因而存在较大的局限性。近年来组织工程学技术的发展为软骨修复提供了新方法。     

异体骨髓基质细胞促进引导性骨再生的实验研究

目的:利用膜引导组织再生技术,将复合异体骨髓基质细胞(BMSCs)的明胶海棉移植于硅胶膜管内,旨在观察异体BMSCs促进膜引导骨组织再生的能力.方法:抽取大耳白兔胫骨结节及股骨转子处骨髓,经密度梯度离心,贴壁筛选,获取BMSCs并培养、扩增.36只成年新两兰兔随机分成3组,每组12只,造成双侧12 mm桡骨缺损,A组缺...     

胎兔骨髓基质细胞修复骨缺损的实验研究

为了证实体外培养的胎免骨髓基质细胞可以修复骨缺损,将培养的基质细胞吸附于明胶海绵,植入兔骨缺损处,1、2、4、6、8周作99mTc-MDP骨显像、x片、组织切片观察骨痂生长情况。结果显示,平均4周左右实验组骨缺损得到修复,提示胎儿骨髓基质细胞可以作为种子细胞来修复骨缺损。     

自体骨髓基质干细胞修复股骨头关节软骨缺损的实验研究

目的 探讨自体骨髓基质干细胞修复兔股骨头软骨缺损的可行性.方法 1、建立兔髋关节软骨缺损动物模型16只,对照组8只,实验组8只;2、取兔髂骨骨髓,体外分离、培养、扩增、骨髓基质干细胞,诱导分化为软骨样细胞并进行细父胞标记;3、与生物材料混合后植入体内修复兔股骨头关节软骨缺损,8周后观察修复效果;结果 8周后大体标本显示关节软骨缺损为白色软骨样组织填充,组织切片显示缺损处有新生软骨形成,阿新兰染色和Ⅱ型胶原免疫组化检测有GAG和Ⅱ型胶原强阳性表达;结论经诱导分化后的自体骨髓基质干细胞复合生物材料移植可用于修复兔股骨头关节软骨缺损.     

自体骨髓基质细胞移植治疗骨不连及骨缺损

目的研究骨髓基质细胞对骨不连与骨缺损的治疗效果。方法抽取患者自体骨髓基质细胞,在体外培养增殖后再植于骨不连与骨缺损处,观察治疗效果。结果4例骨不连与1例骨缺损患者均治愈,疗效良好。结论骨髓基质细胞可用于骨不连与骨缺损的治疗。     

Comparative study on seeding methods of human bone marrow stromal cells in bone tissue engineering

Background In general the traditional static seeding method has its limitation while the dynamic seeding method reveals its advantages over traditional static method. We compared static and dynamic seeding method for human bone marrow stromal cells (hBMSCs) in bone tissue engineering.Methods DNA assay was used for detecting the maximal initial seeding concentration for static seeding. Dynamic and static seeding methods were compared, when scaffolds were loaded with hBMSCs at this maximal initial cell seeding concentration. Histology and scanning electron microscope(SEM) were examined to evaluate the distribution of cells inside the constructs. Markers encoding osteogenic genes were measured by fluorescent RT-PCR. The protocol for dynamic seeding of hBMSCs was also investigated.Results DNA assay showed that the static maximal initial seeding concentration was lower than that in dynamic seeding. Histology and SEM showed even distribution and spread of cells in the dynamically seeded constructs, while their statically seeded counterparts showed cell aggregation.Fluorescent RT-PCR again showed stronger osteogenic potential of dynamically seeded constructs.Conclusion dynamic seeding of hBMSCs is a promising technique in bone tissue engineering.     

两种可吸收生物膜联合去蛋白牛骨基质植入犬拔牙窝成骨的影像学评价

目的: 建立犬拔牙窝模型,采用影像学分析方法评价拔牙窝内植入去蛋白牛骨基质骨粉颗粒Bio-Oss^®(简称Bio-Oss骨粉)并覆盖复层猪小肠黏膜下层膜(multilaminated small intestinal submucosa membrane, mSIS)或可吸收胶原膜Bio-Gide^® (简称Bio-Gide膜), 愈合4周和12周后的牙槽窝内成骨效果。方法: 拔除3只比格犬双侧上下颌共计18颗前磨牙的远中根,得到18个拔牙窝,随机平均分为3大组,并分别对各拔牙窝组进行以下操作:(1)植入Bio-Oss骨粉并覆盖mSIS膜(mSIS组),(2)植入Bio-Oss骨粉并覆盖Bio-Gide膜(BG组),(3)自然愈合(空白对照组)。每大组各随机平均分为2个小组,分别于手术后4周和12周取样进行微计算机体层扫描(micro-computed tomograph, Micro-CT), 检测评价各组牙槽窝内新骨的生长情况,比较mSIS膜和Bio-Gide膜对拔牙窝内骨再生的影响。结果: Micro-CT分析显示,mSIS组和BG组在术后4周和12周的新生骨容积比均显著高于空白对照组(P<0.05),其中mSIS组略高于BG组,但两组间差异无统计学意义(P>0.05)。术后4周mSIS组和BG组的牙槽窝冠1/3区域新生骨容积比例显著高于中1/3及根1/3区域(P<0.05)。术后4周各组的新生骨密度值相近(P>0.05),术后12周时mSIS组和BG组的新生骨密度值均显著高于对照组(P<0.05)。术后4周和12周mSIS组和BG组的新生骨小梁的数量以及排列紧凑程度明显优于空白对照组(P<0.05),而mSIS略优于BG组,但两组间差异无统计学意义(P>0.05)。各组间骨小梁厚度的差异无统计学意义(P>0.05)。结论: 两种屏障膜联合去蛋白牛骨基质植入拔牙窝内有利于新骨再生,mSIS膜与Bio-Gide膜的应用效果相似。     

骨髓基质细胞体外成骨的实验研究

目的 研究骨髓基质细胞体外培养的成骨能力,为细胞移植修复骨缺损提供一条新途径。方法 取新西兰大白兔股骨大转子处骨髓,进行体外培养,纯化,10－14天后进行转代。培养后的细胞经倒置显微镜,透射地镜,钙染色,碱性磷酸酶染色等方法进行观察。结果 培养纯化后的细胞呈梭形,多角形,电镜显示具有分泌功能旺盛的结构,碱性磷酸酶染色强阳性,培养3－4周后,能形成钙结节。细胞在体外能多次传代,维持成骨表型。结论 骨髓基质细胞在体外培养纯化后,骨与成骨细胞相似的形态结构和生物学特性,能形成钙化的骨样组织。     

丁羟茴醚诱导幼儿骨髓间质干细胞分化为神经细胞

目的:探讨幼儿骨髓间质干细胞诱导分化为神经干细胞及神经细胞的方法及生物学特征,为临床利用骨髓间质干细胞或/和造血干细胞治疗小儿脊髓栓系综合征及其它神经系统疾病奠定基础。方法:取健康幼儿骨髓分离纯化骨髓间质干细胞,在α-MEM培养基(含20%胎牛血清,2 mmol/L谷氨酰胺,100 U/ml盘尼西林,100 mg/ml链霉素,25 ng/ml两性霉素B)中进行无分化培养,将传代细胞用丁羟茴醚(ButylatedHydroxyanisole,BHA)诱导,诱导剂是无血清DMEM培养基:含2%二甲基亚砜(Dimethyl sulfoxide,DMSO)、150μMBHA。结果:骨髓间质干细胞经过7 d体外诱导,大约有55%的细胞发生形态学变化,最初是胞体变圆,随后延展出长长的神经丝并相互交织成网,免疫组化结果表明这些细胞beta-微管蛋白Ⅲ(β-tublinⅢ)和神经胶质原纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)表达阳性。结论:儿童骨髓间质干细胞在合适的诱导剂作用下体外可定向分化成神经元和神经胶质细胞。为小儿脊髓栓系综合征及其它神经系统疾病自体骨髓移植实验治疗奠定了基础。     

Transfect bone marrow stromal cells with pcDNA3.1-VEGF to construct tissue engineered bone in defect repair

Background  We previously showed that nano-hydroxyapatite/carboxymethyl chitosan (n-Ha/CMCS) displayed excellent mechanical properties, good degradation rates and exceptional biocompatibility, with negligible toxicity. The aim of this study was to determine the effect of the same composite with vascular endothelial growth factor (VEGF)- transfected bone marrow stromal cells (BMSCs) in a rabbit radial defect model.

Methods  The nano-hydroxyapatite was produced through co-precipitation. The n-HA/CMCS scaffold was produced by particle filtration and lyophilization followed by genipin crosslinking. Total RNA from rabbit bone was reverse-transcribed to synthesize VEGF165-pcDNA3.1 that was transfected into the BMSCs. The composite was implanted into a rabbit radial defect model, and the osteogenic activity examined by gross morphology, X-ray examination and hematoxylin and eosin (HE) staining.

Results  The microstructure and mechanical property of the n-HA/CMCS scaffold resembled natural cancellous bone. Compared with glutaric dialdehyde crosslinked scaffolds, the genipin crosslinked scaffold was less toxic, and displayed a higher capacity to promote cell adhesion and proliferation. Spontaneous fluorescence of the composite permitted visualization of the composite-bone interface and the adhesion behavior of cells on the scaffold under laser scanning confocal microscopy. The scaffold with VEGF-transfected BMSCs bridged the bony defect and promoted healing, with most of the implanted material being replaced by natural bone over time with little residual implant. Using X-ray, we noted obvious callus formation and recanalization of the bone marrow cavity. Furthermore, HE stained sections showed new cortical bone formation.

Conclusions  The n-HA/CMCS scaffold composite with VEGF-trasnfected BMSCs is biocompatible, nontoxic, promotes the infiltration and formation of the microcirculation, and stimulates bone defect repair. Furthermore, the degradation rate of the composite matched that of growing bone. Overall, this composite material is potentially useful for bone defect repair.

     

骨髓基质干细胞联合 rhVEGF治疗肢体缺血的实验研究

目的：研究骨髓基质干细胞移植联合 rhVEGF 对兔肢体缺血的治疗效果。方法手术制作兔后肢缺血模型,之后将骨髓基质干细胞和/或 rhVEGF 注射到局部缺血组织中,对照组注射生理盐水。结果移植后2周、4周各组微血管计数比较,均为 P ﹤0.05,差别有统计学意义。移植后2周、4周缺血组织中 VEGF 蛋白的变化：各组间比较,P ﹤0.05,差别有统计学意义。结论骨髓基质干细胞移植联合 rhVEGF 治疗肢体缺血效果显著,骨髓基质干细胞移植促进 VEGF 分泌,而后者反过来促进干细胞向血管内皮细胞分化,形成新生微血管,加快侧枝循环网络的重建,增加缺血组织血流灌注。     

兔骨髓基质多潜能细胞对bio-oss的贴附研究

目的观察bio-oss载体对兔骨髓基质多潜能细胞贴附后的影响。方法体外培养骨髓基质多潜能细胞,进行成骨化的诱导,并进行前苏红钙化结节染色进行鉴定;诱导后的细胞滴加到bio-oss载体上,利用扫描电镜观察材料对细胞的形态学,利用MTT法观察材料对细胞增殖能力的影响。结果骨髓基质干细胞4~5 d可见少量的集落形成,14 d细胞基本铺满瓶底。第四代细胞在矿化液条件下培养2周左右,细胞形态稍变圆,茜素红染色结果显示强阳性。细胞滴加到载体材料后,可以很好的贴附于材料表面,增殖生长,材料对细胞增殖能力影响无差异。结论 bio-oss载体材料具有较好的生物相容性,可以作为骨组织工程的骨架材料。     

多种细胞因子对人骨髓基质细胞生长的影响

目的:探讨多种细胞因子对骨髓基质细胞生长的影响。方法:分离人骨髓单个核细胞,经培养获得骨髓基质细胞(BMSC),分别用不同的细胞因子组合作用于BMSC,MTT法测细胞增殖。采用Mini MACs系统阳性分离纯化脐血CD34+细胞,用BMSC结合不同的细胞因子组合培养14天后计数CFU-Mix集落数。结果r:hGM-CSF结合FL、SCFI﹑L-6对BMSC生长的增殖作用最明显;BMSC联合SCFI、L-3、FL、G-CSF、EPO对促进CD34+细胞体外集落形成的作用最明显。结论:细胞因子作用下的BMSC扩增有可能应用于造血损伤修复。     

兔骨髓基质细胞组织工程骨治疗骨缺损的研究

目的 探讨应用自体骨髓基质细胞为种子细胞的组织工程骨修复骨缺损的效果。方法 将免自体骨髓基质细胞经淋巴细胞分离液分离培养、传代扩增后，与胶原海绵混合培养后植于免挠骨干1．5cm缺损处。12周后处死动物，通过大体形态及x线、组织学检查进行评价。比较细胞和胶原海绵复合物移植与单纯胶原移植治疗骨缺损的疗效。结果 以组织工程骨移植于骨缺损处，骨缺损完全愈合，骨髓腔通畅。而单纯胶原移植对照组骨缺损未愈合，髓腔不通，与实验组有明显差别。结论 骨髓基质细胞是一种良好的骨源细胞，能定向分化成骨细胞，其成骨机制为膜内化骨和软骨内化骨。骨髓基质细胞作为种子细胞的组织工程骨前景乐观。