结核分枝杆菌部分耐药相关基因的突变特点

目的 分析结核分枝杆菌耐药相关基因的突变特点,评价DNA序列分析用于结核分枝杆菌快速耐药性检测的应用价值.方法 利用DNA序列分析检测结核分枝杆菌的katG、rpoB和gyrA基因片段.结果 86.81%(79/91)异烟肼耐药株存在katG基因的点突变和/或单碱基插入,最常见的突变形式为R463L,占76.92%(70/91).90.38%(94/104)的利福平耐药株在rpoB基因耐药决定区(RRDR)发生突变,突变类型有26种,涉及11种氨基酸,突变集中在密码子第507～533位.70.49%(86/122)氧氟沙星耐药株在gyrA基因耐药决定区(QRDR)发生突变,突变主要形式为A90V、D94Y、D94N、D94H及S91P.结论 耐药相关基因突变的检测,可作为临床快速检测结核分枝杆菌耐药性的方法之一.     

结核分枝杆菌毒力基因研究进展

结核病是目前全球重点控制的传染病之一，结核分枝杆菌(简称结核杆菌)具有强大的致病性和传染力，而要彻底了解和控制结核杆菌，对其毒力基因的认识就显得非常重要。近年来世界各国投入了很大的人力物力研究结核杆菌的毒力基因。对毒力基因的认识将促进结核的疫苗研制、临床诊断与控制，具有十分重要的抗结核战略意义。     

NRAMP1基因和人类对结核分枝杆菌的易感性

NRAMP1基因,又称SLC11A1基因,位于2号染色体长臂35区(2q35),包括15个外显子及内含子4中交替出现的1个外显子,长13 604 bp.NRAMP1的常见多态性基因有D543N、3′UTR、INT4和5′(GT)n等,和结核易感性相关.NRAMP1蛋白由巨噬细胞表达,是一种H+/二价阳离子的反向转运体,对巨噬细胞的功能有多效性.此文对NRAMP1基因及其和MTB的易感相关性的研究结果进行综述.     

广州地区耐喹诺酮结核分枝杆菌gyr基因突变特点

目的分析广州地区耐喹诺酮结核分枝杆菌临床菌株的gyr基因突变特点,为进一步研究结核分枝杆菌耐喹诺酮类药物的分子机理提供地区性资料。方法采用绝对浓度法测定结核分枝杆菌对左氧氟沙星的敏感性,应用DNA直接测序法检测结核分枝杆菌gyr基因的突变情况。结果23株左氧氟沙星耐药株中,15株存在gyrA基因突变,突变率为65.2%,突变位点包括89位、90位、91位和94位;1株存在gyrB基因突变,突变率为4.3%,突变位点为511位。结论广州地区耐喹诺酮结核分枝杆菌临床菌株的gyr基因突变情况与其它地区存在差异。     

RAPD技术在唐山市结核分枝杆菌指纹分型研究中的应用

[目的]RAPD DNA指纹分型方法的建立及其在分枝杆菌基因分型中的应用。[方法]收集结核病患者痰标本,分离培养获得分枝杆菌,进行表型鉴定及耐药性检测;提取基因组DNA,在建立RAPD DNA指纹分型方法的基础上对分枝杆菌进行DNA指纹图谱分析。[结果]RAPD指纹图谱分析将102株分枝杆菌分为7种菌型,其中Ⅰ型35株（34.31%）,Ⅱ型28株（27.45%）,Ⅲ型24株（23.53%）,Ⅳ型6株（5.88%）,Ⅴ型3株（2.94%）,Ⅵ型4株（3.92%）,Ⅶ型2株（1.97%）,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型是主要的3种类型。RAPD扩增特征条带大小为201～1 018 bp。分组统计显示,3种主要的RAPD DNA指纹的分布与患者的居住地、职业、结核菌耐药性有关,而与患者的性别、年龄、结核接触史等无关。[结论]RAPD DNA指纹分型方法是一种简单、快速的分枝杆菌的分型方法;3种主要类型的结核分枝杆菌在唐山地区流行。     

青海省38株结核分枝杆菌plc基因多态性研究

目的 探讨青海地区临床分离的结核杆菌中磷脂酶C编码基因plcABCD的突变情况.方法 38株结核杆菌增菌后提取DNA,并对4个基因plcA,plcB,plcC,plcD同时进行扩增,用琼脂糖凝胶电泳检测扩增产物并分析菌株基因的突变或缺失情况.结果 38株菌被分为6个基因型,其中12株含有完整的所有plcABCD基因,为plc野生株,占31.58％;26株菌有不同plc基因的缺失,为plc突变株,占68.42％.2株菌同时缺失了plcABD基因.plcA,plcB,plcC,plcD各基因的突变发生率分别为13.16％,10.53％,7.89％,47.37％.结论 青海地区临床分离的结核杆菌plc基因呈现多态性,plcD基因最易发生突变.     

应用压电基因传感器芯片检测结核分枝杆菌DNA

目的 由结核分枝杆菌引起的医院感染快速诊断问题已为越来越多的研究者所重视，压电基因传感器芯片技术主要依据晶体液相振荡理论，运用压电传感器与基因芯片技术结合，对标本中靶基因进行检测。方法 使用压电基因传感器芯片技术检测结核分枝杆菌ＤＮＡ。先以结核分枝杆菌ＤＮＡ探针结合在基因芯片表现，然后将１０６例结核患者标本ＤＮＡ分别与之杂交，将杂交信号通过数频处理器以频率变化值的形式输入电脑，再以专用分析软件进行结果分析。结果 检测阳性率为４２．５％，以ＰＣＲ扩增法及涂片法对相同标本进行检测，阳性率分别为３６．８％和１７．０％，同时对压电基因传感器芯片技术的特异性及灵敏度进行检测。结论 实验结果表明压电基因传感器芯片技术是一种比ＰＣＲ扩增法更简便、快速的结核分枝杆菌检测方法。     

结核分枝杆菌耐药分子机制及耐药基因检测方法研究进展

近年来 ,在全球范围内 ,结核分枝杆菌耐药率不断上升 ,高耐药和多耐药菌株不断出现和传播 ,对化疗疗效及结核病流行产生很大影响 ,药物敏感性检测更显重要。在临床实验室 ,目前分枝杆菌药物敏感性检测仍采用常规方法 ,即绝对浓度法 ,比例法和抗性比率法。但这些方法均以细菌生长为终点判断结果 ,由于结核分枝杆菌生长缓慢 ,在得到分离培养物后仍需 1～ 2个月方能获得结果 ,急需建立快速、准确、可靠的药物敏感性试验方法。近年来 ,随着分子生物学理论和技术的发展 ,结核分枝杆菌的耐药机制及耐药的分子基础大部分已被阐明 ,建立了快速检测结…     

江苏省260株结核分枝杆菌Spoligotyping基因分型研究

目的 研究江苏省结核分枝杆菌DNA指纹图谱的分布特征,分析北京家族株与结核分枝杆菌耐药的关联性.方法 江苏省30个耐药监测点收集260株结核分枝杆菌分离株,应用比例法检测分离株对于一线抗结核药物(异烟肼、链霉素、利福平和乙胺丁醇)的耐药性,应用间隔区寡核苷酸分型(Spoligotyping)方法进行基因分型,使用Bio...     

丽水市结核分枝杆菌5种耐药基因突变分析

目的:了解丽水市结核分枝杆菌耐药相关基因rpoB、katG、embB、rpsL和gyrA突变特点。方法:采用PCR-DNA直接测序法,对47株结核菌分离株5个耐药相关基因主要耐药位点突变进行分析。结果:药敏试验共获得耐药结核菌18株,总耐药率为38.30%;序列分析13株存在一个或多个突变位点,未发现碱基的插入或缺失,突变率为27.66%,二者吻合率72.22%。结论:丽水市结核杆菌趋向于耐多种药物,与多个基因突变相关。点突变是本地区结核菌产生耐药性的主要形式。     

福建省耐多药结核分枝杆菌相关耐药基因突变特征分析

目的分析福建省耐多药结核分枝杆菌耐药相关基因rpoB、katG和rpsL的突变特征,为建立快速分子药敏方法提供科学依据。方法收集监测点的痰培养分离菌株进行菌种鉴定、药物敏感性试验。选取46株耐多药结核分枝杆菌和15株全敏感株,扩增rpoB、katG和rpsL的基因片段,测序,比对分析。结果全敏感株rpoB和rpsL基因未检测到突变。耐多药菌株rpoB、katG和rpsL基因的突变率分别为91.30%,80.43%,30.43%。耐多药菌株三个基因的突变率均高于全敏感株的突变率,差异均有统计学意义(χ2值分别为46.67,4.29和11.58,P均<0.05)。katG、rpoB基因同时存在突变的耐多药菌株占80.43%,三个耐药基因均有突变的耐多药菌株占30.43%。结论福建省耐多药结核分枝杆菌的常见突变位点为rpoB531和rpoB526,katG315,rpsL43。     

多重耐药菌中β-内酰胺酶基因监测

目的了解多重耐药的铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌中β-内酰胺酶基因的分布情况。方法采用聚合酶联链反应(PCR)检测78株多重耐药的铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌中的TEM、SHV和CTX—M等3种β-内酰胺酶基因,并进行DNA测序。结果 50株铜绿假单胞菌中37株TEM基因阳性(74.0%),未检出SHV和CTX—M基因,28株鲍曼不动杆菌中25株TEM基因阳性(89.3%),2株SHV阳性(7.1%),未检出CTX—M基因。结论多重耐药的铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌中的β-内酰胺酶基因类型以TEM型较为流行。     

唐山地区结核分枝杆菌耐药及基因突变特征

目的 了解唐山地区结核分枝杆菌的耐药特征及其药物靶基因位点突变特征。方法 问卷调查193名研究对象的一般情况和疾病相关情况,并分析其特征与分离菌株药敏类型的相关性;抗酸染色和胶体金法确定结核分枝杆菌感染;采用试剂盒鉴定药敏类型;通过测序鉴定靶基因位点突变情况。结果 不同药敏类型菌株宿主的BMI、职业、居住地和抗生素用药史的差异具有统计学意义（P＜0.05）;193株临床分离株对一线、二线药物耐药率为37.31%和75.65%;耐药率排序前三位的药物为阿莫西林（53.37%）、氯法齐明（39.38%）和对氨基水杨酸（25.39%）;总突变率前三位分别为embB 306位点（80.66%）,ropB 531位点（72.62%）和rpoB 526位点（55.36%）;60%的基因位点只测得一种突变类型。结论 唐山地区结核分枝杆菌耐药率较高,药物靶基因位点突变率与其他研究报道相近但突变类型较为单一。     

Juniper and Immortelle Essential Oils Synergistically Inhibit Adhesion of Nontuberculous Mycobacteria To Acanthamoeba Castellanii

Acanthamoeba is an opportunistic protozoon, widespread in the aquatic environment, where it can be in endosymbiosis with over 30 pathogenic bacteria, including nontuberculous mycobacteria (NTM). Protozoa play a crucial role in mycobacterial pathogenesis and serve as a reservoir of infection. Since the first step in bacteria making contact with amoebae is adhesion, we were interested in investigating whether essential oils (EOs) can affect it. To that end we investigated the effects of juniper (Juniperus communis) and immortelle (Helichrysum italicum) EOs against Mycobacterium avium, M. intracellulare, and M. gordonae in tap water and against their adhesion to Acanthamoeba castellanii by combining them in synergistic EO concentrations. M. avium and M. intracellulare adhered to A. castellanii to a greater extent than M. gordonae. The adhesion of all NTMs was prevented by the subinhibitory concentrations of EOs. When comparing the effect of synergistic combinations of EOs and the effect of a single concentration from a combination, a higher percentage of adhesion inhibition in all synergistic combinations observed, except against M. gordonae. Neither oil was cytotoxic to A. castellanii. Our findings suggest that the EOs or their components weaken the contact of environmental NTMs and free-living amoebae and indirectly diminish their pathogenic potential, which could be of value in developing strategies for maintenance of water supply systems.     

福建省46株耐多药结核分枝杆菌katG基因突变特征研究

目的:了解福建省耐多药结核分枝杆菌临床分离株katG基因的突变特点,为建立适合我省快速检测异烟肼耐药方法提供参考。方法:对福建省9个监测点进行耐药性调查,收集菌株经菌种鉴定、药物敏感性试验。选取46株耐多药结核分枝杆菌和15株全敏感株,扩增katG高突变区域的基因片段,测序后比对分析。结果:15株全敏感株未检测氨基酸突变。46株耐多药结核分枝杆菌katG基因的突变率为80.43%,katG 315的突变率为54.35%,联合突变率为52.17%。结论:福建省耐多药结核分枝杆菌杆不同耐药谱katG基因突变率不同,最常见的点突变发生于315位,463位具有等位基因多态性。     

解甘露醇罗尔斯顿菌金属蛋白酶基因特征分析

目的 检测解甘露醇罗尔斯顿菌临床分离株的金属蛋白酶基因,并分析其编码蛋白结构特征.方法 采用Axygen细菌基因组提取试剂盒提取解甘露醇罗尔斯顿菌临床分离株DNA,建立基于金属蛋白酶基因的PCR检测方法,使用BLAST比对基因序列,使用CDD、MEROPS、SWISS-MODEL、CDTree、TMHMM和SignalP 4.1对编码蛋白进行在线分析.结果 在该解甘露醇罗尔斯顿菌临床分离株中分别检测出M48和S2P-M50家族金属蛋白酶基因RS-MP48和RS-MP50,与已报道的解甘露醇罗尔斯顿菌SN82F48株所携带的基因序列(WP_045785189.1和WP_045786756.1)相似度为100％.生物信息学研究表明,RS-MP48含有1个M48蛋白酶超家族保守功能域和4个跨膜结构,与芽孢杆菌M48肽酶家族、芽孢杆菌锌依赖蛋白酶、铜绿假单胞菌锌依赖蛋白酶同源性最高,相似度均为99％;与链霉菌热休克蛋白和铜绿微囊藻蛋白酶相似度分别为33％和32％;RS-MP50含有2个S2P-M50超家族保守功能域和4个明显的跨膜结构及少量的膜结合区;与解甘露醇罗尔斯顿菌RIP金属蛋白酶RseP同源性最高,相似度为99％,与罗尔斯顿菌属RIP金属蛋白酶RseP和蛋白酶调节因子相似度均为92％,与脑膜炎奈瑟菌和希瓦菌RseA锌金属蛋白降解酶RseP相似度分别为39％和38％.结论 解甘露醇罗尔斯顿菌是引起人类感染的新病原菌,本研究发现该临床株中存在金属蛋白酶基因,其编码蛋白可能是该类细菌潜在的毒力因子.     

实时荧光定量PCR检测耐药结核分枝杆菌中耐药相关基因whiB7的表达

目的探讨结核分枝杆菌耐药性与whiB7基因表达水平之间的关系。方法以耐受利福平、异烟肼、链霉素、乙胺丁醇和氟喹诺酮的结核分枝杆菌临床分离株为研究对象,利用实时定量PCR的方法,检测药物刺激结核分枝杆菌后whiB7基因表达水平的变化。结果除利福平刺激相应的菌株后,whiB7基因的表达水平变化不明显外,其余药物的刺激均会引起结核分枝杆菌耐药株的whiB7基因表达水平发生显著变化。结论结核分枝杆菌的whiB7基因是对多种抗生素刺激发生反应的基因,推测whiB7的表达参与结核分枝杆菌的耐药过程。     

福建省耐多药结核分枝杆菌耐药相关基因突变特征

目的初步分析福建耐多药结核病(multi-resistant tuberculosis,MDR-TB)临床分离结核分枝杆菌利福平和异烟肼的耐药相关基因突变情况。方法自福建福州肺科医院收集耐多药结核分枝杆菌临床分离菌株,采用PCR测序技术测定利福平和异烟肼耐药相关基因,包括rpoB、katG、inhA和mabA-inhA,并与标准菌株基因序列比对,分析基因突变特点。结果共对67株MDR-TB菌株进行了分析,91.04%的菌株在rpoB81 bp RRDR区发生突变,其中,88.06%(59/67)的MDR-TB菌株在rpoB531、526和516位发生突变;79.10%的菌株在katG、inhA或mabA-inhA上发生突变,59.70%(40/67)的菌株在katG315或者mabA-inhA(-15)位发生突变,没有检测到同时在inhA结构基因和基因调节区发生突变的菌株。结论 PCR-DNA测序分析技术可以用于检测MDR-TB临床分离菌株对RFP和INH的药物敏感性。