雷公藤甲素对去势小鼠骨质疏松模型破骨细胞分化的影响

目的 探究雷公藤甲素（TP）对去势小鼠骨质疏松模型破骨细胞分化的影响,并探讨其可能的分子机制。方法 建立去势小鼠骨质疏松模型,分为假手术组（Sham组）、卵巢切除去势组（OVX组）、雷公藤甲素组（TP组）、利维爱组（Livial组）,造模后第3天给予对应药物处理。治疗6周后,采用TRAP染色检测左侧股骨干骺端的破骨细胞数量。Micro-CT重建三维骨结构图像,检测左侧胫骨干骺端的骨密度（BMD）、骨小梁数目（Tb.N）、骨体积分数（BV/TV）、骨表面积组织体积比（BS/TV）、骨小梁分离度（Tb.Sp）,ELISA检测外周血中IL-6、TNF-α、骨形成标志物骨钙素（OC）、骨吸收标志物抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAcp5b）含量。Western Blot检测右侧股骨组织中p65、p-p65、IκBα、p-IκBα蛋白表达水平。结果 骨小梁周围破骨细胞数量比较：OVX组与Sham组相比明显增加;TP组与OVX组相比明显减少;TP组与Livial组比较,差异无统计学意义。骨参数分析：OVX组与Sham组相比,小鼠骨组织的BMD、Tb.N、BV/TV、BS/TV均显著下降,而Tb.Sp显著升高（P＜0.01）;与OVX组相比,TP组和Livial组骨组织的BMD、Tb.N、BV/TV、BS/TV均显著升高,而Tb.Sp显著下降（P＜0.01）;TP组与Livial组比较,差异无统计学意义（P＞0.05）。IL-6、TNF-α、OC、TRAcp5b含量比较：OVX组的IL-6、TNF-α含量显著高于Sham组（P＜0.01）;各组间OC水平比较,差异无统计学意义（P＞0.05）;OVX组的TRAcp5b水平显著高于Sham组（P＜0.01）。蛋白表达水平：与Sham组相比,OVX组的p65、IκBα表达水平不变,而p-p65和p-IκBα表达水平显著升高（P＜0.01）;TP处理后,p65、IκBα表达水平不变,而p-p65和p-IκBα表达水平却显著降低（P＜0.01）;TP组与Livial组比较,两者间p65、IκBα、p-p65和p-IκBα表达水平差异无统计学意义（P＞0.05）。结论 TP抑制破骨细胞分化,改善了去势小鼠的骨量丢失,其分子机制可能与抑制炎症因子IL-6、TNF-α的表达及NF-κB信号通路的磷酸化水平有关。     

细胞因子对破骨细胞生物学功能的调控作用

破骨细胞(osteoclast,OC)是一种多核巨细胞,主要来源于骨髓造血干细胞的单核巨噬细胞谱系。在促进OC生成的细胞因子、激素、PGE2等的作用下,脾细胞、人外周血单核细胞、骨髓细胞被诱导成OC。OC是维持骨代谢平衡和稳定的一种重要的细胞;其分化、产生及活性增加参与骨质破坏有关的疾病如骨质疏松、类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)、牙周病和Paget病。在这些疾病中均存在细胞因子的改变;这些细胞因子对破骨细胞分化的调控作用是这些疾病发生发展的关键。     

自噬在破骨细胞分化过程中的调控作用

破骨细胞在骨吸收过程中发挥着重要作用,其形成和功能失调可参与骨质疏松、类风湿性关节炎等多种骨相关疾病的发生。破骨细胞的形成和分化是一个复杂的生物学过程,其调控机制尚未完全明了。本研究旨在探讨自噬在破骨细胞分化过程中的作用。在RANKL刺激下,小鼠巨噬细胞RAW264.7可被诱导分化为破骨细胞。本研究采用TRAP染色法检测RAW264.7细胞向破骨细胞分化进程中抗酒石酸酸性磷酸酶活性变化,并通过Western blotting技术检测分析自噬相关蛋白LC3表达变化;并应用自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-Methyladenine,3-MA)明确自噬在破骨细胞分化中的作用。30ng/ml的RANKL刺激RAW264.7细胞至第5d时可观察到分化成熟的破骨细胞。在此过程中,RANKL刺激至第3d时细胞自噬作用显著增强,此后(如第5d时)自噬作用则逐渐减弱。在分化过程中如果以3-MA抑制细胞的自噬,RAW264.7细胞向破骨细胞的分化则可被显著抑制。可见,自噬在RANKL介导的破骨细胞分化成熟的过程中发挥重要的调控作用,抑制自噬则阻碍破骨细胞的分化成熟。     

Mac-1在破骨细胞分化中的作用

目的:探究巨噬细胞分化抗原1(Mac-1)分子在核因子κB受体活化因子配体(RANKL)诱导的破骨细胞分化中作用的分子机制。方法:取4周龄C57BL/6J小鼠脾细胞,用RANKL及巨噬细胞集落刺激因子(MCSF)诱导,同时用抗CD11b及抗CD18的特异性抗体进行处理,1周后对细胞核和细胞骨架进行染色;用抗CD11b抗体、干扰CD11b基因的慢病毒及其对照空载病毒处理RANKL诱导的破骨细胞,1周后对细胞进行免疫荧光染色;取4周龄C57BL/6J小鼠脾细胞用RANKL及M-CSF诱导,同时用抗CD11b抗体、干扰CD11b的慢病毒及其对照空载病毒分别进行处理,1周后提取总蛋白进行Western blot检测。结果:CD11b抗体组和双抗体组的多核细胞形成率低于对照组和CD18抗体组,双抗体组和CD11b抗体组之间多核细胞形成率的差异不具有统计学显著性;免疫荧光双标结果显示病毒组的CD11b、Syk及NFATc1表达强度均低于对照病毒组,CD11b抗体组的CD11b、Syk及NFATc1表达强度均低于对照组;Western blot结果显示,CD11b抗体组的CD11b、Syk、NFATc1、c-Fos及p-ERK/ERK水平均低于对照组,病毒组的CD11b、Syk、NFATc1、c-Fos及p-ERK/ERK水平均低于对照病毒组。结论:Mac-1分子中CD11b亚基对破骨细胞分化具有促进作用。该分子通过激活下游Syk通路,上调c-Fos,增加ERK活性,最终上调NFATc1而促进破骨细胞的分化。     

破骨细胞分化过程中丙酮酸的作用

背景：糖酵解在破骨细胞分化过程中起关键作用,成熟破骨细胞骨吸收主要依赖于糖酵解。丙酮酸作为糖酵解的终末产物,在三大营养物质的代谢中起重要的枢纽作用。目的：探讨丙酮酸对破骨细胞分化的影响。方法：采用CCK-8法检测不同浓度(0.1,1,10,20,30,50 mmol/L)丙酮酸对RAW264.7细胞活性的影响,筛选出安全浓度丙酮酸。将RAW264.7细胞分组干预：空白对照组加入完全培养基(含体积分数10%胎牛血清、1%双抗的α-MEM培养基),对照组加入含核因子κB受体活化因子配体的完全培养基,实验组加入核因子κB受体活化因子配体与不同浓度丙酮酸的完全培养基,分别进行抗酒石酸酸性磷酸酶染色、细胞骨架纤维性肌动蛋白染色、RT-qPCR检测、Western blot检测与骨吸收陷窝实验。结果与结论：(1)CCK-8检测显示,丙酮酸对RAW264.7细胞的最大半数抑制浓度为8.923 mmol/L,后续实验选择0.1,1,5 mmol/L为安全浓度;(2)抗酒石酸酸性磷酸酶染色显示,1 mmol/L丙酮酸促进RAW264.7细胞向破骨细胞分化;(3)细胞骨架纤维性肌动蛋白染色显示,1mmol...     

调节破骨细胞分化的RANK特异性基序的再确认

目的： 进一步确认核转录因子NF-κB受体激动剂（RANK）蛋白中调节破骨细胞(OC)分化的特异性基序(motif),为阐明OC分化机制提供理论依据。方法: 分别突变RANK蛋白膜内部分第533-540之间的8个氨基酸（突变前氨基酸序列为DIIVVYVS,突变后氨基酸序列为ELLAAFAA）,用定点突变方法构建8个由肿瘤坏死因子受体1(TNFR1)和RANK跨膜部分和膜内部分共同组成的TNFR1/RANK突变嵌合体(TNFR1/RANK-533-TNFR1/RANK-540),每1个突变体在其RANK膜内部分含1个突变氨基酸。用包装细胞plat E分别将各突变体包装成逆转录病毒,通过逆转录病毒感染分别将这些突变体转染到TNFR1/TNFR2基因敲除小鼠的骨髓巨噬细胞(BMM)中。用TNF-ɑ和单核细胞集落刺激因子（M-CSF）刺激、观察转染哪种突变体的BMM不能诱导OC形成,不能诱导OC形成的突变体所包含的突变前氨基酸就是RANK调节OC分化的关键氨基酸,多个关键氨基酸组成的片段就是RANK特异性motif。结果: 转染TNFR1/RANK-533、TNFR1/RANK-539和TNFR1/RANK-540的BMM均能分化成OC,表明氨基酸D533、V539、S540突变后对OC分化无影响;转染TNFR1/RANK-534的BMM有极少数能分化成OC,表明氨基酸I534突变后对OC分化有部分影响;而转染TNFR1/RANK-535、TNFR1/RANK-536、TNFR1/RANK-537和TNFR1/RANK-538的BMM均不能分化成OC,表明氨基酸I535、V536 、V537和Y538突变后对OC分化起关键影响。结论: I534、I535、V536 、V537和Y538这5个氨基酸组成的片段（534-IIVVY-538）可能就是RANK调节OC分化的特异性motif。     

力学刺激在破骨细胞分化中的作用

骨组织细胞主要有成骨细胞、破骨细胞、骨细胞3种类型,与细胞外基质共同维持骨的结构完整性和功能性。破骨细胞专门负责骨吸收,通过释放酸性物质和蛋白水解酶降解骨基质,发挥骨吸收作用;通过与成骨细胞相互协调,共同维持骨稳态。破骨细胞增多,导致骨吸收增加,从而引起骨质疏松症等骨骼疾病;破骨细胞生成过少,将导致骨吸收减弱等相关疾病,例如骨硬化症。因此,对于破骨细胞功能的精确调控,在维持骨稳态的平衡中发挥极为关键的作用。既往研究多从生物化学角度解释和阐述各种生物因素对破骨细胞的调控。然而越来越多的研究证实,力学刺激在破骨细胞分化过程中发挥着重要的作用。本文着眼于力学刺激对破骨细胞分化的影响,讨论力学刺激在其中可能发挥的作用,并对该领域的新发现以及未来的发展进行探讨。     

破骨细胞分化成熟调节的分子机理研究进展

破骨细胞 (ｏｓｔｅｏｃｌａｓｔ ,ＯＣ)来源于骨髓中的粒 -巨噬细胞克隆形成单位 (ｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅａｎｄｍａｃｒｏｐｈａｇｅｃｏｌｏｎｙｆｏｒｍｉｎｇｃｅｌｌｓ ,ＣＦＵ -ＧＭ)。ＯＣ的分化和 /或功能变化所导致的骨再建失衡是多种代谢性骨病 ,如骨质疏松症、骨质硬化症和畸形性骨炎 (Ｐａｇｅｔ骨病 )等形成的病理基础。目前已经证明多种激素和局部细胞因子如活性维生素Ｄ3 (1,2 5 (ＯＨ) 2 Ｄ3 )、糖皮质激素、甲状旁腺素 (ＰＴＨ)、前列腺素 (ＰＧＥ2 )、ＩＬ - 4、ＩＬ -6、ＩＬ - 11、ＩＬ - 12等不仅能调节破骨细胞生成…     

不同浓度地塞米松体外对人成骨细胞和破骨细胞分化的影响

目的: 探讨地塞米松(DEX)体外对人成骨细胞(OBs)和破骨细胞(OCs)分化的影响。方法: 以DEX为主要成分的诱导剂体外刺激正常人骨髓间充质干细胞(MSCs),茜素红染色及碱性磷酸酶(ALP)定量法检测OBs间钙结节形成及OBs中ALP水平;改变DEX浓度后,再检测ALP水平以及用Western blotting检测OBs中磷酸化GSK-3β蛋白的表达;外源性核因子κB受体活化因子配基(RANKL)刺激人骨髓单个核细胞(BMMs)14 d后,用抗酒石酸酸性磷酸酶染色鉴定OCs形成情况、Western blotting检测BMMs中RANKL下游的信号途径;不同浓度DEX刺激MSCs 7 d后,用ELISA和Western blotting检测培养液中可溶性RANKL(sRANKL)水平及MSCs中RANKL蛋白表达。结果: 含0.1 μmol/L DEX的诱导剂刺激MSCs后可有钙结节形成,在DEX 0.001-0.1 μmol/L浓度范围内,OBs中ALP水平逐渐增高、磷酸化GSK-3β蛋白表达逐渐增强,当DEX浓度进一步增加后(0.1-10 μmol/L), ALP水平和磷酸化GSK-3β蛋白表达反而下降;外源性RANKL可以诱导BMMs分化为OCs,且BMMs中磷酸化IκBα、SPAK/JNK、p38 MAPK、p44/42 MAPK表达增强;在0.001-10 μmol/L浓度范围内,DEX刺激MSCs后,培养液中 sRANKL水平和MSCs中RANKL蛋白表达逐渐增高,且sRANKL水平和DEX浓度呈正相关(r=0.821,P<0.05)。结论: 在低浓度(0.001-0.1 μmol/L)范围内,DEX既促进OBs分化,又可促进OCs分化。在高浓度(0.1-10 μmol/L)范围内,仍能促进OCs分化,但失去了其对OBs的分化作用。     

成骨／基质细胞在破骨细胞分化中的作用

骨组织微环境中，成骨／基质细胞表达的骨保护素(osteoprotegerin，OPG)和骨保护素配体(osteoprotegerin ligand，OPGL)是调节骨代谢的重要因子。研究表明，成骨／基质细胞的OPG／OPGL相对表达水平与破骨细胞的分化、成熟及骨吸收直接相关。各种刺激骨吸收的生物、物理因素均通过调节成骨／基质细胞的OPG／OPGL相对表达活性，影响破骨细胞的分化和成熟。     

Cultured human monocytes secrete fibronectin in response to activation by proinflammatory cytokines

We studied the effects of the cytokines IL-1alpha, IL-6, tumour necrosis factor-alpha (TNF-alpha), IL-4, IL-10, IL-13 and transforming growth factor-beta (TGF-beta) on fibronectin (FN) production by cultured-human monocytes. IL-1alpha, IL-6 and TNF-alpha all increased FN production, an indicator of monocyte activation. These cytokines increased FN production in a dose-dependent fashion, with a 4-h treatment being sufficient to measure FN production by radioimmunoassay. Conversely, IL-4, IL-10 and IL-13 strongly inhibited cytokine-induced FN production, while TGF-beta only partially inhibited FN production. The combination of suboptimal doses of cytokines (IL-1alpha + IL-6, IL-1alpha + TNF-alpha, IL-6 + TNF-alpha), which could not singly induce substantial amounts of FN, were able to induce FN production by cultured monocytes. Northern blot analysis with a cDNA specific for FN confirmed the expression of FN mRNA in cultured monocytes stimulated with a single cytokine or a combination of cytokines. Our data demonstrate that monocytes may not always require high concentrations of cytokines for activation in vitro, and that the synergistic or additive action of low levels of cytokines on monocyte activation may be sufficient to promote immune or inflammatory reactions. Our data also suggest that certain T cell cytokines may regulate monocyte activation.     

汉防己甲素诱导自噬抑制破骨细胞的分化

背景:已有研究表明汉防己甲素可以通过激活AMPK信号通路诱导细胞自噬从而抑制肿瘤细胞增殖,但目前汉防己甲素诱导破骨细胞自噬和分化的相关研究甚少。目的:探究汉防己甲素在不同浓度下对破骨细胞分化和自噬的影响,并分析诱导破骨细胞自噬能否起到抑制其分化的作用。方法:(1)第一部分:使用重组小鼠巨噬细胞集落刺激因子和核因子κB受体活化因子配体两种细胞因子对小鼠RAW264.7巨噬细胞进行诱导,使其向破骨细胞转化。细胞诱导及药物干预分组如下:空白对照组(完全培养基),阳性对照组(含两种细胞因子),低、中、高剂量汉防己甲素干预组(阳性对照组分别添加0.1,0.5,1.0μmol/L汉防己甲素)。抗酒石酸酸性磷酸酶染色法观察成熟破骨细胞数量变化;Western blot法检测组织蛋白酶K(CTSK)、自噬微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ(LC3-Ⅱ)和自噬底物泛素结合蛋白(p62)的蛋白相对表达量;RT-PCR检测CTSK、LC3-Ⅱ和p62的mRNA相对表达量;丹酰尸胺(MDC)染色观察诱导过程中破骨细胞中自噬小体的数量变化。(2)第二部分:选取抑制破骨细分化效果最明显的汉防己甲素浓度(1.0μmol/L)进行回复性验证。各组处理如下:阳性对照组(含两种细胞因子),自噬抑制剂组(巴佛洛霉素处理),药物干预组(汉防己甲素干预),药物干预+自噬抑制剂组。抗酒石酸酸性磷酸酶染色法观察成熟破骨细胞数量变化;Western blot法检测CTSK的蛋白相对表达量。结果与结论:(1)一定浓度汉防己甲素能够对破骨细胞的分化起抑制作用,并且抑制作用随药物浓度升高而提升;(2)汉防己甲素在一定浓度下能够激发破骨细胞分化过程中自噬标志物的表达及减少自噬特异性底物累积,并在破骨细胞分化过程中可刺激自噬小体形成;(3)使用自噬抑制剂后,汉防己甲素抑制破骨细胞分化的作用受到显著影响;(4)综上,一定浓度的汉防己甲素能够通过激活自噬抑制破骨细胞的分化。     

Recombinant thrombomodulin ameliorates experimental autoimmune encephalomyelitis by suppressing high mobility group box 1 and inflammatory cytokines

Recombinant thrombomodulin (rTM) has pleiotrophic properties, including anti‐coagulation and anti‐inflammation; however, its effectiveness as a treatment for multiple sclerosis (MS) has not been evaluated fully. High mobility group box 1 (HMGB1) and proinflammatory cytokines, working as inflammatory mediators, are reportedly involved in the inflammatory pathogenesis of MS. The aim of this study was to determine whether rTM can be a potential therapeutic agent for experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE). EAE mice received rTM treatment (1 mg or 0·1 mg/kg/day) from days 11 to 15 after immunization. The clinical variables, plasma levels of inflammatory cytokines and HMGB1 and pathological findings in EAE were evaluated. rTM administration ameliorated the clinical and pathological severity of EAE. An immunohistochemical study of the spinal cord showed weaker cytoplasmic HMGB1 staining in the rTM‐treated EAE mice than in the untreated EAE mice. Plasma levels of inflammatory cytokines and HMGB1 were suppressed by rTM treatment. In conclusion, rTM down‐regulated inflammatory mediators in the peripheral circulation and prevented HMGB1 release from nuclei in the central nervous system, suppressing EAE‐related inflammation. rTM could have a novel therapeutic potential for patients with MS.     

唑来膦酸调控NLRP3信号通路抑制脂多糖诱导的破骨细胞分化

背景：唑来膦酸可抑制骨吸收,但其是否能抑制炎症性骨疾病及其相关机制尚不完全清楚。目的：分析唑来膦酸对脂多糖诱导破骨细胞增殖、分化的影响。方法：利用脂多糖将RAW264.7细胞诱导为破骨细胞,采用抗酒石酸酸性磷酸酶染色和F-actin染色鉴定诱导结果。将RAW264.7细胞分5组培养：空白对照组不进行任何干预,对照组加入脂多糖处理,其余3组在加入脂多糖的基础上分别加入0.1,1,5μmol/L的唑来膦酸处理,培养6 h后,采用ELISA法检测上清液中肿瘤坏死因子α水平,Western Blot检测NLRP3、caspase-1、白细胞介素1β、cleaved-caspase-1及肿瘤坏死因子α的蛋白表达。培养第5天,抗酒石酸酸性磷酸酶染色观察破骨细胞形成情况,F-actin染色观察破骨细胞肌动蛋白环。结果与结论：(1)抗酒石酸酸性磷酸酶染色和F-actin染色显示,脂多糖可诱导RAW264.7细胞分化为破骨细胞;(2)对照组肿瘤坏死因子α水平高于空白对照组(P <0.05),0.1,5μmol/L唑来膦酸组肿瘤坏死因子α水平低于对照组(P <0.05);抗酒石酸酸性磷酸酶染色...     

Advances in experimental models of rheumatoid arthritis

Rheumatoid arthritis (RA) is a chronic systemic autoimmune disease characterized by persistent articular inflammation and joint damage. RA was first described over 200 years ago; however, its etiology and pathophysiology remain insufficiently understood. The current treatment of RA is mainly empirical or based on the current understanding of etiology with limited efficacy and/or substantial side effects. Thus, the development of safer and more potent therapeutics, validated and optimized in experimental models, is urgently required. To improve the transition from bench to bedside, researchers must carefully select the appropriate experimental models as well as draw the right conclusions. Here, we summarize the establishment, pathological features, potential mechanisms, advantages, and limitations of the currently available RA models. The aim of the review is to help researchers better understand available RA models; discuss future trends in RA model development, which can help highlight new translational and human-based avenues in RA research.     

细胞因子诱导HepG2细胞ICAM—1表达的研究

目的 研究IFN-γ、TNF-a和IL-1对HepG2细胞细胞间粘附分子-1（ICAM-1）表达的影响。方法 用IFN-γ、TNF-a和IL-1在体外诱导HepG2细胞表达ICAM-1,并用细胞FLISA检测HepG2细胞ICAM-1表达水平。结果 未经刺激的HepG2细胞ICAM-1表达水平很低。TNF-a、IL-1、IFN-γ刺激后,HepG2细胞ICAM-1表达均明显增强,其表达水平与细胞因子浓度呈一定的剂量依赖关系;随着细胞因子刺激时间的延长,HepG2细胞ICAM-1表达也逐渐增多。结论IFN-γ、TNF-a和IL-1等细胞因子能诱导体外培养HepG2细胞ICAM-1增强表达。     

实验性变态反应性脑脊髓炎大鼠模型的复制

目的：观察不同的遗传背景（远交系和近交系）和饲养环境对Wistar大鼠实验性变态反应性脑脊髓炎（EAE）发病率的影响，摸索EAE模型制作的实验方法与技术。方法： 采用动物行为学、常规HE和LFB染色方法，观察不同的遗传背景和饲养环境下豚鼠全脊髓匀浆诱导大鼠EAE的发病情况与中枢神经系统（CNS）的病理变化。结果： （1）动物行为学的改变：各组大鼠EAE发病率、潜伏期和症状评分无显著差异，但近交系组发病大鼠可出现四肢瘫痪。（2）病理学改变：每组发病大鼠CNS内可见不同程度的炎性细胞浸润；髓鞘染色可见广泛的神经髓鞘变性、脱失；而其中近交系组的5只EAE大鼠髓鞘脱失部位大多局限在炎症改变明显的血管套周围的白质区。结论： 远交系与近交系，或清洁级与普通级的Wistar大鼠的EAE的发病率无明显差异，而远交系与近交系的不同遗传背景可能会影响大鼠EAE的体征和病理表现。     

骨碎补影响破骨细胞分化的程度与含药血清浓度有关

文题释义：活化T细胞核因子1：属于NFAT家族重要成员之一,是破骨细胞分化形成中的重要转录因子,活化T细胞核因子1激活后可由细胞质转位至细胞核,在此过程中c-Fos/AP1信号通路起关键作用。CTSK、抗酒石酸酸性磷酸酶是破骨细胞特异性蛋白,活化T细胞核因子1活化的同时,可将CTSK、抗酒石酸酸性磷酸酶转录出细胞核,促进破骨细胞分化。中药含药血清：是指动物灌胃给予中药或单体制剂,经吸收进入血液循环,在一定时间内采取血液,分离所得血清,必定还有一定量的该药物成分,可反映机体真实血药浓度;将此血清进行体外细胞培养体系,可观察体外药理作用。 背景：已有报道骨碎补总黄酮有防治骨质疏松症的效果,但其作用机制多集中于对成骨细胞的作用,而对破骨细胞分化的影响研究较少。 目的：探讨骨碎补通过活化T细胞核因子1信号通路对破骨细胞分化的影响。方法：40只SD大鼠随机分为4组,分别以0,11.6,34.8,104.4 g/kg的骨碎补总黄酮灌胃,获得阴性对照血清及低、中、高浓度含药血清。另取5周龄大鼠分离获取骨髓巨噬细胞,采用CCK-8法检测不同含药血清对巨噬细胞活性的影响;取巨噬细胞分为低、中、高浓度组、阴性对照组、空白组,每孔5个复孔,分别加入低、中、高浓度含药血清、阴性对照血清培养液、正常培养液;所有培养液均用20 μg/L巨噬细胞集落刺激因子、100 μg/L核因子κB受体活化因子配体进行破骨细胞诱导分化。诱导分化7 d,抗酒石酸酸性磷酸酶染色检测破骨细胞数、融合指数,实时荧光定量PCR、Western blot检测各组细胞c-Fos、Fra-1、Fra-2、活化T细胞核因子1、组织蛋白酶KmRNA和蛋白表达;诱导分化14 d,骨片吸收陷窝试验检测破骨细胞骨吸收陷窝数、陷窝面积占比。实验方案经濮阳市安阳地区医院动物实验伦理委员会批准,批准号为PYSAYDQ-2019096。结果与结论：①不同浓度骨碎补含药血清对巨噬细胞活性影响无明显变化;②诱导分化前巨噬细胞形态规则,诱导分化后行抗酒石酸酸性磷酸酶染色证实为破骨细胞;③与空白组、阴性对照组比较,低、中、高浓度组破骨细胞数、融合指数、骨吸收陷窝数、陷窝面积占比、c-Fos、Fra-1、Fra-2、活化T细胞核因子1、组织蛋白酶K mRNA和蛋白相对表达量均明显降低(P < 0.05),且上述指标均随骨碎补含药血清浓度升高呈降低趋势：低浓度组>中浓度组>高浓度组,各浓度组间比较差异均有显著性意义(P < 0.05);④结果说明,骨碎补可能通过活化T细胞核因子1信号通路抑制大鼠巨噬细胞向破骨细胞的分化,且分化抑制程度与骨碎补含药血清浓度有关。ORCID: 0000-0003-3948-4631(许金松) 中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建;骨细胞;软骨细胞;细胞培养;成纤维细胞;血管内皮细胞;骨质疏松;组织工程     

破骨细胞细胞骨架的研究进展

破骨细胞是由造血细胞源的单核前体细胞相互融合而成的一种特殊巨噬多核细胞 ,在骨吸收过程的不同阶段破骨细胞的表型出现很大的改变 ,同时 ,破骨细胞内的细胞内架进行了广泛的重组。本文就近年来有关破骨细胞在吸收周期中细胞骨架的变化、作用及其调节的研究进展和前景作了综述     

Paeoniflorin ameliorates collagen‐induced arthritis via suppressing nuclear factor‐κB signalling pathway in osteoclast differentiation

Paeoniflorin (PF), extracted from the root of Paeonia lactiflora Pall, exhibits anti‐inflammatory properties in several autoimmune diseases. Osteoclast, the only somatic cell with bone resorbing capacity, was the direct cause of bone destruction in rheumatoid arthritis (RA) and its mouse model, collagen‐induced arthritis (CIA). The objective of this study was to estimate the effect of PF on CIA mice, and explore the mechanism of PF in bone destruction. We demonstrated that PF treatment significantly ameliorated CIA through inflammatory response inhibition and bone destruction suppression. Furthermore, PF treatment markedly decreased osteoclast number through the altered RANKL/RANK/OPG ratio and inflammatory cytokines profile. Consistently, we found that osteoclast differentiation was significantly inhibited by PF through down‐regulation of nuclear factor‐κB activation in vitro. Moreover, we found that PF suppressed nuclear factor‐κB activation by decreasing its translocation to the nucleus in osteoclast precursor cells. Taken together, our new findings provide insights into a novel function of PF in osteoclastogenesis and demonstrate that PF would be a new therapeutic modality as a natural agent for RA treatment and other autoimmune conditions with bone erosion.