VD3结合蛋白的分离纯化

目的：纯化VD3结合蛋白（DBP）。方法：利用DBP的相对分子质量及电荷性质，分别用阳离子交换剂、阴离子交换剂和凝胶过滤等分离目的蛋白,SDS-PAGE鉴定纯度，并进行活性分析。结果：分离到相对分子质量为58000的蛋白质，SDS－PAGE呈单一区带。结论：成功分离纯化出DBP。     

VD3结合蛋白的分离纯化

目的纯化VD3结合蛋白(DBP)。方法利用DBP的相对分子质量及电荷性质，分别用阳离子交换剂、阴离子交换剂和凝胶过滤等分离目的蛋白，SDS-PAGE鉴定纯度，并进行活性分析。结果分离到相对分子质量为58000的蛋白质，SDS-PAGE呈单一区带。结论成功分离纯化出DBP。     

蝮蛇毒蛋白C激活物的纯化与抗血小板活性

目的　研究蝮蛇毒蛋白C激活物 (PCA)组分对兔血小板聚集性的影响。方法　借助DEAE Cellulose、SP SephadexC 5 0及SP SephadexG 75柱层析 ,以离子交换和凝胶过滤法从江浙蝮蛇 (AHV)粗毒中分离纯化PCA抗凝组分 ;SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)检测其纯度和分子量。比浊法测定血小板聚集率。结果　从AHV分离纯化的PCA抗凝组分经SDS PAGE电泳测定为单一区带 ,相对分子质量为 14 0 0 0左右 ,等电点 pH 4 .7;该PCA在体外对由诱聚剂ADP诱导的血小板聚集呈剂量依赖性的抑制作用 ,其IC50 为 12 5 μg/ml。PCA(1.0mg/kg) 体内给药可逆性抑制血小板聚集反应。结论　从蝮蛇毒中纯化的这种PCA抗凝组分可通过抑制血小板聚集而影响血凝过程。     

蜜蜂毒中蜂毒素的分离纯化方法及含量测定

目的：从蜜蜂毒中分离纯化蜂毒素（melittin),建立以SDS-聚丙烯酰 胺凝胶电泳(SDS－PAGE）及HPLC进行蜂毒素定性定量分析的方法。方法：用Sephadex G-25、Sephadex G-50、Sephadex G-75三步层析法从蜜蜂毒中分离纯化蜂毒素,以SDS－PAGE定性,以HPLC进行含量测定。结果：样品经SDS－PAGE测定为单一条带,相对分子质量约3000。HPLC含量测定,平均回收率为95．97％,相对标准差（RSD）为1．07％。结论：以上述分离纯化法可制得高纯度的蜂毒素,检测方法准确、可靠、简单。     

福建产舟山眼镜蛇毒细胞毒素的快速分离纯化及鉴定

目的 从舟山眼镜蛇毒中分离纯化细胞毒素(CTX)，并鉴定其理化性质。方法 采用SP—Sephadex C-25阳离子交换色谱及Sephasil Peptide C18反相高效液相色谱法从舟山眼镜蛇毒中分离纯化CTX，SDS—PAGE(Tris—Tricine系统)鉴定纯度，Edman降解法测定N端氨基酸序列。结果 粗毒经阳离子交换色谱，得到14个蛋白峰，其中第X～XⅢ峰具CTX活性；再分别经反相色谱纯化，得到4个CTX．总得率为32.48％；SDS—PAGE显示为均一蛋白，分子量依次为：7．28，7．33，7．24和7．38kD；测定它们N端20个氨基酸序列。结论 采用阳离子交换和反相高效液相色谱可快速、高效地从眼镜蛇毒中获得4个CTX纯品。     

重组变形链球菌V+蛋白的表达和纯化

目的：探讨变形链球菌表面蛋白可变区（V＋）基因在大肠杆菌中高效诱导表达及其表达产物的进一步纯化。方法：将V＋基因以C端融合6个组氨酸的形式在E.coli BL21(DE3)中进行IPTG诱导表达。His6融合表达产物经金属离子（Ni^2 )融体亲和层析分离纯化，SDS－PAGE电泳和Western blot印迹分析表达产物。结果：SDS－PAGE分析确定有与His6融合表达产物（His6-rV )理论相对分子质量一致的诱导表达条带，其表达量占全菌蛋白的20％左右，表达产物以可溶形式存在。进一步纯化目的蛋白，纯度可达90％。Western blot实验表明表达产物具有良好的抗原性。结论：His6融合表达载体可以高效地表达和纯化重组V＋蛋白。     

核受体PPARγ-LBD在原核系统的最适表达及纯化

目的　探索诱导PPARγ LBD的最适表达条件 ,提高可溶性PPARγ LBD蛋白在大肠杆菌中的表达量 ,然后用Ni2 + NTA离子交换树脂对表达蛋白进行分离纯化。方法　PPARγ LBD在大肠杆菌BL2 1(DE3 )中进行诱导表达时 ,以不同IPTG浓度、不同温度 ( 3 7℃ ,3 0℃ ,2 0℃ ) ,确定可溶性PPARγ LBD蛋白表达的最适条件 ;然后用Ni2 + NTA离子交换树脂进行分离纯化 ,其产物进行SDS PAGE纯度分析和Westernblotting鉴定。结果　建立了重组蛋白PPARγ LBD的最适诱导条件 ,即 0 .5mmol LIPTG浓度 ,2 0℃诱导 14h其可溶性表达蛋白的量最高 ;纯化产物经SDS PAGE纯度分析大于 90 %以上 ;Westernblotting检测 ,纯化产物为PPARγ LBD目的蛋白 ,其分子质量约 3 4× 10 3。结论　重组蛋白PPARγ LBD在E .coli中进行了成功表达和纯化 ,并且降低温度可提高可溶性蛋白PPARγ LBD表达量达 5 0 %以上     

福氏志贺菌毒力蛋白IpaC的表达与纯化

目的：表达和纯化福氏志贺菌毒力蛋白IpaC，研究福氏志贺菌的致病机制。方法：将含有ipaC基因的pET32a-i-paC表达质粒载体转化大肠杆菌BL21（λDE3），在异丙基硫代－β－D半乳糖苷（IPTG）诱导下表达，对诱导后的表达产物进行SDS－PAGE鉴定，并采用QIA expressionist^TM蛋白纯化系统来纯化目的蛋白。结果：诱导后的表达产物经SDS－PAGE发现有一相对分子质量约为63000的条带，其含量约占总蛋白量的11％，以350mmol/L咪唑洗脱液洗脱，目的蛋白纯度可达90％以上，结论：pET32a-ipaC重组表达质粒转入大肠杆菌后，可稳定，高效地表达目的蛋白，QIA－expressionistTM蛋白纯化系统是一种简便，高效的纯化系统，可获得高纯度的目的蛋白。     

细胞凋亡显像剂^99mTc-膜联蛋白V的制备与体内分布

将本室改造的毕赤酵母接入100ml BMGY培养基培养24h，离心收集酵母细胞并重悬于100ml BMMY培养基，每12小时加入终浓度为0．5％甲醇诱导表达具有内在金属螯合位点的突变型人膜联蛋白V。48h后离心沉淀培养基，获得的上清经硫酸氨沉淀、分子筛分离纯化蛋白；SDS—PAGE鉴定其相对分子质量为36000，并测定其纯度为95％。纯化后的蛋白加入终浓度为1mmol／L二硫苏糖醇，37℃保温15min恢复活性，     

成团泛菌低分子脂多糖的分离纯化和鉴定

目的 :从革兰阴性非致病菌成团泛菌中提取、分离和纯化出细菌脂多糖 ,开发一种新的免疫调节剂 Pantoea agglomeranslipopolysaccharide(L PSp)。方法 :用 westphal热酚水法粗提 ,阴离子交换层析法进行纯化。应用 Tricine- SDS-聚丙稀酰胺凝胶电泳法 (Tricine- SDS- PAGE)、鲎变形细胞溶解物实验法对 L PSp的相对分子质量及活性进行鉴定。同时对 L PSp的化学成分进行分析。结果 :获得相对分子质量为 5 0 0 0的低分子脂多糖 (L PSp)。经鉴定 L PSp为含有 1 8%2 - keto- 3- deoxyoctulosonate (KDO)、总糖量为 6 4 .5 %、总纯度 >99.0 7%、重量比活性较 E.coli O1 1 1 :B4 L PS高 2 .6倍。结论 :用阴离子交换层析法可纯化出低相对分子质量高纯度水溶性的成团泛菌脂多糖 L PSp,与其它细菌 L PS相比 L PSp具有较高的 KDO含量     

广东菲牛蛭中有效抗凝物质的分离纯化

目的从广东菲牛蛭鲜体中分离纯化有效抗凝物质,并对其生化性质进行测定。方法用水提醇沉、离子交换、反相层析法等分离纯化广东菲牛蛭中的抗凝物质,用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定其蛋白的分子质量,并运用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（MALDI—TOF—MS／MS）进行分析。结果从广东菲牛蛭中分离出得到一种电泳纯的活性多肽,其相对分子质量为19．2kDa。所得菲牛蛭抗凝活性多肽每克蛋白所含单位抗凝活性≥2548000ATU,活性回收率约为53％。结论从广东菲牛蛭鲜体中分离出的活性抗凝多肽对凝血酶具有极强的抑制作用,开发应用前景广阔。     

人S-腺苷蛋氨酸脱羧酶α亚基的克隆、表达与纯化

目的：构建人S 腺苷蛋氨酸脱羧酶(SAMDC)的α亚基的原核表达载体，诱导该质粒在大肠杆菌中表达并纯化表达的重组蛋白。方法：从大肠癌细胞中提取总RNA，RT PCR方法扩增人SAMDCα亚基的cDNA片段801?bp，经TA克隆及亚克隆方法构建原核表达载体pTriEx 4 SAMDC α。将重组表达质粒转化入E.coli JM109(DE3)中，经IPTG诱导表达，SDS PAGE电泳和Western blot鉴定表达蛋白，并通过6×His•Tag，利用亲和层析法纯化表达的融合蛋白。结果：酶切鉴定和DNA测序显示，人SAMDC α亚基的cDNA片段成功插入表达载体pTriEx 4且方向正确，SDS PAGE电泳显示表达出32kD的外源蛋白。Western blot检测结果显示，表达出的蛋白为6×His•Tag的融合蛋白，且Ni NTA亲和层析法纯化了该重组蛋白。结论：成功构建、表达且纯化了重组SAMDC α亚基，为制备抗SAMDC抗体、研究SAMDC基因与结直肠肿瘤的关系提供了必要的工具。     

人重组CD137-Fc分子的构建与真核表达

目的构建人CD137-Fc基因的真核表达质粒，并表达有生物学活性的纯化人CD137-Fc融合蛋白。方法从cDNA文库中用PCR扩增cD137全长编码基因，并导入真核表达载体pcDNA3中。测序证实后，继续用PCR扩增其膜外区cDNA，酶切后与hIgGIFc基因一起装入真核表达载体pcDNA3中，转染293T细胞瞬时表达，用夹心ELISA检测其表达情况，经蛋白A亲和纯化，用SDS-PAGE与免疫印迹进行鉴定。结果测序证实构建的CD137与CD137-Fc cDNA阅读框完整，连接部位序列正确；ELISA证实cD137-Fc蛋白的表达；SDS-PAGE与免疫印迹证实其为人cD137-Fc蛋白。结论获得了纯化的hCD137-Fc融合蛋白，为探讨CD137在免疫自稳调节中的地位，以及探索CD137的其它生物学功能奠定了坚实的实验基础     

尖吻蝮蛇毒无出血活性纤维蛋白溶解酶的纯化及其理化性质研究

目的：从蝮亚科尖吻蝮蛇毒(Agkistrodon acutus venom)中分离纯化出无出血活性纤维蛋白溶解酶(Non—hemonrrhagic fibrinolytic enzyme,NHFLE)并对其理化性质进行研究。方法：应用凝胶过滤和离子交换柱层析法分离纯化尖吻蝮蛇毒NHFLE，用纤维蛋白平板法测定其纤溶活力，用SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)测定其相对分子质量，用皮内出血实验测定其出血活性。结果：从短亚科尖吻蝮蛇毒中分离出一种单一组分的纤维蛋白溶解酶，它的相对分子质量为25000，没有出血活性，在普通纤维蛋白平板和加热平板上都能溶解纤维蛋白，相对活性为粗毒的3．2倍。结论：从尖吻蝮蛇毒中分离出相对分子质量为25000的纯化蛋白是具有直接溶解纤维蛋白活性，而无出血活性的单一的纤维蛋白溶解酶。     

人和小鼠抑癌因子分子量等物化性质比较

应用ＳＤＳ聚丙烯酰胺凝胶电泳技术研究了人和小鼠抑癌因子的分子量等物化性质。结果显示，４种人癌的抑癌因子都呈均一区带，其相对迁移率均为０３６，分子量范围在１２０００左右。２种小鼠癌的抑癌因子也为均一区带，相对迁移率为０５６，分子量约４０００。提示人和小鼠的抑癌因子分子可能均由一条肽链组成。     

重组日本血吸虫14-3-3蛋白的纯化和免疫特性分析

目的：纯化日本血吸虫信号蛋白质14-3-3编码基因的原核表达产物。分析纯化产物的免疫学特性。方法：SDS-PAGE鉴定重组日本血吸虫14-3-3（rSj14-3-3)蛋白包涵体，超声破碎细胞收集包涵体。尿素溶解包涵体，NiSO4平衡层析柱，亲和层析纯化rSj14-3-3,Western-blot鉴定纯化产物的免疫学特性。结果：rSj14-3-3是以包涵体形式在大肠埃希菌中表达。通过亲和层析在32.5kDa附近得到单一蛋白条带，Western-blot证实纯化产物为rSj14-3-3，且具有与天然Sj14-3-3相同的抗原表位。结论：成功纯化了rSj14-3-3蛋白，为研究14-3-3在血吸虫信号转导中的作用奠定了基础。     

用亲和层析法纯化牛精浆蛋白

目的：从牛精浆中纯化牛精浆（BSP）蛋白。方法：利用盐析及亲和层析等方法对BSP蛋白进行纯化。结果：用Gelatin-Sephorase4B亲和胶纯化出一个蛋白峰,经电泳及氮基础测序证实为BSP－A1／－A2蛋白。结论：用市售Gelatin-Sephorase4B亲和胶可方便的纯化出BSP－A1／A2蛋白。     

弓形虫主要表膜P30抗原的纯化与鉴定

目的 应用单克隆抗体免疫亲和层析技术提纯弓形虫主要表膜Ｐ３０抗原并进行鉴定。方法 将我们已建立的分泌抗表膜Ｐ３０抗原单克隆抗体的Ｅ３杂交瘤细胞注入ＢＡＬＢ／ｃ小鼠腹腔,收集腹水,用饱和硫酸胺沉淀和ＤＥＡＥ－－纤维柱层析法提纯单克隆抗体,将其偶联至溴化氢活化的琼脂糖４Ｂ上装柱,经免疫亲和层析技术,从大量的低功率超声粉碎速殖子抗原中分离纯化Ｐ３０蛋白质,并用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ进行鉴定。结果 本次实验约获得了８．１ｍｇ的Ｐ３０蛋白质,且纯度较高。结论 单克隆抗体免疫亲和层析技术可获得一定量的Ｐ３０抗原。