全反式维甲酸对人肝癌高转移细胞株MHCC97-H表达基质金属蛋白酶的影响

目的 研究全反式维甲酸(ATRA)对人肝癌高转移细胞株MHCC97-H表达基质金属蛋白酶(MMPs)的影响。方法 应用明胶酶谱法检测ATRA对体外培养MHCC97-H细胞分泌MMPs酶谱的影响；细胞免疫荧光法检测ATRA对MHCC97-H细胞表达MMP-9的影响；利用侵袭小室模型，检测ATRA对MHCC97-H细胞体外侵袭能力的影响。结果 MHCC97-H在体外培养时可分泌大量的MMPs，其中以MMP-9和其活性形式为主。ATRA在体外可显著地抑制MHCC97-H细胞MMPs的表达，降低肿瘤细胞穿透人工重组基底膜的能力，且在一定的浓度范围内，抑制作用与药物浓度呈正相关。结论 抑制肿瘤细胞分泌MMPs的能力，是ATRA抗肿瘤侵袭转移的主要作用机理之一。     

全反式维甲酸对肝癌细胞分泌Ⅳ胶原酶的影响

目的：探讨全反式维甲酸(ATRA)对肝癌细胞侵袭性影响的途径。方法：通过体外和动物实验的方法，探讨ATRA对肝细胞癌高转移瘤株(Hca-F)人工基底膜粘附能力以及对Ⅳ胶原酶分泌能力的影响。结果：ATRA对Hca-F细胞的人工基底膜粘附能力以及对Ⅳ胶原酶的分泌均有明显的抑制作用，其抑制能力在一定范围之内与ATRA浓度成正比。结论：ATRA通过多途径对Hca-F侵袭性行为产生影响。     

TNP-470对MHCC97-H体外血管生成拟态的抑制作用

目的研究血管生成抑制剂TNP-470对人肝癌高转移细胞株MHCC97-H体外形成血管生成拟态的影响。方法TNP-470作用于MHCC97-H细胞,应用MTT试验、体外侵袭实验,检测MHCC97-H细胞增殖活性和侵袭力的变化。建立MHCC97-H细胞人工基底膜基质凝胶体外三维细胞培养模型,观察MHCC97-H细胞能否形成血管生成拟态以及TNP-470对其影响,应用扫描电镜、透射电镜观察细胞结构改变。结果TNP-470对MHCC97-H细胞增殖无显著抑制作用,可抑制其体外侵袭能力,明显抑制MHCC97-H细胞形成血管生成拟态,减少细胞表面的微绒毛和细胞间连接。结论人肝癌高转移细胞株MHCC97-H可形成血管生成拟态,TNP-470能抑制人肝癌细胞株MHCC97-H体外血管生成拟态形成。     

不同转移潜能人肝癌单克隆细胞株的分离和建立

目的 从高转移潜能的人肝癌细胞系中分离出不同转移潜能的单克隆细胞株。方法 采用有限稀释法,对高转移潜能人肝细胞癌细胞系MHCC97进行单克隆培养,筛选不同转移潜能的克隆细胞株,测定目标克隆株的生长速度、核型、AFP分泌情况,体外侵袭能力、裸鼠接种肺转移率。结果 筛选出高、低两个不同转移潜能的单克隆细胞株,分别命名为MHCC97-H和MHCC97-L,前者肺转移率为100%,后者为40%;MHCC97-H的细胞倍增时间为34.2h,MHCC97-L为60.0h;流式细胞分析显示,MHCC97-H与MHCC97-L相比,前者G0-G1期细胞比例低,S期、G2-M期细胞比例高;人工基底膜穿透能力前者明显强于后者。结论 本实验证实了MHCC97癌细胞系的异质性。这两个单克隆细胞株对于肝癌生物学行为的比较研究有一定的使用价值。     

外源性透明质酸酶对人乳腺癌细胞侵袭力及血管形成能力的影响

目的　探讨外源性透明质酸酶(hyaluronidase, Hyase)对人乳腺癌细胞ZR 75 30 侵袭潜力及血管形成能力的影响。方法　通过建立体外侵袭模型和应用双室联合培养技术,观察外源性Hyase对ZR 75 30细胞穿透Matrigel(人工基底膜)的能力以及诱导血管内皮细胞形成血管能力的影响。结果　实验组的穿膜细胞数为(70.625±11.64)个,明显高于对照组的(22.125±6.09)个(P<0.01); 实验组的血管管腔数目为(34.5±2.4)条,明显高于对照组的(8.5±1.5)条(P<0.01)。结论　外源性Hyase有促进人乳腺癌细胞侵袭及诱导血管形成的作用。     

血管内皮生长因子-C shRNA对肝癌HepG2细胞增殖及侵袭能力的影响

目的 检测靶向血管内皮生长因子-C(vasenlar endothelial growth factor-C,VEGF-C)shRNA质粒载体对肝癌HepG2细胞增殖及侵袭能力的影响.方法 构建VEGF-C shRNA质粒载体,脂质体转染方法转入肝癌HepG2细胞.通过倒置荧光显微镜及流式细胞仪检测细胞的转染率;RT-PCR及Western blot检测转染细胞内VEGF-C mRNA及蛋白的表达变化;MTT法检测细胞增殖抑制率;人工基底膜体外侵袭实验检测细胞侵袭能力.结果 VEGF-C shRNA稳定转染后,肝癌HepG2细胞内VEGF-C mRNA及蛋白表达水平显著下降;VEGF-C shRNA对肝癌HepG2细胞具有明显的增殖抑制作用,其抑制增殖效应呈时间依赖性;VEGF-C shRNA可有效抑制肝癌HepG2细胞的人工基底膜体外侵袭能力,抑制率为51.54%.结论 VEGF-C在肝癌增殖、侵袭转移中发挥重要作用;通过RNA干扰技术实现VEGF-C沉默,在肝癌的基因治疗中具有较好的应用前景.     

全反式维甲酸对肝癌细胞生物学行为的影响

目的：探讨全反式维甲酸（ATRA)对肝癌细胞生物学影响的途径。方法：通过体外和动物实验的方法，探讨ATRA对肝细胞癌高转移瘤株（Hca-F）体外增殖能力，对人工基底膜粘附能力以及对IV胶原酶分泌能力的影响。结果：ATRA对Hca-F细胞的体外增殖能力，人工基底膜粘附能力，以及对IV胶原酶的分泌均有明显的抑制作用，其抑制能力在一定范围随ATRA浓度成正比。结论：ATRA在多途径对Hca-F细胞生物学行为产生影响。     

趋化因子受体在肝癌细胞中的表达及其意义

目的 观察趋化因子受体(CCR1 CCR7 CXCB3 CXCR4)在人肝癌细胞系(Hep3BHepG2 HLE和HLF)的表达,并探讨其作用机制.方法 采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、细胞免疫组织化学、流式细胞仪测定趋化因子受体在肝癌细胞表面的表达,通过肝癌细胞Hep3B体外侵袭实验即重组大鼠巨噬细胞激动蛋白(CCL3)-1对Hep3B细胞穿透人工重组基底膜能力的影响来检测趋化因子受体在肝癌侵袭转移时所起的作用,并通过激光共聚焦显微镜观察趋化因子受体在肝癌细胞侵袭转移过程中的作用机制.结果 通过RT-PCR,流式细胞术可检测到CCR1 mR-NA及蛋白在肝癌细胞中表达,免疫组织化学显示CCR1在肝癌细胞包膜和胞质内都有表达.细胞侵袭实验提示Hep3B在CCL3的刺激下,实验组Hep-3B细胞通过基底膜的数量(213±12)多于对照组细胞通过基底膜的数量(102±11),差异有统计学意义(P<0.01).运用激光共聚焦检测到实验组胞内钙离子的浓度增加到.结论 肝癌细胞系(Hep3B HepG2 HLE和HLF)的表面的表达CCRl,且CCR1在肝癌细胞侵袭转移中发挥重要的作用,其作用机制与细胞内钙离子浓度有很关.     

组织因子对人胃癌细胞体外侵袭转移特性的影响

目的 构建稳定转染人组织因子(TF)的人胃癌细胞株SGC7901,研究TF对胃癌细胞体外侵袭转移特性的影响.方法 采用巢式PCR技术自人胎盘组织克隆目的基因TF,应用脂质体介导的转染技术将其导入人胃癌细胞株SGC7901,采用G418筛选稳定表达TF的细胞,采用RT-PCR及Western blot法检测TF mRNA及蛋白的表达,并进行Transwell实验及划痕实验观察细胞体外侵袭转移能力的变化.结果 经基因测序证实成功构建了稳定、高效表达TF的人胃癌细胞系SGC7901/TF.转染组TF mRNA及TF蛋白表达增高;与阴性对照组及空白对照组相比,转染组细胞的体外侵袭转移能力增强.结论 TF能够增强人胃癌细胞的体外侵袭转移能力.     

T淋巴瘤侵袭转移诱导因子1与胃癌细胞侵袭移行能力的相关性研究

目的：检测T淋巴瘤侵袭转移诱导因子1（Tiam1）在胃癌细胞株中的表达并分析其与胃癌细胞侵袭、移行能力的关系。方法：采用层黏连蛋白黏附法，从胃癌MKN-45细胞株（Mo）中筛选获得高黏附亚株（Mh）和低黏附亚株（ML）。应用RT-PCR和SABC免疫组化技术分别检测Tiam 1mRNA与蛋白在Mo、ML、Mh细胞中的表达。应用Boyden小室测定Mo、ML、Mh细胞的体外侵袭、移行能力并分析其与Tiam1表达间的关系。结果：胃癌MKN-45细胞高黏附亚株（MH）的体外侵袭、移行能力均较MKN-45细胞（Mo）及其低黏附亚株（Mo为强（P〈0.05），但Mo与ML细胞间无差异（P〉0.05）。Tiam 1mRNA和蛋白在MH细胞中的表达均较其在Mo和ML细胞中的表达为强（P〈0.05），但在Mo与ML细胞中的表达无差异（P〉0.05）。Tiam1蛋白和mRNA表达水平与胃癌细胞体外侵袭、移行能力呈正相关（P〈0.05或P〈0.01）。结论：Tiam1基因表达水平升高有可能促进胃癌细胞侵袭、移行能力的增强。     

基质金属蛋白酶组织抑制剂-2基因转染对平滑肌细胞的影响

目的探讨基质金属蛋白酶组织抑制剂(TIMP)2基因对体外培养大鼠主动脉平滑肌细胞(SMCs)增殖和迁移能力的影响。方法利用重组腺病毒载体,将目的基因导入宿主细胞,建立转基因细胞株。应用逆转录聚合酶链反应(RTPCR)和酶联吸附试验(ELISA)检测TIMP2表达。同时应用细胞直接计数法和侵袭小室研究转染细胞体外增殖和侵袭情况。结果转染TIMP2基因的平滑肌细胞基因组中存在有590bp目的基因特异性片断,TIMP2蛋白在转染后平滑肌细胞中获得稳定表达和分泌。转染后平滑肌细胞生长受到明显抑制。AdhTIMP2组透过人工基底膜的细胞数为21.38±12.81,与正常对照组和AdCMV组(53.64±11.27,44.23±12.75)比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论重组腺病毒载体介导TIMP2基因转染对体外生长主动脉平滑肌细胞增殖和侵袭有明显抑制作用。     

姜黄素对人肝母细胞瘤细胞株HepG2增殖和转移的影响

目的：探讨姜黄素对人肝母细胞瘤细胞株HepG2体外增殖和侵袭力的影响。方法：不同浓度的姜黄素（10，20，30，40，50 μmol/L）处理HepG2不同时间（6，12，24，48，72 h）后，用MTT法检测细胞的增殖情况；用上述浓度的姜黄素作用HepG2后，分别采用细胞黏附人工重组基底膜法检测细胞的黏附能力，用Transwell法检测细胞的趋化能力。结果：MTT结果显示，姜黄素能明显抑制HepG2细胞的增殖，且呈时间与浓度依赖性；姜黄素能明显抑制HepG2细胞的黏附与趋化能力，并呈一定的浓度依赖性。结论：姜黄素能有效抑制人肝母细胞瘤细胞株HepG2体外增殖及侵袭转移能力，可望作为肝母细胞瘤患者潜在的化疗辅助药物之一。

     

4′,5,7-三羟基黄酮,芹菜配基对人乳腺癌细胞生长和侵袭潜力的影响

目的探讨透明质酸酶（Hyaluronidase，Hyase）抑制剂4′，5，7-三羟基黄酮，芹菜配基（Apigenin）对人乳腺癌细胞生长、增殖及侵袭潜力的影响。方法通过体外侵袭模型观察Apigenin对人乳腺癌细胞穿透Matrigel（人工基底膜）能力的影响；MTT法和流式细胞仪检测Apigenin对人乳腺癌细胞株生长和增殖的影响。结果8株人乳腺癌细胞的侵袭潜力存在明显差异。加用Apigenin后其侵袭潜力均明显降低（P〈0．05），并与Apigenin存在量效关系；Apigenin对MDA-MB-435S和T47D细胞株的生长抑制作用均呈浓度依赖性；流式细胞仪显示Apigenin阻滞人乳腺癌细胞株MDA-MB-231和ZR-75-30生长于G2／M期（P〈0．05）。结论Apigenin可抑制人乳腺癌细胞的增殖和Hyase的表达，并可降低人乳腺癌细胞株的侵袭潜能。     

白藜芦醇对肾癌细胞体外增殖与侵袭能力的影响

目的探讨白藜芦醇对肾癌786-O与ACHN细胞体外迁增殖与侵袭能力的影响及可能的机制。方法 MTT检测白藜芦醇对肾癌细胞增殖能力的影响,划痕实验检测白藜芦醇对786-O与ACHN细胞体外迁移能力的影响,Transwell实验检测白藜芦醇对786-O与ACHN细胞体外侵袭能力的影响,RT-PCR与Western bolt检测白藜芦醇对MMP-2与MMP-9蛋白表达水平的影响。结果白藜芦醇可抑制膀胱癌细胞体外生长能力,且呈剂量依赖性。30μmol/L白藜芦醇处理786-O与ACHN细胞24h后,划痕实验发现白藜芦醇可抑制786-O与ACHN细胞体外迁移能力,Transwell实验证实白藜芦醇可抑制肾癌细胞786-O与ACHN的体外侵袭能力。RT-PCR与Western bolt结果表明,白藜芦醇可从mRNA与蛋白水平抑制MMP-2与MMP-9的表达。结论白藜芦醇能抑制肾癌细胞体外增殖能力,可能通过下调MMP-2与MMP-9的表达而抑制肾癌细胞786-O与ACHN体外迁移与侵袭能力,有望成为治疗肾癌的新策略。     

T淋巴瘤侵袭转移诱导因子1与胃癌细胞侵袭移行能力的关系

目的检测胃癌细胞中T淋巴瘤侵袭转移诱导因子1（T lymphoma invasion and metastasis inducing factor1，Tiaml）的表达及其与肿瘤侵袭、移行能力的关系，同时观察胃癌细胞在形态学方面的变化。方法采用层黏连蛋白黏附法，由胃癌MKN-45细胞株（M0）中筛选获得高（MH）、低（ML）黏附亚株。应用流式细胞仪检测Tiaml在胃癌细胞中的表达，以Boyden小室法测定M0、ML、MH细胞的体外侵袭、移行能力，并分析其与Tiaml表达间的关系，同时采用苏木精-伊红及细胞骨架蛋白染色、扫描电镜技术观察胃癌细胞形态。结果MH细胞的体外侵袭、移行能力及Tiaml表达均强于M0、ML细胞（P〈0．05），且Tiaml表达与胃癌细胞体外侵袭、移行能力呈正相关（r=0．997和1．000）；同时与M0、ML相比，MH胞体伸展，表面突起增多，片状伪足宽厚，丝状伪足细长而密集，异型性明显，且细胞骨架结构较紊乱，斑点状肌动蛋白小体增多。但M0、ML细胞间差异无统计学意义（P〉0．05）。结论Tiaml表达水平升高可能促进胃癌细胞侵袭、移行。这或许是通过调整胃癌细胞骨架结构重组，增强其变形、游走能力而实现的。     

siRNA沉默HER2对人胰腺癌细胞PANC-1侵袭能力的影响

目的:探讨慢病毒介导的siRNA沉默HER2对人胰腺癌细胞株PANC-1侵袭能力的影响。方法:运用HER2基因小干扰RNA(siRNA)的重组慢病毒稳定转染PANC-1细胞,荧光定量RT-PCR和Western blotting观察HER2 mRNA和蛋白表达的改变,体外侵袭实验检测细胞侵袭能力的变化。结果:HER2基因小干扰RNA的重组慢病毒稳定转染PANC-1细胞可显著抑制HER2 mRNA和蛋白表达;体外侵袭实验显示siRNA沉默HER2后,PANC-1细胞侵袭能力明显下降。结论:HER2基因小干扰RNA的重组慢病毒能有效抑制HER2的表达,抑制胰腺癌细胞体外侵袭能力。siRNA沉默HER2可能为预防和治疗胰腺癌的侵袭转移提供一种新的策略。     

Rho/Rho激酶对肝癌细胞体外侵袭转移作用的研究

目的　观察Rho/Rho激酶对恶性肿瘤细胞侵袭力的影响,探讨Rho/Rho激酶抑制剂用于肿瘤转移治疗的可能性。方法　肝癌细胞株SMMC772 1经Rho/Rho激酶抑制剂Y 2 76 32处理后,分别用黏附基质分析、重建基底膜侵袭模型以及Westernblot分析对肿瘤细胞侵袭、黏附、运动能力的影响。结果　SMMC772 1细胞有Rho蛋白表达,经Y 2 76 32处理后,细胞的侵袭能力明显下降,黏附率降低,运动能力下降。结论　Rho/Rho激酶对肝癌细胞体外侵袭转移有重要作用,Y 2 76 32可降低恶性肿瘤细胞的侵袭能力,改变侵袭相关性质     

泌尿系肿瘤侵袭与转移重要分子:基质金属蛋白酶

侵袭转移是肿瘤细胞、宿主细胞及细胞外基质之间一系列主动、复杂、多步骤相互作用的过程。首先 ,有转移潜质的肿瘤细胞从母体脱离 ,粘附于其他细胞和 (或 )基质蛋白的表面 ;接着由肿瘤细胞或基质细胞释放蛋白水解酶 ,降解细胞外基质 (ＥＣＭ)和基底膜 (ＢＭ) ,破坏ＢＭ屏障 ,肿瘤细胞穿透血管或淋巴管壁向远处转移或直接侵入到周围组织中 ;最后肿瘤细胞在多种生长因子的作用下形成转移灶[1] 。基质金属蛋白酶(ＭＭＰｓ)是一组具有高度保守锌依赖性的肽链水解酶 ,因参与ＥＣＭ和ＢＭ多种成分的降解而与恶性肿瘤的侵袭转移之间存在密切的关系…     

中华眼镜蛇毒膜毒素对人类膀胱癌细胞EJ-m3作用的体外研究

目的 研究中华眼镜蛇毒膜毒素(MT-12)对人膀胱癌细胞株EJ-m3的作用,并探讨其作用机制.方法 以穿透人工基底膜能力为依据筛选具有体外高侵袭能力的膀胱癌细胞;采用四氮唑蓝(MTY)法检测MT-12不同浓度对EJ-m3细胞的生长抑制率;同时流式细胞仪检测不同浓度MT-12作用24h后细胞中趋化因子受体CXCR4的表达.结果 经过反复筛选获得膀胱癌细胞EJ的体外高侵袭力亚系,EJ-m3.MT-12可有效抑制FJ-m3细胞的生长,具有浓度依赖性特点.MT-12对EJ-m3作用72h的ICSO是0.66ug/mL;流式细胞仪检测结果 显示,在0.125～0.5ug/mL,MT-12组随着药物浓度的增加Cx-CR4的表达逐渐减弱(P=0.020).结论 MT-12可有效抑制膀胱癌细胞生长,其作用机制可能与CXCR4在膀胱癌细胞中高表达有关.MT-12有潜力成为新的抗膀胱癌药物.     

成纤维细胞通过肝细胞生长因子增强膀胱癌细胞的侵袭能力

目的间质细胞在肿瘤细胞的转化与侵袭过程中发挥了重要作用，本研究旨在阐明成纤维细胞源性因子，尤其是肝细胞生长因子（HGF），对膀胱癌细胞侵袭潜能的影响。方法体外细胞侵袭实验评价成纤维细胞TIG-1和HGF对多种膀胱癌细胞（5637、T24、J82、HT1376和MGHU-1）侵袭潜能的影响。RT—PCR检测上述细胞HGF和其受体c—Met的表达水平。酶联免疫吸附实验检测无转移的膀胱癌患者和正常人的血清HGF浓度，以阐明血清HGF水平和膀胱癌侵袭力之间的关系。结果体外细胞侵袭实验发现：在成纤维细胞TIG-1培养上清作用下，各种膀胱癌细胞体外侵袭力显著增强，但HOF的中和抗体可部分抑制这种效应。