异种牛颈静脉带瓣管道重建右室流出道研究

目的 观察去细胞牛颈静脉带瓣管道( BJVC)重建猪右心室流出道后的细胞生长特性、抗钙化性能及血流动力学性能.方法 应用经去细胞、鞣制、改性(B组,n=8)及未去细胞(A组,n=8)的BJVC分别进行猪肺动脉与右心室连接,行光镜及电镜观察宿主内皮细胞及肌成纤维细胞生长特点,原子火焰法检测组织钙含量,超声心动图检测 BJVC 血流动力学参数.结果 术前A组BJVC试片表面无内皮细胞,术后12个月内膜表面50％～60％的表面覆盖卵圆形内皮细胞,基质层未见宿主成纤维细胞迁入;术前B组去细胞后BJVC已基本无细胞成分,术后12个月内皮细胞覆盖率约80％ ～90％,宿主肌成纤维细胞已爬行迁移至基质层的1/3.术后A组近端及远端吻合口管壁、瓣膜组织钙含量显著大于B组(P＜0.05),B组上述各项指标均显著大于新鲜BJVC(P ＜0.05).术后当天A组及B组各项血流动力学指标比较差异无统计学意义(P＞0.05),B组术后当天及术后12月各项指标比较差异无统计学意义(P＞0.05);术后12月A组远端吻合口口径显著小于B组(P＜0.05),远端吻合口压差、跨瓣压差、牛颈静脉返流量显著大于B组(P＜0.05).结论 去细胞化后鞣制、改性的牛颈静脉是一种更好的重建右室流道材料,但远期效果需进一步研究.     

不同方法制备生物衍生骨体内植入的组织学观察

目的探讨不同方法制备的生物衍生骨植人大耳白兔体内后的组织学变化，为组织工程研究提供异种动物源支架材料。方法取新鲜市售猪股骨两端，除去软组织及骨膜后切割为0．5cm×0．5cm×0．5cm大小骨块。根据不同处理方法分为5组：A组仅用生理盐水冲洗，B组经脱脂处理，C组经脱脂脱钙处理，D组经脱脂脱钙脱细胞处理，E组经脱脂脱细胞处理。取各组骨块行微量元素检测；经25kGy辐照灭菌后植入26只新西兰大耳白兔股部肌袋内，左侧植入A、B组骨块，右侧植入C、D及E组骨块，各肌袋植入1块。术后2、6及12周取材，作HE及Masson染色，行炎性细胞、破骨细胞计数，观察胶原纤维生成及成骨情况。结果各组骨块微量元素残留量符合标准。所有动物术后生存良好。各组实验兔植入部位均未见组织坏死、积液及化脓感染。炎性细胞计数以A组为最多，与其他各组比较差异有统计学意义（P〈O．05）；破骨细胞计数各组间差异无统计学意义（P〉0．05）。HE及Masson染色观察，胶原纤维及新骨形成C、D组为最好，E组次之，A、B组最差。结论脱脂脱钙脱细胞处理的猪股骨有良好的降解性、成骨性及较低的炎性反应，有可能成为组织工程骨的支架材料。     

新型多孔PLGA/HA复合支架体外细胞相容性的实验研究

目的研究新型多孔聚乳酸乙醇酸／羟基磷灰石（PLGA/HA）支架材料的体外细胞相容性。方法采用贴壁法对兔骨髓基质细胞（BMSCs）进行体外矿化诱导培养，扩增后与实验A组（含5％HA的PLGA／HA），实验B组（含10％HA的PLGA／HA）及对照C组（仅含PLGA）分别进行体外复合培养；并通过定性及定量法检测BMSCs在材料表面的粘附能力、增殖活力，验证细胞材料复合体的成骨活性。比较分析各组之间的差异。结果兔BMSCs在每组材料的表面均能生长，经体外诱导后在支架材料的表面形成钙结节，A、B组细胞的粘附及增殖能力均强于C组（P〈0．05），A、B组之间无差异。结论兔BMSCs与新型多孔PLGA／HA支架材料有良好的相容性。     

雌激素诱导皮肤成纤维细胞向肌成纤维细胞表型转分化的机制

目的探讨雌激素诱导皮肤成纤维细胞向肌成纤维细胞转分化的可能途径和调控机制。方法将人皮肤成纤维细胞分为6组：对照组（A组）、雌激素组（B组）、雌激素＋ICI-182780组（C组）、雌激素＋SB203580组（D组）、雌激素＋PD98059组（E组）和雌激素＋SP600125组（F组）。各组细胞经同步化处理后,直接以雌激素刺激或经上述各激酶抑制剂预处理后再以雌激素刺激。收集细胞,一部分以单细胞逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测α平滑肌肌动蛋白（alpha smooth muscleactin,（2-SMA）阳性表达百分比,另一部分细胞抽提总RNA后采用实时荧光定量RT—PCR检测α—SMA的表达水平变化。结果B组的α—SMA表达水平和阳性百分比与A组比较显著升高（P〈0．01）,而C组和F组与B组比较α—SMA表达水平和阳性百分比升高的作用则被显著抑制（P〈0．05）。结论在雌激素诱导成纤维细胞向肌成纤维细胞的转分化过程中,雌激素G受体及JNK—MAPK信号转导途径起到重要作用。     

微管仿生人工骨对犬骨髓基质细胞生物学行为的影响

[目的]研究不同微管结构仿生人T骨对犬骨髓基质细胞（BMSCs）增殖和分化的影响。[方法]仿生人工骨分为正交结构（A组）和同心结构（B组），以磷酸钙骨水泥（CPC）／重组人骨形成蛋白2（rhBMP-2）（C组）、单纯CPC（D组）为对照组：梯度密度离心法获取犬骨髓单个核细胞，取第3代与人工骨复合培养。通过荧光显微镜、扫描电镜观察细胞在人工骨表面附壁和生长情况；以MTT实验检测各组细胞增殖能力；测定碱性磷酸酶（ALP）检测BMSCs的成骨活性：[结果]细胞在各组人工骨表面黏附、生长，以A、B组数量较多；MTT法检测显示A、B、C组吸光度（A）值大于D组（P〈0．05）、A、B、C组A值相似（P〉0．05）；ALP测定显示ALP活性A、B组〉C组〉D组（P〈0．05），A、B组间差异无统计学意义（P〉0．05）。[结论]微管结构仿生人工骨与犬BMSCs有良好的生物相容性，是BMP的良好缓释载体，可以促进犬骨髓基质细胞向成骨方向分化.     

脱细胞天然支架生物力学性能变化及预处理改善组织相容性的实验研究

目的观察脱细胞猪主动脉瓣的生物力学性能变化,探讨不同预处理改善天然支架组织相容性的效果。方法新鲜猪主动脉瓣经酶加去污剂法去除细胞,力学测试仪检测其最大负荷、最大应力、最大应变和弹性模量的变化,苏木精-伊红（HE）染色、Ⅰ型胶原免疫组化染色和扫描电镜观察其病理形态学变化;将脱细胞瓣膜分别予磷酸缓冲液、多聚赖氨酸和未灭活胎牛血清包被处理,然后种植大鼠主动脉肌成纤维细胞,甲基噻唑基四唑试验检测细胞黏附率,HE染色和扫描电镜观察形态学变化。结果酶加去污剂法能完全脱去瓣膜细胞,基本维持胶原纤维的空间结构,但其最大负荷、最大应力及弹性模量下降,最大应变上升（P〈0．05）;胎牛血清预处理去细胞瓣能显著提高肌成纤维细胞的黏附率,促进细胞生长、分化和增殖,并在瓣膜表面形成连续的细胞层（F值=129．26,P=0．000）。结论酶加去污剂法可较完全去除猪主动脉瓣膜细胞并保持细胞外基质的三维结构,但其生物力学性能有所下降;胎牛血清预处理能改善脱细胞瓣天然支架的细胞黏附、生长和繁殖。     

A型肉毒毒素对兔植皮后皮片收缩相关因素的影响

／目的研究A型肉毒毒素对兔植皮术后皮片收缩的相关因素影响。方法于兔背部沿脊柱两侧对称地制备两排共4个2cm×2cm正方形供皮区,切取全厚皮片,共形成20个创面。每只兔背部随机选取2个创面皮下注射A型肉毒毒素5U,此为A组,共10个创面;其余未注射A型肉毒毒素的创面为B组。术后12d,大体观察切口愈合及植皮成活情况。观察组织的HE染色标本中炎症细胞、成纤维细胞、胶原纤维的变化及免疫组织化学染色标本中α-SMA表达;测量每张图片α-SMA的积分光密度值。结果大体观察A组与B组切口愈合及皮片成活无明显差异。光镜下,观察A组较B组真皮中炎症细胞减少,胶原纤维相对细小、致密度下降,排列较规则,大体走向一致;成纤维细胞数量减少,较分散。A组与B组α-SMA的积分光密度值组间差异具有统计学意义（P=0．003）,A组α-SMA的表达较B组明显减少。结论A型肉毒毒素的注射不影响植皮的正常成活及切口愈合。可通过减少收缩过程中的成纤维细胞的数量、胶原的合成与沉积及炎症细胞的生成,以减少肌成纤维细胞中α-SMA的表达,达到抑制皮片收缩的目的。     

血小板内皮细胞粘附分子-1在机械通气致肺损伤中的作用

目的：探讨血小板内皮细胞粘附分子－1（PECAM－1）在机械通气致肺损伤中的作用。方法：24只普通健康小猪，随机等分为对照组，低潮气量（A组），正常潮气量组（B组）及大潮气量组（C组），持续给予不同潮气量通气，利用免疫组织细胞化学技术，髓过氧化物酶（MPO）测定法及病理组织切片技术，分别检测不同潮气量组通气1d,3d,7d后肺血管内皮细胞表面PECAM－1表达量，血清和肺组织匀浆中MPO活性的变化及肺血管内皮细胞结构及连接的改变。结果：A，B，C组血清，肺组织匀浆MPO活笥较对照组升高（P＜0．05或0．01），A，B，C组肺血管内皮组织表面PECAM－1对照组表达下调（P＜0．05或0．01），内皮细胞及基膜肿胀，内皮细胞间间隙增大，均以7d后明显，尤以A，C组显著。结论：PECAM－1在机械通气致肺损伤中可能发挥重要作用。     

山羊颈椎间盘纤维环成纤维细胞成骨潜能的体外观察

目的 诱导培养椎间盘纤维环成纤维细胞，探讨其成骨潜能，比较重组人骨形成蛋白2（recombinant human bone morphogenetic protein2，rhBMP-2）和肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor α，TNF—α）对其成骨的不同影响。方法利用体外细胞培养技术，建立实验山羊颈椎间盘纤维环成纤维细胞培养体系，根据培养液的不同，分为空白对照组、TNF-α组（加入50U／ml TNF-α）、rhBMP-2组（加入0．1μg／ml rhBMP-2）和TNF—α＋rhBMP-2组（加入50U／ml TNF-α＋0．1μg／ml rhBMP-2），培养3周观察纤维环成纤维细胞在条件培养液诱导下的成骨表型变化、碱性磷酸酶（alkaline phosphatase，ALP）和骨钙素（osteocalcin，OC）等成骨指标变化。结果 各实验组培养液对细胞增殖无明显影响。rhBMP-2组和TNF-α＋rhBMP-2组细胞趋化性生长明显，矿化结节出现，茜素红染色呈深红色钙阳性反应。各实验组ALP活力与空白对照组比较差异均有统计学意义（P〈0．05）。rhBMP-2组与TNF—α＋rhBMP-2组成纤维细胞的OC分泌量与空白对照组比较差异均有统计学意义（P〈0．05），TNF—α组与空白对照组比较差异无统计学意义（P〉0．05）。结论 体外培养的椎问盘纤维环成纤维细胞有成骨潜能，rhBMP-2对纤维环成纤维细胞有明确的诱导成骨作用。     

透明质酸钠对大鼠成肌细胞增殖和分化的影响

目的 研究透明质酸钠对成肌细胞增殖和分化的影响。方法 采用酶消化法将新生SD大鼠骨骼肌组织分离、纯化、原代培养及传代培养；取第3代成肌细胞，分别加入浓度为0．05%、0．1％及0．2％的透明质酸钠溶液作为生长培养基行体外培养为实验A、B及C组，加入常规生长培养基为对照D组，观察各组成肌细胞增殖情况，并采用细胞计数及MTT法绘制生长曲线。另选择0．1%透明质酸钠融合培养基行体外成肌细胞培养，常规融合培养基作对照，观察透明质酸钠对成肌细胞分化功能的影响。结果A、B及C组成肌细胞增殖表现相似，2d时进入对数生长期，4d时均达顶峰；D组成肌细胞于3d时进入对数生长期，5d时细胞数倍增，6d时达顶峰。MTT法所测吸光度（A）值的变化反映成肌细胞的增殖情况，与细胞计数的结果一致，以B组细胞增殖作用最明显，B组A值在2～8d时均高于C、D组（P〈0．05），8d时高于A组（P〈0．05）。0．1％透明质酸钠融合培养基中的成肌细胞融合率较低且上升缓慢，7d时融合率最高，为11．7％；常规融合培养基成肌细胞融合率于6d时达到峰值，约为35．0%。结论 透明质酸钠与成肌细胞的细胞相容性较好，可以作为良好的成肌细胞培养基。