体内、体外产生的小鼠桑葚胚玻璃化冻存后的发育能力

目的　探讨体内、体外产生的小鼠桑葚胚玻璃化冻存后的发育能力。方法体内、体外产生的小鼠桑葚胚分别被含有乙烯甘醇、Ficoll和蔗糖的玻璃化溶液处理后冻存。结果体内产生的小鼠桑葚胚单纯暴露于玻璃化溶液中 ,而未冻存时其发育到胚泡期的百分率为 97 3% (一步法 )和 98 4% (二步法 ) ,与对照组 (98 1% )均无显著差异 (P >0 0 5 ) ,体外产生的小鼠桑葚胚单纯被玻璃化溶液处理后发育到胚泡期的百分率分别为 81 8% (一步法 )、82 4% (二步法 )和 83 6 % (对照组 ) ,三者之间无显著差异 (P >0 0 5 )。但是 ,体外产生的小鼠桑葚胚经玻璃化冻存融解后 ,发育到胚泡期的百分率为 70 6 % (一步法 )、81 3%(二步法 )和 83 6 % (对照组 ) ,一步法玻璃化组明显低于二步法玻璃化组和对照组 (P <0 0 5 ) ,而在体内产生的小鼠桑葚胚玻璃化冻存融解后 ,发育到胚泡期的百分率为 93 1% (一步法 )和 95 7% (二步法 ) ,二者之间无显著差异 (P >0 0 5 )。所有玻璃化冻存的小鼠桑葚胚融解后 ,显微镜下观察均未见透明带破裂。结论体内、体外产生小鼠桑葚胚胎经玻璃化冻存融解后 ,可保持较高的存活率和发育能力 ,二步法玻璃化更适合冻存体外产生的小鼠桑葚胚。     

EDS-40玻璃化冻存小鼠卵母细胞的研究

目的设计研究玻璃化液EDS一40对冻贮小鼠卵母细胞的效果。方法①按随机分组原则，分为实验组和对照组，实验组（a）采用自行设计的EDS一40玻璃化液进行玻璃化冷冻（其配方为：40％乙二醇＋18％葡聚糖），对照组（b）采用国际上已证实效果较好的EFS-40J~璃化溶液进行玻璃化冷冻，对照组（c）采用以PROH为基础的程序冷冻液进行程序冷冻。首先对EDS一40和EFS-40玻璃化溶液，行玻璃化测试；再随机选用小鼠卵母细胞，在室温25℃下分别加入EDS-40和EFS．40玻璃化溶液，玻璃化后装管并迅速投入液氮中。对照组（c）置于程序冷冻仪中进行程序化冷冻。各组均冻存2mo-3mo后，在25℃的水浴中复温后，用培养液反复洗涤后移入培养孔板培养，观察卵母细胞的成活率。将成活的卵母细胞行体外受精，观察其受精率。结果①两种玻璃化溶液能达到玻璃化效果；②EDS一40、EFS一40及对照组冷冻复温后的存活率依次为：79．34％、67．94％、56．34％；⑤EDS一40、EFS-40及对照组冻卵的受精率分别：79．17％、66．29％、51．25％。结论①EDS一40可以用来玻璃化冷冻小鼠卵母细胞；②EDS一40较EFS一40玻璃化溶液冻存小鼠卵母细胞效果更好；③玻璃化技术比传统冷冻法效果更好。     

小鼠胚胎切割及半胚体外培养

目的 为基因型完全相同的同卵双胞脂人类动物模型的建立积累基础资料。方法C57BI/6J雌性小鼠与KM雄性小鼠交配,见栓3．5d采集小鼠晚期桑椹胚和早期囊胚,应用显微手术刀直接分割法进行胚胎二等份分割,所得半胚体外培养,观察其发育情况。结果 晚期桑椹胚分割成功率是91．3％,半胚发育率为57.1％,早期囊胚分割成功率约为89．2％,半旺发育率为71.2％。结论 C57BI/6J小鼠与KM小鼠的F1代胚胎经切割后能在体外良好发育,该资料可用于同卵双胞胎分化发育的研究及人类双胞胎动物模型的制作。     

玻璃化技术冻存小鼠桑椹胚的研究

研究玻璃化技术对小鼠桑椹胚冻贮的影响.按随机分组原则,分为实验组与对照组,对照组为未冻贮直接培养胚胎移植.实验组随机选用NIH小鼠优质桑椹胚,在25℃室温下,加入自行研制的EDS-40玻璃化溶液,玻璃化后装管并迅速投入液氮中,与加入EFS玻璃化溶液及采用缓冻法的DS液冻存2～个3月后,复温进行比较,观察胚胎形态及胚胎发育情况.     

小鼠胚胎成纤维细胞与人胚共培养对胚胎体外发育影响

[目的]评价小鼠胚胎成纤维细胞共培养是否促进d3质量差的人胚胎的囊胚发育。[方法]使用小鼠胚胎成纤维细胞与受精后第3天(d 3)质量差的胚胎共培养,对照组使用Quins囊胚培养液进行序贯培养,观察各阶段囊胚形成率,检测囊胚总细胞数。[结果]d5共培养组12.3％胚胎开始出现早期囊腔化,d 6 7.4％胚胎出现囊腔扩张,4.2％的胚胎d 7孵出。而序贯培养组d 5仅4.2％胚胎开始早期囊腔化,d 6仅1.5％胚胎出现囊腔扩张,d 7仅0.6％的胚胎孵出,表明共培养组囊胚形成率更高,囊胚发育速度快于对照组。此外,共培养组囊胚总细胞数更多,d 6扩张囊胚总细胞数为62.6±13.4,而未扩张囊胚总细胞数26.1±8.9,分别高于序贯培养组。[结论]小鼠胚胎成纤维细胞共培养与 Quins囊胚培养液序贯培养比较,前者更能促进d 3质量差的人胚胎体外发育。     

瘦素对小鼠着床前胚胎发育影响的体外研究

目的　探讨瘦素在体外对小鼠着床前胚胎发育的影响。方法　 1收集小鼠 2 -细胞胚胎 ,在不同剂量瘦素的 CZB培养液中进行体外培养 ,观察胚胎发育情况 ,并进行胚胎移植 ,观察着床率 ;2收集小鼠 2 -细胞胚胎在空白 CZB培养液中体外培养至桑葚胚期 ,再分别置入不同剂量瘦素的 CZB培养液中进行体外培养 ,观察胚胎进一步发育情况。结果　瘦素能提高 2 -细胞胚胎体外发育的质量、发育率和胚胎着床率。当瘦素剂量为 10 ng/ ml时平均胚胎形态学评分 (AES)为 16 .0 8± 0 .37,剂量为 5 0 ng/ ml时 AES为 17.5 7± 0 .4 2 ,两者间差别有统计学意义(P<0 .0 5 )。但剂量进一步增加 ,促进作用不再递增。瘦素对桑葚胚体外进一步发育无显著影响。结论　瘦素参与了小鼠着床前胚胎的发育 ,能提高胚胎发育质量、发育率 ,有利于胚胎的进一步着床。     

重组人白细胞介素-1β对冷冻后小鼠桑椹胚体内外发育率的影响

本试验探讨了重组人白细胞介素－１β（ｒｈＩＬ－１β）对小鼠桑椹胚玻璃化冷冻后体内外发育的影响。结果表明：当ｒｈＩＬ－１β添加浓度为５、５０、５００ＩＵ／ｍｌ时,对解冻后的胚胎经体外培养,发育率（８７％～１００％）与对照组（９４％）相比无显著性差异（Ｐ＞００５）。而浓度提高到１０００ＩＵ／ｍｌ时,胚胎的发育受到抑制。解冻后胚胎在含有５、５０、５００ＩＵ／ｍｌ浓度的ｒｈＩＬ－１β培养液中培养３～４ｈ后移植于假妊娠３ｄ的受体鼠,移植妊娠率（８６％、１００％、８３％）高于对照组（５６％）,特别是５０ＩＵ／ｍｌ处理组与对照组有极显著差异（Ｐ＜００１）。而浓度为１０００ＩＵ／ｍｌ处理组的胚胎移植妊娠率（３０％）低于对照组。试验证明,添加浓度为５～５００ＩＵ／ｍｌｒｈＩＬ－１β的培养液,对解冻后胚胎的体外发育率无影响,而且能够显著提高移植妊娠率。     

乙二醇为主体的玻璃化溶液对小鼠桑椹胚的超低温保存

本试验系统地研究了以低毒性的乙二醇为主体,添加葡聚糖和海藻配制成的玻璃化溶液（EDT20,EDT30及EDT40）,在室温（20 ℃或25 ℃）下对小鼠体内受精的桑椹胚进行玻璃化冷冻保存。毒性试验表明,30%葡聚糖溶液（D）,0.5mol/L海藻糖溶液（T）,以及两种物质的混合液即DT溶液,对胚胎均无化学毒性作用,乙二醇是化学毒性的主要来源。且随着乙二醇浓度的增加和平衡时间的延长,对胚胎的化学毒性也增大。小鼠桑椹胚的玻璃化冷冻试验中,20 ℃室温下胚胎冷冻效果好于25 ℃,但差异无显著意义（P>0.05）。在20℃室温下,胚胎于EDT30中平衡1 min,后直接投入液氮中一步法冷冻后胚胎体外发育率、移植妊娠率和产仔率分别为94.00%、45.00%、38.00%,与对照组差异均无显著意义（P>0.05）。若将胚胎在10%EG中平衡5 min,再移入EDT30中平衡30 s二步法冷冻效果最佳,解冻后囊胚发育率、移植妊娠率和产仔率分别为96.00%、57.00%、52.00%,与对照组差异均无显著意义(P>0.05)。     

槲皮素对小鼠1-细胞胚胎体外发育能力的影响

目的 为完善小鼠早期胚胎体外培养体系,了解槲皮素对小鼠1-细胞胚胎体外发育的影响.方法 以CZB为基础培养液,添加不同浓度(500、50、5、1、0.5、0.2、0.1 μm)的槲皮素作为试验组,添加等量二甲基亚砜(DMSO)作为对照组,观察不同浓度槲皮素对胚胎发育到囊胚各阶段的影响.结果 当槲皮素浓度超过50μm时,对胚胎发育有毒性效应;0.1～1 μm浓度槲皮素对胚胎发育有促进作用,特别是0.5 μm槲皮素能明显提高胚胎的囊胚形成率.结论 0.5 μm槲皮素能促进小鼠早期胚胎的体外发育.     

小鼠电激活孤雌胚胎早期体内外发育能力的比较

目的 探讨小鼠电激活孤雌胚胎的早期体内、外发育能力.方法 利用不同电脉冲参数和激活液对小鼠卵母细胞进行活化,观察激活后的小鼠孤雌胚体外发育状况和移植后的发育能力.结果 非电解质激活液优于电解质液,脉冲强度、脉冲宽度和脉冲次数3个参数各自处于某一范围内时,他们之间存在某种相关性,降低其中1个参数可通过升高另外2个参数得到补偿,经筛选较适宜的电脉冲参数为:1.0 kV/cm、40μs、2p,或者1.5kV/cm、30/μs、2p,分别为74.65％和71.19％,体外囊胚发育率分别为43.40％和47.62％.电激活孤雌胚体外发育时序比正常胚胎慢,但囊胚细胞数与对照组差异不显著.它们经胚胎移植后,其中的一部分能够着床,但着床率仅为3.6％,极显著低于对照组(67％,P＜0.01).结论 电刺激能够较好地模拟正常受精过程激活小鼠卵母细胞,但激活后的多数小鼠孤雌胚胎着床能力较低,不能够顺利着床.     

乙醇对小鼠胚胎体外发育影响的研究

用含不同浓度乙醇的 Whitten氏培养液对小鼠 2细胞、4细胞、8细胞和桑椹期胚胎分别进行体外培养 ,研究乙醇对小鼠不同发育时期胚胎体外发育的影响。首先利用含 0 .0 1%、0 .5 %、1.0 %、1.5 %、2 .0 %、3.0 %、5 .0 %、10 .0 %乙醇的 Whitten氏培养液对 2细胞胚胎进行培养 ,观察研究小鼠 2细胞胚胎对培养液中乙醇浓度的耐受极限。然后再用含 1%和 3%乙醇的 Whit-ten氏培养液分别对小鼠 2细胞、4细胞、8细胞和桑椹期胚胎进行培养。结果 :含低浓度乙醇 (1%以下 )的培养液对外细胞胚胎和桑椹胚的囊胚形成有促进作用 ,而在 2细胞和 4细胞胚胎…     

乙醇对小鼠胚胎体外发育影响的研究

用含不同浓度乙醇的Whitten氏培养液对小鼠2细胞、4细胞、8细胞和桑葚期胚胎分别进行体外培养，研究乙醇对小鼠不同发育时期胚胎体外发育的影响。首先利用含0、0．1％、0．5％、1．0％、1．5％、2．0％、3．0％、5．0％、10．0％乙醇的Whitten氏培养液对2细胞胚胎进行培养，观察研究小鼠2细胞胚胎对培养液中乙醇浓度的耐受极限。然后再用含1％和3％乙醇的Whitten氏培养液分别对小鼠2细胞、4细胞、8细胞和桑葚期胚胎进行培养。结果：含低浓度乙醇（1％以下）的培养液对8细胞胚胎和桑葚胚的囊胚形成有促进作用，而在2细胞和4细胞胚胎中则影响不明显。含高浓度乙醇（≥3％）的培养液则对各期胚胎有不同程度的抑制作用，但随着胚胎发育其对乙醇的耐受力将逐渐增强。     

氨基酸浓度对昆明小鼠胚胎体外发育的影响

目的探讨培养液中氨基酸成分对植入前昆明小白鼠胚胎发育的影响,摸索植入前胚胎体外培养氨基酸的最佳浓度.方法从超排昆明小鼠输卵管中取出的630枚受精卵均分为7组,分别在经添加不同浓度Eagle‘s氨基酸的去牛血清白蛋白KSOM培养液(mKSOM、mKSOM 1/16AA、mKSOM 1/8AA、mKSOM 1/4AA、mKSOM 1/2AA、mKSOM AA、mKSOM 2AA)中培养,对比观察各组胚胎体外发育的过程.用卡方检验分析添加各浓度氨基酸的培养液培养效率的差别,并将8细胞发育率和囊胚发育率分别与相应的氨基酸浓度进行曲线拟合分析.结果与未添加氨基酸组对比,添加氨基酸组胚胎发育率高,8细胞胚和囊胚的形成率与培养液中氨基酸的浓度关系均符合三次模型,在氨基酸为 1/2浓度时8细胞胚和囊胚的形成率均达到最高.结论氨基酸对胚胎的体外发育有促进作用,但含有高浓度氨基酸的培养液培养效果反而有所下降,可能是由于高浓度的氨基酸影响胚胎的代谢和渗透压的改变,且氨基酸分解及胚胎代谢所产生的铵对胚胎有毒性作用.     

单胚胎玻璃化冷冻对小鼠胚胎体外发育的影响

目的:比较单胚胎玻璃化冷冻与慢速冷冻对小鼠分裂期胚胎损伤和体外发育的影响,探讨使用玻璃化冷冻保存大量胚胎的可行性。方法:选择8-细胞胚胎随机进行改良的玻璃化和慢速冷冻,复苏后培养至囊胚孵出,计数胚胎复苏率、卵裂球死亡率、囊胚形成率、细胞团数、孵出率,并进行组间比较分析。结果:玻璃化冷冻组复苏率、卵裂球死亡率、囊胚形成率、孵出率、细胞团数分别为100%、12.7%、75.7%、66.4%、112,慢速冷冻组分别为87.1%、31.0%、35.5%、58.7%、78,除囊胚孵出率其余各指标两组间差异均具有统计学意义。结论:单胚胎玻璃化法冻存小鼠分裂期胚胎复苏后细胞成活率高,结构完整,更好的保持了胚胎的发育潜能。     

冻融胚胎体外培养至囊胚移植后出生婴儿1例报道

常规体外受精于第3天将胚胎冷冻保存,但冻胚经融解后受多种因素的影响着床能力较低,经体外培养2～3d可观察其发育潜能,将形成囊胚者进行移植,以提高着床的机率,是目前冻胚移植的又一新点[1]。我中心冻融胚胎体外培养至囊胚移植后出生婴儿1例,现报告如下。1病例介绍患者,女,29岁,主因:"人流术后8年,婚后未避孕不     

胰岛素对ICR小鼠胚胎体外发育的影响

目的研究ICR小鼠胚胎体外培养时,添加胰岛素的作用、浓度及所需阶段．方法用添加不同浓度胰岛素的mKSOM培养基对小鼠胚胎进行体外培养及选择最适浓度对不同阶段鼠胚进行体外培养,观察囊胚发育率和囊胚细胞数的变化．结果所有添加胰岛素的浓度组,囊胚发育率均高于对照组,其中0．005μg／mL和0．05μg／mL浓度组囊胚细胞数显著高于对照组和其他各浓度组．2-细胞至4-细胞、4-细胞至桑椹胚前添加胰岛素囊胚率显著高于对照组和其他实验组．结论在ICR小鼠胚胎体外培养时添加胰岛素能够促进胚胎发育;胰岛素浓度增至μg／mL对在ICR小鼠胚胎无毒性作用;在ICR小鼠胚胎体外培养的适宜胰岛素浓度为0．005μG／mL和0．05μG／mL;2-细胞至4-细胞、4-细胞至桑椹胚前添加胰岛素更加重要．     

猪体细胞核移植胚的体外发育及其影响因素

以卵丘细胞为核供细胞组成重构胚 ,卵裂率达以5 6 .7% ,发育至桑椹胚达 11.7%、孵化囊胚率为 6 .7% ,显著高于成纤维细胞重构胚 (P<0 .0 5 )。作者还研究了卵母细胞的采集方法、激活程序和卵龄对卵丘细胞核移植重构胚体外发育的影响 ;以血清饥饿法将卵丘细胞诱导至 G0或 G1期 ,抽吸法 /解剖法采集卵母细胞 ,体外培养 33或 4 4 h,将卵丘细胞置于去核卵母细胞的卵周隙中 ,重构胚以钙离子载体 A2 3817或电脉冲结合6 - DMAP激活处理 ,体外培养 6 d,结果表明 ,卵母细胞采集方法、激活液中细胞松弛素 (CB)、激活程序并不影响重构胚的发育 (以…     

ERα特异性抑制剂对KM小鼠植入前胚体外发育的影响

目的探讨ERα在KM小鼠植入前胚体外发育中的作用。方法以空白M16培养液为对照组,观察不同浓度的ER抑制剂(ICI182780)、ERα特异性抑制剂(MPP)、ERβ特异性抑制剂(PHTPP)和ERα特异性抗体对KM小鼠1-细胞胚体外发育至4-细胞胚和囊胚的影响。结果与M16对照组比较,0.5和1μmol/L的ICI182780、10μmol/L的MPP明显降低4-细胞胚的发育率,导致囊胚发育失败(P<0.01);25和50μmol/L的MPP、1μg/m L的ERα特异性抗体将1-细胞胚阻滞在2-细胞阶段,并且50μmol/L的MPP对细胞有毒性作用(P<0.01);0.5μg/m L的ERα特异性抗体使细胞丧失发育至囊胚的能力(P<0.01);各浓度的PHTPP均未被观察到有上述作用(P>0.05)。结论 ER抑制剂、ERα特异性抑制剂和ERα特异性抗体均能抑制小鼠1-细胞胚的体外发育。