一种大批量制备眼镜蛇毒金属蛋白酶natrahagin的方法

目的　建立从中华眼镜蛇毒 (Najanajaatra)中大批量分离、纯化natrahagin的方法。 方法与结果 10 g眼镜蛇毒经超滤去除小分子组分后 ,再经Heparin -SehparoseCL - 6B亲和层析及SephadexG - 15 0分子筛层析 ,获得 91mgnatrahagin ,产率为0 91% ;SDS -PAGE显示natrahagin呈单一区带 ,相对分子质量约 4710 0 ,并具有水解纤维蛋白原和血小板膜糖蛋白Ib(PlateletmembraneglycoproteinIb ,GPIb)。 结论此实验成功建立的从中华眼镜蛇毒中大批量制备natrahagin的方法具有高效、简便的特点。     

眼镜蛇毒抗肿瘤作用的研究进展

近年来,人们对蛇毒成分的抗肿瘤作用进行了较多的研究,其中眼镜蛇毒的抑癌作用引起了很大的关注［１］．１眼镜蛇毒的抗肿瘤作用１．１体外实验体外实验分两个层次：一是直接使用粗毒,二是使用提纯的蛇毒成分。我国学者赵蓉等［２］应用９种蛇毒（眼睛王蛇、眼镜蛇、金环蛇、银环蛇、青环海蛇、蝮蛇、尖吻蛇、竹叶青及圆斑蝰）的粗毒对多种人类实体瘤细胞株,包括子宫颈癌细胞株（Ｈｅｌａ）、鼻咽癌细胞株（ＣＮＥ）、肝癌细胞株（ＳＭＣ）、胃癌细胞株（ＭＧＣ８０－３）等进行了直接毒性作用实验,结果表明眼镜蛇毒对肿瘤细胞的杀伤作…     

蛇毒金属蛋白酶抑制血小板聚集的研究进展

金属蛋白酶广泛存在于细菌直到哺乳动物体内,需二价阳离子如锌、钙来维持其酶活性和结构的完整性。它是一组具有许多共同生化性质的可降解细胞外基质的关键酶。这些细胞外基质包括各种胶原、蛋白多糖和糖蛋白。细胞外基质在维持正常组织结构与功能及细胞生长、分化过程中起到非常重要的作用。它处于不断代谢更新、降解、重塑的动态平衡中。这种动态平衡的失调与体内许多病理过程如肝硬化、动脉粥样硬化、肾脏疾病和肿瘤浸润复发等密切相关。早在30年前就发     

中国眼镜蛇毒对血小板聚集的影响

中国常见八种蛇毒包括眼镜蛇毒;银环蛇毒;金环蛇毒;眼镜王蛇毒;蝰蛇毒;蝮蛇毒;竹叶青蛇毒;五步蛇毒。在体外前四种蛇毒通过ADP的诱导,抑制家兔血小板的聚集,后四个毒促进家兔血小板聚集。用CM-Sephaex C 50柱层析3.0×65cm。眼镜蛇毒分为9个组份。组份Ⅰ和组份Ⅱ有明显抑制血小板聚集作用。组份I和组份Ⅱ经聚丙烯酰胺凝胶园盘电泳,鉴定为一区带。     

蛇毒金属蛋白酶及去整合素的结构与功能

蛇毒金属蛋白酶是蛇毒主要功能性蛋白质之一,它直接作用于局部组织的毛细血管,影响毛细血管内皮细胞与基底膜之间的相互作用;蛇毒去整合素与蛇毒金属蛋白酶来自共同的前金属蛋白酶原,这些酶原都含有4个共同的结构域:信号肽、前导肽、蛋白酶结构域、间隔区.去整合素因能特异性识别整合素而得名,蛇毒去整合素为低分子量蛋白质,含有多个Cys残基,它能阻断整合素与其配体的结合,抑制整合素介导的细胞与细胞、细胞与细胞外基质之间的黏附反应,在血小板聚集、感染、炎症反应、肿瘤转移等病理过程中发挥重要作用.     

眼镜蛇毒组份M对血液流变学的影响

静脉注射眼镜蛇毒M组份（0．07mg／kg和0．1mg／kg）可使家兔和狗的全血粘度和血浆粘度降低，对家兔红细胞压积和红细胞电泳时间无影响。M组份在体内外均能抑制ADP和花生四烯酸所诱导的血小板聚集。     

眼镜蛇毒M组份对实验性血栓形成的影响

眼镜蛇毒M组份对家兔实验性血栓形成有剂量(或浓度)依赖性的抑制作用,静脉注射0.05～0.2mg/kg使家兔颈动——静脉旁路血栓湿重减轻,维持时间在1小时以上,静脉注射0.3mg/kg时,抑制率为59.19％,M组份亦可使Chandler管中血栓湿重、干重减轻。     

中国眼镜蛇毒蛋白酶natrahagin水解血小板膜糖蛋白Ib和抑？…

目的：观察从中国眼镜蛇（Ｎａｊａ ｎａｊａ ａｔｒａ）毒中纯化的蛋白酶ｎａｔｒａｈａｇｉｎ水解血小板膜糖蛋白Ｉｂ（ｐｌａｔｅｌｅｔ ｍｅｍｂｒａｎｅ ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ Ｉｂ,ＧＰＩｂ）和抑制血小板聚集的作用。方法：通过ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）检测以及凝胶图像光密度分析系统ｎａｔｒａｈａｇｉｎ对血小板膜糖蛋白的水解作用。比浊法测定血小板聚集率。结果：Ｎａｔｒａｈａｇｉｎ     

眼镜蛇毒的镇痛、消炎作用

本文用小鼠扭体法、热板法、甲醛法等三种致痛模型测试并证实眼镜蛇毒有镇痛作用,存在良好的量效关系,作用较吗啡持久。小鼠连续五天给药(0.4mg/kg ip),镇痛作用不产生耐受,与吗啡亦无交叉耐受性,其镇痛作用不被纳络酮拮抗。皮下注射0.4mg/kg对大鼠足跖角叉菜或鲜蛋清炎症模型有明显消肿作用。本文提示眼镜蛇毒有镇痛和消炎作用,其镇痛机制可能与吗啡不同,属另一类非麻醉性镇痛药。     

中华眼镜蛇毒心脏毒素—13对猪离体冠脉的作用

探讨中华眼镜蛇毒中分离纯化获得的心脏毒素－１３对离体冠脉血管平滑肌的作用和机制。用离子交换和凝胶过滤法从中华眼镜蛇毒中分离纯化出心脏毒素。以不同浓度ＣＴＸ－１３分别作用于猪冠脉环，观察记录其所诱发的血管环收缩。普萘洛尔，哌唑嗪和尼群地平分别与冠脉环预作用５ｍｉｎ，再分别给予不同浓度的ＣＴＸ－３，观察记录其收缩强度的变化。     

蛇毒金属蛋白酶及去整合素的结构与功能

金属蛋白酶和去整合素是大多蛇毒的重要组成成分,大分子的金属蛋白酶简称MDC酶,其由N末端金属蛋白酶结构域、类去整合素结构域和一个C末端的富半胱氨酸结构域组成;去整合素是小分子量的含有RGD序列并富含半胱氨酸的非酶多肽。 MDC酶的去整合素结构域虽然不具有RGD模体,但其与去整合素有很高程度的结构同源性,并能识别细胞表面受体整合素、抑制整合素依赖的细胞之间的相互作用。 ADAM家族蛋白是发现与哺乳动物细胞的膜结合MDC酶,其与可溶性蛇毒MDC酶密切相关。这组膜锚定哺乳动物AD-AM家族蛋白在结构上同样具有一个去整合素结构域和一个金属蛋白酶结构域（ A Disintegrin And Metallopro-teinase domains ）,故简称为ADAM家族蛋白。 ADAM家族参与细胞表面分子的脱落,一些蛇毒MDC酶也有这一属性。     

基质金属蛋白酶及金属蛋白酶组织抑制剂在肺纤维化中的变化

观察基质金属蛋白酶（MMPs）及金属蛋白酶组织抑制剂（TIMPs,MMPs特异性抑制剂）在鼠肺纤维化中的变化,以探讨MMPs与肺纤维之间的关系。采用气管内灌小博莱霉方法复制鼠肺纤维化模型,并进行以下研究;①HE染色、Masson染色,②羟脯氨酸含量测定,③MMP-2,TIMPs免疫组织化学分析,④MMPs蛋白电泳,⑤肺组织溶胶原活性测定。结果显示：实验组大鼠在肺泡炎阶段MMP-2的蛋白表达增强、活性增加,TIMPs的蛋白表达相对减弱,肺组织溶胶原活性升高;在肺纤维化阶段,MMP-2较炎症时减弱,而TIMPs增强,肺组织溶胶原活性下降。提示MMPs/TIMPs失衡影响肺纤维化的形成与发展。     

眼镜蛇毒神经生长因子对成年猫坐骨神经损伤后的作用

目的　探讨从眼镜蛇毒分离纯化出的神经生长因子 (nerve growth factor,NGF)对成年猫坐骨神经损伤后的影响。方法　制成成年猫坐骨神经损伤模型 ,损伤局部注射蛇毒 NGF 2μg/ (kg· d) ,分别治疗 10 d和 30d,并与对照组 (损伤坐骨神经 ,不给药物 )比较。结果　术后 10 d,对照组术侧远端神经纤维数量比治疗组明显减少(P<0 .0 1) ,治疗组术侧足底刺激出现早 ,肢体活动恢复快。术后 30 d,治疗组术侧远端神经纤维大量再生 ,再生神经纤维数量已明显超过对照组和术后 10 d组水平 (P<0 .0 1) ,但结构紊乱 ,轴突和郎氏结消失。术侧肢体在连续注射 NGF 16 d左右出现足底刺激反应消失 ,肢体瘫痪等改变。结论　眼镜蛇毒 NGF在神经损伤早期应用能减轻神经纤维发生的溃变 ,促进受损神经的再生与功能恢复 ;而损伤局部长时间注射蛇毒 NGF则会导致神经纤维增生过度 ,丧失传导功能     

眼镜蛇毒对油酸型呼吸窘迫综合征的保护作用

实验组小白鼠先从腹腔注射眼镜蛇毒(200μg/kg),然后从尾静脉注射油酸(0.07ml/kg),对照组先从腹腔注射生理盐水(200μl/kg),再从尾静脉注入同剂量油酸。结果表明,实验组的肺湿重、肺干重、肺系数及肺含水量等指标均比对照组显著下降。增加静脉注射的油酸剂量至0.1ml/k8,重复实验,结果相同。说明适量的眼镜蛇毒可缓解油酸型呼吸窘迫综合征(RDS)。     

中华眼镜蛇毒活性组分抑制内皮细胞增殖及其机制探讨

目的 观察中华眼镜蛇毒活性组分(China cobra venom active factor,CCVAF)对新生牛肺主动脉血管内皮细胞增殖的抑制作用,并探讨其抑制细胞增殖的胞内机制.方法 采用胰酶消化法体外培养新生牛肺主动脉血管内皮细胞,将不同浓度的CCVAF与细胞在高血清、VEGF条件下共孵育,应用MTT法检测细胞增殖,免疫组化方法检测各组c-myc,c-fos,PCNA表达.结果 CCVAF终浓度为1.25,2.5,5.0μg/ml,对常规培养的细胞增殖抑制率分别为22%,54%,83%,对VEGF诱导的体外培养的细胞增殖抑制率分别为18%,39%,72%,对高血清诱导的细胞增殖抑制率分别为20%,44%,79%;CCVAF终浓度为2.5μg/ml,c-myc,c-fos及PCNA阳性细胞标记指数比对照组分别降低89.7%,47.1%及88.O%.结论 CCVAF可抑制常规培养的、VEGF及高血清诱导的新生牛肺主动脉血管内皮细胞增殖,这种抑制作用呈剂量依赖性;抑制胞内c-myc,c-fos,PCNA的表达可能是其抑制细胞增殖的机制之一.CCVAF抑制血管内皮细胞增殖作用可能在抗血管生成方面具有重要意义.     

中华眼镜蛇毒组分抗白血病作用的实验及初步临床应用研究

目的：研究眼镜蛇组分对白血病细胞的直接作用及临床疗效。方法：应用ＭＴＴ法检测眼镜 毒组分对ＨＬ６０等９株白血病细胞系的毒性作用及量效关系;初步观察静脉滴注眼镜蛇毒组分治疗８例恶性血液病患者的效果。结果：眼镜蛇毒组分对９株人白血病细胞系均有明显的抑制作用,ＩＣ５０为０．００６～４．４０μｇ／ｍｌ,且呈较好的量效关系（ｒ为０．６６～０．９９;Ｐ〈０．２～０．００１）。初步的临床观察结果显示,一疗程后８     

眼镜蛇毒对大鼠丘脑腹内侧核c-jun表达的影响

目的:探讨眼镜蛇毒对大鼠丘脑腹内侧核(VM)c-jun表达的影响。方法:将18只SD大鼠随机分为正常对照组、生理盐水组、眼镜蛇毒组,每组6只。采用免疫组织化学方法观察VM的c-jun表达。结果:与正常对照组和生理盐水组相比,眼镜蛇毒组大鼠VM的c-jun表达增加(P<0.01)。结论:眼镜蛇毒对大鼠VM的c-jun表达有上调作用。     

眼镜蛇毒对大鼠丘脑网状核c-jun表达的影响

目的:观察眼镜蛇毒对大鼠丘脑网状核(thalamicreticular nucleus,TRN)c-jun表达的影响。方法:大鼠随机分为正常组、生理盐水组和眼镜蛇毒组,每组各6只。灌注固定、取脑包埋、石蜡切片。运用免疫组织化学染色法,观察并比较c-jun在各组大鼠TRN的分布情况。结果:眼睛蛇毒组大鼠TRN c-jun阳性细胞数及表达强度较正常组、生理盐水组均显著增高(P<0.01)。结论:眼镜蛇毒对大鼠TRN c-jun的表达有上调作用。     

中华眼镜蛇毒组份M抑制血小板聚集作用机制初探

探讨中华眼镜蛇毒组份Ｍ抑制血小板聚集作用机制;方法：运用卵磷脂法、剩余可凝纤维蛋白原法、纤维蛋白平板法等分别测定了中华眼镜蛇毒组份Ｍ中磷脂酶Ａ_２（ＰＬＡ_２）,纤维蛋白原溶解酶及纤维蛋白溶解等与血小板聚集相关的酶活性,并运用十二烷基磺酸钠一聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）分析了组份Ｍ对血小板内细胞骨架蛋白的影响;结果：组份 Ｍ不含 ＰＬＡ_２活性,无纤维蛋白（原）溶解酶活性,亦无ＡＤＰ酶和 ５’－核苷酸酶活性,不影响正常人血浆乳酸脱氢酶的含量,但对ＡＤＰ诱导的血小板细胞内肌动蛋白微丝聚合物的形成有明显抑制作用;结论：中华眼镜蛇毒组份Ｍ对血小板聚集所依赖的血小板内细胞骨架系统的功能有抑制作用。     

基质金属蛋白酶与组织金属蛋白酶抑制剂及其在肿瘤临床的应用前景

伴有细胞外基质破坏的肿瘤细胞浸润是肿瘤转移这一复杂机制的最主要过程。在基底膜和结缔组织等胞外基质破坏过程中 ,具有基质特异性的基质金属蛋白酶和组织金属蛋白酶起重要作用。因此 ,通过抑制金属蛋白酶的内在活性或合成抑制剂来达到抑制肿瘤转移的目的 ,已成为肿瘤临床诊断和治疗研究的重要内容。本文对基质金属蛋白酶和组织金属蛋白酶抑制剂的最新研究进展做一综述。1　基质金属蛋白酶细胞外基质 (extracellular m atrix,ECM)代谢的许多生物学过程同基质金属蛋白酶 (matrix metalloproteinases,MMPs)的表达密切相关 [1 ]。MMPs是…