醛糖还原酶抑制剂对糖尿病大鼠肾脏超微结构的影响

研究醛糖还原酶抑制剂防治糖尿病肾脏病变的意义。利用糖尿病ＳＤ大鼠动物模型观察了醛糖还原酶抑制剂ｓｏｒｂｉｎｉｌ对大鼠尿蛋白和肾脏超微结构的影响。结果：糖尿病鼠用ｓｏｒｂｉｎｉｌ治疗后尿蛋白呈下降趋势，肾小球基底膜厚度及系膜基质堆积明显减少。结论： ｓｏｒｂｉｎｉｌ对肾脏病变有明显疗效，使用醛糖还原酶抑制剂防治糖尿病肾病将是一条有希望的新路。     

褪黑激素对巨噬细胞呼吸爆发和iNOS基因表达的作用

目的：研究褪黑激素对巨噬细胞呼吸爆发和iNOS基因表达的作用，并探讨其作用的机制。方法：本项研究以佛波酯刺激巨噬细胞产生呼吸爆发，以脂多糖／γ—干扰素诱导巨噬细胞表达可诱导型一氧化氮合酶，应用化学发光技术以及ESR自旋捕集技术研究了褪黑激素对巨噬细胞产生内源性超氧阴离子、一氧化氮的作用。结果：研究结果表明褪黑激素能够清除巨噬细胞呼吸爆发产生的超氧阴离子自由基、抑制可诱导型一氧化氮合酶基因表达、减少内源性一氧化氮的生成，而这一抑制作用是通过NF—κB信号通路实现的。结论：褪黑激素对巨噬细胞的活化具有显的调控作用。     

醛糖还原酶(AR)基因对大鼠肾系膜细胞的转染及AR抑制剂对其增殖的影响

目的观察醛糖还原酶(AR)基因转染及AR抑制剂(ARI)对体外培养大鼠肾系膜细胞(MsC)增殖的影响。方法应用Westernblot检测转基因MsC及PDGF作用MsC后AR的表达。四唑蓝比色法(MTT法)检测细胞增殖,流式细胞术分析细胞周期,对比大鼠正常MsC和转基因MsC的生长情况,并观察ARI———Sorbinil和Zopolrestat对血小板源性生长因子(PDGF)和小牛血清(NBS)促细胞增殖作用的影响。结果①Westernblot鉴定转基因MsCAR表达较正常MsC明显增高;②转染组较正常组生长速度快;③PDGF作用MsC后可上调AR的表达;④PDGF和10%NBS均可显著刺激两组细胞的增殖,ARI可部分抑制PDGF对正常组和转染组的促增殖作用,对10%NBS,ARI可部分抑制其对转染组的促增殖作用,而对正常组无显著影响,抑制作用呈剂量依赖性。结论AR可能参与了MsC在病理状况下的过度增殖过程。     

醛糖还原酶的分离纯化和性质分析

利用离心、盐析及ＤＥＡＥ－纤维素、羟基磷灰石、葡聚糖－Ｇ１００多步层析法将牛睾丸ＡＲ分离纯化，醛糖还原酶（ａｌｄｏｓｅｒｅｄｕｃｔａｓｅ，ＡＲ），并利用体外酶动力学方法测定其底物特异性，为寻找有效的醛糖还原酶抑制剂提供线索。结果：纯化的酶经ＳＤＳ－ｐＡＧＥ电泳鉴定示一单一蛋白条带，牛睾丸ＡＲＭｒ约为（４００００±１０００）ｕ，ＡＲ底物特异性，按１／ｋｍ大小依次排列为：Ｐ－硝基苯醛，ＤＬ－甘油醛，Ｄ－葡萄糖醛酸，Ｄ－木糖，Ｄ－半乳糖，Ｄ－葡萄糖。     

银杏叶提取物对胶质瘤细胞NF-κB表达和NO生成的调控

目的 研究银杏叶提取物(EGb761)对C6胶质瘤细胞核转录因子-κB(NF-κB)表达和可诱导型一氧化氮合酶(iNOs)、一氧化氮(NO)生成的影响。方法 以脂多糖(LPS)和佛波酯(PMA)诱导体外培养的C6胶质瘤细胞表达可诱导型一氧化氮合酶、产生大量NO，应用激光共聚焦成像系统和NO荧光探针监测细胞内NO浓度变化，逆转录基因扩增技术和蛋白质印迹技术检测EGb761对C6胶质瘤细胞中iNOs基因表达的影响，并探讨这一调控作用的分子机制。结果 EGb761能明显降低C6胶质瘤细胞中iNOs mRNA和蛋白的表达、减少NO的生成，抑制IκB-α的降解和阻止p65／RelA进入细胞核。结论 结果提示EGb761可通过NF-κB信号通路对C6胶质瘤细胞iNOs基因表达和NO的生成进行调控。     

醛糖还原酶抑制剂对屋尘螨诱导的人支气管 上皮细胞炎症因子的影响

目的 测定醛糖还原酶抑制剂对屋尘螨诱导的人支气管上皮细胞NF-κB 及细胞因子表达水平 的影响,探索气道炎症的新干预措施。方法 将人支气管上皮细胞分为空白对照组（空白对照）、屋尘螨组（屋 尘螨）、屋尘螨+Zopol 组[ 屋尘螨+ 醛糖还原酶抑制剂唑泊司他（Zopol）] 及Zopol 组（醛糖还原酶抑制剂 Zopol）,检测各组细胞NF-κB/p65 mRNA 的相对表达量、NF-κB/p65 核蛋白、上清液中IL-29 及IL-6 的蛋白含量。结果 屋尘螨+Zopol 组经屋尘螨及醛糖还原酶抑制剂共同作用24 h 后,人支气管上皮细胞的 NF-κB/p65 mRNA、NF-κB/p65 核蛋白相对表达量、IL-6 及IL-29 蛋白水平均低于屋尘螨组（P <0.05）, 但高于空白对照组（P <0.05）,Zopol 组与空白对照组之间,差异无统计学意义（P >0.05）。结论 醛糖还原 酶抑制剂Zopol 调控了NF-κB 介导的炎症信号,减少人支气管上皮细胞炎症因子的表达。     

大鼠重症急性胰腺炎胰腺组织中NO生成及iNOS表达的变化

目的探讨重症急性胰腺炎（SAP）时胰腺组织一氧化氮（NO）和诱导型一氧化氮合酶（iNOS）表达的变化。方法 36只健康雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为2组。SAP组（n=18）以逆行胰胆管内加压注射5%牛磺胆酸钠的方法建立SAP模型;对照组（n=18）以同法注射等剂量生理盐水。造模后6、12、24 h每组随机处死大鼠6只,检测血淀粉酶、胰腺组织病理组织学改变、胰腺组织NO水平及iNOS活性以及腺腺组织iNOS mRNA表达的变化。结果与对照组相比,SAP组在6 h时间点上,胰腺组织中NO水平、iNOS活性明显升高（P〈0.01）,免疫组化和RT-PCR结果也显示iNOS蛋白及iNOS mRNA表达增高（P〈0.01）;随时间延长,在12 h和24 h各指标到达高峰,24 h仍维持在较高水平（P〈0.01）。结论在SAP时,随着时间的延长,iNOS表达增高,从而产生高浓度的NO,加重胰腺组织的损伤。     

醛糖还原酶抑制剂对糖尿病SD大鼠神经传导速度的影响

利用糖尿病ＳＤ大鼠动物模型观察了３种醛糖还原酶抑制剂（ａｌｄｏｓｅｒｅｄｕｃｔａｓｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ，ＡＲＩｓ）Ｓｏｒｂｉｎｉｌ、黄岑甙、黄连素对大鼠神经传导过度的影响。结果发现糖尿病鼠用上述３种ＡＲＩｓ治疗后神经传导速度明显改善（糖尿病鼠为３８．４±３．５１ｍ／ｓ，３种ＡＲＩｓ分别为４５．６±５．５５ｍ／ｓ，４５．８±５．０２ｍ／ｓ和４２．０±３．７４ｍ／ｓ），结果提示ＡＲＩｓ对神经病变有效，使用ＡＲＩｓ防治糖尿病神经病变将是一条有希望的新路。     

糖皮质激素对机械通气大鼠肺组织iNOS、NO表达的影响

目的通过观察糖皮质激素对机械通气大鼠肺组织诱导型一氧化氮合酶(iNOS)及一氧化氮(NO)表达的影响,探讨糖皮质激素对呼吸机所致肺损伤(ventilator induced lung injury,VILI)的干预作用。方法 24只雄性Wistar大鼠随机分为对照组、机械通气组、地塞米松(DXM)干预组。用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测肺组织iNOS mRNA表达,用免疫组织化学染色法检测肺组织iNOS蛋白表达,用硝酸还原酶法测定肺组织和血浆NO含量。结果机械通气组和DXM干预组大鼠肺组织iNOS mRNA及其蛋白表达水平,以及血浆和肺组织NO含量均明显高于对照组(P<0.01);DXM干预组上述指标与机械通气组比较均明显降低(P<0.01)。结论糖皮质激素可通过抑制肺组织iNOS的表达,减少NO的生成,对机械通气大鼠肺组织具有保护作用。     

小叶金露梅对醛糖还原酶和α-葡萄糖苷酶的抑制作用

目的对小叶金露梅不同提取部位的α-葡萄糖苷酶(AG)和醛糖还原酶(AR)抑制活性进行研究,找寻天然的AG和AR抑制剂。方法体外实验通过α-葡萄糖苷酶抑制剂和醛糖还原酶抑制剂筛选模型,对小叶金露梅乙酸乙酯部位(总黄酮)、石油醚部位和水层部位提取物的AG和AR抑制活性进行测定;体内实验进行小叶金露梅总黄酮对小鼠糖耐量的测定。结果小叶金露梅总黄酮部位对AG和AR有较高的抑制活性,而且总黄酮部位抑制AG活性的作用强于阿卡波糖。同时,小叶金露梅总黄酮高、低剂量均能提高小鼠的糖耐量。结论小叶金露梅总黄酮对α-葡萄糖苷酶和醛糖还原酶具有抑制活性。     

氧化应激对内皮细胞NF-κB、iNOS和NO信号表达的影响

目的观察氧化剂第三丁基过氧化氢（t-BHP）对体外培养的内皮细胞存活率及核转录因子κB（NF-κB）、iNOS和一氧化氮（NO）的影响。方法体外培养人脐静脉内皮细胞（HUVEC）,用不同浓度的t-BHP处理,具体如下：（1）检测细胞存活率。t-BHP作用浓度分别为12.5,25,50,100μmol/L,作用时间分别为30,60,90,120 min,采用MTT法观察;（2）检测NF-κB p65、iNOS蛋白表达量及细胞内NO水平。t-BHP的作用浓度为50μmol/L,作用时间分别为30,60,90,120 min,采用Western blot测NF-κB p65、iNOS蛋白表达量,Griess化学显色法测细胞内NO水平;（3）iNOS抑制剂左旋硝基精氨酸甲酯（L-NAME,600μmol/L）预处理内皮细胞24 h,用Griess化学显色法检测细胞内NO水平。结果 t-BHP可降低内皮细胞的存活率,且呈时间及剂量依赖性,50μmol/Lt-BHP作用30 min细胞核NF-κB活化片段p65蛋白表达达高峰,作用60 min细胞质iNOS蛋白达高峰;iNOS抑制剂L-NAME可明显抑制内皮细胞NO升高。结论氧化应激可引起内皮细胞损伤,其效应可能通过NF-κB-iNOS-NO途径介导。     

褪黑素对缺血再灌注后大鼠肝脏NF-κB表达及iNOS的影响

目的探讨褪黑素对缺血再灌注后大鼠肝脏NF—κB表达及iNOS的影响。方法采用大鼠部分肝缺血再灌注模型，将健康雄性SD大鼠78只随机分为假手术组（S）、缺血再灌注组（I／R）、褪黑素处理组（Mel）3组．分别检测标本中NF—κB表达和iNOS含量。结果S组无NF-κB阳性表达；I／R组和Mel组经历单纯的肝脏缺血后，NF—κB的表达与S组无差异（P〉0．05），而再灌注后两组均有不同程度的NF—κB表达增加，并均于6h时点处达到各自峰值，Mel组于再灌注后各相应时点NF—κB的阳性表达率显著低于I／R组（P〈0．01）。再灌注后0～1h，3组iNOS活力无差异（P〉0．05），此后，I／R组iNOS活力随再灌注时间的延长而较S组显著上升（P〈0．01），其高峰亦在9h时点处出现，Mel组再灌注1h后各时点iNOS活力均较I／R组显著下降（P〈0．01）。结论褪黑素可以有效下调肝脏I／R过程中NF—κB的表达，抑制iNOS的活力，发挥其对肝脏缺血再灌注损伤的保护作用。     

大鼠iNOS基因siRNA表达体系的构建及鉴定

目的:构建大鼠iNOS基因的siRNA表达体系,为建立RNAi干扰技术平台打下基础。方法:应用siR-NA设计软件在大鼠iNOS的mRNA上寻找特异性的短核苷酸序列,设计合成两条互补的小发夹结构的DNA序列,经退火后形成双链DNA片段,将其克隆到线性的pSilencerTM1.0-U6载体中,转化DH5α大肠杆菌,提取质粒,酶切鉴定后进行测序分析。结果:酶切和序列测定结果表明,大鼠iNOS基因的siRNA表达载体构建成功。结论:成功构建了大鼠iNOS基因的siRNA表达体系,为今后借助RNA干扰技术调节iNOS基因的表达、研究iNOS基因与其它因子的关系奠定了基础。     

鼠醛糖还原酶的分离纯化和性质分析

利用离心、盐析及多步层析法将鼠睾丸醛糖还原酶（ａｌｄｏｓｅｒｅｄｕｃｔａｓｅ，ＡＲ）分离纯化，纯化的酶经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳鉴定示一单一蛋白条带，ＡＲ分子量为３９０００±１０００，ＡＲ底物特异性，按１／Ｋｍ大小依次排列为：Ｐ－硝基苯醛，ＤＬ－甘油醛，Ｄ－葡萄糖醛酸，Ｄ－木糖，Ｄ－半乳糖，Ｄ－葡萄糖。     

腹水草抗大鼠乙醇型胃溃疡的作用及其对NO、iNOS和VEGF表达的影响

[目的]观察腹水草水提液抗大鼠乙醇型胃溃疡的作用效果,以及对一氧化氮（NO）、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）、和血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响。[方法]48只SPF级SD大鼠随机分成正常对照组、模型组、雷尼替丁组,腹水草高、中、低剂量组,每组8只。正常对照组和模型组分别给予0.9%生理盐水灌胃;而雷尼替丁组则给予0.18%雷尼替丁混悬液灌胃（0.027g·kg^-1·d^-1）;腹水草各剂量组分别给予高、中、低剂量腹水草水提液灌胃（浓度分别为2.8、1.4、0.7 g·kg^-1·d^-1）,每天1次,连续14d。于最后1次灌胃1h后,采用无水乙醇造模1h。然后处死大鼠,比较各组大鼠胃溃疡指数及溃疡抑制率,分别采用硝酸还原酶法,夹心ELISA和荧光定量PCR法分析不同剂量腹水草水提液对NO含量、iNOS活力, VEGF蛋白,iNOS、VEGF mRNA表达的影响。[结果]腹水草水提液可以显著的抑制溃疡的发生。腹水草水提液高、中、低剂量给药组的溃疡抑制率分别为90.83%、70.26%、45.93%。与模型组相比,腹水草高剂量给药组大鼠胃黏膜组织中NO含量显著提高（P〈0.01）,腹水草各给药组大鼠胃黏膜组织中iNOS活力和iNOS mRNA的表达量均显著提高（P〈0.01）,而对于VEGF则无统计学差异。[结论]腹水草水提液具有显著地抗大鼠乙醇型胃溃疡的作用,其作用机制可能与提高胃组织中NO含量,iNOS活力及其mRNA的表达有关。     

卡托普利对SHR大鼠eNOS、iNOS表达的影响

目的 探讨自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rats, SHR)在高血压发展进程中,卡托普利对SHR内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase, eNOS)和诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase, iNOS)表达的改善作用。方法 以WKY(Wistar-Kyoto)大鼠为空白对照,SHR为模型进行分组实验,7～24周龄SHR灌服卡托普利(3.375 g/(kg·d)),后停药观察至32周龄。测量血压、左室质量指数(left ventricular mass index, LVMI)、主动脉舒张功能、血清亚硝酸根离子(NO₂^-)含量、iNOS、eNOS mRNA以及蛋白含量变化。结果 (1)不同周龄的SHR左室质量指数、血清NO₂^-浓度均高于WKY,主动脉的舒张度均显著低于WKY。(2)mRNA表达含量变化：与WKY相比,不同周龄的SHR的心肌和动脉eNOS和iNOS mRN...     

通痹方对糖尿病大鼠红细胞醛糖还原酶的影响

目的:评价通痹方对糖尿病大鼠醛糖还原酶(aldose reductase,AR)的影响.方法:用链尿佐菌素(STZ)建立糖尿病大鼠模型,造模1周后用通痹方治疗,用药4周后观察通痹方对其血糖和AR的影响.结果:糖尿病大鼠血糖及红细胞AR活性升高,与正常组相比差异显著(P＜0.05);通痹方治疗组血糖及红细胞AR活性明显降低,与糖尿病模型组比差异显著(P＜0.05).结论:通痹方可明显抑制糖尿病大鼠AR活性.     

芦丁对大鼠缺血再灌注心肌组织iNOS和eNOSmRNA表达的影响

目的：研究芦丁对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用及其机制。方法通过左冠状动脉结扎建立SD大鼠心肌缺血再灌注模型,将大鼠随机分为对照组、模型组、芦丁组、L-NAME（eNOS 抑制剂）组,ELISA 法检测血清一氧化氮（NO）水平,免疫抑制法检测血清肌酸激酶同工酶（CK-MB）浓度,实时荧光定量 PCR分析各组心肌组织iNOS 和eNOS mRNA 表达的变化。结果与模型组比较,芦丁组血清 NO 水平增高（P＜0.01）,CK-MB 浓度下降（P＜0.01）,eNOS mRNA 表达升高（P＜0.01）,iNOS mRNA 表达下降（P＜0.01）。结论芦丁缺血预处理对心肌起到了保护作用,其机制可能与上调心肌组织eNOS mRNA 、下调iNOS mRNA 表达有关。     

羟乙基淀粉对脑组织核因子-κB和iNOS表达的影响

目的观察6％羟乙基淀粉（200／0．5，HES）注射液复苏对失血性休克大鼠脑组织NF-κB和iNOS表达的影响。方法随机将25只SD大鼠分为对照组、休克组、全部自体血复苏组、2倍出血量的HES复苏组、1倍出血量的HF5加1／2出血量的自体血复苏组。大鼠股动脉放血致休克1h后，分别用上述液体复苏30min，取脑组织。通过病理组织学和免疫组化的方法观察脑水肿和炎性细胞浸润的程度、及脑组织中NF-κB和iNOS表达的变化。结果休克组和各复苏组脑组织中NF-κB的表达明显增加，并见不同程度的脑水肿和炎性细胞浸润；1倍出血量的阳隆加1／2出血量的自体血复苏后NF-κB的表达增加显著下调，脑水肿和炎性细胞浸润亦减轻。各组NF-κB和iNOs的变化基本一致，二者具有显著正相关（r=0．831，P〈0．01）。结论在失血性休克致大鼠全脑缺血损伤时，常规量羟乙基淀粉（200／0．5）复苏可能通过抑制脑组织NF-κB和iNOS表达而减轻脑缺血-再灌注损伤。