自体外周血单个核细胞对原代肝癌细胞生长的影响及芦荟多糖对其干预作用

目的 观察、探讨自体外周血单个核细胞(PBMC)对原代肝癌细胞生长的影响及芦荟多糖AP11的干预作用.方法 以手术切除肝癌组织为标本,胰酶短暂消化加吹打、单细胞悬液培养法原代培养肝癌细胞.通过倒置显微镜观察其形态学特征.于分离培养第2天,加芦荟多糖AP11、芦荟多糖AP11干预及未干预的PBMC于癌细胞中,倒置显微镜观察其对癌细胞形态的影响,MTT法观察其对癌细胞生长的影响.结果 采用胰酶短暂消化加吹打分离、单细胞悬液原代培养的方法,可成功获取原代肝癌细胞;与空白对照组相比,芦荟多糖组癌细胞在形态上无明显差别,MTT实验结果表明其对癌细胞的生长无明显影响;与空白对照组相比,芦荟多糖AP11干预与未干预PBMC组癌细胞形态均有较大变化,MTT实验结果表明,其对癌细胞的生长有显著抑制作用.结论 芦荟多糖AP11无直接体外抗肿瘤活性,其抗肿瘤活性可能是通过与PBMC的相互作用,通过调节机体的免疫系统而达到的.     

不同浓度芦荟多糖对外周血单个核细胞和HepG2 生长的影响

目的:为芦荟多糖的抗肿瘤作用研究提供实验用细胞模犁,筛选最佳干预药物及其浓度.方法:采用人淋巴细胞分离液,Ficoll Hypaque密度梯度离心法分离外周血单个核细胞(PBMC),Alamar Blue法观察芦荟多糖对PBMc生长的影响,四唑氮蓝(Methylthiazolctrazolium,MTT)法观察芦荟多糖对HepG2生长的影响.结果:密度梯度离心法成功分离PBMC.芦荟多糖AP11在200μg·mL-1时已较明显促进和维持PBMc的生长(P<0.01).各不同浓度芦荟多糖对HepG2的生长无显著影响(P>0.05).结论:芦荟多糖AP11(200μg·mL-1)可作为开展抗肿瘤作用机理的理想实验用药.     

红花多糖对人PBMC增殖活性及NK、LAK细胞杀伤活性的影响

目的:探讨红花多糖(Safflower polysaccharide,SPS)体外对人外周血单个核细胞(PBMC)的增殖作用及对NK细胞、LAK细胞杀伤活性的影响。方法:采集健康成人外周血,常规分离PBMC,体外与不同浓度的SPS共同培养,用3H-TdR法检测PBMC的增殖活性;MTT法检测NK、LAK细胞的杀伤活性。结果:SPS对PBMC增殖有促进作用,其促增殖作用呈现量效依赖性,以1.25mg.mL-1和0.625mg.mL-1剂量组促增殖作用明显(P0.05);SPS对NK细胞与LAK细胞的杀伤活性都有明显的提升作用(P0.05)。结论:SPS可促进PBMC的增殖,增强NK细胞、LAK细胞的杀伤活性,增强免疫功能。     

当归多糖对树突状细胞成熟和功能的影响

目的:探讨当归多糖对外周血单个核细胞(PBMC)来源的树突状细胞(DC)体外分化、成熟和功能的影响。方法:以外周血单个核细胞为来源,联合应用 GM-CSF、IL-4及 TNF-α,在体外诱导培养 DC。采用 MTT 法测定 DC 诱导的混合淋巴细胞反应分析 APS-3对 DC 刺激淋巴细胞增殖功能的影响;采用流式细胞术检测细胞表面标志 CD1a,HLA-DR,CD86的表达,来评价 APS-3对 DC 分化的作用;RT-PCR 技术研究 DC IL-12p40mRNA 的表达,探讨 APS-3对 DC 分泌 Th1型细胞因子 IL-12的影响。结果:人 PBMC 在体外可诱导培养出具有典型形态、表型及免疫活性的 DC。采用不同浓度APS-3(0.1、0.3、1.0μg/mL)处理培养的 DC 表面标志 CD1a、CD86、HLA-DR 及 IL-12mRNA 表达量均呈上升趋势。经不同浓度 APS-3处理的 DC 诱导的 MLR,在小剂量范围(0.01-1μg/mL)是剂量依赖性的增强作用,在高剂量范围(30-100μg/mL)表现为抑制效应;常规培养8天生成的 DC 与淋巴细胞共培养后,加入不同浓度 APS...     

芦荟多糖对脑缺血模型大鼠细胞凋亡的影响

目的:观察芦荟多糖对局灶性脑缺血大鼠的神经保护作用,并进一步探讨其作用机制。方法:采用线栓法阻断大鼠一侧大脑中动脉(MCAO),制备局灶性脑缺血模型,观察芦荟多糖对MCAO模型大鼠脑缺血后神经功能缺损导致的行为学变化,流式细胞仪检测芦荟多糖对MCAO模型大鼠脑缺血后24h大脑皮质细胞凋亡率的影响,以此探讨芦荟多糖抗细胞凋亡及对脑缺血的神经保护作用。结果:芦荟多糖能明显降低缺血脑组织的凋亡率。结论:芦荟多糖对大鼠局灶性脑缺血具有保护作用,其机理可能与芦荟多糖抑制细胞凋亡有关。     

红花多糖对人PBMC增殖活性及分泌细胞因子的影响

[目的]探讨红花多糖(SPS)对人外周血单个核细胞(PBMC)的增殖作用及PBMC诱生细胞因子的影响。[方法]采集健康成人外周血,常规分离PBMC,体外与不同浓度的SPS共同培养,检测PBMC的增殖活性及白细胞介素-2(IL-2)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和干扰素-γ(IFN-γ)的水平。[结果]SPS对PBMC增殖有促进作用,以1.25g/L和0.625g/L剂量组增殖活性增加明显(P0.05);红花多糖(SPS)各组IL-2和IFN-γ水平明显高于对照组(P0.05),而各组TNF-α的水平无显著性差异。[结论]SPS可促进PBMC的增殖,提高IL-2和IFN-γ水平,增强免疫功能。     

天花粉多糖促人外周血单个核细胞增殖和对人乳腺癌细胞人子宫颈癌细胞的生长抑制作用

目的 研究天花粉多糖促人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC)增殖作用和对人乳腺癌细胞(MCF-7细胞)、人子宫颈癌细胞(HeLa细胞)生长抑制作用.方法 分离健康人PBMC,采用MTT法测定不同浓度天花粉多糖(0.5,1.0,2.0,5.0,10.0,20.0 mmol·L-1)作用于人PBMC 72h后,对人PBMC的促增殖作用;不同浓度天花粉多糖对MCF-7细胞和HeLa细胞生长的抑制作用.结果 2.0～20.0 mmol·L-1天花粉多糖具有显著促进人PBMC增殖(P<0.05),且呈一定的浓度依赖关系;5.0,10.0,20.0 mmol·L-1天花粉多糖均能有效抑制MCF-7细胞和HeLa细胞生长(P<0.05).结论 天花粉多糖具有促人PBMC的增殖作用,并可显著抑制肿瘤细胞MCF-7和HeLa细胞的生长.     

不同产地和采收期对库拉索芦荟中芦荟多糖和芦荟苷的影响

芦荟为较常用的中药,药典2005年版收载芦荟为百合科植物库拉索芦荟Aloe veraL.与A.barba-densisM ill.(同种异名)、好望角芦荟A.feroxM ill.或其他同属近缘植物叶的液汁浓缩干燥物。库拉索芦荟习称“老芦荟”,好望角芦荟习称“新芦荟”。性味苦,寒。归肝、胃、大肠经。芦荟清肝热,通便。本品按干燥品计算,库拉索芦荟含无水芦荟苷(C20H20O8)不得少于28·0%[1]。芦荟除了蒽醌类化合物外,主要的化学成分还有多糖、脂类、有机酸、生....     

中华芦荟多糖对辐射小鼠胸腺细胞凋亡及细胞周期的影响

目的研究芦荟多糖(AP)对受60Coγ射线辐射后小鼠胸腺细胞凋亡及细胞周期进程的影响.方法取小鼠辐射后不同时间点胸腺单细胞悬液,流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞周期的改变,1.8%琼脂糖凝胶电泳检测DNA梯形条带,透射电镜观察细胞超微结构的变化.结果辐射前30 min ip 50 mg/kg AP能显著降低6 Gy γ射线辐射后4 h、8 h和12 h小鼠胸腺细胞凋亡率,显著提高各时间点G0/G1期细胞所占比例,降低G2/M期细胞比例.能使DNA片段明显减少;显著改善细胞超微结构,明显减少凋亡小体数量.结论AP对辐射小鼠胸腺细胞的保护作用与改善细胞周期紊乱、抑制细胞凋亡有关.     

芦荟素抑制A549肺癌细胞增殖、凋亡和周期的作用机制研究北大核心CSCD

目的:探究芦荟素对非小细胞肺癌(Non-small cell lung cancer,NSCLC) A549细胞增殖、凋亡和周期的作用及机制。方法:用不同浓度芦荟素处理A549细胞,MTT法检测细胞活性;流式细胞仪检测细胞凋亡和周期; Western blot检测细胞增殖、凋亡、细胞周期及相关通路标记蛋白的表达。结果:芦荟素浓度达到50μM及以上时,A549细胞活性低于80%,因此,选择5、10、20μM三个浓度进行后续实验。芦荟素(10、20μM)能显著促进A549细胞凋亡,还能诱导A549细胞G2/M期阻滞;芦荟素可显著抑制细胞增殖标记蛋白Ki67和细胞周期蛋白Cyclin B的表达,浓度为10μM和20μM时能明显升高细胞凋亡蛋白cleaved caspase-3的表达水平。此外,芦荟素还能明显抑制p38 MAPK通路蛋白p-Cdc25B和p-Hsp27的表达,降低p-p38/p38的比值。结论:芦荟素可抑制NSCLC A549细胞增殖,诱导细胞凋亡和周期阻滞,作用机制可能与抑制p38 MAPK通路激活有关。     

Effect of Kuibitang on lipopolysaccharide-induced cytokine production in peripheral blood mononuclear cells of chronic fatigue syndrome patients

Kuibitang (KBT) is clinically used to treat patients suffering from chronic fatigue syndrome (CFS) in South Korea. However, its effect has not been investigated experimentally. Recent reports have shown that CFS patients display an altered cytokine production. We examined the effect of KBT on lipopolysaccharide (LPS)-induced various cytokines production in peripheral blood mononuclear cells (PBMC) of CFS patients and healthy controls. KBT (1 mg/ml) significantly inhibited LPS-induced tumor necrosis factor-, interleukin-10, and transforming growth factor-β1 production in PBMC of CFS patients. However, LPS-induced interferon-γ production was significantly increased by KBT (0.01 mg/ml). These results provide evidence of a novel activity of the KBT that regulate cytokines production related with CFS.     

枸杞多糖对人外周血巨噬细胞抗肿瘤作用的影响

目的研究枸杞多糖(LBP)对正常人外周血巨噬细胞免疫调节功能的影响。方法无菌分离人外周单核细胞,加入PHA和不同质量浓度的LBP,MTT法检测巨噬细胞对肝癌细胞株Bel-7402生长的影响;ELISA法检测LBP作用后巨噬细胞培养上清液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平。结果用LBP处理后的巨噬细胞对肿瘤细胞的杀伤功能增强,80 mg/L1、00 mg/L LBP刺激后,巨噬细胞的吞噬作用明显增强(P均<0.01)。80 mg/L、100 mg/L LBP组肿瘤细胞与巨噬细胞培养上清液中TNF-α的量明显增高(P均<0.01),并证实了该作用可能与LBP促进巨噬细胞分泌TNF-α有关。结论LBP能增强人外周血巨噬细胞的免疫功能,发挥抗肿瘤作用。     

基于外周血单个核细胞转录组学的柴归颗粒抗抑郁作用机制研究<

目的 通过转录组测序（RNAsequencing,RNA-seq）技术分析柴归颗粒对慢性不可预知温和应激（chronic unpredictable mild stress,CUMS）模型大鼠外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cells,PBMCs）的转录组学特征，并采用qRT-PCR法验证其作用机制。方法 将大鼠随机分为对照组、模型组、盐酸文拉法辛（35 mg/kg）组和柴归颗粒低、中、高剂量（4.2、8.3、16.6 g/kg）组，造模同时给药，连续28 d。通过抑郁症传统药效学指标（体质量、旷场实验、糖水偏爱实验及强迫游泳实验）评价柴归颗粒的药效。采用RNA-seq技术对大鼠PBMCs进行转录组学分析，筛选差异基因，对其进行京都基因与基因组百科全书（Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG）分析；通过qRT-PCR法对筛选出的关键表达基因进行实验验证。结果 行为学指标显示柴归颗粒能显著改善CUMS模型大鼠的抑郁行为。转录组学中KEGG通路富集分析表明抑郁发生时及柴归颗粒干预后，都显著富集到嘌...     

Cacao extracts suppress tryptophan degradation of mitogen-stimulated peripheral blood mononuclear cells

Ethnopharmacological relevance

The fruits of Theobroma cacao L. (Sterculiaceae) have been used as food and a remedy for more than 4000 years. Today, about 100 therapeutic applications of cacao are described involving the gastrointestinal, nervous, cardiovascular and immune systems. Pro-inflammatory cytokine interferon-γ and related biochemical pathways like tryptophan degradation by indoleamine 2,3-dioxygenase and neopterin formation are closely associated with the pathogenesis of such disorders.

Aim of the study

To determine the anti-inflammatory effect of cacao extracts on interferon-γ and biochemical consequences in immunocompetent cells.

Materials and methods

Effects of aqueous or ethanolic extracts of cacao were examined on mitogen-induced human peripheral blood mononuclear cells (PBMC) of healthy donors and on lipopolysaccharide-stimulated myelomonocytic THP-1 cells. Antioxidant activity of extracts was determined by oxygen radical absorption capacity (ORAC) assay.

Results

In mitogen-stimulated PBMC, enhanced degradation of tryptophan, formation of neopterin and interferon-γ were almost completely suppressed by the cacao extracts at doses of ≥5 μg/mL. Cacao extracts had no effect on tryptophan degradation in lipopolysaccharide-stimulated THP-1 cells.

Conclusions

There is a significant suppressive effect of cacao extracts on pro-inflammatory pathways in activated T-cells. Particularly the influence on indoleamine 2,3-dioxygenase could relate to some of the beneficial health effects ascribed to cacao.     

哈萨克族类风湿关节炎患者外周血单个核细胞中miR-146a的表达及其意义

目的探讨哈萨克族类风湿关节炎患者外周血单个核细胞(PBMC)中miR-146a表达水平及与该病临床特点的相关性。方法选择30例哈萨克族初发类风湿关节炎患者作为类风湿关节炎组,同时期30例非类风湿关节炎患者作为对照组。采用实时荧光定量PCR法检测2组患者PBMCs中miR-146a表达水平并进行比较;记录类风湿关节炎组患者DAS28评分、关节功能分级、血沉(ESR)、C反应蛋白(CRP)、血小板计数、类风湿因子(RF)、抗环瓜氨酸肽抗体(CCP)、抗角蛋白抗体(AKA)水平,分析类风湿关节炎组患者miR-146a表达水平与DAS28评分、关节功能分级及各实验室检测指标的相关性。结果类风湿关节炎组患者PBMCs中miR-146a相对表达水平为1.708±0.375,对照组为1.025±0.225,类风湿关节炎组患者PBMCs中miR-146a相对表达水平明显高于对照组(P0.05);类风湿关节炎组PBMCs中miR-146a相对表达水平与DAS28评分、关节功能分级、ESR、CRP、血小板、CCP、AKA、RF均无明显相关性(P均0.05)。结论哈萨克族类风湿关节炎患者PBMC中miR-146a表达上调,但其表达水平与病情未显示出相关性。     

聚酯型儿茶素对人外周血单核细胞免疫反应的影响

目的 研究聚酯型儿茶素对人外周血单核细胞免疫反应的影响。方法 采用MTT法测定淋巴细胞增殖反应和IL－2活性,采用免疫细胞化学和间接免疫荧光测定IL－2R的水平,采用和放射免疫法细胞内cAMP浓度。结果 50,150,500μg/mL聚酯型儿茶素对人外周血单核细胞增殖有明显的促进作用,亦可促进经植物血凝素（PHA)在化的人外周血单核细胞产生IL－1及表达IL－2R。此外,聚酯型儿茶素可明显降低人外周血单核细胞内cAMP浓度,也可对抗前列腺素E1（PGE1）升高cAMP的作用。结论 聚酯型儿茶素对人具有明显的免疫增强作用,其机制与促进IL－2的诱发及其受体的表达,降低细胞内cAMP水平有关。     

Immunomodulating effects of "tien-hsien liquid" on peripheral blood mononuclear cells and T-lymphocytes from patients with recurrent aphthous ulcerations

Recurrent aphthous ulcerations (RAU) represent a common oral mucosal disease with altered humoral and cellular immunities. In our institution, an immunomodulating agent, levamisole, is used to treat RAU with satisfactory therapeutic effect. Tien-Hsien liquid (THL) is an extract of Chinese medicinal herbs with immunomodulating effects. To test whether THL has immunomodulating effects on antigen-stimulated proliferation response (PR) of peripheral blood mononuclear cells (PBMC) and T-cells isolated from RAU patients and to test whether THL is a potential drug for treating RAU, PBMC or T-cells isolated from RAU patients were incubated with lipopolysaccharides (LPS) from Escherica coli, phytohemagglutinin (PHA), staphylococcal enterotoxin B (SEB), glutaraldehyde-inactivated tetanus toxoid (TT), glucosyltransferase D (GtfD), or antigens of Streptococcus mutans in the presence or absence of THL. We found that THL significantly increased the LPS-stimulated PR of PBMC from active RAU patients, the GtfD-stimulated PR of PBMC and of T-cells from inactive RAU patients, and the S. mutans-stimulated PR of PBMC from inactive RAU patients. However, THL could also significantly reduce the SEB-stimulated PR of PBMC and of T-cells from active RAU patients and S. mutans-stimulated PR of T-cells from active RAU patients. These results suggest that THL can modulate the antigen-stimulated PR of PBMC and T-cells from RAU patients. Therefore, it may be a potential immunoceutical agent for treatment of RAU.     

苦参碱对体外培养的强直性脊柱炎患者外周血单个核细胞增殖的影响

目的探讨苦参碱对体外培养的强直性脊柱炎（AS）患者外周单个核细胞（PBMC）增殖的影响。方法将20例AS患者的外周血分离得到PBMC进行体外培养,将细胞数调整到3～4&#215;10^6/mL,备用。将培养得到的PBMC分为试验组和阴性对照组,其中试验组分为4个不同剂量组（500μg&#183;mL^-1组、250μg&#183;mL^-1组、125μg&#183;mL^-1组、62.5μg&#183;mL^-1组）,分别观察加入不同剂量的苦参碱后,在12、24、36、48小时PBMC增殖情况。结果不同剂量苦参碱对植物血凝素（PHA）刺激体外培养PBMC的增殖有明显的抑制作用,并具有时间和剂量的依赖性,其中62.5μg&#183;mL^-1的剂量在12h、48h时对PBMC的增殖的抑制率分别为11.32%、15.46%,而500μg&#183;mL^-1的剂量在12h、48h时对PBMC的增殖的抑制率分别为36.28%、68.22%。苦参碱浓度在500μg&#183;mL^-1作用时间在48h时抑制作用最强。结论一定浓度的苦参碱可以明显抑制体外培养的AS患者外周单个核细胞的增殖,本试验为以苦参为君药的清热强脊颗粒治疗AS的有效性提供了部分实验依据。