促红细胞生成素/神经生长因子对大鼠压迫性损伤后背根神经节细胞的影响

目的:观察促红细胞生成素(EPO)/神经生长因子(NGF)对慢性压迫中的大鼠背根神经节(DRG)细胞的影响。方法:暴露大鼠多节段DRG,行慢性压迫造模型,并分离DRG,模型组分离的DRG细胞给予外源EPO或NGF,台盼蓝染色检测细胞存活率,TUNEL法检测细胞凋亡,免疫荧光法检测Bcl-2和Bax表达,荧光探针法检测活性氧(ROS)活性,ELISA法检测炎症因子IL-1β、TNF-α、IFN-γ的水平。结果:EPO或NGF可减轻DRG细胞的损伤和凋亡,下调促凋亡因子Bax的表达,并上调抗凋亡因子Bcl-2的表达,降低ROS活性。结论:EPO和NGF有利于受损的DRG细胞抗炎和抗氧化作用。     

miR-143靶向TREM1调控免疫因子白介素-6/10对克罗恩病模型肠黏膜HT-29细胞增殖的影响机制北大核心CSCD

目的探讨miR-143靶向TREM1调控免疫因子IL-6、IL-10对克罗恩病模型肠黏膜HT-29细胞增殖的影响及其机制。方法采用LPS刺激HT-29细胞建立克罗恩病(Crohn′s disease,CD)肠黏膜细胞炎症反应模型,将模型细胞分为agomir NC组、antagomir NC组、miR-143 agomir组和miR-143 antagomir组,通过ELISA、Western blot、qRT-PCR实验检测各组细胞炎性因子、细胞活力、细胞凋亡及TREM1表达水平,探究miR-143对模型细胞炎症反应、细胞凋亡的影响及miR-143与TREM1的靶向关系;并通过生物信息学数据库和双荧光素酶基因报告实验对miR-143和TREM1靶向关系进行验证。结果与正常组比较,模型组细胞IL-6表达水平显著升高(P<0.01),而IL-10表达水平显著下降(P<0.01),提示CD细胞模型建立成功;与agomir NC组相比,miR-143 agomir能显著降低促炎因子IL-6水平(P<0.01)、增加抗炎因子IL-10水平(P<0.01),增加模型细胞活力,降低细胞凋亡;同时,miR-143 agomir能显著下调CD模型细胞中TREM 1的蛋白和mRNA表达水平(P<0.01)。双荧光素酶基因报告实验证实miR-143与TREM1的靶向结合作用。结论miR-143可靶向抑制TREM1减少IL-6的分泌和增加IL-10的分泌,并抑制肠黏膜细胞的凋亡,从而缓解CD中肠黏膜的损伤。     

早期凋亡细胞抑制LPS诱导炎症反应的研究

目的研究早期凋亡细胞的炎症抑制作用。方法以紫外线照射诱导早期凋亡及坏死的Jurkat细胞，用流式细胞仪检测早期凋亡率。建立LPS诱导的小鼠炎症反应模型，分别向炎症部位滴注100μl灭菌磷酸缓冲液、坏死及早期凋亡Jurkat细胞。以HE染色切片病理学检查及激光共聚焦显微镜检查各处理组小鼠肺组织炎症反应程度；以双夹心ELISA、Westem blot、RT-PCR等方法检测不同处理后小鼠炎症反应状态下细胞因子分泌和表达变化。结果和注入灭菌磷酸缓冲液及坏死细胞相比，向炎症部位滴注早期凋亡细胞后，病理检查肺组织炎症反应程度明显减轻；激光共聚焦显微镜检查，肺间质CD3阳性荧光明显减少；肺组织Westem blot及RT-PCR结果表明，注入外源性早期凋亡细胞后，LPS刺激下肺组织炎症性细胞因子MIP-2、TNF—α的分泌及表达减少，抗炎性细胞因子TGF-β1分泌增强；当TGF-β1中和抗体和早期凋亡细胞共同滴入后，炎症性细胞因子MIP-2、TNF-α的表达及分泌有所上调。腹腔灌洗液ELISA结果表明，早期凋亡细胞增强了LPS刺激的炎症性腹腔内抗炎性细胞因子TGF-β1的分泌，抑制炎症性细胞因子MIP-2、TNF-α的分泌。加入TGF-β1中和抗体后逆转了早期凋亡细胞对MIP-2、TNF-α分泌的抑制作用。结论早期凋亡细胞通过增强炎症部位TGF-β1的分泌，抑制MIP-2、TNF-α的表达及分泌，从而发挥一定的炎症抑制作用。     

SIRT1基因shRNA慢病毒载体构建及干扰效应检测

背景：SIRT1基因在细胞能量代谢、凋亡及衰老过程中发挥极重要的作用,另有研究发现SIRT1可能在炎症反应方面起着调控作用。 目的：构建SIRT1特异性的shRNA慢病毒载体,并初步检测其对THP-1细胞SIRT1基因的抑制效应。 方法：设计SIRT1靶点特异性的寡核苷酸序列,连接到经Age Ⅰ和EcoR Ⅰ酶切线性化的pGCSIL-GFP载体,包装293T细胞产生慢病毒,再转染THP-1细胞,通过实时荧光定量PCR实验及Western Blot检测对SIRT1靶基因的抑制情况。 结果与结论：阳性克隆PCR及测序证实SIRT1基因shRNA慢病毒载体构建成功,实时荧光定量PCR及Western Blot检测该载体在mRNA和蛋白水平能抑制THP-1细胞的SIRT1表达。     

抗BrdU单克隆抗体在凋亡细胞检测中的应用研究

目的 探讨将自制的抗BrdU单克隆抗体（mAb）用于TUNEL法检测凋亡细胞的可能性。方法 分别用TUNEL免疫荧光法和免疫组化技术，检测地塞米松诱导的凋亡胸腺细胞和射线照射的大鼠皮肤组织中的凋亡细胞。结果 用TUNEL免疫荧光法和TUNEL免疫且化法法检测发现，凋亡细胞的细胞核分别呈明显的荧光或酶底物着色，而非凋亡细胞不显示荧光或无酶底物着色。结论 该抗BrdU mAb用于TUNEL法，能够检测单个细胞标本或组织切片中的凋亡细胞，为国内开展凋亡细胞的检测，提供了一种新的方法。     

细胞因子与全身性炎症反应综合征发生机理的研究进展

ＳＩＲＳ的发生过程中有多种细胞因子参与。促炎因子的持续性大量产生,促炎／抗炎平衡的破坏以及机体细胞反应性的异常等可能是ＳＩＲＳ及其所致炎性器官损伤的主要原因,基因缺陷小鼠的研究提示：ＬＰＳ刺激ＩＣＡＭ－１表达并通过诱导血管内皮细胞和中性粒细胞的相互作用造成器官损伤;ＩＦＮγ／ＴＮＦα则可直接诱导靶器官中的细胞大量凋亡引起器官功能衰竭,ＳＥＢ则通过活化Ｔ细胞,产生ＩＦＮγ进而诱导炎症损伤。     

人肺癌细胞株抗脱落凋亡特性的分析

目的：研究肺癌细胞A549、Spc-A1、PLA801及Calu-3抗脱落凋亡的特性，为研究肺癌细胞抗脱落凋亡的机制提供理论依据。方法：应用形态学观察，流式细胞术结合PI及AnnexinV—FITC双标记染色法及Western blot法观察4株肺癌细胞脱落凋亡的特性。结果：脱落培养12h后，4株肺癌细胞有不同形态学变化；流式细胞仪检测发现Calu-3悬浮培养24h后，凋亡率与贴壁培养24h的凋亡率有明显差别；而A549等3种肺癌细胞系与贴壁培养的对照组相比较，其凋亡率无显著性差异，Western blot结果也验证了上述结果。结论：肺癌细胞Calu-3属于脱落凋亡细胞，而A549、Spc-A1、PLA801属于抗脱落凋亡细胞。     

细胞因子与全身性炎症反应综合征发生机理的研究进展

ＳＩＲＳ的发生过程中有多种细胞因子参与。促炎因子的持续性大量产生、促炎／抗炎平衡的破坏以及机体细胞反应性的异常等可能是ＳＩＲＳ及其所致炎性器官损伤的主要原因。基因缺陷小鼠的研究提示：ＬＰＳ刺激ＩＣＡＭ －１ 表达并通过诱导血管内皮细胞和中性粒细胞的相互作用造成器官损伤；ＩＦＮγ／ＴＮＦα则可直接诱导靶器官中的细胞大量凋亡引起器官功能衰竭；ＳＥＢ 则通过活化Ｔ 细胞、产生ＩＦＮγ进而诱导炎症损伤。     

抗类风湿病药金诺芬对中性粒细胞自发性凋亡的影响

目的 研究抗类风湿病药金诺芬(AF)对中性粒细胞自发性凋亡的影响。方法 运用流式细胞技术和MTS细胞活性测定技术对不同浓度的金诺芬影响下的中性粒细胞活性及其凋亡进行观察，并用低分子质量DNA“梯形条带”(DNA ladder)检测技术对其凋亡进行鉴定。结果 低浓度金诺芬(1μmol／L)可通过延迟中性粒细胞的自发性凋亡而增加其生命期限；但当金诺芬浓度大于5μmol／L时，中性粒细胞的坏死则明显增加，因而缩短了其生命期限。结论 金诺芬临床治疗量时的血清浓度一般在0．7μmol／L左右，在此浓度下，中性粒细胞通过延迟自发性凋亡来延长其功能性生命期限，所以金诺芬对类风湿关节炎患者的抗炎、抗风湿作用不可能通过直接清除炎症局部的中性粒细胞来完成；金诺芬的抗炎、抗风湿作用可能存在更为复杂的作用机制。     

circFADS2靶向miR-125a-5p调控MPP+诱导的SK-N-SH细胞损伤的机制

目的：探究circFADS2靶向miR-125a-5p调控帕金森病（PD）细胞炎症反应和凋亡的机制。方法：100μmol/L MPP+诱导SK-N-SH细胞建立PD模型，分为Con组、PD组、PD+pcDNA组、PD+pcDNA-circFADS2组、PD+anti-miR-NC组、PD+anti-miR-125a-5p组、PD+pcDNA-circFADS2+miR-NC组、PD+pcDNA-circFADS2+miR-125a-5p组。qRT-PCR检测circFADS2和miR-125a-5p表达；ELISA检测IL-1β、TNF-α含量；流式细胞术检测细胞凋亡；Western blot检测cleaved-caspase3、cleaved-caspase9蛋白表达；双荧光素酶报告实验检测circFADS2与miR-125a-5p的靶向关系。结果：与Con组相比，PD组circFADS2表达降低，miR-125a-5p表达、凋亡率、IL-1β、TNF-α含量、cleaved-caspase3、cleaved-caspase9蛋白表达升高（P<0.05）。circFADS2过表...     

小檗胺对糖尿病肾病大鼠肾损伤和炎性细胞因子产生的影响

目的研究小檗胺(berbamine,BBM)对糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)大鼠的保护作用及其机制。方法将大鼠分为对照组组、模型组、DN+BBM组(50、100、200 mg/kg),采用高脂喂食结合化学诱导法建立DN大鼠模型。检测24 h尿蛋白含量,检测血清肌酸酐(SCr)和尿素氮(BUN);苏木精-伊红(HE)和TUNEL染色观察肾脏病理情况;Western blot检测凋亡、炎症通路相关蛋白表达;ELISA检测血清中炎症细胞因子表达。建立LPS+DN大鼠模型,检测指标同上。结果与模型组相比,DN+BBM组大鼠尿蛋白、血清肌酐和尿素氮含量、肾组织病理损伤、凋亡率、cl-caspase-3、cl-caspase-9和Bax蛋白表达、炎症细胞因子IL-1β、IL-6和TNF-α含量、炎症通路蛋白p-P65、MIP-2表达均降低;Bcl-2表达增加。此外,BBM显著减弱LPS对DN大鼠肾脏功能、凋亡率及相关蛋白表达、血清炎性细胞因子及炎症通路蛋白表达的调节作用。结论小檗胺能有效缓解糖尿病肾病大鼠肾损伤和炎症反应,其机制与抑制NF-κB p65活化有关。     

C-反应蛋白诱导人肾小管上皮细胞凋亡

目的:探讨与微炎症状态相应的C-反应蛋白(CRP)水平是否诱导肾小管上皮细胞凋亡。方法:以微炎症状态相应的CRP浓度刺激HK-2细胞。采用AnnexinⅤ-FITC、PI染色和流式细胞术检测凋亡细胞的百分率。采用Hoechst 33258染色观察肾小管上皮细胞凋亡的形态学改变。比色法检测细胞caspase-3活性。Real-time PCR检测促凋亡基因bax、抗凋亡基因bcl-2的mRNA表达。结果:CRP呈剂量和时间依赖性地诱导HK-2细胞凋亡,细胞凋亡在CRP浓度为10 mg/L时达高峰,在20 mg/L时则以晚期凋亡和坏死为主。Hoechst 33258细胞核染色显示CRP作用的HK-2细胞呈现染色质浓缩、碎裂或染色质边集等细胞凋亡的特点。CRP增高细胞caspase-3的酶活性、上调促凋亡基因bax的表达和下调抗凋亡基因bcl-2的表达。结论:CRP轻度增高可诱导肾小管上皮细胞凋亡。     

多器官功能障碍综合征小鼠脾脏树突状细胞与炎症因子变化的关系

目的探讨多器官功能障碍综合征（MODS）病程中脾脏树突状细胞（DC）变化对炎症因子的影响与作用。方法采用腹腔注射酵母多糖的方法复制小鼠MODS模型，分为正常对照组和MODS组。采用流式细胞技术检测脾脏DC免疫表型，运用免疫组化技术检测脾脏中促炎因子IL-1β与抗炎因子IL-10的表达，计量观察DC与炎症因子在病程中的变化并做相关分析。结果伤后6h组，脾脏中CD11c^＋／MHC-Ⅱ’DC数目与IL-18’细胞数目均明显增多，至24h组达峰值。自48h组，CD11c^＋／MHC-Ⅱ’DC与IL-1β’细胞含量开始下降，在6天组和10～12天组降至正常组或低于正常组含量；而同时CD11c^＋／MHC-Ⅱ^-DC和IL-10阳性细胞含量则相对增多，至10～12天组阳性细胞含量显著升高达到峰值。结论DC的活性在MODS病程早期与IL-1β表达呈正相关性，在病程晚期与IL-10表达呈负相关，提示脾脏DC活性变化与促炎因子和抗炎因子均有密切的相关性。     

雷公藤甲素调节小胶质细胞极化反应保护损伤的神经元

背景：将小胶质细胞从M1表型转变为M2表型被认为是治疗神经退行性疾病的一种有希望的策略。多项研究表明,雷公藤甲素可以抑制神经炎症,改善多种神经退行性疾病,但是其机制尚不明确。目的：探讨雷公藤甲素对脂多糖激活小胶质细胞诱导SH-SY5Y细胞损伤的保护作用及其机制。方法：CCK8法检测BV2细胞活性筛选最佳的雷公藤甲素使用浓度;然后将BV2细胞分为3组：对照组,模型组(1μg/mL脂多糖),雷公藤甲素组(1 nmol/L雷公藤甲素+1μg/mL脂多糖),收集上清液,采用Griess法检测一氧化氮水平,ELISA法检测促炎因子白细胞介素6、肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β和抗炎因子白细胞介素10水平;免疫荧光染色和Western blot法检测BV2细胞诱导型一氧化氮合酶和精氨酸酶1的表达。收集3组小胶质细胞条件培养液并分别作用于SH-SY5Y细胞：分为对照条件培养液组、模型条件培养液组和雷公藤甲素条件培养液组,TUNEL染色法检测SH-SY5Y细胞凋亡率,免疫荧光染色和Western blot法检测caspase3、Bax和Bcl-2的表达。结果与结论：(1)与对照组比较,模型组BV2细胞上...     

干扰circRNA_002178抑制胶质瘤细胞恶性生物学行为

目的：探讨干扰circRNA＿002178对胶质瘤细胞增殖、凋亡、侵袭、炎症反应的影响。方法：RT-qPCR检测临床样本癌组织和癌旁组织中circRNA＿002178的表达；转染分组后采用RT-qPCR检测不同转染序列中circRNA＿002178的表达，筛选干扰效果最佳序列组；CCK8法检测细胞增殖率；克隆形成法检测细胞形成率；流式检测细胞凋亡水平；Western blot检测凋亡相关蛋白的表达水平；RT-qPCR检测VEGF mRNA表达水平；Western blot检测VEGF蛋白表达水平；Transwell检测侵袭；ELISA检测血清炎症因子含量。结果：胶质瘤组织circRNA＿002178表达水平明显高于癌旁组织，选用胶质瘤细胞U-251进行后续实验，选择干扰效果最为显著的circ＿002178-shRNA2组为后续实验干扰组。与shRNA-NC组相比，circ＿002178-shRNA2组胶质瘤细胞凋亡率与克隆形成率明显降低；胶质瘤细胞凋亡率及Bax/Bcl-2蛋白表达明显升高；胶质瘤细胞VEGF及其VEGF mRNA表达明显降低，侵袭细胞数量明显减少；促炎因子IL-6、i...     

TLR4活化对肝癌细胞H7402生物学特征的影响

目的:分析TLR4在肝癌细胞H7402的表达水平,研究其活化对肿瘤细胞生物学功能、炎症应答以及对化疗药物治疗的影响。方法:RT-PCR方法检测肝癌细胞TLR4基因、细胞凋亡和细胞周期相关基因的表达水平。LPS作用于肝癌细胞后,利用MTT法检测细胞增殖,AnnexinV/PI双染法检测细胞凋亡,荧光定量PCR法检测肿瘤相关细胞因子的表达水平,流式细胞术检测肿瘤细胞表面淋巴细胞受体的配体及CyclinD1表达,Western blot检测Bcl-xl表达水平。结果:TLR4在人肝癌细胞系HepG2、H7402、PLC/PRF/5中都有表达,LPS能促进肝癌细胞系的增殖,抵抗顺铂的抗肿瘤作用。进一步的机制研究表明,LPS能上调肝癌细胞周期相关分子CyclinD1、凋亡相关分子Bcl-xl的表达,并下调Fas的表达、上调肿瘤相关的炎症因子的表达。结论:LPS诱导肝癌细胞H7402表达炎症因子、促进肿瘤细胞的增殖,导致肿瘤细胞对化疗药顺铂产生抵抗作用。     

蝎毒耐热多肽对脂多糖诱导的BV2细胞炎性反应的抑制作用

目的:观察蝎毒耐热多肽(SVHRP)对细菌脂多糖(LPS)诱导的BV2细胞炎性反应的影响,探讨其是否具有抑制神经炎症的作用。方法:LPS诱导BV2细胞活化,进行免疫细胞化学染色(OX-42抗体)检测细胞的形态,MTT法检测SVHRP对细胞的毒性;分别用Griess试剂法和酶联免疫吸附法(ELISA)测定细胞外液炎性介质一氧化氮(NO)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量;Western Blot检测诱导型NO合成酶(iNOS)蛋白表达水平。结果:不同浓度的SVHRP(2~50μg/ml)对BV2细胞均无毒性。SVHRP(20μg/ml)预处理能明显抑制LPS诱导的BV2细胞的形态活化改变,减少细胞激活后产生的炎性因子NO和TNF-α,抑制iNOS的蛋白表达。结论:SVHRP明显抑制BV2小胶质细胞的炎性反应,提示SVHRP具有抗神经炎症作用。     

呼吸道合胞病毒感染对细胞凋亡及FasL、Fas、Bcl-2、Bax基因表达的研究

目的：研究呼吸道合胞病毒(RSV)感染与细胞凋亡的关系及对凋亡相关基因FasL、Fas、bcl-2和bax表达的影响。 方法： 采用A549细胞，在RSV感染后不同时点收集细胞，流式细胞仪和透射电镜检测细胞凋亡，免疫组织化学法检测凋亡相关基因FasL、Fas、Bcl-2和Bax表达情况。 结果： 流式细胞仪检测结果RSV感染后72 h（6.61%）、120 h（10.94%）的细胞凋亡指数明显高于对照组（4.32%、5.31%）；免疫组化法检测结果对照组FasL、Bax基因呈现无表达或局部弱表达；随着RSV感染时间的延长，bax、 Fas、 FasL基因的表达均高于对照细胞，bcl-2基因呈现弱表达或无表达。 结论： RSV在感染后期能诱导宿主细胞发生凋亡，促凋亡基因FasL、Fas 、Bax和抗凋亡基因Bcl-2表达水平的差异是RSV诱导凋亡的机制之一。     

肾上腺素对小鼠巨噬细胞中促炎／抗炎介质比值的影响

目的：研究肾上腺素对脂多糖（LPS）诱导的小鼠单核巨噬细胞株RAW264.7中促炎介质［肿瘤坏死因子（TNF-α）、一氧化氮（NO）、环加氧酶-2（COX-2）］和抗炎介质［血红素氧化酶-1（HO-1）、白介素10（IL-10）］表达及NF-κB活化的影响。 方法： 以10 μg/L的LPS刺激体外培养的RAW264.7细胞作为炎症模型，加入不同浓度的肾上腺素（1、5、10、50 μmol/L）孵育24 h后，收集培养上清并提取细胞总蛋白，酶联免疫法测定上清中TNF-α、IL-10浓度，Griess法检测上清NO含量(以NO2-/NO3-表示)，免疫印迹法检测细胞总蛋白中COX-2、HO-1、IκB-α的含量。 结果： 10 μg/L的LPS明显诱导TNF-α、NO(NO2-/NO3-)、COX-2、IL-10及HO-1的产生；LPS+肾上腺素组与LPS单独作用组相比促炎介质TNF-α、NO(NO2-/NO3-)、COX-2的表达量显著下降，而抗炎介质IL-10、HO-1的表达却明显增强；肾上腺素与LPS共同作用组中IκB-α的含量与单独LPS作用组相比无明显差异。 结论： 肾上腺素下调LPS诱导的巨噬细胞中促炎介质的表达同时促进抗炎介质的表达，这种效应并不通过影响NF-κB的活化来实现。     

苦味类中药成份藉苦味受体途径对气道炎症过程的遏制效应

目的：探讨苦味受体(Bitter taste receptor,TAS2Rs)在苦味类中药组份治疗慢性气道炎症中的抗炎效应。方法：实验分为三组(n=8),即空白对照组、PM2.5组(雾化吸入PM2.5悬液复制大鼠慢性气道炎症模型)和PM2.5+柠檬苦素组(陈皮提取物干预),分别以ELISA、RT-PCR和Westem blot检测各组大鼠支气管/肺组织炎症因子及TAS2Rs mRNA和蛋白表达水平。结果：PM2.5刺激组炎症因子TNF-α和IL-13的mRNA和蛋白表达水平较对照组明显增高,TAS2R14的mRNA和蛋白表达变化不明显;柠檬苦素干预组炎症因子TNF-α和IL-13的mRNA和蛋白表达水平较PM2.5组降低,TAS2R14的mRNA和蛋白表达水平则明显增高。结论：苦味类中药组份吸入治疗可遏制慢性炎性气道的炎症因子产生及释放,并刺激肺部TAS2Rs的表达增加,故认为苦味类中药组份激活气道TAS2Rs可能是其发挥抗炎效应的重要机制。