咖啡酸苯乙酯对大肠癌细胞HCT116细胞周期和cyclin D1表达的影响

目的探讨咖啡酸苯乙酯(caffeic acid phenethyl ester, CAPE)对体外培养的大肠癌细胞HCT116细胞周期和cyclin D1表达的影响.方法以人大肠癌细胞株HCT116为研究对象,PI染色、流式细胞仪检测CAPE处理24 h后细胞周期分布,Western blotting、RT-PCR检测CAPE处理24、48 h 后cyclin D1表达的变化.结果 2.5、5.0、10 mg/L CAPE处理HCT116细胞24 h后,G0/G1期细胞百分率上升,S期细胞百分率下降,呈剂量依赖性.2.5、5.0、10 mg/L CAPE处理HCT116细胞24、48 h后cyclin D1蛋白和mRNA表达均降低,呈剂量和时间依赖性.结论 CAPE诱导HCT116细胞周期阻滞,其机制可能与其下调cyclin D1表达有关.     

甘草次酸对K562细胞增殖抑制作用及其机制研究

目的 研究甘草次酸对髓系白血病细胞系K562体外增殖抑制作用,分析其引起细胞周期的变化及探讨其可能的抗癌机制.方法 MTT法检测甘草次酸对K562细胞增殖活性的影响;Hoechst 33258染色法观察细胞凋亡形态学改变;流式细胞术分析细胞周期的变化以及cyclin D1和cyclin E蛋白表达的变化;RT-PCR测定细胞中cyclin D1和cyclin E mRNA表达的改变.结果 甘草次酸对K562有增殖抑制作用,其抑制作用呈现为量效和时效依赖性,作用48 h的IC50值为(93.1±3.7)μmol/L.甘草次酸可以诱导细胞发生凋亡,Hoechst染色可见细胞核内凋亡小体.甘草次酸可以诱导K562细胞周期阻滞于G0/G1期,同时G2/M期细胞比例减小,S期变化不明显,仅在最大浓度组稍有降低.甘草次酸可以同时下调K562细胞内cylin D1和cyclin E蛋白和基因的表达,下调作用与剂量呈正相关.结论 甘草次酸能明显抑制K562细胞增殖,并诱导其周期阻滞于G0/G1期.该效应可能与其下调周期蛋白cyclin D1和cyclin E表达有关,有望成为新型抗肿瘤中药.     

白藜芦醇诱导肺癌细胞凋亡和细胞周期阻滞的分子机制

目的探讨白藜芦醇对肺癌细胞系A549和H1299细胞增殖与细胞周期阻滞及细胞凋亡之间的联系。方法采用MTT法检测白藜芦醇对A549和H1299细胞增殖的影响;用Western印迹法检测白藜芦醇作用后A549和H1299中凋亡相关蛋白cleaved-caspase-3、cleaved-caspase-7、cleaved-caspase-9、cleaved-PARP及细胞周期相关蛋白cyclin D1、cyclin D3和CDK2、CDK4、CDK6、p53、p18、p21、p27的表达情况;通过流式细胞仪技术检测白藜芦醇诱导A549和H1299细胞凋亡率以及细胞周期阻滞的影响。结果白藜芦醇对A549和H1299的生长均有抑制作用,呈浓度依赖性;经白藜芦醇处理后,A549和H1299的周期蛋白cyclin D1、cyclin D3和CDK2蛋白的表达水平上调,而周期蛋白CDK4、CDK6、p53、p18、p21、p27的表达水平下调;A549和H1299的凋亡相关蛋白cleaved-caspase-3、cleaved-caspase-7、cleaved-caspase-9、cleaved-PARP的表达水平上调;流式细胞仪检测A549和H1299的细胞凋亡率随白藜芦醇的浓度上升而增加,流式细胞仪检测细胞周期即可观察到随白藜芦醇的浓度的增加,细胞周期明显阻滞于G1/S期。结论白藜芦醇可能是通过促进caspases通路的活化,从而促进细胞凋亡;周期蛋白cyclin D1、cyclin D3和CDK2蛋白的表达水平的上调和CDK4、CDK6、p53、p18、p21、p27的表达水平的下调可能是白藜芦醇诱导人肺癌细胞发生G1/S期阻滞的关键机制。     

全反式维甲酸对大鼠C6胶质瘤细胞周期及周期因子表达的影响

目的:探讨全反式维甲酸对大鼠C6胶质瘤细胞周期及周期因子的影响及其机制。方法:建立大鼠C6脑胶质瘤模型,腹腔注射全反式维甲酸后,流式细胞仪检测细胞增殖时相变化,免疫组化法检测p27kip1蛋白和Cyc-lin D1蛋白表达的变化。结果:治疗组较对照组,G1期细胞比例增加,S期细胞比例减少,p27kip1蛋白表达增多,Cyc-lin D1蛋白表达减少。结论:维甲酸处理后,大鼠C6胶质瘤细胞周期发生G1期阻滞,其机制同上调p27kip1蛋白表达及下调Cyclin D1蛋白表达有关。     

漆树酸对人前列腺癌细胞 LNCaP 细胞周期的影响及机制

目的：观察漆树酸对人前列腺癌细胞 LNCaP 细胞周期的影响并分析其机制。方法人前列腺癌细胞 LNCaP 经漆树酸处理后,MTS 法观察不同时间、不同浓度的漆树酸对细胞增殖率的影响,流式细胞术分析细胞周期变化,Western blot 方法观察漆树酸作用后细胞周期相关因子 CDK4、CDK6、cyclin D1和 P27蛋白水平的表达变化。结果（1）漆树酸时间和浓度依赖性地抑制细胞增殖;（2）经漆树酸处理后的细胞出现生长抑制,细胞主要阻滞在 G0／G1期;（3）漆树酸作用细胞后,CDK4、CDK6、cyclin D1蛋白表达水平低于溶剂对照组,而 P27蛋白表达水平高于溶剂对照组。结论漆树酸可抑制 LNCaP 细胞增殖,其机制可能是与细胞周期相关蛋白 P27的上调, CDK4、CDK6、cyclin D1表达下调有关,导致细胞阻滞在 G0／G1期。     

苦参碱诱导HepG2细胞凋亡与cyclin D1和p27kip1关系的实验观察

目的研究苦参碱抗肿瘤机制，初步探讨其与细胞周期调控蛋白cyclin D1和p27^kip1是否有关。方法苦参碱诱导后运用电镜、流式细胞仪方法检测HepG2细胞形态及细胞周期分布，并用免疫细胞化学法检测细胞内cyclin D1和p27^kip1蛋白表达变化。结果发现苦参碱诱导HepG2细胞凋亡，使细胞周期停滞于G1期。随着干预的苦参碱浓度增加cyclin D1下调，而p27^kip1蛋白上调，有统计学意义（P〈0．05）。结论苦参碱抗肿瘤机制可能是诱导肿瘤细胞凋亡，与细胞周期调控蛋白cyclin D1和p27^kip1有关。     

SKP2和p27kip1在放疗后鼻咽癌CNE2细胞应答中的作用

目的探讨SKP2、p27kip1及细胞周期阻滞在放疗后鼻咽癌细胞应答中的作用.方法以人鼻咽低分化鳞癌CNE2细胞株作为研究对象,流式细胞仪检测放疗前后细胞周期变化,West blot检测放疗前后不同时间点SKP2及p27kip1表达的变化.结果放疗后鼻咽癌CNE2细胞株出现G2/M期细胞周期阻滞,低剂量(2Gy)放疗后0.5~1.5h出现SKP2表达短暂下降,同时伴p27kip1表达相应增高;放疗后4h出现SKP2表达升高而p27kip1表达下调.高剂量(6Gy)放疗后1.5h内出现SKP2表达升高,而放疗后2~4h表达下降;而p27kip1表达在放疗后0.5h出现短暂下降,1.5~4h表达上调,两者之间关联性不确定.结论 SKP2、p27kip1和细胞周期阻滞参与放疗后鼻咽癌CNE2细胞的应答反应,且低剂量放疗时,p27kip1表达可能受SKP2调控.     

三氧化二砷对人肝癌细胞株SMMC-7721中p27~(kip1)及其相关分子Skp2表达的影响

目的 通过检测三氧化二砷(As2O3)对肝癌SMMC-7721细胞周期素依赖性激酶抑制剂(CDKI)p27kip1及S期激酶相关蛋白2(Skp2)的影响,探讨其抗癌作用机制.方法 体外培养人肝癌细胞株SMMC-7721,用2μmol/L As2O3处理72h,流式细胞仪检测细胞周期变化及细胞凋亡率,应用Western blot方法检测p27kip1、Skp2及CDK2基因编码蛋白的表达.结果 与对照组比较,As2O3使SMMC-7721细胞周期阻滞在G2/M期.经As2O3作用的人肝癌细胞p27kip1基因编码蛋白表达增加,而p27kip1相关分子Skp2及CDK2的表达减少.结论 As2O3可干扰细胞周期的进程,抑制SMMC-7721细胞的增殖.其作用机制与上调p27kip1蛋白及下调Skp2、CDK2有关.     

丙型肝炎病毒核心蛋白对肝癌细胞stat3通路及细胞周期蛋白cyclin D1的调控作用

[目的]探讨丙型肝炎病毒核心蛋白(HCVc)是否调控肝癌细胞中stat3通路及细胞周期蛋白cyclin D 1的表达,参与肝癌细胞的恶性生物学行为.[方法]将含HCVc基因的真核表达质粒pEGFP-N3-HCVc瞬时转染人肝癌细胞HepG2使HCVc过表达,用siRNA-HCVc敲除HepG2细胞中HCVc的表达,荧光显微镜检测绿色荧光蛋白(GFP)的表达,Western blot检测HCVc、总stat3(stat3)、磷酸化stat3(p-stat3)及cyclinD1蛋白的表达;流式细胞术及MTT法检测细胞周期变化及细胞增殖情况.[结果]Western blot结果显示,通过瞬时转染而过表达HCVc的HepG2细胞中,HCVc、p-stat3及cyclinD1的蛋白水平高于空白质粒转染组和未转染组;siRNA-HCVc敲除HCVc表达后,HCVc、p-stat3和cyclin D1蛋白的表达下调;酪氨酸磷酸化抑制剂AG490(JAK2特异性拮抗剂)处理可下调过表达HCVc的HepG2细胞中p-stat3和cyclin D1蛋白的表达.流式细胞术显示过表达HCVc可促进细胞向G2/M期进展.MTT法结果显示过表达HCVc使HepG2细胞增殖能力增加.[结论]HCVc可活化HepG2细胞中stat3通路,调控细胞周期蛋白cyclinD1的表达,促进细胞周期进展及细胞增殖,可能与肝癌的发展有关.     

三氧化二砷对A549细胞周期及cyclin D_1基因表达的影响

目的：研究三氧化二砷（arsenic trioxide,As2O3）对肺腺癌A549细胞株细胞增殖、细胞周期以及cylin D1基因表达情况,初步探讨As2O3对肺腺癌细胞增殖的影响及其机制。方法：分别以不同浓度的As2O3作用于A549细胞,作用不同时间后,对细胞增殖活性、细胞周期及cylin D1基因表达的情况进行检测。结果：稍高浓度（〉2μmol/L）的As2O3可抑制A549细胞增殖,并有剂量和时间依赖性,As2O3可抑制A549细胞由G1期进入S期。逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）检测cylin D1基因转录水平和细胞爬片免疫组化检测cyclin D1基因蛋白表达的相对强度,发现As2O3作用组cyclin D1基因表达与对照组相比明显减低（P〈0.01）。结论：As2O3可有效抑制A549细胞增殖,抑制效应呈量效和时效关系,并且能阻碍细胞周期由G1进入S期,这一过程可能与As2O3抑制cyclin D1基因表达有关。     

Akt1/p27kip1途径介导脂氧素A4抑制TNF-α所致的系膜细胞增殖

目的：研究脂氧素A4(LXA4)是否抑制肿瘤坏死因子-α(TNF-α)所致的肾小球系膜细胞增殖，并探讨LXA4作用的信号转导机制。方法：用不同浓度的脂氧素A4预外理培养的大鼠肾小球系膜细胞，再加入TNF-α(10ng／m1)共同孵育；或单用TNF-α刺激肾小球系膜细胞。用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖；用RT-PCR法检测细胞周期素E与mRNA表达；用Westemblot检测308位苏氨酸(Thr308)磷酸化的蛋白激酶Aktl及细胞周期负调控蛋白P27^kipl表达量。结果：LXA4呈剂量依赖性地抑制TNF-α诱导的系膜细胞增殖。在系膜细胞增殖同时TNF-α引起的细胞周期素E的蛋白表达也被LXA4下调。LXA4减少TNF-α诱导的肾小球系膜细胞中308位苏氨酸磷酸化的Akt1蛋白。LXA4呈剂量依赖性地阻止TNF-α所致的P27^kipl表达下调。结论：LXA4能够抑制TNF-α所致的大鼠系膜细胞的增殖，其机制依赖于Akt1／P27^kipl信号转导途径。     

p27kip1和cyclin D1在肾癌中的表达及临床意义

目的:研究肾癌组织中p27kip1和cyclinD1蛋白的表达,探讨其与肾癌生物学特征的内在联系。方法:应用免疫组化S-P法,对53例肾癌及6例正常肾组织中p27kip1和cyclinD1蛋白进行检测。结果:在正常肾组织中p27kip1均呈阳性表达,p27kip1阳性表达率在肾癌不同临床分期,不同病理分级中差异显著(G1～G2:70.00%,G3～G4:27.27%,P<0.05;T1～T2:70.83%,T3～T4:20.69%,P<0.05)。cyclin D1在正常肾组织呈阴性表达,cyclinD1阳性表达率在肾癌不同临床分期,不同病理分级中差异显著(G1～G2:51.35%,G3～G4:27.27%,P<0.05;T1～T2:58.33%,T3～T4:20.69%,P<0.05)。结论:p27kip1和cyclinD1蛋白在肾癌中的表达与肿瘤生物学行为密切相关,p27kip1和cyclinD1在肾癌的发生、发展中起重要作用。     

透明质酸结合蛋白对肿瘤细胞表达 cyclin E及p27kip1的影响

目的：研究透明质酸结合蛋白（HABP）对人乳腺癌、前列腺癌细胞和牛血管内皮细胞cyclinE及p27^kip1表达的影响。方法：将人脑透明质酸结合蛋白（hbHABP）全长cDNA转染到人乳腺癌细胞（MDA435）和前列腺癌细胞（TSU）中，研究细胞周期蛋白cyclinE及细胞周期蛋白依赖性激酶抑制物p27^kip1表达的变化。再将这些转基因细胞的培养上清液（CM）加入牛主动脉血管内皮细胞（ABAE）的培养上清液中，观察CM对ABAE的p27^kip1表达的影响。结果：MDA435和TSU细胞转染hbHABP基因后，cyclinE的表达水平均明显低于对照组细胞，而p27^kip1的表达水平均升高。ABAE细胞受CM作用后，p27^kip1的表达水平也高于对照组细胞。结论：hbHABP可能具有下调肿瘤细胞周期蛋白cyclinE和上调细胞周期蛋白依赖性激酶 抑制物p27^kip1的作用，从而抑制肿瘤细胞的生长；同时，hbHABP促进血管内皮细胞p27^kip1的表达，可以抑制肿瘤新生血管的形成。     

细胞周期正负调控因子在伤口愈合中的表达规律及意义

目的：伤口愈合是细胞增生受到严密调控的过程。细胞生长取决于细胞周期正负调控因子间的相互作用及平衡。本研究通过测定伤口愈合过程中细胞周期正向调控因子CyclinD1、CyclinE、CDK2、CDK4及负向调控因子p21^cipl、p27^kipl、p16^ink4a、p15^ink4b的表达变化，旨在探讨愈合过程中生长调控机制及意义。方法：采用大鼠全皮层开放伤模型，收集伤后3-30日伤口组织，以免疫组织化学法测定Ki67的表达，Western blot法检测CyclinD1、CyclinE、CDK2、CDK4及p21^cipl、p27^kipl、p16^ink4a、p15^ink4b。结果：细胞生长主要发生在伤后一周之内，生长高峰出现在伤后5日。CyclinD1、CDK2、CDK4的表达均保持较为恒定的水平，整个愈合过程无明显的起伏变化；伤后3-11日，CyclinE呈高表达，14日开始明显下降，伤后21-30日几乎回落到伤前水平。Western blot法未检测到p16^ink4a、p15^ink4b的表达；p21^cipl在伤后7-14日呈一过性表达，其峰值水平出现在伤后9日；p27^kipl呈结构性表达，伤后3-5日表达强度相对低下，随后大幅度上调。P21^cipl、p27^kipl表达确与Ki67的表达呈反向趋势。结论：伤口愈合过程中，p21^cipl、p27%kipl在防止过度增生趋势中发挥着监控作用，其中p27^kipl的作用更为重要。     

细胞周期正负调控因子在伤口愈合中的表达规律及意义

目的　伤口愈合是细胞增生受到严密调控的过程。细胞生长取决于细胞周期正负调控因子间的相互作用及平衡。本研究通过测定伤口愈合过程中细胞周期正向调控因子Cyclin D1、Cyclin E、CDK2、CDK4及负向调控因子p21cip1、p27kip1、p16ink4a、p15ink4b的表达变化，旨在探讨愈合过程中生长调控机制及意义。方法　采用大鼠全皮层开放伤模型，收集伤后3-30日伤口组织，以免疫组织化学法测定Ki67的表达，Western blot 法检测Cyclin D1、Cyclin E、CDK2、CDK4及p21cip1、p27kip1、p16ink4a、p15ink4b。结果　细胞生长主要发生在伤后一周之内，生长高峰出现在伤后5日。Cyclin D1、CDK2、CDK4的表达均保持较为恒定的水平，整个愈合过程无明显的起伏变化；伤后3-11日，Cyclin E呈高表达，14日开始明显下降，伤后21-30日几乎回落到伤前水平。Western blot法未检测到p16ink4a、p15ink4b的表达；p21cip1在伤后7-14日呈一过性表达，其峰值水平出现在伤后9日；p27kip1呈结构性表达，伤后3-5日表达强度相对低下，随后大幅度上调。p21cip1、p27kip1表达确与Ki67的表达呈反向趋势。结论　伤口愈合过程中，p21cip1、p27kip1在防止过度增生趋势中发挥着监控作用，其中p27kip1的作用更为重要。     

TGFα对胃癌细胞cyclin E和cyclin D1表达的影响

目的 探讨TGFα对胃癌细胞cyclinE和D1表达的促进作用，为研究TGFα促胃癌发生发展机制提供重要信息。方法 ①细胞体外培养，用无血清RPMI-1640阻断法进行G0／G1期同步化，用碘化丙啶染色和流式细胞术，检测其同步化率；②细胞经G0／G1期同步化后，给予2.5％低浓度血清＋RPMI-1640培养处理，以及在此基础上分别加入10、30、50μg／L TGFα处理，均作用5h；用免疫荧光染色及流式细胞术，检测细胞cyclinE和D1的表达情况。结果 细胞经无血清RPMI-1640阻断法处理，其G0／G1期的百分率由常规培养的54％上升到72％；加入TGFα处理后，细胞cyclinE和D1表达均显著高于单用低血清培养（均P〈0.001），并随TGFα剂量的增加而增加；当TGFα浓度为50μg／L时，两者的表达与单用低血清培养比，分别增加了25.18％和27.52％（均P〈0．001）。结论 TGFα可显著促进胃癌细胞cyclinE和D1的表达，从而发挥其促细胞周期进程的作用。     

Cigarette smoke extract promotes human pulmonary artery smooth muscle cells proliferation through protein kinase C alpha-dependent induction of cyclin D1

Background Exposure to cigarette smoke stimulates the proliferation of human pulmonary artery smooth muscle cells （HPASMCs） in vivo and in vitro. However, the molecular mechanism remains unclear. This study aimed at investigating the role of signaling pathways involving protein kinase C alpha （PKCα） and cyclin D1 in the cigarette smoke extract （CSE）-induced HPASMCs proliferation.Methods Synchronized HPASMCs were treated with different concentrations of CSE. Cell proliferation was evaluated by 3-（4,5-dimethylthiazol-2-yl）-2,5-diphenyttetrazolium bromide （MTT） assay and cell counting. Cell cycle was analyzed by flow cytometry with propidium iodide staining. Activation of PKCα was measured by detecting the expression of PKCαprotein in the cytosolic and membrane fractions using Western blotting analysis. Small interfering RNA （siRNA） was used to knockdown PKCα and cyclin D1. The cyclin D1 mRNA was assessed by real-time RT-PCR. The PKCα and cyclin D1protein levels were detected by Western blotting.Results Low concentrations of CSE （1%-10%） stimulated proliferation of HPASMCs, with its maximal effect at 5%.CSE （5%） led to PKCα activation. Inhibition of PKCα activity using G（o） 6976 or siRNA-mediated knockdown of PKCα significantly attenuated CSE-induced cell proliferation and G1/S transition. Cyclin D1, one of key regulators of G1/S transition, was found to be upregulated by 5% CSE at both the mRNA and protein levels. CSE-stimulated cellproliferation and G1/S transition was abolished by cyclin D1 siRNA. Moreover, G（o） 6976 or PKCα siRNA significantlysuppressed CSE-induced upregulation of cyclin D1 at both the mRNA and protein levels.Conclusion PKCα-cyclin D1 pathway at least partially mediates the CSE-induced proliferation in HPASMCs.     

细胞周期蛋白D1和p27kip1在前列腺癌中表达的意义

目的探讨细胞周期蛋白D1(cyclinD1)、p27kip1在前列腺癌组织中的表达水平以及与生物学行为的关系。方法应用免疫组织化学方法检测62例前列腺癌组织中cyclinD1、p27kip1蛋白的表达水平。结果62例前列腺癌中，cyclinD1、p27kip1蛋白表达总阳性率分别为41．9％(26／62)、30．6％(19／62)；两种蛋白阳性表达与病理组织学分级、被膜浸润呈负相关。结论cyclinD1、p27kip1蛋白表达可作为前列腺癌恶性表型的指标,cyclinD1是前列腺癌发生、发展过程中早期的分子事件。     

藏红花素对人膀胱移行细胞BIU-87细胞抗增殖作用研究

目的 研究藏红花素(crocin)对人膀胱移行细胞株BIU-87增殖的作用及机制.方法 MTT法测定crocin抗增殖效应,FCM分析细胞周期分布,RT-PCR技术测定Cyclin D1, p27kip1 mRNA表达变化,Western blot检测Cyclin D1,p27kip1蛋白表达变化.结果 crocin对细胞生长有抑制作用,且呈时间-剂量依赖关系.FCM检测显示,crocin可使细胞阻滞于G0/G1期;3.2mmol/L crocin作用于BIU-87细胞后RT-PCR结果显示,Cyclin D1 mRNA表达明显下调,p27 mRNA无显著变化;Western blot结果表明Cyclin D1蛋白明显下调;p27kip1蛋白表达显著增加.结论 crocin对细胞有抗增殖作用,可阻滞细胞于G0/G1期,其可影响Cyclin D1 mRNA转录,但并不影响p27 mRNA表达水平,并调控Cyclin D1、p27kip1蛋白表达.