缬沙坦对大鼠自体移植静脉内膜增生的影响

目的:观察特异性血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂缬沙坦对大鼠自体移植静脉内膜增生的影响。方法:①实验于2004-06/2004-10在哈尔滨医科大学附属第二医院动物实验中心完成。取Wistar成年大鼠150只,雌雄不拘。②大鼠自体移植静脉模型的建立:将大鼠麻醉后,显露并游离左颈总动脉及左颈外静脉长约1.5cm,游离并切取静脉长约1.0cm,肝素生理盐水冲洗,阻断并切取动脉0.8cm,将静脉端吻合于左颈总动脉。③实验过程中有4只大鼠因出血而死亡,有6只大鼠因移植静脉阻塞而不符合模型要求,随机将剩余140只大鼠分为2组,缬沙坦组和对照组,每组70只。缬沙坦组于造模前2天开始用缬沙坦灌胃[3mg/(kg·d)],对照组造模前2天开始用等量生理盐水灌胃,1次/d,直至取材。两组动物分别于造模后1,3d及1,2,4,6,8周取材备检,每组每个时间点10只。④采用苏木精-伊红染色,应用计算机图像分析仪计算新生内膜面积/中膜面积表示内膜增生程度;应用免疫组化方法检测增殖细胞核抗原和P-选择素的表达。光镜下观察,400倍高倍镜下,随机选取4个视野,计数单位视野阳性细胞数占总细胞数百分比,并取平均值。⑤两组间均数比较采用t检验。结果:实验过程中有4只大鼠因出血而死亡,有6只大鼠因移植静脉阻塞而不符合模型要求,最终进入结果分析140只,缬沙坦组、对照组各70只。①移植静脉新生内膜面积与中膜面积比:造模后2,4,6,8周缬沙坦组明显低于对照组(0.2752±0.0061,0.7836±0.0058,0.8809±0.0050,0.7609±0.0053;0.6999±0.0048,1.6131±0.0056,1.9339±0.0071,1.7897±0.0091,t=173.35,325.29,382.91,308.95,P<0.01)。②移植静脉增殖细胞核抗原阳性细胞百分比:造模后1,2,4,6周缬沙坦组明显低于对照组[(26.88±6.28)%,(30.45±6.80)%,(16.20±3.57)%,(5.37±1.34)%;(35.33±8.34)%,(40.49±10.04)%,(20.87±4.51)%(9.29±2.44)%,t=2.56,2.62,2.57,4.45,P<0.01]。③移植静脉P-选择素阳性细胞百分比:造模后1,2,4,6,8周缬沙坦组明显低于对照组[(6.41±2.61)%,(12.82±3.71)%,(23.46±7.75)%,(30.33±7.78)%,(18.61±5.90)%;(9.88±3.05)%,(18.41±5.33)%,(34.61±11.19)%,(40.11±7.36)%,(28.71±5.58)%,t=2.73,2.73,2.59,2.88,3.93,P<0.01]。结论:自体静脉移植后,移植静脉发生了内膜增生性变化;缬沙坦可抑制静脉移植术后增殖细胞核抗原及P-选择素的表达,从而减少白细胞与血管内皮细胞间的黏附,达到抑制内膜增生的目的。     

c-jun反义核酸对自体移植静脉内膜增生的影响

目的：观察反义c-jun核酸对自体移植静脉内膜增生的影响。方法：选择20只SD大鼠，等分为实验组和对照组，均行自体颈外静脉、颈总动脉移植手术，实验组移植静脉周围和血管吻合口周围应用反义c-jun核酸凝胶涂布；对照组仅行凝胶涂布。术后2周取出移植血管，分别行病理学、免疫组织化学检测移植血管内膜厚度，内膜平滑肌细胞数及增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen，PCNA)、脱氧核糖核酸和α-肌动蛋白等反映血管平滑肌细胞(vascular smooth musclecell，VSMC)增殖情况和表型转换的指标的表达情况。结果；移植静脉术后动脉化，管壁增厚，但转染c-jun反义核酸组移植血管内膜厚度(实验组和对照组均数差值为-20．7170，P&;lt;0．01)及VSMC(实验组和对照组比较t值为-13．011，P&;lt;0．01)增殖均较对照组减少，PCNA(实验组和对照组均数差值为-19．2310，P&;lt;0．01)和DNA(实验组和对照组比较F值为55．000，P&;lt;0．01)阳性表达情况亦较对照组明显减少，α-肌动蛋白的表达较对照组升高(实验组和对照组比较q值为5．503，P&;lt;0．01)。结论：反义c-jun核酸可抑制VSMC的表型转化及细胞分裂而减少VSMC的增殖，从而有效的抑制移植静脉内膜的过度增生。     

兔自体移植静脉内膜增生与缬沙坦的干预效应

目的:内膜增生是移植静脉再狭窄的主要原因,血管紧张素Ⅱ在血管组织增生中发挥着重要作用,缬沙坦作为AT1受体拮抗剂可在受体水平阻断血管紧张素Ⅱ的生物学作用.实验拟验证AT1受体拮抗剂缬沙坦对兔颈部静脉移植术后血管内膜增生的干预作用.方法:实验于2005-10/2006-10在南通大学动物实验中心完成.①实验分组:雄性新西兰大白兔20只,微生物控制级别Ⅰ级,兔龄16～18周,体质量(2.5±0.5)kg,随机排列表法分为对照组和治疗组,每组10只.②实验方法:所有动物行颈部自体静脉移植手术,对照组予普通饲料饲养;治疗组则予普通饲科 缬沙坦[10mg/(kg·d)]喂养.③实验评估:饲养4周后观察两组动物治疗前后的血压变化情况;取出静脉移植物行病理形态学检查;采用图像分析系统计算血管腔内膜的厚度、面积及中膜的厚度、面积;免疫组织化学方法检测增殖细胞核抗原的表达.结果:纳入大白兔20只,均进入结果分析,术后切口无感染,两组移植静脉无闭塞.①对照组和治疗组动物的血压在治疗前后无明显变化(P＞0.05).②对照组移植物内膜明显增厚,内膜下大量平滑肌细胞增殖,中膜稍有增厚:治疗组内膜增厚较对照组减弱,中膜平滑肌细胞向内膜下迁移、增殖较对照组明显减轻,中膜增厚不明显.③治疗组新生内膜厚度、面积及增殖细胞核抗原均低于对照组(P＜0.01),结论:缬沙坦可以显著抑制兔自体静脉移植后的再狭窄,并抑制移植静脉桥中增殖细胞核抗原的表达.     

超声辐照对兔移植静脉内膜增生的影响

目的 观察超声辐照对移植静脉内膜增生的影响,以期寻找防治内膜增生的新方法.方法 将32只实验兔随机分为超声辐照组和对照组,每组16只,建立兔自体颈内静脉移植替代颈总动脉模型.对照组仅常规术后处理,超声辐照组术后当天至第7天使用超声（2.190 W/cm2,0.8 MHz）辐照移植血管段,于术后第2、4周分别使用彩色多普勒超声和数字减影血管造影观察两组移植血管的通畅率;光、电镜观察两组移植静脉的组织形态学改变;增殖细胞核抗原（PCNA）免疫组织化学染色观察两组血管内膜平滑肌细胞（SMC）的增殖情况.结果 术后第4周,对照组、超声辐照组通畅率分别为87.5%及93.8%,两组比较差异无统计学意义（P〉0.05）;超声辐照组内膜厚度减少35%,与对照组比较差异有统计学意义（P〈0.05）;超声辐照组术后第2、4周PCNA阳性细胞数均明显低于对照组（5.7±0.5 vs.16.1±1.5,15.1±2.6 vs.50.2±5.3）,两组比较差异有统计学意义（P〈0.05）.结论 在兔自体静脉移植模型上,超声辐照可以降低SMC的增殖,减轻内膜增生.因而,超声辐照可考虑作为一种防治静脉移植后再狭窄的治疗方法.     

c-jun反义核酸对自体移植静脉内膜增生的影响

目的:观察反义c-jun核酸对自体移植静脉内膜增生的影响。方法:选择20只SD大鼠,等分为实验组和对照组,均行自体颈外静脉、颈总动脉移植手术,实验组移植静脉周围和血管吻合口周围应用反义c-jun核酸凝胶涂布;对照组仅行凝胶涂布。术后周取出移植血管,分2别行病理学、免疫组织化学检测移植血管内膜厚度,内膜平滑肌细胞数及增殖细胞核抗原(proliferatingcellnuclearantigen,PCNA)、脱氧核糖核酸和α-肌动蛋白等反映血管平滑肌细胞(vascularsmoothmusclecell,VSMC)增殖情况和表型转换的指标的表达情况。结果:移植静脉术后动脉化,管壁增厚,但转染c-jun反义核酸组移植血管内膜厚度(实验组和对照组均数差值为-20.7170,P<0.01)及VSMC实验组和对照组比较t值为-13.011,P<0.01)(增殖均较对照组减少,PCNA(实验组和对照组均数差值为-19.2310,P<0.01)和DNA(实验组和对照组比较值为F55.000,P<0.01)阳性表达情况亦较对照组明显减少,α-肌动蛋白的表达较对照组升高(实验组和对照组比较q值为5.503,P<0.01)。结论:反义c-jun核酸可抑制VSMC的表型转化及细胞分裂而减少VSMC的增殖,从而有效的抑制移植静脉内膜的过度增生。     

不同长度自体静脉移植对管壁细胞增殖的影响

目的通过动物实验,观察不同长度自体静脉移植对管壁细胞增殖的影响。方法将兔自体股静脉分别取10、15、20mm倒置移植到同侧股动脉,修复动脉缺损。术后第1、2、4周取材,观察移植静脉组织学变化并进行免疫组化检查。结果移植后静脉内皮细胞修复管腔,中膜平滑肌层数增多,弹力纤维增生,但仍保持血管壁的3层结构。随着移植血管长度的增加,内膜增生明显,中膜胶原纤维组织增多,内皮细胞修复不完全,弹力纤维增生减少。结论移植血管长度过长,可能加重移植血管的病理改变。     

不同长度自体静脉移植对管壁细胞增殖的影响

目的 通过动物实验，观察不同长度自体静脉移植对管壁细胞增殖的影响。方法 将兔自体股静脉分别取10、15、20mm倒置移植到同侧股动脉，修复动脉缺损。术后第1、2、4周取材，观察移植静脉组织学变化并进行免疫组化检查。结果 移植后静脉内皮细胞修复管腔，中膜平滑肌层数增多，但仍保持血管壁的3层结构。随着移植血管长度的增加，内膜增生明显，中膜胶原纤维组织增多，内皮细胞修复不完全，弹力纤维增生减少。结论 移植血管长度过长，可能加重移植血管的病理改变。     

自体移植静脉再狭窄的反义基因治疗

自体移植静脉再狭窄的反义基因治疗边杰芳综述张柏根审校（上海第二医科大学附属仁济医院血管外科，上海２００００１）ＡｎｔｉｓｅｎｓｅＧｅｎｅＴｈｅｒａｐｙｆｏｒＲｅｓｔｅｎｏｓｉｓｉｎＡｕｔｏｖｅｎｏｕｓＧｒａｆｔＢｉａｎＪｉｅｆａｎｇ（Ｄｅｐａｒｔｍｅ...     

P21基因转染治疗移植静脉内膜增生的潜在临床价值研究

目的:研究复制缺陷性腺病毒携带p21基因体外孵育转染治疗移植静脉内膜增生(IH)的可行性及潜在临床价值。方法:采用直接连接法将p21基因装入5型腺病毒,得Adp21。实验动物分3组(n=36):p21基因转染组(T)、药物治疗组(D)、对照组(C),T组移植静脉段取材后置于高滴度的病毒工作液(2×10~8pfu/ml)中,0℃～4℃下体外孵育转染45min,转染后将该静脉段经端端吻合间置于同侧颈总动脉;D组动物于术前1周给抗IH药西拉普利,C组动物无特殊处理,后2组移植静脉段取材后置于普通培养液45min(0℃～4℃下),同法吻合移植。于术后不同时间段取材,印迹杂交及免疫组化法鉴定p21基因的表达,HE及V.G染色观察移植静脉段的IH情况。结果:T组术后3d即有p21表达,另两组不表达。D组的I/M在术后3d至术后3w小于C组,有显著差异(P<0.05),至4w时D组的I/M已接近C组,无显著差异。3d时D组I/M小于T组,但1w后各时间段的情况则相反,T组I/M小于D组,均有显著差异(P<0.05,具体数值见表-1)。结论:体外孵育法可有效实现Adp21转染移植静脉段,静脉移植入体内后能有效表达转染的目的基因,功能蛋白p21能减轻移植静脉IH,其效果优于抗IH药西拉普利,有重要的潜在临床意义。     

SSR128129E对大鼠自体移植静脉桥内膜增生的影响

目的:探讨SSR128129E(SSR)对大鼠自体移植静脉桥内膜增生的影响。方法:将28只雄性SD大鼠建立自体静脉移植模型并随机分为实验组和对照组,实验组给予SSR 50 mg/(kg·d)胃灌注,而对照组给予生理盐水胃灌注,于术后2、4周取材备检。应用图像分析仪计算新生内膜厚度,免疫组化检测FGFR2的表达部位及western bolt检测FGFR2蛋白表达变化情况。结果:术后2、4周,相比于对照组静脉桥,实验组新生内膜厚度明显减少[(17.59±4.33)μmνs.(30.47±6.99)μm,P<0.05;(27.92±7.55)μmνs(53.95±8.90)μm,P<0.01]。FGFR2蛋白在内皮及平滑肌细胞中均有表达,且明显下降。结论 :SSR可明显抑制静脉桥内膜增生,原因可能与其降低FGFR2的表达,进而抑制平滑肌细胞增殖有关。     

可降解性聚乙醇酸血管外支架抑制移植静脉内膜的增生

背景:冠状动脉旁路移植后,自体大隐静脉桥的再狭窄是急需解决的问题.国内外研究已表明,应用血管外支架是预防再狭窄的一种可行办法.目的:以犬双侧后腿股静脉-股动脉旁路移植动物模型为基础,观察可降解性聚乙醇酸血管外支架抑制移植静脉内膜增生的作用. 方法:24只草犬随机抽签法分为3组,对照组直接进行双侧后腿股动脉移植,聚乙醇酸外支架组移植静脉后外套聚乙醇酸外支架,涤纶外支架组移植静脉后外套非限制性非可降解材料(涤纶)外支架.移植后4,6周取出移植静脉,测量其内膜、中膜的厚度.同时检测增殖细胞核抗原与血管内皮生长因子,计算其细胞增殖情况与滋养血管生长情况.结果与结论:聚乙醇酸外支架和涤纶外支架均与移植静脉壁之间形成了富含毛细血管的新生外膜,移植静脉中膜及内膜厚度均小于对照组(P < 0.05);中膜血管内皮生长因子表达显著降低(P < 0.05),而外膜血管内皮生长因子表达显著增高(P < 0.05),中膜增殖细胞核抗原表达显著降低(P < 0.05).聚乙醇酸外支架组移植静脉中膜及内膜厚度小于涤纶外支架组(P < 0.05),增殖细胞核抗原阳性细胞数低于涤纶外支架组(P < 0.05).提示可降解性聚乙醇酸血管外支架在血管移植后可以明显抑制移植静脉内膜和中膜增生,进而预防移植静脉再狭窄,是一种良好的可用于抑制移植血管再狭窄的外支架材料.     

分米波对家兔移植静脉内皮细胞及内膜增生影响的研究

目的：探讨分米波对移植静脉内皮细胞及内膜增生的影响。方法：构建家兔自体股静脉—股动脉移植模型，实验组对手术部位行分米波照射，对照组空白对照。分别于移植术后1、2、4周取移植静脉行亚硝酸银染色观察内皮细胞覆盖情况：HE及弹力纤维染色观察内膜、中膜及外膜厚度：增殖细胞核抗原（PCNA）免疫组化染色观察管壁细胞增殖情况：透射电镜观察超微结构变化。结果：与对照组相比，实验组内皮细胞修复较快，肌—内皮连接重建快，PCNA染色阳性细胞数目较少，血管内膜及中膜增生程度较轻，差异有显著性意义（P〈0．01）。结论：分米波能促进移植静脉内皮细胞的修复，减轻内膜的增生。     

缬沙坦减轻肺高压大鼠肺血管平滑肌细胞增生的研究

目的:探讨缬沙坦降压和对肺高压大鼠肺血管平滑肌细胞增生的影响。方法:对分流组及治疗组大鼠行腹主动脉-下腔静脉分流术,治疗组以缬沙坦40mg/(kg·d)灌胃。术后6周和11周分别测定肺动脉平均压(PAMP)、右心室(RV)/左心室+室间隔(LV+S)比值,观察肺血管壁的变化。结果:治疗组大鼠术后6周和11周PAMP、RV/LV+S及肺血管平滑肌细胞增生程度均比分流组为轻。结论:缬沙坦有降低肺高压大鼠肺动脉压力,减轻肺血管平滑肌细胞增生的作用。     

自体骨髓来源内皮祖细胞移植对移植静脉桥血管再内皮化及内膜增生的影响

目的:已有实验研究证明,移植骨髓来源内皮祖细胞可以促进球囊损伤后血管内皮的修复及抑制内膜的增生.那么移植骨髓来源内皮祖细胞对自体静脉移植术后静脉血管内皮修复和内膜增生是否起同样的作用?观察自体骨髓来源内皮祖细胞移植对自体静脉移植术后静脉桥血管再内皮化及内膜增生的作用。方法:实验于2007-01/08在北华大学附属医院内科实验室完成。实验室级别:P2级。①实验材料:6～8月龄雄性新西兰大白兔由解放军第二军医大学实验动物中心提供.体质量(2.5±0.5)kg,清洁级,实验过程中对动物处置符合动物伦理学标准。②实验方法:抽取成年兔骨髓分离制备骨髓单个核细胞,体外扩增法培养出骨髓来源内皮祖细胞.在培养第7天通过Ac-Dil-LDL、FITC-BS-1双染色及流式细胞仪检测CD34、CD133、FIK-1表达进行细胞鉴定,应用DAPI荧光染料体外标记培养7 d的骨髓来源内皮祖细胞、将成年新西兰大白兔23只随机分为细胞移植组(n=13)和对照组(n=10)进行自体左颈外静脉、颈总动脉移植术,在建模后第3天将DAPI标记的骨髓来源内皮祖细胞悬液经耳缘静脉植入细胞移植组动物体内,埘照组植入等量的PBS液③实验评估:细胞移植后4周.观察兔静脉移植段血管性及内膜厚度。结果:23只免均进入结果分析,无脱落:①通过体外扩增法培养的骨髓来源内皮组细胞,培养至7 d可见AC-Dil-LDI及FITC-BS-1双染色阳性细胞并表达CD34、CD133及FIK-1。②在呈绿荧光染色的血管内皮中可见有部分不均匀的散发蓝色荧光(DAPI标记细胞的细胞核)。③细胞移植组兔静脉血管内皮有DAPI标记的细胞.且内膜厚度明显低于对照组(P<0.05)结论:自体骨髓来源的内皮祖细胞移植可以促进损伤部位血管内皮的修复.并抑制内膜的过度增生。     

The role of the fibrocyte in intimal hyperplasia

BACKGROUND: Experimental animal studies have shown that the intimal hyperplasia (IH) responsible for occlusion after successful revascularization procedures may be partially caused by a bone marrow-derived cell that migrates to the site of vascular injury. Concurrent studies have demonstrated an extensive role in wound healing for the circulating fibrocyte. OBJECTIVES: We aimed to trace the path of the circulating cell that contributes to IH and determine if it is the fibrocyte. METHODS AND RESULTS: We established an in vitro model whereby purified monocytes from six healthy human volunteers were cultured into fibrocytes. These cells were morphometrically similar to the vascular smooth muscle cell (VSMC) found in IH and expressed alpha-smooth muscle actin (alpha-SMA) as well as CD34, CD45 and Collagen I (Col I), markers indicative of the fibrocyte. In an in vivo ovine carotid artery synthetic patch graft model, carboxyfluorescein diacetate, succinimidyl ester (CFSE) labeled circulating leukocytes were observed throughout the graft as well as in the neointima in 18 sheep. These cells were shown to produce collagen and alpha-SMA at 1, 2 and 4 weeks. These cells then underwent immunohistochemical analysis and were found to express a set of markers unique to the fibrocyte (CD34, CD45, Vimentin and alpha-SMA) and also to double stain for CD34 and alpha-SMA. CONCLUSIONS: IH in an ovine carotid artery patch graft model is partially derived from a hematopoietic circulating progenitor cell that acquires mesenchymal features as it matures at the site of injury.