肺岩宁方调控MALAT1抑制A549肺癌细胞侵袭的机制研究

目的探讨肺岩宁方调控肺腺癌转移相关转录本1(MALAT1)抑制A549肺癌细胞侵袭的机制。方法向A549细胞转染LV-vector、LV-over/MALAT1慢病毒载体,应用肺岩宁方(0～500μg/ml)干预细胞,应用实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)法检测MALAT1表达情况;应用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测肺岩宁方对肿瘤细胞增殖的影响;细胞侵袭实验检测肿瘤侵袭能力;Western blot法检测Wnt/β-catenin/EMT信号通路相关蛋白的表达。结果细胞侵袭实验结果显示,过表达MALAT1可增强A549细胞的侵袭能力,与正常对照组和慢病毒载体组相比,差异有统计学意义(P0.01);与正常对照组相比,肺岩宁方可抑制A549细胞侵袭,差异有统计学意义(P0.01),但过表达MALAT1后可减弱肺岩宁抑制细胞侵袭的能力。MTT结果显示,肺岩宁方可抑制肺癌A549细胞增殖,且呈浓度依赖性。qRT-PCR结果显示,肺岩宁方可下调MALAT1表达。Western blot结果显示,MALAT1可下调E-cadherin蛋白,上调N-cadherin、Snail及细胞核中β-catenin的蛋白水平,肺岩宁方能上调E-cadherin蛋白,下调N-cadherin、Snail及细胞核中β-catenin的蛋白水平,但过表达MALAT1可削弱肺岩宁对这些蛋白的调控作用。结论 MALAT1过表达通过激活Wnt/β-catenin通路,加速EMT进程促进A549肺癌细胞侵袭;肺岩宁方能够通过下调MALAT1,抑制Wnt/β-catenin/EMT信号轴,从而阻止A549肺癌细胞侵袭。     

中医药防治肝癌复发转移作用机制的实验研究进展

随着对中医药防治肝癌复发转移机制的逐步深入研究发现，中医药可以通过抑制肝癌细胞的生长增殖、影响肿瘤转移相关基因、调控细胞基质降解酶的表达、调节免疫功能、抗多药耐药、抑制肝癌血管形成、抑制黏附侵袭能力、调控细胞信号通路等方面，干预肝癌细胞的转移与复发，有效提高了肝癌患者的生活质量及生存率。本文将围绕中医理论、实验研究整理汇总，对中医药防治肝癌复发转移作用机制的实验研究进展进行综述。     

抑癌微小RNAs在鼻咽癌迁移和侵袭中的作用机制及中医药干预作用

鼻咽癌（NPC）发病部位隐匿,早期不易被发现,因此诊断时多为中晚期且伴有转移。NPC侵袭和转移是一个复杂的生物学过程,受到多种因素的影响,研究发现基因的表达调控参与了鼻咽癌侵袭和转移,这是当前研究领域的热点。微小核糖核酸（miRNAs）是一种短小（约22个核苷酸）的非编码RNA分子,通过调控靶基因的转录和翻译,参与了恶性肿瘤细胞侵袭和转移的各个环节并发挥重要作用。在NPC中也发现了miRNAs的异常表达,而这些表达的变化对NPC的侵袭和转移发挥了重要的调控作用,基于目前的研究,总结了不同miRNAs作为抑癌基因在NPC细胞迁移和侵袭中的调控机制,主要包括其对靶基因、迁移和侵袭相关蛋白及重要信号通路的调节,涉及了上皮间质转化（EMT）、新生血管和淋巴管、肿瘤干细胞和放化疗抵抗等生物学过程;另一方面,中医药在NPC的防治,特别是放化疗后改善不良反应、降低转移率等方面疗效显著,因此,该文总结了中医药及中药活性成分经miRNAs发挥抑制NPC细胞迁移和侵袭的作用及机制,以期为后续深入研究和开发抗NPC新药提供一定的理论基础。     

解毒三根汤对结肠癌SW480细胞侵袭转移及AKT/GSK-3β信号通路的影响

目的探讨解毒三根汤抗结肠癌侵袭转移的可能作用机制。方法在结肠癌SW480细胞中建立蛋白激酶B (AKT)敲减和相应阴性的细胞稳定株。实验分为阴性对照组、阴性三根汤组、AKT敲减对照组、AKT敲减三根汤组。首先用终浓度为50 ng/ml表皮细胞生长因子诱导各组细胞48 h建立上皮间质转化(EMT)模型。再用6 g/L解毒三根汤干预阴性三根汤组和AKT敲减三根汤组48 h。通过划痕实验、Transwell迁移和侵袭实验观察细胞侵袭转移能力,采用Western blot法检测EMT相关标记物(E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、Occludin、Twist、Slug、Snail、ZEB1)及蛋白激酶B/糖原合成酶激酶3β(AKT/GSK-3β)信号通路相关蛋白表达。结果与阴性对照组比较,其余3组细胞12 h及24 h迁移距离均缩短,迁移及侵袭过膜细胞数均减少(P 0. 05);与AKT敲减对照组比较,AKT敲减三根汤组细胞12 h及24 h迁移距离缩短,迁移及侵袭过膜细胞数减少(P 0. 05)。与阴性对照组比较,其余3组细胞E-cadherin、Occludin上调,N-cadherin、Vimentin、Slug、Twist、Snail、ZEB1、AKT、GSK-3β下调(P 0. 05)。与AKT敲减对照组比较,AKT敲减三根汤组E-cadherin、Occludin上调,N-cadherin、Vimentin、Snail、Slug、Twist、ZEB1、AKT、GSK-3β下调(P 0. 05)。结论解毒三根汤可能通过AKT/GSK-3β信号通路逆转结肠癌细胞的EMT,从而抗结肠癌侵袭转移。     

常春藤皂苷元对肠癌SW480细胞上皮-间质转化(EMT)及侵袭的影响

目的:探讨常春藤皂苷元(HG)通过调控上皮-间质转化(EMT)途径抑制大肠癌侵袭转移的机制。方法:以肠癌细胞SW480细胞为研究对象,不同质量浓度HG干预转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的SW480细胞,作用24 h后噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖能力。转移小室(Transwell)实验检测细胞侵袭能力。实时荧光定量-聚合酶链式反应(q PCR)和蛋白质免疫印迹(Western blot)法分别检测EMT标志物E-钙黏蛋白(E-cadherin),N-钙黏蛋白(N-cadherin),波形蛋白(Vimentin),蜗牛同源物1(果蝇)样1蛋白(Snail)及侵袭转移标志分子信号传导蛋白和转录激活物(STAT3),基质金属蛋白酶-9(MMP-9),MMP~(-1)4,伴有Kazal域的富含半胱氨酸的逆转诱导蛋白(RECK)表达变化。结果:HG可抑制TGF-β1诱导的肠癌SW480细胞增殖、干预EMT和降低侵袭能力,降低EMT标志分子N-cadherin,Vimentin,Snail及侵袭转移标志分子STAT3,MMP-9,MMP~(-1)4表达,增强E-cadherin,RECK的表达,与TGF-β1组比较均具有统计学差异(P0.05)。结论:HG可通过抑制EMT途径影响大肠癌细胞SW480侵袭转移。     

中医药干预Ⅲ型上皮间质转化的研究

Ⅲ型上皮间质转化(Epithelial-Mesenchymal Transition,EMT)主要涉及因细胞与细胞间的黏附中断、细胞极性丧失、以及细胞离散导致的恶性肿瘤的侵袭和转移。它与恶性肿瘤的高转移率、低生存时间以及不良预后密切相关。EMT的发生与细胞间连接蛋白、生长因子、蛋白激酶、转录因子、目的基因以及一些阻断相关蛋白基因表达的microRNA等生物信号密切相关,并且其发生过程受到多个信号转导途径的共同作用。目前中药对EMT的干预,在肿瘤的转移、复发、治疗效果以及预后评价中取得一定成效。虽尚未发现有效靶向治疗肿瘤EMT的药物,但在针对Ⅲ型EMT上述通路机制的中药单体成分及复合方剂的研究方面已有不少收获。通过分析中药对EMT相关生物标志物及其通路的影响机制,以期丰富中医药抑制EMT的研究方法和理论基础,为临床中药抗癌提供更多证据。     

中药抑制肿瘤上皮间质转化的研究

从中药单体和复方制剂两方面对中药抑制肿瘤上皮一间质转化（EMT）的研究进展作一整理,并总结了传统中医药与现代药理机制之间的关联,上皮-间质转化是上皮细胞通过特定的程序转化为间质细胞的生物学过程,在肿瘤的侵袭转移过程中起重要作用,但至今尚缺乏有效的治疗药物。中药单体成分及复合方剂抑制肿瘤EMT的基础和临床研究进行了很多,有些药物已经在临床中应用并经证实疗效确切,亦有些药物目前尚处于基础实验阶段,中药单体的作用机制较复方合剂进展迅速。但EMT的调控是个复杂的过程,需要寻找更加特异的靶点,特异性地抑制调控EMT的过程;同时需要积累更多的临床经验,兼顾临床疗效、不良反应及耐药现象。相信随着对EMT研究方法的不断改进和理论的完善,中药抑制EMT的研究必将受到越来越多的关注,对于实现中药现代化起到重要意义。     

白藜芦醇及其代谢产物与类似物抗癌症转移作用机制研究进展

癌细胞的上皮-间质转化(EMT)效应、细胞迁移以及侵袭能力在癌症转移过程中起到重要作用。白藜芦醇是在葡萄、浆果以及花生皮中发现的一种天然多酚。多项研究表明白藜芦醇及其代谢产物与类似物具有多种靶向抗癌作用。综述白藜芦醇及其代谢产物或类似物通过影响与EMT、癌症迁移和向不同器官侵袭有关的多种信号传导途径来抑制癌症转移的研究进展,以期为白藜芦醇在癌症治疗中的应用提供参考。     

基于PI3K/AKT/mTOR信号通路探讨中医药通过活性氧介导的内质网应激调控细胞自噬和凋亡抑制结肠癌转移的研究概况

肿瘤的发生发展需要微环境的保护与支持,自噬和细胞凋亡在结肠癌的复发转移中起到关键作用。PI3K/AKT/mTOR信号通路是自噬经典信号通路,过度的自噬能够诱导自噬细胞的凋亡,而ROS通过改变细胞的内部环境在细胞凋亡和自噬中发挥重要作用,并且能够通过产生ER应激影响ER中的蛋白错误折叠信号,从而影响细胞生长和死亡。因此,探究基于PI3K/AKT/mTOR信号通路,中医药是否可以通过ROS介导的ER应激调控自噬和细胞凋亡从而抑制结肠癌的转移,为临床提供治疗思路。     

中医药治疗大肠癌相关信号通路的研究进展

大肠癌的发生发展涉及多个信号通路的异常,是一种复杂的疾病,中医药通过调节多种信号通路,影响肿瘤细胞分化、细胞增殖、凋亡、细胞转移、细胞周期和肿瘤血管生成等多个生物过程达到预防结直肠癌发生（炎-癌转化）、治疗原发肿瘤、防治肿瘤转移（结直肠癌常见转移为肝转移、肺转移、骨转移、淋巴转移）、防治化疗出现多药耐药、减轻结直肠癌化疗毒副作用的目的。研究证实中医药治疗大肠癌相关通路的研究已相当广泛,基于检索国内外文献发现,白花败酱草、片仔癀等可以调控Notch通路,抑制大肠癌细胞生长;姜黄素、祛瘀解毒汤等调控Hippo通路抑制大肠癌胞的存活、增殖、侵袭和迁移;苦津茶、木犀草素等通过调控Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Keap1)/核转录因子E2相关因子2(Nrf2)/抗氧化反应元件（ARE）通路抑制大肠癌细胞增殖、保护肠道屏障;淫羊藿苷、银杏内酯C等调节肝细胞生长因子（HGF）/间质-表皮转化因子（c-Met）通路诱导大肠癌细胞凋亡、防治大肠癌肝转移;毛蕊花糖苷、芹菜素等调控p53蛋白促进大肠癌细胞凋亡、逆转大肠癌胸苷酸合成酶（TS）,减少大肠癌多药耐药;白藜芦醇、番茄红素等调节胰岛素生长因子（I...     

Traditional Chinese medicine for prevention and treatment of hepatocellular carcinoma: A focus on epithelial-mesenchymal transition

Hepatocellular carcinoma (HCC) is one of the most prevalent malignant cancers worldwide. Epithelial-mesenchymal transition (EMT), which endows epithelial cells with mesenchymal properties, plays an important role in the early stages of metastasis. Conventional cancer therapies have promising effects, but issues remain, such as high rates of metastasis and drug resistance. Thus, exploring and evaluating new therapies is an urgent need. Traditional Chinese medicines (TCMs) have been acknowledged for their multi-target and coordinated intervention effects against HCC. Accumulating evidence indicates that TCM can inhibit the malignancy of cells and the progression of EMT in HCC. However, studies on the effects of TCM on EMT in HCC are scarce. In this review, we summarized recent developments in anti-EMT TCMs and formulae, focusing on their underlying pharmacological mechanisms, to provide a foundation for further research on the exact mechanisms through which TCM affects EMT in HCC.     

基于上皮间质转化的人参活性成分抗肿瘤作用的研究进展

上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)是胚胎发育、细胞纤维化及肿瘤转移过程中的重要环节,其因可促进肿瘤细胞侵袭和扩散而成为肿瘤转移的关键促进剂,也是许多肿瘤的最终病理变化过程。在EMT过程中,上皮细胞失去极化结构并获得迁移和侵袭能力,导致肿瘤转移,是造成恶性肿瘤临床治疗失败且死亡率高的重要原因之一。研究表明,人参活性成分在不同类型肿瘤的EMT过程中均可发挥抑制作用,具有较好的临床疗效且不良反应少。因此,总结人参活性成分通过抑制EMT过程的抗肿瘤作用,以期为肿瘤治疗提供新思路以及为新型抗肿瘤中药的开发提供支撑。     

软坚散结颗粒对人胃腺癌SGC-7901细胞EMT的抑制作用及相关机制

目的:上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)现象的发生发展是肿瘤转移的关键因素之一,对胃癌EMT现象的研究可能有助于控制胃癌转移。本课题旨在研究软坚散结方(RJSJ)对人胃腺癌SGC-7901细胞EMT的抑制作用并探讨相关机制。方法:采用噻唑蓝(MTT)比色法观察RJSJ对SGC-7901细胞的抑制作用;采用transwell方法观察RJSJ对SGC-7901细胞侵袭的抑制作用;采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)观测SGC-7901细胞EMT过程中锌指E盒结合同源盒蛋白1(Zinc finger E-box binding homeobox 1,Zeb1),锌指E盒结合同源盒蛋白2(Zinc finger E-box binding homeobox 2,Zeb2)以及E-钙黏蛋白(E-cadherin)mRNA和蛋白的表达。结果:(1)MTT结果显示,不同浓度RJSJ组均能有效抑制SGC-7901细胞的增殖(P0.05),RJSJ对SGC-7901细胞的抑制作用呈剂量和时间依赖。(2)transwell侵袭实验结果显示,不同质量浓度RJSJ(250,500,1 000 mg·L-1)对SGC-7901细胞的穿膜能力有不同程度的抑制作用(P0.05)。(3)Real-time PCR和Western blot结果显示,与空白组比较,RJSJ各组均能使E-cadherin mRNA和蛋白表达增加,Zeb1,Zeb2mRNA和蛋白表达减少,其中RJSJ高剂量组能够明显上调E-cadherin mRNA和蛋白表达,下调Zeb1,Zeb2 mRNA和蛋白表达(P0.05)。结论:RJSJ对SGC-7901细胞有直接的抑制作用;RJSJ对SGC-7901细胞EMT有抑制作用,其机制可能与下调Zeb1,Zeb2 mRNA及蛋白表达,上调E-cadherin mRNA及蛋白表达有关。     

白杨素调控YAP介导的EMT进程抑制人结肠癌HCT-116细胞转移的机制研究

目的 探讨白杨素在体内外对人结肠癌HCT-116细胞侵袭与转移作用及相关机制。方法 本实验应用CCK-8法检测白杨素对HCT-116细胞增殖能力的抑制作用。利用划痕和Transwell法检测白杨素干预HCT-116细胞后对细胞迁移和侵袭能力的作用。通过Western blot检测白杨素干预后对HCT-116细胞中上皮间质转化(EMT)相关蛋白E-cadherin、N-cadherin、Vimentin和Snail表达水平的影响,并检测白杨素对HCT-116细胞内Yes相关蛋白(YAP)蛋白表达的作用。利用siRNA干扰实验考察YAP低表达对白杨素在HCT-116细胞侵袭作用和EMT进程中的影响。构建体内实验性肺转移模型考察白杨素对HCT-116细胞体内转移的作用。结果 白杨素从8 μmol·L^-1开始能够显著抑制HCT-116细胞的增殖,8 μmol·L^-1以下对HCT-116细胞增殖没有显著抑制作用。划痕和Transwell实验显示,白杨素(1、2和4 μmol·L^-1)能够剂量依赖性的抑制HCT-116细胞的迁移与侵袭。Western blot结果显示,白杨素能够上调E-cadherin的蛋白表达,下调N-cadherin,Vimentin及转录因子Snail的蛋白表达。同时还发现白杨素能够下调YAP蛋白表达水平,而利用siRNA下调YAP后能显著逆转白杨素对HCT-116细胞迁移与侵袭的抑制作用,并能逆转白杨素对HCT-116细胞EMT过程的促进作用。体内肺转移实验显示,白杨素显著抑制了HCT-116在肺上转移结节。结论 本实验表明,白杨素能够在体内外抑制人结肠癌HCT-116细胞的侵袭与转移能力,其作用机制与抑制YAP的蛋白表达,下调EMT过程相关。     

从细胞上皮-间质转化角度探讨从痰论治胃癌侵袭转移

胃癌原发灶侵袭和转移是导致患者生存质量下降及短期内死亡的主要原因,如何更早期更及时防治胃癌侵袭转移是目前研究的重点。研究证实细胞上皮-间质转化（EMT）是肿瘤侵袭转移的重要前提。根据前期研究中运用金龙蛇制剂从痰论治胃癌结果,从细胞上皮-间质转化角度来探讨从痰论治胃癌侵袭转移将具有明确的现实意义。     

“已病防变”——调控肿瘤转移前微环境防止肿瘤转移

肿瘤转移是癌症相关死亡的主要原因。转移前微环境的形成是肿瘤转移的关键始动因素。现代药理研究显示,中药可以通过影响肿瘤分泌物抑制肿瘤转移、阻止肿瘤招募抑制性免疫细胞、影响特定组织部位基质组分的炎性极化。中药作用具有多靶点、微效、双向调节等特点,可通过影响肿瘤的功能基因网络,在调控肿瘤相关基因表达、基因的组合上发挥多因微效的整合调节作用,这与以信号转导动态网络为药物靶标的研究策略相契合。因此,通过中医药防治肿瘤转移前微环境的形成是行之有效的研究路径。对中药调控肿瘤转移微环境的现状进行综述,为中医药防治肿瘤转移的研究提供理论依据。     

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??OBJECTIVE To investigate the effect of iridoids in Ajuga decumbens(ADI) on the metastasis of invasive breast cancer cells and related mechanisms. METHODS Several assays including cell-HUVEC adhesion assay were conducted, Transwell migration and Transwell invasion assay were conducted. In vivo antimetastatic effect of ADI was determined using experimental lung metastatic models induced by tail vain injection of 4T1-luc cells. Western blot analysis was employed to detect the expression of associated proteins of EMT and ERK1/2 MAPK signaling pathway. RESULTS The 50-200 mgL^-1 ADI could significantly inhibit the cell-HUVEC adhesion, migration and invasion of MDA-MB-231 cells. Administration with 200 mgkg ^-1 dose of ADI markedly inhibited the lung tumor nodules. Treatment with ADI resulted in markedly inhibition of phosphorylation of ERK1/2 and the reversal EMT of breast cancer cells, which increased the levels of epithelial biomarkers, such as E-cadherin and ZO-1, and reduced the levels of mesenchymal biomarkers, such as vimentin. CONCLUSION These results indicates that ADI can inhibit breast cancer cell invasion by suppressing the ERK1/2 MAPK pathway as well as reversing the epithelial-mesenchymal transition.     

人参皂苷Rb1、Rg3、Rh2 抗肿瘤作用与机制概况

人参皂苷是中药人参抗肿瘤作用的主要成分,临床药理研究表明：人参皂苷Rb1 可以通过抑制P-gp 外排药物,增强细胞对药物的敏感性,降低肿瘤细胞多药耐药性,拮抗免疫功能的抑制和维持机体对肿瘤细胞的免疫功能;Rg3 则主要通过影响肿瘤细胞蛋白质表达、作用于细胞分裂来诱导肿瘤细胞凋亡,并能抑制肿瘤新血管生长;Rh2 通过抑制肿瘤细胞增殖、诱导其凋亡、控制肿瘤细胞转移来起到抗肿瘤作用,本文通过对人参皂苷Rb1、Rg3、Rh2 抗肿瘤作用及机制的阐述,为其临床应用开发提供理论依据。     

基于ZEB2、14-3-3ζ/TGF-β/smad通路探讨七方胃痛颗粒对人胃腺癌AGS细胞EMT的影响

目的探讨七方胃痛颗粒对ZEB2、14-3-3ζ/TGF-β/smad通路介导胃癌EMT和获得浸润侵袭转移能力过程中的作用和机制及对EMT细胞的ZEB2、14-3-3ζ表达的影响,为七方胃痛颗粒防治胃癌提供理论依据。方法参照血清药理学方法制备七方胃痛颗粒含药血清,观察七方胃痛颗粒中药对AGS细胞、TGF-β1诱导AGS细胞形成EMT细胞的干预情况,分别采用细胞划痕试验、Transwell细胞侵袭试验和MTT法检测细胞侵袭迁移穿透能力;采用Western Blot、RT-PCR法检测细胞ZEB2、14-3-3ζ的转录及表达情况。结果与TGF-β1/Smad组和空白对照组相比,七方胃痛颗粒能抑制人胃腺癌AGS细胞及EMT细胞的增殖、侵袭和穿透能力(P<0.05),且EMT细胞中ZEB2、14-3-3ζ蛋白和mRNA表达降低(P<0.05),并呈时间依赖性。结论在体外试验中,七方胃痛颗粒能抑制人胃腺癌AGS细胞及其EMT细胞的增殖、侵袭和穿透能力,其机制可能与抑制其ZEB2、14-3-3ζ及TGF-β/smad通路相关,从而达到抗癌作用。