恶性疟原虫融合抗原PfCP-2.9在不同品系小鼠中的免疫特性

目的:探讨恶性疟原虫融合抗原PfCP-2.9在不同品系小鼠(BALB/ca、C57BL/6J、C3H/He、DBA/2J及昆明种)中的免疫原性和免疫反应特性.方法:以ISA720为佐剂,PfCP-2.9抗原皮下免疫5种品系小鼠3次,间隔3周.以ELISA检测免疫血清中特异性抗体的动态变化、IgG抗体亚型及对融合抗原各组分的抗体水平,以间接荧光抗体实验分析免疫血清对恶性疟原虫天然抗原的识别情况.结果:5种品系小鼠均能产生针对PfCP-2.9的免疫应答,3次免疫后血清中特异性抗体滴度达105以上.PfCP-2.9所诱生的免疫血清不但能识别MSP1-19和AMA-1(Ⅲ)两个主要片段,而且能识别恶性疟原虫天然抗原.所诱导的4种IgG抗体亚型中,IgG1和IgG2a是免疫血清中主要的抗体类型.但特异性抗体水平及抗体亚型分布因遗传背景不同而异.结论:融合蛋白PfCP-2.9在5种不同品系小鼠中具有强的免疫原性,其抗体能识别疟原虫天然蛋白.     

恶性疟原虫裂殖子表面蛋白3功能区片段的制备及其免疫原性分析

目的构建恶性疟原虫裂殖子表面蛋白3功能片段MSP3(69)与谷胱甘肽(GST)的融合蛋白,并在大肠杆菌中进行表达,分析其免疫原性。方法采用大肠杆菌系统表达融合蛋白GST-MSP3(69),以疟疾病人血清进行Western-blot,并以ISA720、佛氏、氢氧化铝与CpG联合3种佐剂与GST-MSP3(69)融合蛋白乳化,免疫Balb/ca小鼠,分析其免疫原性。结果在大肠杆菌系统中成功表达GST-MSP3(69)融合蛋白,疟疾病人血清能与融合蛋白反应。3种佐剂免疫Balb/ca小鼠均能诱发Balb/ca小鼠产生较高水平的特异抗体,3次免疫后的抗体滴度分别为4.5×105,4.1×105和3.5×105。3次免疫后血清抗体亚型分析显示该蛋白能够诱导Balb/ca小鼠产生较高滴度的亲细胞亚型IgG1和IgG2b,ISA720、佛氏、氢氧化铝与CpG联合佐剂组IgG1分别为8×104、7.8×104、6.8×104,IgG2b分别为1.2×104,1.25×104、1.5×104。统计学分析显示不同佐剂组的抗体滴度及抗体亚型滴度之间差异均无统计学意义(P>0.05)。结论制备了在大肠杆菌表达的GST-MSP3(69)融合蛋白,该蛋白具有高免疫原性,并产生亲细胞亚型抗体,这些为研究MSP3蛋白功能区的免疫保护作用打下了基础。     

修饰后日本血吸虫Sjc-97基因的真核表达及其免疫原性

目的:研究日本血吸虫大陆株副肌球蛋白基因第3区域片段(Sjc-97f3)毕氏酵母表达产物的免疫原性.方法:根据毕氏酵母密码子使用频率重新设计Sjc-97核苷酸序列,依据不对称PCR原理人工合成Sjc-97f3,并在毕氏酵母中表达.表达产物通过Ni-NTA亲和层析和凝胶过滤层析方法纯化,再分别与ISA720和Al(OH)3佐剂乳化后,免疫C57BL/6和昆明小鼠,通过尾蚴膜反应和ELISA反应检测特异性抗体.结果:Sjc-97f3基因在毕氏酵母中获得了高水平分泌表达,其表达产物能与日本血吸虫免疫血清进行特异性免疫反应.经与佐剂乳化后,该蛋白具有良好的免疫原性.ELISA结果显示重组蛋白在小鼠体内可激发明显的抗体反应,但2种佐剂所诱导的抗体水平以ISA720佐剂为高; 该抗原在不同品系小鼠中的抗体水平存在显著差异(P<0.01),昆明鼠的抗血清滴度远高于C57BL/6小鼠.小鼠免疫血清能识别日本血吸虫表面抗原,产生特异的尾蚴膜反应. 结论:密码子优化的Sjc-97f3在毕氏酵母中获得高效表达,其产物具有良好的免疫原性.     

CpG序列诱发抗dsDNA抗体的免疫学特性分析

目的 研究胞嘧啶鸟嘌呤二核苷酸(cytosine guanine dinucleotides,CpG)序列诱生抗dsDNA抗体的免疫特征.方法 以CpG序列为生物佐剂,用天然的小牛胸腺DNA模拟自身抗原,免疫正常的BALB/c小鼠.免疫结束后,分析小鼠血清中抗dsDNA抗体的特征.结果 CpG序列诱生的抗dsDNA抗体...     

CpG基序对幽门螺杆菌疫苗的免疫佐剂效应实验研究

目的　探讨CpG在幽门螺杆菌疫苗研究中的佐剂效应。方法　将 60只BALB c小鼠分为 4组 ,分别以H .pylori尿素酶B亚单位 (rUreB) CPG、rUreB CT、单独UreB以及PBS进行口服免疫 ,ELISA检测胃、肠、气管冲洗液sIgA以及血清IgG亚类 (IgG1,IgG2a) ,RT PCR差异显示T淋巴细胞IFN γ、IL 4mRNA。结果　①CpG rUreB组在胃、肠、气管和血清产特异性抗体水平显著高于PBS组和单独rUreB组 (P <0 0 1) ,与CT UreBs组差异不显著 (P >0 0 5 ) ;②抗原刺激后CpG rUreB组T淋巴细胞表达的IFN γ、IL 4mRNA显著高于PBS组和rUreB组。结论　①CpG可能是H .pylori疫苗研究中有效的粘膜佐剂 ;②CpG rUreB组诱导的可能是Th1 Th2型免疫应答。     

不同剂量CpG ODN联合STAg鼻内免疫BALB／c小鼠诱导的免疫应答

目的 观察弓形虫可溶性速殖子抗原（STAg）与不同剂量的CpG ODN联合滴鼻免疫小鼠的免疫效果，探索CpG ODN佐剂最佳剂量。方法 5-6周龄BALB／c小鼠50只随机分为5组，每组10只，实验组以20μg STAg联合不同剂量CpG ODN佐剂滴鼻免疫小鼠，佐剂剂量分别为0、1、5、10μg，对照组以PBS滴鼻，间隔2wk免疫2次。末次免疫后30d断颈处死全部小鼠，分离脾、Peyer＇s patch（PP结）、肠系膜淋巴结（MLN）和IEL淋巴细胞，观察淋巴细胞增殖情况。用ELISA的方法检测血清IgG和粪便IgA含量。结果 与PBS组和0剂量佐剂组相比，10μg CpG ODN联合STAg免疫后，小鼠肠粘膜淋巴组织和脾淋巴细胞增殖明显（P〈0．05）。10μg组血清IgG远高于对照组（P〈0．05），粪便IgA高于对照组（P〉0．05）。结论 CpG ODN可作为STAg的粘膜佐剂，10μg CpG ODN与STAg联合具有最佳的免疫效果。     

CpG ODN联合HBsAg免疫BALB/c小鼠和HBV转基因C57BL/6J小鼠

目的:探讨人工合成硫代修饰的含CpG基序的寡脱氧核苷酸(ODN)作为佐剂对HBsAg诱导BALB/c和HBV转基因小鼠产生免疫应答的影响. 方法: 用人工合成CpG ODN与血源HBsAg联合免疫BALB/c和HBV转基因C57BL/6J小鼠,采用ELISA方法观察小鼠血清HBsAg及抗-HBs水平,用ELISPOT方法判断CpG ODN对HBsAg免疫小鼠脾T淋巴细胞分泌细胞因子的影响. 结果: CpG ODN联合HBsAg免疫BALB/c小鼠较HBsAg单独注射组同期抗-HBs滴度明显提高,尤其在首次免疫后6、8、12 wk,2组比较差异显著(P<0.05),联合免疫较CpG ODN单独免疫自首次免疫后4 ～16 wk差异显著(P<0.05).与HBsAg,CpG ODN 单独免疫比较,联合免疫能使HBsAg特异性分泌IFN- γ T细胞分别增加3或9倍;CpG ODN,HBsAg联合免疫可诱导转基因小鼠产生抗-HBs,随时间延长,抗体滴度逐渐升高,并能使更多小鼠产生抗体,而单用HBsAg组、CpG ODN组均不能诱导抗-HBs的产生,免疫后各组血清HBsAg浓度较免疫前明显下降(P <0.05),但组间无明显差别(P>0.05),与HBsAg,CpG ODN 单独免疫比较,联合免疫能使HBsAg特异性分泌IFN- γ T细胞分别增加3或11倍. 结论: CpG ODN作为佐剂可增强HBsAg诱导BALB/c小鼠产生体液及细胞免疫应答,CpG ODN ,HBsAg联合免疫可打破HBV转基因小鼠对HBsAg免疫耐受,可望成为慢性乙型肝炎的有效预防和治疗性疫苗.     

CpG寡脱氧核苷酸作为人用疫苗佐剂的初步研究

目的：研究活化人免疫细胞的CpG寡脱氧核苷酸（CpG-ODN)在动物模型中的疫苗佐剂活性。方法;通过体外试验确定研究人CpG-ODN的动物模型,评价人 CpG-ODM在动物模型中对HBsAg的疫苗佐剂活性。结果：CpG2006等含有5′GTCGTT3′基元的人Cp-ODN能够活化小鼠脾细胞分泌IgM和IFN－γ,而CpGT7等含有5′GTCGTC3′基元的人CpG-ODN对小鼠活性很弱,具有较强人特 异性,对两类序列均能够较好活化恒河猴B细胞。以上结果提示小鼠和恒河猴可能用作研究人CpG-ODN的动物模型。在BALB／c小鼠中含有5′GTCGTT3′基元的序列能够显著提高抗－HBs总抗体、IgG1和IgG2a亚型抗体水平,而含有5′GTCGTC3′基元的序列作用稍弱,但两者均能够显著逆转Al(OH3)对Th1类免疫应答的抑制作用,使IgG2a/IgG1从0．014提高到1左右。然而在恒河猴体内的疫苗佐剂活性较弱,CpGT7能够使特异性抗体滴度提高2倍,而CpG2006没有作用。结论：动物模型结果表明CpG-ODN是一种良好的Th11类候选人用疫苗佐剂。     

美洲大蠊重组BCG-Cr PI变应原的免疫原性

目的对表达美洲大蠊CrPI变应原的卡介苗（BCG）进行免疫原性评估,为BCG脱敏疫苗的研制提供实验基础。方法10^6CFU重组BCG．CrPI包下注射免疫BALB／C小鼠,分别于免疫0、2、4、6、8周收集血清。使用纯化的重组CrPI被ELISA板,ELISA检测CrPI特异性IgG及IgG1、IgG2a亚类。结果重组BCG—CrPI皮下注射免疫BALB／C小鼠2用后,血清CrPI特异性IgG显著高于对照组（P〈0．05）,实验组IgG1及IgG2a也显著高于对照组（P〈0．05）,IgG2a升高更明显。结论重组美洲大蠊BCG—CrPI具免疫原性,并且诱Th1优势免疫应答。     

日本血吸虫HGPRT重组抗原与不同佐剂联合应用对小鼠免疫保护作用的研究

目的:观察日本血吸虫(大陆株)次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(hypoxanthine-guanine phosphoribosyl-transferase, HGPRT)重组抗原(reSjc HGPRT)与ISA206或弗氏佐剂联合免疫对小鼠诱导抗日本血吸虫感染的保护作用. 方法:雌性C57BL/6小鼠随机分为5组:reSjc HGPRT加ISA206佐剂免疫组、reSjc HGPRT加弗氏佐剂组、ISA206佐剂对照组、弗氏佐剂对照组和感染对照组.20 μg重组抗原和ISA206或弗氏佐剂乳化后小鼠项背部多点皮下注射,共免疫3次,每次间隔2周.佐剂对照组小鼠仅注射ISA206或弗氏佐剂和生理盐水,感染对照组不注射任何重组抗原或生理盐水.于末次免疫后3周,每只小鼠经腹部皮肤感染(30±1)条日本血吸虫尾蚴,6周后剖杀小鼠,门脉灌注收集成虫,计数成虫数、雌雄合抱数和小鼠肝组织虫卵数.在免疫前、攻击感染前和小鼠剖杀前分别采血并分离血清,用ELISA检测血清中特异性IgG抗体. 结果:重组抗原加ISA206佐剂或弗氏佐剂免疫组均诱导小鼠产生特异性IgG抗体应答,与感染对照组和弗氏佐剂对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05);诱导小鼠产生的减虫率、减雌雄合抱率和肝组织减卵率分别为53.7%、59.3%、44.9%和43.3%、44.1%、33.0%,与感染对照组和2种佐剂对照组相比均有统计学意义(P<0.05).结论:reSjc HGPRT与ISA206或弗氏佐剂联合免疫,可诱导小鼠产生抗血吸虫感染保护作用.     

多种属CpG ODN诱导特异性抗体反应的研究

目的 探讨人工合成的CpG ODN对不同物种的免疫刺激活性,开发具有广谱免疫刺激活性的CpG ODN.方法 将特定的CpG ODN单独或与不同的抗原联合分别免疫鸡和小鼠,用ELISA检测不同时间鸡和小鼠特异性抗体的滴度.结果 CpG ODN均能诱导鸡和小鼠产生抗原特异性抗体,且抗体水平明显高于对照组(P＜0.05).结论 这种CpG ODN在一定程度上具有广谱免疫刺激特性.     

Regulating Effects of Novel CpG Chitosan-nanoparticles on Immune Responses of Mice to Porcine Paratyphoid Vaccines

INTRODUCTION CpG oligodeoxynucleotide is a newly emerging powerful adjuvant inducing a broad array of immune responses to a wide variety of antigens. Previous studies showed that CpG motifs activate B cells and dendritic cells (DC), trigger immune cascade…     

人CpG-寡脱氧核苷酸对质粒DNA免疫刺激活性的影响

目的：研究人CpG寡脱氧核苷酸（CpG-ODN)对DNA疫苗质粒骨架免疫刺激活性的影响。方法：将多拷贝对人和小鼠均有免疫刺激活性的CpG2006序列导入质粒骨架,并在小鼠模型体内外评价重组质粒DNA的免疫刺激活性。结果：首先构建了质粒pMini,仅含有卡那抗性基因和pUC18复制起点,然后向pMini中导入了多拷贝对小鼠具有交叉免疫刺激活性的人CpG2006拷贝数的增加,质粒DNA在体外活化小鼠脾细胞分泌IgM的能力逐步增强,但诱生IFN－γ的能力却依次降低,用重组质粒DNA作为HBsAg疫苗佐剂,免疫BALB／c小鼠,pMini和pCpG11对特异性总抗体以及IgG1亚型抗体水平无明显影响（P＞0．05）,但pCpG26能够使两类抗体水平分别提高3倍（P＜0．001）和2倍（P＜0．02）,所有质粒DNA均能够使IgG2a亚型抗体水平提高5－10倍,但三者之间差异无显著意义（P＞0．05）,结论：向质粒骨架中导入一定数量的人CpG-ODN能够增强质粒DNA的免疫刺激活性。     

CpG-ODN调节小鼠免疫细胞对HBsAg体液免疫应答性的初步研究

目的：初步探寻能够刺激小鼠免疫系统产生针对HBsAg的体液免疫应答的最佳CpG-ODN序列。方法：应用正交设计法设计含有不同序列的10例CpG-ODN免疫小鼠，以研究影响CpG-ODN免疫活性的6个因素；免疫时间，CpG基序侧翼核苷酸、5‘‘‘‘‘‘‘‘-poly(A)、硫代修饰，回文结构和CpG-基序数量，筛选出量优组合的CpG-ODN。结果：10例CpG-ODN与HBsAg一起免疫小鼠均可不同程度地诱导小鼠抗HBsAg抗体水平的变化，显示出CpG-ODN较强的佐剂效应。结论：CpG-ODN与HBsAg一起免疫小鼠可诱导小鼠产生强烈的抗体应答，以六个因素均存在时CpG-ODN的免疫刺激活性较强，即10号序列5‘‘‘‘‘‘‘‘-AAAAAACGTTAACGTT-3’为本实验中刺激小鼠免疫系统产生针对HBsAg的体液免疫应答的最佳序列。     

伤寒Ty21a-CpG佐剂减毒活疫苗诱导抗体应答的研究

目的探讨人工合成的CpG-ODN 作为佐剂对伤寒Ty21a减毒活疫苗诱导小鼠产生抗体的影响.方法将不同剂量的人工合成的含CpG ODN的硫代磷酸寡核苷酸作为佐剂与伤寒Ty21a减毒活疫苗混合,以小鼠作为免疫动物进行免疫接种,采用试管凝集法检测免疫小鼠的血清特异性抗体滴度.结果 CpG-ODN 30μg佐剂组与不用佐剂的Ty21a减毒活疫苗相比较,应用CpG-ODN 组小鼠产生更强的抗体应答,抗体几何均数滴度相比有明显的差异.结论 CpG-ODN作为佐剂可促进伤寒Ty21a减毒活疫苗诱导昆明小鼠产生特异性免疫应答.     

佐剂CpG ODN对HBV基因疫苗诱导抗体产生的影响

目的 探讨人工合成的ＣｐＧ ＯＤＮ作为佐剂对乙肝病毒基因疫苗诱导小鼠产生抗ＨＢｓ的影响。方法 构建编码乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）表面抗原蛋白Ｓ的重组真核表达质粒ｐＣＲ３．１－Ｓ作为ＨＢＶ基因疫苗,人工合成含ＣｐＧ ｍｏｔｉｆ的硫代磷酸寡核苷酸作为佐剂,以ＢＡＬＢ／ｃ小鼠作为实验动物进行免疫接种,采用ＥＬＩＳＡ法检测免疫小鼠的抗ＨＢｓ应答。结果 与生理盐水作为佐剂组相比较,应用ＣｐＧ ＤＯＮ组小鼠产生更     

Nanoparticles as a vaccine adjuvant of anti-idiotypic antibody against schistosomiasis

Background The development of new adjuvants for human use has been the focus of attention. This study’s aim is to explore the possibility of using nanoparticle Ca nanoparticles (CA) as a vaccine adjuvant of anti-idiotypic antibody NP30 against schistosomiasis and its protective mechanisms. Methods Nanoparticle CA-NP30 conjugate (CA-NP30) was fabricated. BALB/c mice were immunized actively with CA-NP30 to evaluate its effects of protective immunity on mice. The serum levels of specific IgG, IgG1 and IgG2a antibodies against NP30 and the concentrations of IFN-γ and IL-4 in supernatant of splenocytes were determined via ELISA. Results Nanoparticle CA could enhance significantly the protective immunity of NP30 against infection of Schistosoma japonicum and the worm reduction rose from 36.0% (NP30 alone) to 52.6%. The serum levels of specific IgG, IgG1 and IgG2a antibodies against NP30 increased remarkably, as compared with those of the group immunized with NP30 alone. The concentration of IFN-γ in supernatant of splenocyte was drastically elevated ［the groups immunized with CA-NP30 and NP30 alone were (493.80±400.74) pg/ml and (39.03±39.58) pg/ml, respectively］, but the concentration of IL-4 showed no significant difference from that of NP30 alone ［(27.94±9.84） pg/ml vs （27.28±14.44） pg/ml］. Conclusions Nanoparticle CA could act as a vaccine adjuvant of anti-idiotypic antibody NP30 against schistosomiasis. The mechanism could be that CA-NP30 enhances humoral and cellular immune responses in mice.     

Inhibitory effects of TLR7/8ligand R-848on IgE production of murine in vivo

Objective To investigate whether R-848 could inhibit IgE production of mice immunized with OVA plus ALUM in vivo.Methods BALB/c mice were immunized s.c on the back with PBS,OVA,OVA plus R-848,OVA plus CpG,OVA plus ALUM,and OVA plus ALUM in R-848 or CpG every two weeks for three times.The blood from the mice was harvested after the last immunization,and the concentration of OVA specific or total IgE,IgG1 and IgG2a in the sera was determined;the splenocytes from the immunized mice were harvested and cultured with or without OVA for 3 days,and the concentration of IL-4 and IFNγ in the supernatants was determined.Results Firstly,we investigated that R-848 as Th1 adjuvant could enhance the production of OVA specific IgG2a in mice immunized with OVA.Secondly,further study showed that R-848 could inhibit the production of OVA specific IgE and total IgE,and promote the production of OVA specific IgG2a in the sera of mice immunized with OVA plus ALUM.Moreover,the results of ELISA showed that R-848 inhibiting IgE production was related to its reducing IL-4 production and enhancing IFNγ production.Conclusion R-848 could inhibit IgE production of mice immunized with OVA plus ALUM in vivo.