药物中N-亚硝胺类基因毒性杂质检测方法的研究进展

N-亚硝胺类基因毒性杂质是公认强致癌物之一,特别是缬沙坦事件发生后,更是引起了国内外药品监督管理机构的高度重视.本文对N-亚硝胺类基因毒性杂质进行了概述,介绍了其化学结构、毒理作用和国内外的标准规定控制情况,同时按方法分类整理了近年来国内外对药物中该类杂质的检测方法,包括高效液相色谱法、液相色谱-质谱联用法和气相色谱-...     

N-亚硝胺类基因毒性杂质的研究进展

自“缬沙坦事件”之后，N-亚硝胺类基因毒性杂质引起了业界的广泛关注。本文概述了药物中N-亚硝胺类基因毒性杂质和相关检测方法的研究进展，以及近20年来国内外有关药物中基因毒性杂质监管指南的完善历程。N-亚硝胺类基因毒性杂质作为一类高反应活性的基因毒性杂质，主要来源于药物合成过程中发生的副反应，以及药物在储存或者运输过程中发生的氧化或还原等反应。所有的动物实验表明，N-亚硝胺类具有很强的致癌性。在理论上，所有药物都存在N-亚硝胺类杂质或被N-亚硝胺类杂质污染的风险，由于该类化合物在药物中常以痕量形式存在，在分析检测过程中药物基质干扰大，因此建立便捷、高效的分析方法是非常有必要的。     

药物中基因毒性杂质检测方法研究进展

基因毒性杂质由于对DNA的破坏作用而具有一定的致癌性,危害极大.因其结构众多,患者在服药过程中有摄入该类杂质的风险.部分国家对基因毒性杂质的限度控制已成为药品上市时必须考察的指标.本文概述了基因毒性杂质的基本概念、相关法规标准、部分杂质检测方法限度等内容,以期为控制药品中基因毒性杂质的含量提供参考和依据,保证患者用药安...     

药物基因毒性杂质及其检测方法研究现状

基因毒性杂质（GTI）主要来源于原料药的合成过程或储藏运输等环节,其在痕量水平即可造成DNA损伤并诱发细胞癌变,因此近年来受到了广泛关注。各国法规对不同种类的GTI均提出了严格的限量标准和控制策略,因此发展灵敏可靠的检测方法应用于原料药中GTI的筛查、定量及表征具有重要意义。本文介绍了药物中GTI的警示结构及其分类、常见来源和毒理学限量标准,重点结合国内外研究进展对气相色谱及其联用技术、液相色谱及其联用技术、电化学传感和表面增强拉曼光谱等新型技术应用于药物GTI的检测进行评述,并探讨基于警示结构或生物效应导向的通量筛查策略和方法,以期为药物GTI的有效监测研究提供参考。     

高效液相色谱串联质谱法检测阿奇霉素原料药及其制剂中6种N-亚硝胺类基因毒性杂质

目的 建立同时测定阿奇霉素原料药及其制剂中N-亚硝基二甲胺（NDMA）、N-亚硝基-N-甲基-4-氨基丁酸（NMBA）、N-亚硝基二乙胺（NDEA）、N-亚硝基乙基异丙胺（NEIPA）、N-亚硝基二异丙胺（NDIPA）、N-亚硝基二丁胺（NDBA）6种N-亚硝胺类基因毒性杂质含量的高效液相色谱串联质谱（HPLC-MS/MS）法。方法 色谱柱为ACE Excel 3 C18-AR柱（150 mm×4.6 mm,5μm）,流动相为甲醇-0.1%甲酸水溶液（梯度洗脱）,流速为0.6 mL/min,离子源为大气压化学电离（APCI）源,采用多反应监测（MRM）模式。结果 NDMA,NMBA和NDEA,NEIPA,NDIPA,NDBA的质量浓度分别在0.48～48.00 ng/mL和0.13～13.25 ng/mL范围内与峰面积线性关系良好（r> 0.995 0,n=6）;NDMA,NMBA,NDEA,NEIPA,NDIPA,NDBA的检测限分别为0.16,0.16,0.04,0.04,0.04,0.04 ng/mL,定量限分别为0.49,0.48,0.13,0.13,0.13,0.13 ...     

UPLC-MS/MS法测定替米沙坦中16种N-亚硝胺类基因毒性杂质

目的:建立替米沙坦原料中16种N-亚硝胺类基因毒性杂质的UPLC-MS/MS检测方法.方法:SHIMADZU Shim-pack Velox Biphenyl色谱柱(150 mm×4.6 mm,2.7μm);0.1％甲酸水溶液为流动相A,0.1％甲酸的甲醇溶液为流动相B,梯度洗脱;流速为0.55 mL·min-1;柱温...     

GC-MS/MS法同时测定氯沙坦钾原料药及其制剂中6种N-亚硝胺类基因毒性杂质

目的 建立同时测定氯沙坦钾原料药及其制剂中6种N-亚硝胺类基因毒性杂质含量的方法。方法 采用气相色谱-串联质谱（GC-MS/MS）法测定氯沙坦钾原料药、氯沙坦钾片、氯沙坦钾胶囊、氯沙坦钾氢氯噻嗪片中N-亚硝基二甲胺（NDMA）、N-亚硝基二乙胺（NDEA）、N-亚硝基-N-乙基异丙胺（NEiPA）、N-亚硝基二异丙胺（NDiPA）、N-亚硝基二苯胺（NDPA）、N-亚硝基二丁胺（NDBA）6种N-亚硝胺类基因毒性杂质含量。色谱柱为SHIMADZU SH-L-17Sil MS毛细管柱;采用程序升温;进样口温度为250℃;进样量为1μL;载气为氦气,流速为1 mL/min。离子源为电子轰击源,离子源温度为250℃;溶剂延迟时间为3.1 min;采集模式为多反应监测模式。结果 NDMA、NDEA、NEiPA、NDiPA、NDPA、NDBA与其相邻色谱峰之间的分离效果均良好,分离度均大于3.8;其线性范围分别为4.9～486.0、4.9～488.5、4.5～451.5、6.8～683.5、5.2～525.0、5.2～520.0 ng/mL(r≥0.999 8),定量限分别为4.86、4.88、...     

原料药中基因毒性杂质控制的研究进展

目的介绍原料药(active pharmaceutical ingredient,API)中基因毒性杂质控制的法规要求、评估方法和控制方法。方法通过学习欧美法规发展历史,理解国际高端市场对基因毒性杂质控制的监管期望,提出原料药中基因毒性杂质风险评估方法。结果与结论企业基于半定量评估,结合清除研究数据,建立科学的控制策略,使实际工艺中所有可能涉及的基因毒性杂质风险得到明确鉴别和控制,是达到监管期望的有效途径。     

同时测定泮托拉唑钠中三种基因毒性杂质

目的 用同一个色谱-质谱条件检测泮托拉唑钠的三个基因毒性杂质。方法 采用色谱-质谱法,色谱条件：色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(Kromasil 100-5,4.6mm×25cm,5μm或效能相当的色谱柱),以乙腈-0.01 mol/L乙酸铵(35:65)为流动相,体积流速0.9ml/min,柱温25℃;质谱条件：正离子检测模式,扫描范围：150-450DA,干燥器温度350℃,干燥气流速10L/min,雾化气压力50psig,毛细管电压4000V,碎裂电压175V,锥孔电压65V。切入质谱的时间设为0~3.5min to waste,3.5~主峰保留时间-0.5min to MS,主峰保留时间-0.5min~end to waste。结果 该方法专属性、线性范围、检测限定量限、准确度、重复性、溶液稳定性均良好。结论 所建立的方法可用于泮托拉唑钠原料基因毒性杂质1、基因毒性杂质2、中间体Ⅱ三种基因毒性杂质的检测。     

UPLC-MS/MS法测定奥美沙坦酯中7个亚硝胺类基因毒性杂质

目的 建立超高效液相色谱-串联质谱法（UPLC-MS/MS）测定奥美沙坦酯中7个基因毒性杂质：N-亚硝基二甲胺、N-亚硝基-4-甲基-4-氨基丁酸、N-亚硝基二乙胺、N-亚硝基乙基异丙基胺、N-亚硝基二异丙胺、N-亚硝基二丙胺、N-亚硝基二丁胺。方法 采用Agilent poroshell PFP （100 mm×2.1 mm,2.7 μm）色谱柱;流动相为0.1%甲酸水溶液（A）-甲醇（B）梯度洗脱;体积流量0.4 mL/min,柱温40℃;采用APCI离子源正离子扫描,多反应监测（MRM）模式下,对7个基因毒性杂质同时进行定量检测。结果 各杂质质量浓度在1~100 ng/mL内具有良好线性关系,r>0.995;低、中、高3个浓度的加样回收率（n=3）为83%~117%,RSD值为0.8%~4.1%,平均加样回收率为87%~106%;检测限范围为0.02~0.19 ng/mL,定量限为0.06~0.65 ng/mL。4批奥美沙坦酯样品中均未检出杂质。结论 该方法灵敏度高,专属性强,可用于测定奥美沙坦酯原料药中7个亚硝胺类杂质,为奥美沙坦酯的质量控制提供参考。     

GC-MS/MS测定替米沙坦片中10种亚硝胺类基因毒性杂质

目的 建立GC-MS/MS同时测定替米沙坦片中N-亚硝基二甲胺(NDMA)、N-亚硝基甲乙胺(NMEA)、N-亚硝基二乙胺(NDEA)、N-亚硝基-N-乙基异丙胺(NEIPA)、N-亚硝基二异丙胺(NDIPA)、N-亚硝基二正丙胺(NDPA)、N-亚硝基二正丁胺(NDBA)、N-亚硝基哌啶(NPIP)、N-亚硝基吡咯烷(NPYR)和N-亚硝基吗啉(NMOR)10种亚硝胺类基因毒性杂质的含量。方法 样品经甲醇提取,经Agilent VF-WAXms(30 m×0.25 mm,1 μm)毛细管气相色谱柱分离,采用多反应离子监测(MRM)模式进行定量分析。结果 NDMA、NMEA、NDEA、NEIPA、NDIPA、NDPA、NDBA和NPIP在0.2~50 ng·mL^-1线性关系良好,相关系数均为1.000 0;检测限均为0.05 ng·mL^-1,定量限均为0.2 ng·mL^-1,平均回收率分别为103%(RSD=9.2%,n=9),108%(RSD=6.1%,n=9),107%(RSD=5.3%,n=9),106%(RSD=3.9%,n=9),102%(RSD=5.0%,n=9),99%(RSD=6.9%,n=9),97%(RSD=8.6%,n=9),101%(RSD=4.4%,n=9)。NPYR和NMOR在1.0~50 ng·mL^-1内线性关系良好,相关系数均为1.000 0;检测限均为0.4 ng·mL^-1,定量限均为1.0 ng·mL^-1,平均回收率分别为95%(RSD=6.4%,n=9),103%(RSD=6.1%,n=9)。所收集的254批样品中,12批次检出NDMA,其余9个杂质在254批样品中均未检出。结论 该方法操作简便、灵敏度高,专属性强,适用于替米沙坦片或其他制剂中NDMA、NMEA、NDEA、NEIPA、NDIPA、NDPA、NDBA、NPIP、NPYR和NMOR 10种基因毒性杂质的检测。     

药物中肼类基因毒性杂质分析研究进展

基因毒性杂质具有在极低暴露水平下即能导致严重毒性的特点,对用药的安全性造成严重的威胁。作为一类重要的基因毒性杂质,肼是一种常见的中间体,而且是常见药物的降解产物。对基因毒性杂质进行了概述,并较为详尽地介绍了肼类基因毒性杂质的分析方法,为需要测定此类基因毒性杂质的分析人员提供参考。     

原料药国际注册中基因毒性杂质的法规解读

遗传毒素是一类极富挑战性的杂质,并已被证明即便在低浓度条件下依然具有毒性。因此美国和欧盟的药品监管机构以及人用药品注册技术要求国际协调会（ICH）都特别指定了它们在原料药和成品药中的限量。通过解析原料药在美国和欧盟注册中涉及到的关于基因毒性杂质控制的法规,为中国制药企业提供相关技术指导以推动中国药品出口事业的增长。     

UHPLC-MS/MS法测定依那普利氢氯噻嗪复方制剂中潜在基因毒性杂质

目的 通过合成基因毒性杂质N-亚硝基氢氯噻嗪(NO-HZCT),建立超高效液相色谱-串联质谱法(UHPLC-MS/MS)测定依那普利氢氯噻嗪制剂中N-亚硝基氢氯噻嗪。方法 参考文献方法合成NO-HZCT,采用高分辨质谱对其相对分子量和结构进行确定;采用Agilent Eclipse Plus C₁₈ RRHD(3.0 mm×150 mm, 1.8μm)色谱柱,以10 mmol·L^-1甲酸铵-0.1%甲酸的水溶液作为流动相A,以0.1%甲酸的乙腈溶液作为流动相B,梯度洗脱,体积流量0.6 mL·min^-1;采用ESI离子源正离子扫描,多反应监测(MRM)模式下,对NO-HZCT进行定量检测。结果 NO-HZCT质量浓度在0.51～50.67 ng·mL^-1范围内具有良好的线性关系,相关系数(r)为0.999 7;低、中、高3个浓度的加样回收率(n=3)分别为93.10%(RSD 3.7%)、104.30%(RSD 1.0%)和106.48%(RSD 1.8%);检测限和定量限分别为0.08 ng·mL...     

抗生素杂质的检测方法研究进展

本文对抗生素杂质的各检测方法的研究进展进行了综述。常用的杂质检测法有高效液相色谱法(HPLC)、气相色谱法(GC)及凝胶渗透色谱法(GPC);GPC主要用于高分子聚合物的检测,而GC法用于挥发性杂质的检测。此外,还有毛细管电泳法(CE)、气相色谱一质谱联用技术(GC-MS)、核磁共振(NMR)光谱法及高效阴离子交换色谱-积分脉冲安培检测分析法等。本文重点阐述HPLC法结合色谱二维光谱相关法在杂质定位识别方面的应用和CE法及LC-MS法在抗生素杂质分析方面的应用情况,最后对各方法在杂质检测领域的发展前景进行展望。     

基因毒性杂质的毒理学评估策略

基因毒性杂质的限度确定是药物安全研究的重要内容.有潜在基因毒性的杂质根据其结构特征和毒理学数据可分为5类:已知有致突变性及致癌性的杂质、有致突变性但致癌性未知的杂质、含有与药物活性成分结构无关的警示结构但无致突变性数据的杂质、含与药物活性成分相关警示结构的杂质以及致癌风险高的特殊杂质.本文以毒理学评价的方法,分类对基因...     

高效液相色谱法测定氟比洛芬中4种基因毒性杂质

目的 建立高效液相色谱法测定氟比洛芬中基因毒性杂质：2-氟苯胺、4-溴-2-氟乙酰苯胺、4-溴-2-氟苯胺和4-溴-2-氟联苯。方法 采用Phenomenex Kinetex F5 100A (250 mm×4.6 mm, 5μm)色谱柱,乙腈-水-冰醋酸(体积比30∶65∶5)为流动相A,乙腈为流动相B,梯度洗脱,流速为1.2 mL·min^-1,检测波长为254 nm,进样体积10μL,柱温为35℃。结果 2-氟苯胺、4-溴-2-氟乙酰苯胺、4-溴-2-氟苯胺和4-溴-2-氟联苯的检测下限分别为5.987、3.198、6.408,3.199 mg·L^-1;分别在质量浓度19.96～2 235(r=0.993)、10.66～2 387(r=0.999)、21.36～2 392(r=0.999)和10.66～2 388 mg·L^-1(r=0.999)内与峰面积呈良好线性关系;平均加样回收率分别为100.5%、100.2%、101.4%和97.9%(n=9),加样回收率良好;对照品和供试品加标溶液在24 h内稳定性良好。三批...     

原料药中基因毒性杂质分类清除及控制策略

原料药中的基因毒性杂质为患者带来潜在致癌风险,首先对基因毒性杂质的来源及警示结构特征进行了阐述;其次总结了基因毒性杂质分类控制原则及可接受限度计算方法;最后结合原料药生产特点,提出从生产工艺优化及质量控制完善等两个方面降低基因毒性杂质至可接受标准内的解决方案.在原料药基因毒性杂质清除及控制的理论基础上,列举了盐酸西替利...