miR-145-5p通过抑制ROCK1的表达减轻脓毒症诱导的急性肺损伤

目的:探讨miR-145-5p在脓毒症诱导的急性肺损伤(ALI)中的调控作用和分子机制.方法:盲肠结扎穿刺法(CLP)建立C57BL/6小鼠脓毒症模型,分为CLP组、CLP+NC agomir组、CLP+miR-145-5p agomir组和假手术组,分离原代小鼠肺微血管内皮细胞(MPVECs),miR-145-5p模拟物或对照模拟物转染到MPVECs.采用双荧光素酶报告基因实验验证ROCK1和miR-145-5p的作用关系.挽救实验中,在LPS处理前24 h将MPVECs与ROCK1过表达载体(或空载体)和miR-145-5p模拟物共转染.检测caspase-3的转录活性、细胞凋亡率、miR-145-5p、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)和ROCK1的表达水平.结果:与假手术组相比,CLP组小鼠肺损伤程度,IL-1β、IL-6水平及caspase-3活性和细胞凋亡率均显著增加(P<0.05);MPVECs细胞中,与未处理的细胞相比,LPS刺激可显著诱导炎症细胞因子的分泌和细胞凋亡(P<0.05).脓毒症小鼠中过表达miR-145-5p可减轻脓毒症诱导的肺损伤、细胞凋亡和炎症反应.在LPS处理的MPVECs细胞中,miR-145-5p也表现出抗凋亡和抗炎作用.ROCK1的上调逆转了miR-145-5p抑制caspase-3活性、抗凋亡和抗炎作用.结论:miR-145-5p通过下调ROCK1的表达,减轻了脓毒症诱导的急性肺损伤,有望作为脓毒症诱导的急性肺损伤治疗的潜在靶点.     

Casp-8通过调控NLRP3炎性小体介导的细胞焦亡减轻脓毒症引起的急性肺损伤

目的:分析半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-8(Casp-8)对脓毒症引起的急性肺损伤(ALI)的作用及其相关分子机制。方法:对40只C57BL/6小鼠使用盲肠结扎穿孔术(CLP)建立脓毒症诱导的小鼠ALI模型,将造模成功的小鼠随机分为模型组(CLP组)和CLP+Casp-8抑制剂组(CLP+Z-IETD-FMK组),每组20只。另取20只正常饲养的小鼠设为假手术组(sham组)。采用称质量法测定小鼠肺组织湿干质量比值(W/D),HE染色观察小鼠肺组织病理变化,TUNEL染色检测肺组织细胞凋亡情况,ELISA检测小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中炎症因子水平,qRT-PCR检测肺组织中Casp-8 mRNA表达,Western blotting检测小鼠肺组织中Casp-8蛋白、核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎性小体及细胞焦亡相关蛋白表达。结果:与sham组比较,CLP组小鼠24 h存活率明显降低(P<0.05);小鼠肺组织充血水肿,肺泡结构严重破坏,肺间质内大量炎症细胞浸润;肺组织W/D,细胞凋亡率,BALF中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6、I...     

内皮细胞 miR-27b-3调控YAP信号参与脓毒症中的机制研究

【摘要】目的 探究miR-27b-3p对YAP信号的调控及其在脓毒症发生发展中的作用。方法 将小鼠按照随机数列法均分为4组,分别为对照组, CLP（盲肠结扎穿孔）组,mimic NC组,miR-27b-3p mimic组。利用CLP（盲肠结扎穿孔）法构建小鼠脓毒症模型, miR-27b-3p组小鼠通过尾静脉注射miR-27b-3p mimic,对mimic NC组小鼠尾静脉注射mimic NC阴性对照物。分离小鼠原代肺内皮细胞,qRT-PCR（荧光定量PCR）检测细胞中YAP（是相关蛋白1）、ICAM（细胞间粘附分子）、E-selectin（选择素）miR-27b-3p mRNA水平;数据库PITA预测调控YAP的miRNA;WB检测细胞中YAP、ICAM、E-selectin表达及p65活化水平;ELISA检测细胞上清中TNF-α(肿瘤坏死因子-α)、IL-6(白介素-6)水平。 结果 与对照组相比,CLP组小鼠原代肺内皮细胞中YAP、ICAM、E-selectin mRNA表达明显升高（P＜0.05）,miR-27b-3p表达明显下调（P＜0.05）;数据库PITA预测miR-27b-3p与YAP mRNA 3’ UTR序列存在6个完全互补配对碱基UGUGAA;WB结果显示,与对照组相比,CLP组YAP、ICAM、E-selectin等蛋白水平明显升高,同时p-p65磷酸化活化水平明显升高;与mimic NC组相比,miR-27b-3p mimic组YAP表达量明显下调,ICAM、E-selectin表达水平明显升高,同时p65磷酸化水平升高;ELISA结果显示,与对照组相比,CLP组小鼠内皮上清中TNF-α、IL-6水平升高（P＜0.05） ;与mimic NC组相比,miR-27b-3p mimic组小鼠内皮上清中TNF-α、IL-6的含量明显升高（P＜0.05）。结论 miR-27b-3p在脓毒症血管内皮细胞中低表达,而YAP在内皮中高表达。脓毒症诱导内皮低表达miR-27b-3p,促进YAP在脓毒症内皮细胞中进一步高表达,从而抑制负向反馈调控内皮炎症信号活化。     

miR-323-3p通过靶向TGF-β2/JNK通路影响冠心病大鼠心肌细胞的凋亡

目的:探讨微小RNA-323-3p(miR-323-3p)对冠心病大鼠心肌细胞凋亡的影响及其可能的作用机制。方法:将SD大鼠分为Control组、Model组、NC agomir组、miR-323-3p agomir组、miR-323-3p agomir+pcDNA组、miR-323-3p agomir+pcDNA-TGF-β2组,每组12只。除Control组外,其它组大鼠均采用高脂饲料喂养以构建冠心病大鼠模型。建模成功后,通过尾静脉注射对应的agomir或pcDNA进行处理,Control组、Model组尾静脉注射等量的生理盐水。2周后,测量大鼠心脏功能指标平均动脉压(MAP)、左室收缩压(LVSP)、心率(HR)的变化;HE染色检测大鼠心肌组织病理变化;TUNEL染色检测各组大鼠心肌细胞凋亡;qRT-PCR检测大鼠心肌组织中miR-323-3p表达;Western blotting检测大鼠心肌组织中Bax、Bcl-2、转化生长因子β2(TGF-β2)及磷酸化c-Jun氨基末端激酶(p-JNK)蛋白表达;双荧光素酶报告基因实验验证miR-323-3p与TGF-β2的关系。结果:与C...     

激动ALDH2抑制程序性坏死减轻脓毒症小鼠心肌损伤的作用探讨

目的 观察脓毒症小鼠心肌损伤中程序性坏死的发生,探讨线粒体乙醛脱氢酶2(aldehyde dehydrogenase 2,ALDH2)是否通过抑制程序性坏死发挥心肌保护作用。方法 选取8周龄雄性C57BL/6J小鼠,采用CLP法诱导脓毒症心肌损伤模型。将小鼠随机分为3组(10只/组):假手术组(Sham组)、脓毒症组(CLP组)、脓毒症+Alda-1组(CLP+Alda-1组)。CLP术后24 h, HE染色观察心肌损伤,透射电镜观察心肌超微结构变化;用ELISA法测定心肌组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量;Western Blot法检测心肌组织ALDH2、Caspase-8、RIPK1、RIPK3蛋白表达。结果 与Sham组相比,CLP组小鼠HE染色显示心肌纤维排列不整齐,有炎症细胞浸润,间质水肿,红细胞渗出;透射电镜观察到心肌线粒体肿胀,嵴减少,外膜破裂;心肌组织TNF-α含量升高(P<0.01),Caspase-8蛋白表达降低(P<0.05),RIPK1和RIPK3蛋白表达升高(P<0.01)。与CLP组相比,CLP+Alda-1组小鼠心肌形态有改善,线粒体...     

LncRNA MIR22HG调节miR-132-3p/TLR2轴对急性心肌梗死小鼠心肌细胞凋亡和心室重构的影响

目的:探讨长链非编码RNA miR-22宿主基因（lncRNA MIR22HG）调节miR-132-3p/Toll样受体2(TLR2)轴对急性心肌梗死（AMI）小鼠心肌细胞凋亡和心室重构的影响。方法:取C57BL/6J小鼠随机分为sham组、AMI组、AMI+sh-NC组、AMI+shMIR22HG组、AMI+sh-MIR22HG+antagomir-NC组、AMI+sh-MIR22HG+antagomir-132-3p组，每组10只，除去sham组外，其它组都进行冠状动脉左前降支结扎，sham组只开胸不结扎冠状动脉，其中AMI+sh-NC组、AMI+sh-MIR22HG组、AMI+shMIR22HG+antagomir-NC组、AMI+sh-MIR22HG+antagomir-132-3p组小鼠分别相对应的对尾静脉注射sh-NC、sh-MIR22HG、sh-MIR22HG+antagomir-NC、sh-MIR22HG+antagomir-132-3p。超声心动图评估小鼠心室重构和心脏功能；HE染色和Masson染色观察心肌组织病理学变化及纤维化；RT-qPCR检测心肌组织MIR22...     

miR-21-5p通过调控自噬减轻肥厚性心肌病小鼠的心肌损伤

目的 探讨miR-21-5p对主动脉弓缩窄术(transverse aortic constriction, TAC)所致的肥厚性心肌病小鼠心肌损伤的保护作用及潜在机制。方法 40只雄性C57BL/6小鼠随机分为假手术组(sham组)、模型组(TAC组)、miR-21-5p激动剂处理组(ago^miR-21-5p组)和miR-21-5p激动剂+PI3K抑制剂处理组(ago^miR-21-5p+LY294002组),每组10只,采用主动脉弓缩窄术建立心肌肥厚模型。qRT-PCR法检测miR-21-5p、α-肌球蛋白重链(alpha myosin heavy chain,α-MHC)、β-肌球蛋白重链(beta myosin heavy chain,β-MHC)和心房利钠肽(atrial natriuretic peptide, ANP)的mRNA表达情况,超声心动图检测心脏功能,测定心脏质量/体质量(HW/BW)及心脏质量/胫骨长度(HW/TL)比值,HE染色观察心肌细胞横截面积,Masson染色观察心肌组织纤维化程度,免疫组化染色观察Collag...     

丙酸钠通过抑制NLRP3保护脓毒症大鼠的结肠组织

目的：探究丙酸钠（SP）对大鼠脓毒症模型结肠组织的保护作用并研究其与NLRP3炎性小体的关系。方法：采用盲肠结扎穿刺法建立脓毒症动物模型,随机分为假手术（Sham）组、模型（CLP）组、模型+SP（CLP+SP）组和假手术+SP（Sham+SP）组。建模24 h后处死各组大鼠,收集结肠组织。HE染色观察各组大鼠结肠结构变化,ELISA试剂盒检测结肠组织中IL-6、TGF-β和TNF-α含量,Western blot和免疫组化染色检测结肠紧密连接蛋白（claudin-1和occludin）和NLRP3炎性小体的表达情况。用同样的方法建立脓毒症模型,记录每组大鼠72 h生存率。结果：SP治疗能提高CLP组大鼠的生存率,减少病理损伤。CLP+SP组结肠组织中IL-6、TGF-β和TNF-α水平较CLP组低（P＜0.05）。相比CLP组,CLP+SP组结肠组织中claudin-1和occludin表达有所增加（P＜0.05）。CLP+SP组结肠组织中NLRP3、caspase-1、IL-β和IL-18表达与CLP组比较明显降低（P＜0.05）。结论：SP能提高脓毒症大鼠的存活率。此外,SP可能通过提高脓毒症大鼠结肠组织中紧密连接蛋白的表达,抑制NLRP3炎性小体的激活来减少结肠损伤。     

凝血酶敏感蛋白-1介导脓毒症肝损伤中ERK通路的作用研究

目的观察凝血酶敏感蛋白-1(TSP-1)介导的脓毒症肝损伤中细胞外调节激酶(ERK)通路的作用.方法选用雄性Balb/c小鼠随机分为4组(n=5):假手术(sham)组、CLP对照组、阴性片段对照组、有效片段组.利用流体尾静脉注射法予以TSP-1特异性的siRNA片段进行RNA干扰(RNA)i,下调肝脏TSP-1表达,采用盲肠结扎穿刺(CLP)制作脓毒症模型,检测肝脏TSP-1表达变化,检测血清转氨酶和TNF-α含量,检测肝脏ERK蛋白表达变化.结果有效片段组中肝脏TSP-1的表达明显下调,验证RNAi有效.与假手术组相比,CLP组和阴性对照组转氨酶ALT和AST含量、TNF-α含量明显升高(P<0.05),磷酸化ERK蛋白表达明显降低(P<0.05),予以有效片段进行RNAi后,ALT和AST含量、TNF-α含量明显降低(P<0.05),磷酸化ERK蛋白表达明显升高(P<0.05).结论 TSP-1参与介导脓毒症肝损伤,导致血清转氨酶及TNF-α含量升高,ERK通路的抑制是其分子机制之一.     

p38MAPK信号通路在脓毒症大鼠海马区神经元自噬中的作用

  目的  探讨p38丝裂原激活的蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase, MAPK)信号通路在脓毒症大鼠海马区神经元自噬中的作用。  方法  通过盲肠结扎穿孔术(cecal ligation and puncture, CLP)建立大鼠脓毒症模型。SD大鼠随机分为假手术组(sham组)、模型组(CLP组)、溶媒组(CLP+Veh组)、p38MAPK抑制剂组(CLP+SB203580组),每组分为3、6、12、24和48 h亚组;CLP+Veh组和CLP+SB203580组分别侧脑室注射1% DMSO 5 μL和0.1 mmol/L SB203580 5 μL,注射后30 min建立CLP模型,sham组仅翻看盲肠后关腹,未做其他处理。监测大鼠生命体征,包括平均动脉压(mean arterial pressure, MAP)和心率(heart rate, HR);神经行为学评分了解大鼠的脑损伤情况;大鼠脑海马区组织HE染色观察病理改变;透射电镜下观察大鼠脑海马区神经元自噬过程;Western blot检测海马区微管相关蛋白1轻链3(microtubule associated protein 1 light chain 3, LC3)Ⅱ、LC3Ⅰ选择性自噬接头蛋白(p62/sequestosome-1, p62/SQSTM1)、MAPK激活蛋白激酶2(MAPK-activated protein kinase 2, MK-2)、磷酸化MK-2(phosphorylation MK-2, p-MK-2)的蛋白表达;免疫荧光染色观察大鼠海马区神经元LC3和p62/SQSTM1的表达。  结果  在不同时间点,CLP组大鼠MAP低于、HR高于sham组,以造模后12 h变化最明显;CLP组大鼠神经行为学评分最低,海马区组织病理改变明显,透射电镜下观察有较多自噬空泡形成。与CLP组比较,CLP+SB203580组大鼠神经行为学评分回升,海马区病理改变好转,透射电镜下自噬空泡中的包裹物降解;Western blot结果显示,与sham组比较,造模后CLP组大鼠海马组织LC3Ⅱ/ LC3Ⅰ和p-MK-2/MK-2表达升高,p62/SQSTM1表达下降,前者至12 h达到高峰,后者至12 h达到谷底,CLP+SB203580组与其它组相比,在造模12 h时,大鼠海马组织LC3Ⅱ/LC3Ⅰ和p-MK-2/MK-2表达升高,而p62/SQSTM1表达进一步下降(P＜0.05);免疫荧光法观察结果显示,海马区LC3和p62/SQSTM1在NeuN的定位及表达与Western blot所测得的结果一致。  结论  脓毒症大鼠抑制p38 MAPK信号通路,可以使自噬进一步激活,对海马区神经元起到保护作用。     

过表达miR-203a-3p对脂多糖致大鼠急性肺损伤后肺纤维化的影响及其机制

目的 探讨过表达miR-203a-3p对脂多糖(LPS)致大鼠急性肺损伤后肺纤维化的影响及其机制。方法 采用多次小剂量注射LPS制备大鼠急性肺损伤后肺纤维化模型,并将造模成功的大鼠随机分成模型组(Model组)、agomir阴性对照组(agomir-NC组)和miR-203a-3p agomir组(agomir组),另设对照组(Control组),每组15只。造模前1 d及造模开始后1周,给予尾静脉注射miR-203a-3p agomir干预。造模2周后,测定肺组织湿/干比重(W/D)及肺组织羟脯胺酸(Hyp)含量;HE染色和Masson染色观察肺组织病理变化及肺纤维化程度;ELISA法检测各组大鼠肺泡灌洗液(BALF)中白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;qRT-PCR检测大鼠肺组织中miR-203a-3p和卵泡抑素样蛋白1(Fstl1)mRNA表达水平;Western blot检测大鼠肺组织中Fstl1蛋白表达水平;双荧光素酶报告系统检测miR-203a-3p和Fstl1的靶向关系。结果与Control组比较,Model组...     

ghrelin对脓毒血症大鼠肺脏炎症及核苷酸结合寡聚域2和受体相互作用蛋白2 mRNA表达的影响

目的研究ghrelin对脓毒血症大鼠肺脏中性粒细胞浸润、炎性细胞因子[肿瘤坏死因子(TNF)-α和白细胞介素(IL)-6]及核苷酸结合寡聚域2(NOD2)和受体相互作用蛋白2(RIP2)mRNA表达的影响。方法 24只雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠随机分为4组:假手术组(Sham组)、假手术+ghrelin组(Sham+ghrelin组)、脓毒血症组(CLP组)和脓毒血症+ghrelin组(CLP+ghrelin组)。采用盲肠结扎穿孔(CLP)的方法建立脓毒血症大鼠模型。Sham+ghrelin组和CLP+ghrelin组分别于假手术或CLP后即刻经尾静脉注射10 nmol/kgghrelin,Sham组和CLP组于相应时间点尾静脉注射等量0.9%氯化钠溶液,给药速率为0.2 mL/min。于假手术或CLP后6 h麻醉下处死大鼠,取肺组织,光学显微镜下观察肺组织病理学变化,并测定髓过氧化物酶(MPO)活性、TNF-α和IL-6水平以及NOD2和RIP2 mRNA的表达。结果与Sham组和Sham+ghrelin组比较,CLP组和CLP+ghrelin组肺组织MPO活性、TNF-α和IL-6水平、...     

辛伐他汀对脓毒症大鼠心肌保护作用的实验研究

目的探讨辛伐他汀对脓毒症大鼠心肌损害的保护作用及可能机制。方法将30只4周龄清洁级雄性Wistar大鼠随机分为3组:假手术对照组(Sham组)、脓毒症模型组(CLP组)和辛伐他汀干预组(Sim组)。Sham组仅开腹翻动盲肠;CLP组及Sim组行盲肠结扎穿刺术;Sim组于术后尾静脉注射辛伐他汀20 mg·kg-1+10%二甲基亚砜(DMSO)1 mL·kg-1和生理盐水2 mL·kg-1,其他各组均注射生理盐水3 mL·kg-1。Sham组于术后5 h、CLP组及Sim组分别于术后52、0 h处死6只大鼠,留血液和心肌组织标本。分别测定血清心肌酶CKMB、心肌组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及心肌组织一氧化氮(NO)含量,观察心肌组织病理变化并采用免疫组织化学测定TOLL样受体4(TLR-4)蛋白表达。结果 CLP组心肌组织损伤明显,TLR-4表达明显,CKMB、TNF-α、NO水平较Sham组均显著升高(均P<0.01),其中CKMB、TNF-α水平和TLR-4表达于5 h较高,而NO水平于20 h较高。Sim组心肌病理损伤减轻,且各指标表达较CLP组均显著下降(均P<0.01)。结论辛伐他汀能减轻脓毒症大...     

己酮可可碱对大鼠脓毒症急性肺损伤p38MAPK活性的影响

目的　探讨己酮可可碱(pentoxifylline,PTX)对腹腔感染致脓毒症急性肺损伤发挥肺保护作用与p38MAPK活化的关系。方法　采用盲肠结扎穿孔致脓毒症模型,将大鼠随机分为Ⅰ组(Sham组)、Ⅱ组(脓毒症CLP组)、Ⅲ组(脓毒症加西黄著胶CLP+V组)、Ⅳ组(脓毒症加生理盐水CLP+N组)、Ⅴ组(脓毒症加SB203580 CLP+SB组)、Ⅵ组(脓毒症加己酮可可碱CLP+PTX组),其中Ⅲ组、Ⅳ组为溶媒对照组。用Western Blot检测假手术组,脓毒症1,3,6,12,24 h后p38MAPK的磷酸化,然后选择1,6,24 h分别检测应用SB203580或PTX后p38MAPK的表达,同时检测血浆TNF-α、IL-6的含量并观察24 h内肺组织病理改变。结果　与假手术组比较,脓毒症组在各个时间点p38MAPK均有较强的表达,SB203580或PTX预处理后各组的p38MAPK的磷酸化明显受到抑制,且与血浆TNF-α、IL-6的含量以及肺的病理切片变化一致。结论　己酮可可碱可能是通过抑制p38MAPK的磷酸化抑制促炎因子的过度表达,发挥对脓毒症急性肺损伤的保护作用。     

凝血酶敏感蛋白-1对脓毒症肝损伤影响的实验研究

目的利用RNA干扰(RNA)i方法探讨凝血酶敏感蛋白-1(TSP-1)对脓毒症肝损伤的影响及机制.方法选用雄性Balb/c小鼠随机分为4组(n=10):假手术组(sham)、CLP对照组、阴性片段对照组、有效片段组.利用流体尾静脉注射法予以TSP-1特异性的siRNA片段进行RNAi,下调肝脏TSP-1表达,采用盲肠结扎穿刺(CLP)制作脓毒症模型,检测血清转氨酶、血清TNF-α含量,观察肝细胞凋亡,检测肝脏JNK蛋白表达变化.结果与假手术组相比,CLP组和阴性对照组转氨酶ALT和AST含量、TNF-α含量、凋亡细胞比例明显升高(P<0.05),磷酸化JNK蛋白表达明显降低(P<0.05),予以有效片段进行RNAi后,ALT和AST含量、TNF-α含量、凋亡细胞比例明显降低(P<0.05),磷酸化JNK蛋白表达明显升高(P<0.05).结论 TSP-1参与介导脓毒症肝损伤,导致血清转氨酶及血清TNF-α含量升高、肝细胞凋亡增加,其机制与JNK通路的抑制有关.     

抑制铁死亡可减轻脓毒症小鼠的心肌损伤：脂钙蛋白-2的作用

目的 观察铁死亡在盲肠结扎与穿孔（CLP）法诱导的脓毒症小鼠心肌损伤中的作用,并探讨脂钙蛋白-2（Lcn2）在铁死亡中的可能作用。方法 选取8周龄雄性C57BL/6小鼠,采用CLP法诱导脓毒症心肌损伤模型。小鼠随机分为3组（10只/组）：假手术组、脓毒症组（CLP,小鼠接受CLP手术）、脓毒症+铁死亡抑制剂Ferrostain-1组（CLP+Fer-1,小鼠腹腔注射浓度为5 mg/mL的Fer-1 5 mg/kg,1 h后接受CLP手术）。各组小鼠术后24 h通过超声心动图检测小鼠心功能。H&E染色观察心肌损伤,透射电镜观察心肌纤维细微结构和线粒体的变化;ELISA法测定血清中炎症因子肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平;组织铁试剂盒测定心肌组织铁含量的变化;Western blot法检测心肌组织中Lcn2蛋白和铁死亡相关蛋白谷胱甘肽过氧化物酶4（GPX4）和铁死亡抑制蛋白1（FSP1）的表达变化。结果 与假手术组相比,CLP术后24 h,脓毒症小鼠心脏收缩与舒张功能减弱,左心室射血分数（LVEF%）、左心室缩短分数（LVFS%）和左心室舒张末期内径（LVIDd）降低（P<0.05）;左心室收缩期末期内径（LVIDs）升高（P<0.05）。与CLP组相比,CLP+铁死亡抑制剂Fer-1组LVEF%、LVFS%和LVIDd升高（P<0.05）;LVIDs降低（P<0.05）。光镜下观察到CLP小鼠心肌纤维排列不整齐,部分变性,有炎症细胞浸润,间质水肿,横纹模糊,红细胞渗出。透射电镜观察到部分线粒体嵴减少,外膜破裂,部分线粒体变小,膜密度增高。CLP+Fer-1组小鼠心肌形态学有改善,线粒体损伤减轻。与假手术组相比,CLP组血清TNF-α水平、心肌组织铁含量、Lcn2蛋白表达升高（P<0.01）,GPX4、FSP1蛋白表达降低（P<0.01）。与CLP组相比,CLP+Fer-1组血清TNF-α水平、心肌组织铁含量、和Lcn2蛋白表达降低（P<0.05）;GPX4、FSP1蛋白表达升高（P<0.05）。结论 来源于GPX4、FSP1不同途径的铁死亡参与CLP引起的脓毒症性心肌损伤的发生,抑制铁死亡可减轻脓毒症心肌损伤,Lcn2可能参与其中。     

miR-140靶向PD-L1在小鼠脓毒症免疫抑制中的作用

【摘要】 目的 探讨miR-140靶向PD-L1在小鼠脓毒症免疫抑制中的作用。 方法 取90只小鼠随机分成对照组（Control组）、脓毒症模型组（CLP组）和CLP+miR 140组，每组30只。盲肠结扎穿孔法（CLP法）建立小鼠脓毒症模型，尾静脉注射转染miR-140 agomir，记录30天生存率，ELISA法检测血清肿瘤坏死因子（TNF-α）、白细胞介素2（IL-2）表达，流式细胞术检测血清CD4+T和CD8+T细胞百分率，提取腹膜巨噬细胞，流式细胞术分析PD L1阳性百分率，实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测miR-140和PD-L1基因表达，蛋白印迹（Western blot）检测PD-L1蛋白表达，荧光素酶报告实验检测miR-140和PD-L1靶向作用关系。 结果 与control组相比，CLP组在1 、7、14 d的TNF α、IL-2水平升高（P＜0.01），而TNF-α、IL-2水平呈时间依赖性降低（P＜0.05）；CLP组较control组小鼠生存率降低（P＜0.01），CD4+和CD8+细胞百分比升高（P＜0.01），巨噬细胞PD-L1阳性细胞率升高（P＜0.01），miR-140表达水平降低（P＜001），PD-L1基因和蛋白表达水平升高（P＜0.01）；与CLP组比较，CLP+miR-140组小鼠生存率升高（P＜0.01），CD4+和CD8+细胞百分比升高（P＜0.01），巨噬细胞PD-L1阳性细胞率下降（P＜0.01），miR-140表达水平升高（P＜0.01），PD-L1基因和蛋白表达水平降低（P＜0.01）；荧光素酶报告实验结果显示miR-140和PD-L1存在靶向作用关系。 结论 miR-140可靶向作用于PD-L1，从而改善小鼠脓毒症引起的免疫抑制。     

替格瑞洛对急性心肌梗死小鼠心肌的保护作用及机制研究

目的 探讨替格瑞洛对急性心肌梗死(AMI)小鼠心肌的保护作用,并阐明其作用机制。方法 将8周龄雄性C57BL/6小鼠随机分为5组：假手术组(sham组)、AMI组、替格瑞洛治疗组、替格瑞洛预处理组、替格瑞洛预处理+治疗组。除sham组外,其余各组小鼠均采用结扎左前降支冠状动脉的方法建立AMI小鼠模型,各实验组(替格瑞洛治疗组、替格瑞洛预处理组、替格瑞洛预处理+治疗组)分别在造模后、造模前和造模前后灌胃相同剂量替格瑞洛治疗小鼠,超声心动图测定小鼠心脏功能相关指标;采用试剂盒检测小鼠血清肌钙蛋白(cTn I)水平、肌酸激酶同工酶(CK-MB)和乳酸脱氢酶(LDH)活性;统计并计算各小鼠心脏质量/体重比值;苏木素-伊红(HE)染色和2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色检测小鼠心肌组织病理变化;ELISA检测心肌组织白细胞介素(IL)-18、IL-1β、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;免疫荧光检测心肌组织CD68、p62表达及分布情况;Western blot检测心肌组织NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、半胱天冬酶-1前体(pro-caspase-1)、活化型半胱天冬...     

抑制miR-128-3p表达对油酸致大鼠肺损伤的保护作用研究

目的 探讨抑制miR-128-3p表达对油酸致大鼠肺损伤的保护作用及可能机制.方法 随机将100只SD大鼠分成5组:假手术组(sham组)、模型组(Model组)、antagomir NC组(NC组)、miR-128-3p antagomir组(antagomir组)和miR-128-3p antagomir+ Nrf2抑制剂ML385组(antagomir+ML385组),每组20只.采用尾静脉注射油酸(0.15 ml/kg)的方法建立肺损伤大鼠模型,术前1h给予miR-128-3p an-tagomir或ML385进行干预.造模成功24 h后,测定动脉血氧分压(PaO2)、氧合指数(OI)及肺组织湿/干重比(W/D);苏木精-伊红染色法(HE)观察肺组织病理学改变并评分;酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定支气管肺泡灌洗液(BALF)中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-6(IL-6)含量;比色法测定肺组织中超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)和活性氧(ROS)水平;反转录酶-聚合酶链锁反应(RT-PCR)检测肺组织中miR-128-3p表达水平以及E2相关因子2(Nrf2)和血红素氧合酶-1(HO-1)的mRNA水平;蛋白质印迹免疫(Western blot)检测肺组织中Nrf2和HO-1的蛋白表达水平;荧光素酶报告基因实验验证miR-128-3p与Nrf2的靶向作用关系.结果 与sham组比较,Model组大鼠肺组织损伤严重,肺组织病理评分、W/D值、BALF中TNF-α、IL-1β和IL-6含量,肺组织中ROS和MDA水平以及miR-128-3p表达水平增加(P＜0.01),而PaO2、OI值和SOD活性以及Nrf2、HO-1的mRNA和蛋白表达水平均降低(P＜0.01);与Model组比较,an-tagomir组大鼠肺组织损伤程度得到明显改善,肺组织病理评分、W/D值、BALF中TNF-α、IL-1β和IL-6含量,肺组织中ROS和MDA水平以及miR-128-3p表达水平下降(P＜0.01),而PaO2、OI值和SOD活性以及Nrf2、HO-1的mRNA和蛋白表达水平均上升(P＜0.01),而NC组大鼠以上各指标差异无统计学意义(P＞0.05);与antagomir组比较,an-tagomir+ ML385组大鼠以上各指标变化趋势又发生逆转(均P＜0.01).荧光素酶报告基因实验证实,miR-128-3p能靶向调控Nrf2的表达.结论 抑制miR-128-3p表达可显著减轻模型大鼠的肺损伤,其作用机制可能与通过靶向调控Nrf2表达,抑制肺组织炎症反应有关.     

间充质干细胞移植对脓毒症小鼠肠道损伤的保护作用与机制的初步探讨

目的 探讨胎盘间充质干细胞(placental-derived mesenchymal stem cells, P-MSCs)移植对脓毒症小鼠肠道损伤的保护作用与机制。方法 将24只小鼠随机均分为3组：假手术(Sham)组、脓毒症(CLP)组与胎盘间充质干细胞治疗(CLP+P-MSCs)组。假手术组小鼠仅开腹游离盲肠后还纳,其余2组采用盲肠结扎穿孔法(CLP)构建脓毒症模型。Sham组和CLP组均于术后1 h经尾静脉注射0.9%NaCl 0.1 mL,CLP+P-MSCs组于术后1 h输注P-MSCs 2×10⁵个。P-MSCs移植24 h后收集各组小鼠肠道和血液样本。肠道组织经HE染色后进行病理评估,酶联免疫吸附法对血清D-乳酸、二胺氧化酶(DAO)、内毒素、IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-10、TGF-β浓度进行检测,实时荧光聚合酶链式反应法对小肠组织中相关炎性因子基因表达水平进行测定。蛋白免疫印迹法测定肠道中ZO-1与occludin蛋白的表达情况,免疫组化法对小肠巨噬细胞的浸润程度进行检测,免疫荧光法对巨噬细胞的极化情况进行检测。结果 外源性移植的...