细胞因子信号转导抑制因子-1在脓毒症小鼠肝脏和脾脏中表达的研究

目的 观察细胞因子信号转导抑制因子-1(SOCS1)在脓毒症小鼠肝脏和脾脏中的变化情况,探讨SOCS在体内的可能作用机制.方法 采用盲肠结扎穿孔术(CLP)制备脓毒症小鼠模型.提取肝脏和脾脏组织的总RNA及蛋白,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术测定组织中SOCS1 mRNA的相对含量;用免疫印迹法测定组织中SOCS1相对蛋白含量;用SPSS统计软件分析上述指标之间的变化关系.结果 脓毒症小鼠术后6 h肝组织SOCS1的基因和蛋白表达均迅速升高,基因表达至24 h达到高峰(P＜0.05),蛋白表达一直保持高位;在脾脏中仅检测到SOCS1基因表达,随时间延长逐渐上升,并一直保持高位;肝脏中SOCS1的基因和蛋白表达量间呈明显正相关(y=0.110±5.765×10-3x,r=0.837,F=93.309,P＜0.01).结论 CLP导致的脓毒症可诱导SOCS1在肝脏和脾脏中进一步表达,提示SOCS1在脓毒症出现后的免疫变化中有重要作用,可利用它们对脓毒症进行干预,以改善脓毒症的预后.     

高糖诱导下肾小管上皮细胞中细胞因子信号转导抑制因子-1/3的表达及意义

目的 观察高糖诱导下肾小管上皮细胞形态学改变及细胞因子信号转导抑制因子(SOCS-1/3)在肾上管上皮细胞中的表达及意义. 方法 体外培养人肾近曲小管上皮细胞株(HKCs),并分为空白对照组、高糖组、Janus激酶2抑制剂AG490组.空白对照组以无血清培养基(5.5 mmol/L葡萄糖)培养细胞8 h;高糖组在含1%胎牛血清培养基中加高糖(300.0 mmol/L葡萄糖)培养;AG490组在高糖组基础上加10 μmol/L AG490培养.后两组再按培养时间分为2、4、6、12、24、48 h 6个亚组,每组6孔.倒置显微镜和电镜下观察细胞形态学及超微结构改变,采用免疫细胞化学和蛋白质免疫印迹法(Western blotting)检测SOCS-1/3蛋白表达,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测SOCS-1/3 mRNA表达. 结果 与空白对照组比较,高糖组12 h后细胞呈梭形改变,有不规则突起,随时间延长细胞界限不清,胞质内颗粒增多;电镜下细胞表面微绒毛及细胞内线粒体明显减少,粗面内质网明显增加.AG490组细胞变化不明显.免疫细胞化学显示,SOCS-1/3蛋白表达以胞质为主,散在胞核表达.SOCS-1/3在正常HKC中有基础表达(0.218±0.023,0.337±0.009);高糖组4～24 h SOCS-1/3蛋白表达均高于空白对照组,其中SOCS-1以4 h表达最高(1.022±0.072),SOCS-3以6 h表达最高(1.256±0.105,均P<0.01);AG490组SOCS-1/3蛋白表达较高糖组明显下降(4 h SOCS-1:0.589±0.167,6 h SOCS-3:0.656±0.075,均P<0.05).高糖组2～12 h SOCS-1/3 mRNA表达高于空白对照组,其中SOCS-1以4 h表达最高(1.716±0.098比0.475±0.045,P<0.05),SOCS-3以6 h表达最高(2.848±0.116比0.749±0.086,P<0.01);AG490组则低于高糖组(4 h SOCS-1:0.865±0.075,6 h SOCS-3:0.923±0.116,均P<0.05). 结论 高糖可诱导肾小管上皮细胞发生形态学及超微结构改变,在早期即有SOCS-1/3表达上调,可能与Janus激酶(JAK)/信号转导和转录激活因子(STAT)/SOCS信号转导通路的负反馈调节途径有关.     

大鼠细胞因子信号转导抑制因子-1基因的多态性及其结构分析

目的 扩增大鼠细胞因子信号转导抑制因子-1(SOCS-1)基因,利用生物信息学方法预测其结构和功能特征,为进一步的实验研究提供理论指导.方法 扩增并测序大鼠的SOCS-1编码区序列,利用生物信息学网站的在线分析工具和Vector NTI suite软件包,识别大鼠SOCS-1基因并预测其编码蛋白质的各种结构特征,根据该基因构建其分子进化树.结果 聚合酶链反应(PCR)扩增获得2个序列不同的SOCS-1基因,BLASTx分析该基因为全长基因,该基因全长639 bp,编码212个氨基酸(aa),具有1个SOCS盒(aa172～aa208),1个Scr同源区2(SH2)结构域(aa80～aa155)和1个核定位序列(aa160～aa174),一级结构含有2个线性B细胞抗原表位,全部位于蛋白的表面,并在空间结构上相距较远.结论 SOCS-1基因具有基因多态性,其保守的SH2区域及SOCS盒与其对信号转导通路抑制作用有关,而其核定位序列可能影响其他核转导因子,B细胞线性表位则在免疫诊断方面有较好的应用前景.     

多发性肌炎外周血白细胞中细胞因子信号转导蛋白抑制因子基因表达的初步研究

目的研究活动期多发性肌炎患者外周血白细胞细胞因子信号转导蛋白抑制因子(SOCS)1、SOCS2、SOCS3和细胞因子诱导的含SH2区域蛋白1(CIS)与正常人表达的差异,探讨SOCS在多发性肌炎发病中可能的作用。方法 2011年6月-12月,采用实时荧光定量聚合酶链反应法检测了14例活动期多发性肌炎患者和14例正常人外周血白细胞中SOCS1、SOCS2、SOCS3和CIS1基因的相对表达量。结果与对照组相比,多发性肌炎症患者外周血白细胞基因SOCS 1～3表达明显降低(P值均<0.05),CIS1基因的表达较对照组明显升高(P<0.05),差异有统计学意义。结论 SOCS基因家族可能参与了多发性肌炎的发病,该蛋白分子家族的成员可能会成为多发性肌炎治疗的一种新的候选基因。     

miR-190通过调控细胞因子信号转导抑制因子5促进肝细胞癌发生的机制

目的探讨微RNA-190(miR-190)通过调控细胞因子信号转导抑制因子5(SOCS5介导肝细胞癌(HCC)发生的机制。方法选取84例HCC患者的肝癌组织及癌旁组织,通过实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测miR-190表达水平,并分析其与患者临床特征和预后的相关性。将miR-190模拟物/抑制物或SOCS5 siRNA(siSOCS5)转染至SNU398和HepG2细胞中,CCK-8检测细胞的增殖,Transwell对细胞的侵袭与迁移进行检测,RT-PCR和蛋白免疫印迹法检测SOCS5基因和蛋白的表达水平,双荧光素酶测定验证miR-190与SOCS5的靶向关系。通过异种移植肿瘤验证SOCS5体内抑癌作用。结果 HCC中miR-190水平上调,且miR-190高表达与肿瘤大小、淋巴结转移、临床分期、预后不良有关(P均<0.05)。CCK-8和Transwell结果表明,过度表达的miR-190可促进细胞增殖、侵袭及迁移。RT-PCR、蛋白免疫印迹法和双荧光素酶测定结果证实了SOCS5是miR-190的真正靶点。此外,SOCS5在体内外均有促进HCC发展的作用。结论 miR-1...     

细胞因子信号转导抑制蛋白3与骨髓增殖性肿瘤关系的研究进展

细胞因子信号转导抑制蛋白（suppressor of cytokine signaling,SOCS）是一类对细胞因子和生长相关因子信号转导通路起负性调节的蛋白家族,目前已发现20多个成员,其中SOCS3是该家族中研究最热、最为清楚的成员之一。近年来研究发现,骨髓增殖性肿瘤（myeloproliferative neoplasms,MPN）患者中存在SOCS3基因异常,提示其可能在MPN的发生、发展、转移过程中扮演重要角色。本文就SOCS3与MPN关系的研究进展进行综述,讨论的问题主要包括有：SOCS蛋白家族概况,SOCS3的结构,功能,表达与调控,以及COCS3与MPN的关系等。     

细胞因子信号转导抑制因子3和肿瘤坏死因子α在有机磷中毒鼠肝脾中的表达

目的 观察有机磷农药中毒(AOPP)小鼠肝脏、脾脏中细胞因子信号转导抑制因子3(SOCS-3)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)mRNA表达的变化,探讨SOCS-3,TNF-α在AOPP致多器官功能衰竭(MODS)中的发病机制,从而为MODS的防治提供新的策略.方法 36只健康雄性BALB/c小鼠制成中毒模型,随机分成敌敌畏中毒组(n=12),生理盐水对照组(n=12),正常对照组(n=12),分别于染毒后2 h,6 h,12 h,24 h取小鼠的肝脏、脾脏,以逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定SOCS-3和TNF-α表达水平,各组间比较采用方差分析进行.结果 中毒后2,6,12和24 h其肝、脾中SOCS-3基因的mRNA表达量均明显高于对照组(P<0.05),其中肝脏中24 h达到最高峰,脾脏中于12 h达最高峰,之后到24 h有下降(P<0.05).肝、脾中TNF-α基因的mRNA表达量均明显高于对照组(P<0.05),并于12 h达最高峰,之后到24 h有下降(P<0.05).AOPP中毒后肝脏和脾脏组织的RNA条带为5 S,15 S和30 S,参比基因β-actin在鼠肝脏和脾脏中的mRNA表达,中毒后2 h,6 h,12 h,24 h其肝、脾中SOCS-3基因的mRNA表达,其中肝脏中24 h达到最高峰,脾脏中于12 h达最高峰,之后到24h有下降(P<0.05).肝、脾中TNF-α基因的mRNA表达于12 h达最高峰,之后到24 h有下降(P<0.05).统计分析显示,肝脏中SOCS-3和TNF-α mRNA存在明显的正相关性(y=0.089+0.758x,r=0.939,F=252.168,P<0.01),脾脏中SOCS3和TNF-α mRNA存在明显的正相关性(y=0.057+0.361x,r=0.953,F=336.122,P<0.01).结论 不同时间点,AOPP中毒小鼠肝脏,脾脏中SOCS-3,TNF-α mRNA表达趋势一致.小鼠肝脾SOCS-3和TNF-α水平均升高.     

髓系白血病细胞中细胞因子信号转导抑制因子1基因启动子去甲基化对细胞增殖、凋亡的影响

目的 探讨髓系白血病(ML)细胞中细胞因子信号转导抑制因子1(SOCS-1)基因启动子去甲基化对细胞增殖、凋亡的影响。方法 收集78例ML患者的骨髓标本(实验组)以及人ML细胞系U937、HL-60、K562为研究对象,另外收集50例健康捐献者的骨髓标本作为对照组。甲基化特异性聚合酶链反应(MS-PCR)检测ML患者骨髓标本中SOCS-1基因启动子甲基化状态,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测ML患者骨髓标本以及人ML细胞系中SOCS-1 mRNA表达;Western blot检测ML患者骨髓标本以及人ML细胞系中SOCS-1蛋白表达。用0、0.8、1.6、3.2μmol/L地西他滨(DCA)分别处理U937细胞,并分别命名为空白组、DCA-L组(DCA低剂量)、DCA-M组(DCA中剂量)、DCA-H组(DCA高剂量)。MS-PCR检测各组细胞中SOCS-1基因启动子甲基化状态;qRT-PCR检测各组细胞中SOCS-1 mRNA表达;Western blot检测各组细胞中SOCS-1蛋白表达;CCK-8法检测各组细胞增殖情况;流式细胞术检测各组细胞凋亡情况。结果 SOCS...     

细胞因子信号转导抑制因子1RNA干扰慢病毒载体的构建与鉴定

背景：以往关于细胞因子信号转导抑制因子1的研究多用脂质体或其他载体转染的技术,但存在效率低和安全性差等问题。目的：构建细胞因子信号转导抑制因子1RNA干扰慢病毒载体并进行鉴定。方法：实验设计3组针对细胞因子信号转导抑制因子1的短发夹RNA序列,应用基因重组技术插入pPll3.7载体,测序正确的重组病毒质粒与包装质粒通过共转染293T细胞,培养48h后,收集细胞培养上清液,感染A549细胞,westernblot检测目的蛋白细胞因子信号转导抑制因子1在靶细胞中的表达。结果与结论：实验通过对重组载体进行测序分析证实短发夹RNA插入慢病毒载体,慢病毒载体上清成功转染A549细胞后western blot检测结果显示该载体抑制了细胞因子信号转导抑制因子1蛋白在A549细胞有表达。说明实验成功构建了细胞因子信号转导抑制因子1RNA干扰慢病毒载体。     

原发性胆汁性肝硬化患者树突状细胞中细胞因子及其信号转导抑制分子变化的意义

目的 观察细胞因子信号转导抑制分子(SOCS)在原发性胆汁性肝硬化(PBC)患者树突状细胞(DC)及其表型和分泌细胞因子的变化,以研究SOCS在PBC发病机制中的作用.方法 对10例PBC患者和8名健康人,用流式细胞术(FCM)分析其DC表型CD83、CD86和人类白细胞抗原DR(HLA-DR),用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测DC培养上清液中细胞因子白细胞介素-10(IL10)、IL-12和干扰素-γ(IFN－γ)含量,用免疫印迹法(WB)测定DC中SOCS1和SOCS3水平;并评价分析这些指标在2组中的变化特征.结果 PBC患者外周血中DC细胞表型CD83、CD86和HLA-DR 的表达率分别为(79.4±4.8)％、(86.5±6.3)％和(90.0±3.5)％,均高于健康对照组的表达率[(68.3±4.1)％、(74.2±6.3)％和(83.6±7.6)％,t值分别为5.340、4.120和2.514,P均＜0.05];DC分泌的IL-12和IFN-γ含量分别为(53.5±11.1)、(32.0±9.0)ng/L,与健康对照组的细胞因子含量[(32.1±10.7)、(15.4±8.1)ng/L]相比,IL-12和IFN-γ均显著升高(t值分别为4.123和3.818,P均＜0.01);IL-10含量为(7.0±4.6) ng/L,与健康对照组[(5.8±4.2) ng/L]相比,差异无统计学意义(t=0.563,P＞0.05);WB检测PBC组DC中SOCS1和SOCS3的表达比健康对照组明显降低.结论 PBC患者体内DC更倾向于成熟状态,其抗原递呈能力明显增强,SOCS的低表达可能与免疫平衡紊乱和免疫耐受破坏有关.     

RNAi对细胞因子信号转导抑制因子1在内皮细胞中表达的沉默作用

背景：利用RNAi技术引发细胞因子信号转导抑制因子1沉默可促进神经内分泌肿瘤细胞的凋亡,然而对于内皮细胞是否有类似的作用,目前尚不清楚。目的：实验拟验证内皮细胞中是否有细胞因子信号转导抑制因子1表达,并在所设计的siRNA中,筛选出1对对细胞因子信号转导抑制因子1沉默效率最高的siRNA。设计、时间及地点：随机对照,体外细胞学实验,于2007—12／2008—06在南昌大学医学院第二附属医院所属的江西省分子医学重点实验室完成。材料：人脐静脉内皮细胞由南京凯基生物公司提供。方法：设计并化学合成4对靶向细胞因子信号转导抑制因子1的siRNA：siRNA-1、siRNA-2、siRNA-3、siRNA-4。培养人脐静脉内皮细胞,利用RT-PCR检测人脐静脉内皮细胞是否有细胞信号转导抑制因子1表达。将带有荧光标记的阴性对照siRNA配制成25,50,75,100nmol／L的4组,利用脂质体转染细胞,并在荧光倒置显微镜下观察转染效率,对比得出有最佳转染效率的浓度。然后,实验根据不同的处理因素分成8组：siRNA-1、siRNA-2、siRNA-3、siRNA-4和阳性对照组、阴性对照组、转染试剂组、空白对照组4个对照组。将均为有最佳转染效率浓度的各组siRNA转染细胞,48h后提取RNA。主要观察指标：利用RT-PCR测定细胞因子信号转导抑制因子1mRNA的相对表达水平。结果：人脐静脉内皮细胞高表达细胞因子信号转导抑制因子1。siRNA在50nmol/L时有较高的转染效率。4对siRNA干扰后,细胞因子信号转导抑制因子1mRNA的表达水平与阴性对照、转染试剂组和空白对照组相比明显下调（P〈0．05）,与阳性对照组相比显著下调（P〈0．01）,其中siRNA-3的沉默效率最高（P〈0．05）,阴性对照、转染试剂组和空白对照组与阳性对照组相比明显下调（P（0．05）,阴性对照、转染试剂组和空白对照组之间差异无显著性意义（P〉0．05）。结论：内皮细胞中存在细胞因子信号转导抑制因子1表达。RNAi抑制细胞因子信号转导抑制因子1在内皮细胞中的表达,实验筛选出1对沉默效率最高的siRNA。     

白血病抑制因子:不仅仅是一种肿瘤相关细胞因子

白血病抑制因子(LIF)是一种糖蛋白类的细胞因子,可由机体许多组织诱导产生。LIF可与效应细胞表面的异源二聚体型膜受体结合发挥作用,这种异源二聚体膜受体由低亲和力LIF特异性受体和gp130受体链组成,其中gp130也参与构成白细胞介素-6、抑瘤素M、心肌营养因子-1和睫状神经营养因子的受体。LIF不仅作用于肿瘤组织和细胞,而且还可维持胚胎干细胞的自我更新,刺激血小板的形成, 参与一些造血细胞的增殖和骨组织的形成等。     

细胞因子信号转导抑制因子1在脓毒症小鼠肝脏中的表达

目的 探讨细胞因子信号转导抑制因子-1 (SOCS-1)的含量在脓毒症小鼠肝脏中的变化情况以及可能的作用机制.方法 采用盲肠结扎并穿刺术(CLP)制作脓毒症模型,将成年雄性BALB/c小鼠随机分为8组,包括健康对照组(N),假手术组,术后2,6,12,24,48 h处死组.提取各组肝脏组织的RNA及蛋白质,采用RT-PCR测定组织中SOCS-1 mRNA的相对含量,用免疫印迹方法测定相对蛋白含量,用SPSS统计软件测定它们之间的变化关系.观察脓毒症时肝组织病理改变,免疫组织化学检测SOCS1在肝脏的表达.结果 CLP术后SOCS-1在肝脏内的基因表达和蛋白表达都在第6h迅速升高,基因表达至24h到顶峰(P＜0.05),蛋白表达一直保持高位,脓毒症时肝组织可见脂肪变性、坏死等病理改变,免疫组织化学可见SOCS-1的表达.结论 由CLP导致的脓毒症可诱导SOCS-1在肝脏中表达增多.     

正常妊娠反复自然流产绒毛及蜕膜组织中细胞因子信号转导负调控因子的表达:改变Th1/Th2平衡调节可影响妊娠结局

背景:细胞因子信号转导负调控因子(suppressors of cytokine signaling,SOCS)参与多种细胞因子信号通路的调节,SOCS1-3对妊娠的调节作用较为突出。目的:通过检测反复自然流产患者和正常妊娠绒毛及蜕膜组织中SOCS3蛋白表达,了解反复自然流产患者SOCS3蛋白的表达。方法:Westenblotting方法检测反复自然流产患者和正常妊娠绒毛组织及蜕膜组织SOCS3的表达。结果与结论:与正常妊娠组相比,反复自然流产组SOCS3在绒毛组织中表达减少(P<0.05),在蜕膜组织中表达减少(P<0.01)。推测SOCS3蛋白可能影响妊娠结局,反复自然流产组SOCS3表达降低,可能导致Th2反应降低,从而导致流产发生。     

细胞因子受体信号转导与造血细胞发育的调控

引言本综述涉及细胞因子受体的结构与功能由于这种受体家庭的研究发展很快，本文详细讨论的主要内容限于造血有关的细胞因子受体，因为此系统是首先被识别的而且它们的基本功能作用已经明确了。可惜由于篇幅的原     

细胞因子与慢性前列腺炎关系的研究现状

近年来,慢性前列腺炎性疾病有迅速增多的趋势,并且不断呈现出病变的多样性和复杂性。尽管慢性前列腺炎（chronic prostatitis,CP）不会对患者的生命构成威胁,但可严重影响其生活质量。有关细胞因子在CP发病中作用的研究日趋增多,本文复习近年文献,就细胞因子及其相关因子在CP中的研究进展作一综述。     

细胞因子信号传导抑制蛋白-1(SOCS-1)研究进展

细胞因子信号传导抑制蛋白（suppressor of cytokine signaling,SOCS）家族是一类由细胞产生并反馈性阻断细胞因子信号转导过程的负性调节因子,最先发现的是SOCS-1。SOCS-1可抑制IL-6、LIF、OSM、INF-γ以及GH等多种细胞因子的信号转导,对体内多种免疫反应的激活起调控作用。SOCS-1异常表达与多种疾病的发病相关,在急慢性白血病、类风湿性关节炎、肝硬化和肝癌的发病中起重要作用。本文就SOCS-1与细胞因子的关系及其临床研究进展进行综述。     

280位His残基对sIL—6R介导的IL—6信号转导功能的影响

目的：研究ｓＩＬ－６Ｒ第２８０位Ｈｉｓ残基突变后对其介导的ＩＬ－６信号转导功能的影响。方法：首先利用凝胶阻滞电泳方法确定ＩＬ－６靶细胞系－Ｓｋｏ－００７细胞中参与ＩＬ－６信号转导途径的转录因子（ＳＴＡＴ３和ＮＦ－ＩＬ－６）的诱导活化情况;进而将ｓＩＬ－６Ｒ突变体Ｈ２８０１的真核细胞表达产物与ＩＬ－６协同刺激Ｓｋｏ细胞,通过观察转录因子活化状态的变化来反应Ｈ２８０Ｉ对ＩＬ－６信号传递功能的影响。结果     

慢性前列腺炎对生殖的影响

慢性前列腺炎与男性生殖的关系一直是学术界争论的问题之一。 2 0 0 0 - 0 8～ 2 0 0 3- 0 8我们试图通过慢性前列腺炎中不育者、已育者和健康生育男性的血清性激素和精液进行检测并比较 ,从而探讨慢性前列腺炎与生殖的相关性。1　对象和方法1.1　对象　根据吴阶平主编《泌尿外科》慢性前列腺炎和不育诊断标准 ,诊断慢性前列腺炎已婚 2 5 6例 ,其中不育 4 2例 [年龄(2 8.2± 4 .2 )岁 ]。选与不育者相匹配的慢性前列腺炎生育者 5 0例 [年龄 (30 .4± 5 .3)岁 ]和健康生育男性 30例 [年龄 (2 7.9±3.8)岁 ]做对照。 3组年龄、身高、体重比较…     

前列腺癌细胞DU145同步化诱导的DNA损伤反应通路和PI3KAkt通路对凋亡抑制因子基因Apollon(BIRC6) mRNA表达的影响

[目的] 探讨在前列腺癌细胞DU145同步化培养后引起的DNA损伤反应通路和PI3K/AKT通路对凋亡抑制因子(IAP)基因Apollon/BIRC6 mRNA表达的影响.同时分析Apollon基因所在染色体是否存在特异性的异常.[方法]采用无血清的饥饿培养法使细胞同步在G0期;用含羞草碱、胸腺嘧啶和噻氨酯哒唑分别使细胞同步在G1期、S期和G2/M期并引起DNA损伤反应,同时加入PI3K的特异性抑制剂ly294002以阻止PI3K/AKT通路.利用RT-PCR半定量法检测Apollon mRNA在各个细胞周期相的表达情况.细胞遗传学的常规G式显带法,分析凋亡抑制因子基因所在的染色体是否存在特异性的异常.[结果]含羞草碱同步化的G0/G1期细胞达到了78.04%,胸腺嘧啶同步化的S期细胞达到62.19%,噻氨酯哒唑同步化的G2/M 60.5%.Apollon基因所在的染色体2p,存在缺失或者重复,如2p-,2p+.Apollon mRNA的表达, 同步化的G2/M、S期细胞组分别与非同步化细胞组比较差异有显著性(P<0.01),噻氨酯哒唑+ly294002组与噻氨酯哒唑相比较差异有显著性(P<0.01).[结论]前列腺癌细胞株DU145存在某些染色体的结构和数目异常,可能影响某些基因的表达.药物的同步化激活了DNA损伤反应通路和生存信号通路,再通过PI3K/Akt通路,在细胞周期的某个时相调控BIRC6/Apollon mRNA的表达.