12β-羟基藜芦酰棋盘花胺对小鼠小脑和大脑皮层组织DNA损伤的影响

目的探讨12β-羟基藜芦酰棋盘花胺(12β-hydroxylveratroylzygadenine,Vog)引起小鼠小脑和大脑皮层组织DNA损伤的影响。方法取132只雄性昆明种小鼠,随机分为空白组,Vog高(2.50μmol/kg)、低剂量组(0.25μmol/kg),给药7 d。采用彗星实验检测小脑和大脑皮层DNA损伤及修复情况;酶联免疫法检测8-羟基脱氧鸟苷(8-OHd G)、醌氧化还原酶(NQO1)含有量;比色法测定小脑和大脑皮层活性氧自由基(ROS)、丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)含有量和总超氧化物歧化酶(T-SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力;RT-PCR检测小脑和大脑皮层8-羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶(Ogg1)和血红素加氧酶-1(Ho-1)mRNA表达。结果 Vog明显提高小鼠小脑和大脑皮层MDA、ROS、NO以及尿液中8-OHd G含有量,降低GSH-Px和T-SOD活力,以及NQO1含有量,上调Ogg1表达。停药后第3天DNA修复接近正常水平,8-OHd G含有量接近正常水平。结论 Vog可能引起氧化应激,导致DNA损伤。Vog同时上调Ogg1表达,为抗氧化防御状态和DNA修复系统的代偿性调节。     

续断水提液对小鼠急性毒性和遗传毒性的影响

目的:探讨续断水提液对小鼠的急性毒性和遗传毒性。方法:采用最大耐受剂量法评价续断水提液对小鼠的急性毒性,观察小鼠体重及心脏、脾脏、肝脏、肾脏指数的变化;采用微核实验和单细胞凝胶电泳实验评价其遗传毒性,将40只小鼠随机分成空白组(ig 10 m L·kg~(-1)生理盐水),环磷酰胺组(第4天开始注射0.1 g·kg~(-1)环磷酰胺),续断水提液高、中、低剂量组(ig 32,16,8 g·kg~(-1)续断水提液)。各组小鼠给药5 d后处死并解剖,取骨髓细胞检测嗜多染红细胞的微核率;取胸腺、肝脏及脾脏细胞检测续断水提液对小鼠DNA的损伤。结果:续断水提液经口给药小鼠的最大给药量为80 g·kg~(-1),该剂量对小鼠体重及心脏、脾脏、肝脏、肾脏指数均无显著影响。中、低剂量组小鼠嗜多染红细胞的微核率与空白组比较无显著性差异;但续断高剂量组微核率明显高于空白组(P0.05)。高、中、低剂量组胸腺、脾脏、肝脏细胞尾部DNA百分率,尾矩略高于空白组,但均无显著性差异。结论:续断水提液对小鼠最大给药剂量为80 g·kg~(-1),属无毒级;中和低剂量续断水煎液对小鼠无遗传毒性作用,高剂量续断水提液可诱发小鼠骨髓嗜多染红细胞微核率升高,存在潜在的遗传毒性。     

粉防己与其主要组分粉防己碱效、毒作用及关系初探

目的:结合粉防己碱在生药及水提物中含量的测定,从效、毒两个维度来阐释粉防己与其主要生物碱粉防己碱的作用差异及两者之间的关系。方法:HPLC测定粉防己水提物中粉防己碱的含量的基础上,确定粉防己碱给药剂量,分别采用热板法、小鼠耳肿胀法对粉防己与粉防己碱的镇痛、抗炎作用进行比较研究;同时,选取给药12,24 d以及停药12 d 3个不同时间点实验动物总蛋白(TP),白蛋白(ALB),丙氨酸氨基转氨酶(ALT),天冬氨酸氨基转氨酶(AST),总胆红素(TBIL)作为观测指标,对粉防己与粉防己碱的肝脏毒性进行探查和比较。结果:1防己药材中粉防己碱的含量8.99 mg·g-1,粉防己水提液中粉防己碱的转移率为30.03%;2粉防己与粉防己碱均有明显的镇痛作用,但从短期镇痛效果而言,以粉防己碱为佳,从长期镇痛效果而言,以粉防己水提物为佳。粉防己碱的抗炎效果相对优于粉防己水提物的抗炎效果,但两者相比无显著性差异。3粉防己水提物和粉防己碱给药均可以造成一定程度的肝细胞受损,但两者的作用机制不同,且粉防己水提物造成的肝脏损伤停药后具有可逆性,而粉防己碱造成的肝脏损伤在停药后则继续发展。结论:粉防己碱作为粉防己的主要组分,并不能够完全表征粉防己的药效及毒性,同样的,粉防己中的其他组分也对粉防己碱的毒性作用没有明显的监制作用。粉防己碱与粉防己的效、毒作用表现及机制并不相同。     

雷公藤不同提取部位对小鼠肝肾的损伤作用

目的观察雷公藤不同提取部位对小鼠肝肾毒性损伤的作用。方法提取分离雷公藤不同部位,给小鼠分别灌服5、10 d,检测给药后小鼠体内的肝肾损伤相关功能指标,研究雷公藤的肝肾损伤较明显的部位。结果给药5、10 d后,雷公藤醇提物部位、乙酸乙酯部位和正丁醇部位可导致小鼠血中谷丙转氨酶和谷草转氨酶的升高;给药5 d后,乙酸乙酯高剂量组和正丁醇高剂量组以及醇提物高、低剂量组的尿素氮(BUN)值升高,但是对血肌酐(Scr)影响不大;给药10 d后,正丁醇高剂量组以及醇提物高、低剂量组的BUN升高,醇提物高、低剂量组Scr值升高。结论雷公藤的肝毒性较强,且毒性成分集中在醇提物部位,而以乙酸乙酯部位和正丁醇部位较多。雷公藤不同部位短期给药产生的肾脏毒性不明显,对肾脏产生的影响主要和醇提物部位有关。     

鸭跖草水提取物对小鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的:探讨鸭跖草对小鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法:昆明种小鼠65只随机分成假手术组、模型组和鸭跖草水提物高、中、低剂量组。鸭跖草高、中、低剂量组小鼠分别灌服鸭跖草水提物20,10,5g/kg.d,模型组和假手术组小鼠在相同时间点灌服等体积的蒸馏水,连续10d。末次给药1h后,模型组和鸭跖草各剂量组小鼠均采用夹闭双侧颈总动脉30min再灌注60min的方法复制急性脑缺血再灌注损伤模型,假手术组仅做双侧颈总动脉分离术,不夹闭。测定各组小鼠脑指数、脑组织含水量、脑匀浆中丙二醛(MDA)含量及脑组织超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力,并观察大脑皮层和海马CA1区细胞形态的变化。结果:与模型组比较,鸭跖草高、中剂量组小鼠脑指数和脑组织含水量均降低(P<0.01和P<0.05),脑匀浆中MDA含量减少(P<0.01),而SOD和GSH-Px的活力增加(P<0.01和P<0.05),且大脑皮层和海马CA1区神经元损伤减轻。结论:鸭跖草水提物对小鼠脑缺血再灌损伤具有保护作用,其机制与抗氧化作用有关。     

槟榔碱对骨髓细胞内DNA的影响

目的通过体内骨髓细胞实验,探讨槟榔碱对DNA的损伤作用机制。方法采用AO探针标记,激光共聚焦技术检测槟榔碱对骨髓细胞内DNA和RNA的影响;采用流式细胞仪测定槟榔碱对骨髓细胞周期的影响。结果给予槟榔碱20、10、5mg/kg剂量的染毒组,骨髓细胞内RNA/DNA的荧光像素比值明显高于空白对照组,差异非常显著(P<0.01);骨髓细胞周期与空白对照组相比,G0/G1期细胞比率有非常显著增加(P<0.01),S期细胞比率有非常显著降低(P<0.01),G2/M期细胞比率有非常显著降低(P<0.01)。结论槟榔碱对小鼠骨髓细胞的DNA有一定的损伤作用,具有一定的遗传毒性。     

吴茱萸指标成分体内外的肝损伤作用

目的:评价吴茱萸中吴茱萸碱、吴茱萸次碱、柠檬苦素体内外作用的肝损伤,为吴茱萸毒性物质基础研究提供依据.方法:吴茱萸水提物小鼠肝损伤实验,将美国癌症研究所(ICR)小鼠分为吴茱萸水提物高、中、低剂量组(80,60,40 g·kg-1)和空白组,给药24 h后取血测定血清丙氨酸氨基转移酶(ALT),天门冬氨酸氨基转移酶(A...     

款冬花及其所含生物碱对小鼠肝脏毒性作用的研究

目的探讨款冬花提取物、总生物碱部位、非生物碱部位和克氏千里光碱（senkirkine）对小鼠肝脏的毒性作用。方法小鼠灌胃给予款冬花水提液、醇提液、总生物碱、非生物碱、克氏千里光碱及腹腔注射克氏千里光碱，连续给药7d后，测定体重变化、肝脏指数，血清中GOT，GPT，TBIL的含量，并进行肝脏病理组织学检查。结果总碱组、克氏千里光碱口服和腹腔注射组显著抑制小鼠体重增加，血清生化指标显著升高，克氏千里光碱两组的肝脏指数明显增加。病理切片显示，水提组与对照组形态学无差异；总碱组形态学有所改变，肝细胞呈轻度细胞水肿，可见肝细胞点状坏死，肝小叶及汇管区未见炎细胞浸润；克氏千里光碱两组肝细胞均呈不同程度细胞水肿，可见肝细胞点状和碎片状坏死，肝小叶及汇管区可见少量炎细胞浸润。结论在所给剂量下，水提液无肝脏毒性，用药安全；总生物碱、克氏千里光碱有明显的肝脏毒性。     

藜芦提取物的体外DPPH自由基清除作用和对PC9肺癌细胞增殖的影响

目的探讨藜芦（Veratrum nigrum）提取物对DPPH自由基清除作用和对人体肺癌细胞系PC9细胞增殖的影响,比较藜芦的水提物与醇提物的作用差异。方法DPPH自由基清除法和CCK-8细胞毒性检测法。结果藜芦水提物和醇提物在10mg／ml时体外DPPH清除率分别为52．3％和42,8％。在体外培养的条件下能明显抑制PC9细胞的增殖,并且呈浓度依赖性,而水提物只在高浓度时有抑制作用。结论藜芦提取物具有DPPH自由基清除作用,并且对PC9细胞的体外增殖有明显的抑制作用。     

吴茱萸及其主要成分的遗传毒性研究

目的:研究吴茱萸及其主要成分吴茱萸碱、吴茱萸次碱和柠檬苦素的遗传毒性,为有毒中药吴茱萸的开发利用提供依据。方法:选用了Ames试验、体外CHL细胞染色体畸变试验和小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验。Ames试验选用TA97、TA98、TA100、TA102、TA1535组氨酸缺陷型菌株。吴茱萸碱、吴茱萸次碱和柠檬苦素分别设5个剂量组:0.000 5、0.005、0.05、0.5、5mg/皿;体外CHL细胞染色体畸变试验,吴茱萸碱、吴茱萸次碱和柠檬苦素的剂量分别为0.005 mg/mL、0.05/mL和0.5 mg/mL,受试药物与CHL细胞接触时间分别为4 h和24 h;吴茱萸醇提物小鼠骨髓微核试验,设吴茱萸醇提物0.88、3.52、10.55 g(生药)/kg 3个给药剂量组。连续给药4 d,每天给药1次。结果:吴茱萸碱、吴茱萸次碱和柠檬苦素各剂量组Ames试验结果为阴性。CHL试验中,吴茱萸碱的试验结果为阴性;吴茱萸次碱24 h组细胞染色体畸变率略有增加,差异有统计学意义(P0.05);柠檬苦素4 h和24 h组细胞染色体畸变率都略有增加,0.05 mg/mL、0.5 mg/mL组与阴性对照组比较,差异有统计学意义(P0.05),而0.005 mg/mL组与阴性对照比较,差异无统计学意义(P0.05)。微核试验中,吴茱萸醇提物的小鼠骨髓细胞微核试验结果为阴性。结论:综合以上3个试验结果,认为在本实验室条件下,吴茱萸醇提物无遗传毒性。但在体外试验中,吴茱萸次碱和柠檬苦素有致突变性。为进一步确认吴茱萸及其主要成分的遗传毒性,可进一步研究和探讨。     

桑叶水提液的急性毒性和遗传毒性研究

目的初步评价桑叶水提液安全性。方法通过小鼠急性毒性试验、鼠伤寒沙门氏菌试验(Ames试验)、中国仓鼠肺成纤维细胞(CHL)染色体畸变试验和小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验,考察桑叶水提液急性毒性和遗传毒性。结果桑叶水提液40 g/kg小鼠灌胃给药未出现死亡,体质量与正常对照组比较无明显差异(P>0.05)。经Ames试验、CHL细胞染色体畸变试验、小鼠微核试验,桑叶水提液的结果均为阴性。结论本实验条件下,桑叶水提液的小鼠灌胃给药最大给药剂量为40 g/kg,且未表现出遗传毒性。     

柴胡水提物连续给药对小鼠肝脏的影响

目的:观察柴胡水提物连续给药对小鼠肝脏的影响。方法:多次灌胃给予小鼠柴胡水提物,测定不同剂量下血液生化指标、氧化指标、细胞膜指标、线粒体指标以及病理指标的变化。结果:柴胡水提物120g/kg、20g/kg和2g/kg可降低小鼠肝组织SOD,其中柴胡水提物120g/kg还可降低小鼠肝组织GST活性,其余指标与空白组比较没有明显的差异。结论:柴胡水提物可致小鼠肝脏损伤,其毒性产生的机理可能与小鼠肝脏的氧化-抗氧化系统平衡受到破坏有关。     

基于胃寒证的吴茱萸水提物镇痛及伴随毒副作用机制

对吴茱萸水提物在胃寒证小鼠模型上镇痛作用的药效剂量范围及机制进行初步研究。制备胃寒证小鼠模型,采用经典的小鼠热板法,灌胃不同剂量吴茱萸水提物,观察其镇痛及伴随毒副作用,检测血清ALT,AST,PGE₂,NO,NOS,MDA,SOD,GSH,GSH-Px,BUN,CR及肝脏ALT,AST;并通过相关的毒性反应积分表,记录小鼠的伴随毒性症状。吴茱萸水提物在药后30 min有明显的镇痛作用,60 min达到峰效应,呈现一定的"量-效"和"时-效"关系,血中和肝内 ALT和AST水平升高,血中PGE₂,MDA,NO,NOS水平的增高,SOD,GSH,GSH-Px水平下降,BUN,CR水平无明显变化,肝体比值增加,肾体比值无明显变化。吴茱萸水提物发挥镇痛效应的机制与抑制疼痛介质释放、过氧化损伤及NO损伤有关;在发挥镇痛效果的同时还会伴随着对肝脏产生一定的毒性,毒性机制主要为氧化损伤,呈现与肝毒性损伤相并行的"量-时-毒"关系。     

党参水提物对D-半乳糖致衰老模型小鼠肝、肾细胞DNA和组织结构的影响

目的:研究党参水提物对衰老模型小鼠肝、肾DNA和肝、肾组织结构的影响,探讨党参保肝、护肾、抗衰老的机制,为中医药延缓衰老提供科学依据。方法:将100只小鼠随机分为正常对照组、模型对照组和党参水提物低、中、高剂量组5组。模型对照组和党参水提物低、中、高剂量组每日每只小鼠颈背部皮下注射质量分数50 g/L的D-半乳糖溶液,注射量为0.025 m L/g;正常对照组注射同体积量生理盐水。3个党参治疗各组每日上午按相当于生药量5,10,15 g/kg3个剂量给致衰老小鼠灌服党参水煎液,与造模同步,连续服药42 d。采用单细胞凝胶电泳检测肝、肾细胞DNA损伤,石蜡切片法观察肝、肾组织结构变化。结果:给予10,15 g/kg党参水提物后,小鼠肝肾细胞DNA尾长、尾矩、Olive尾矩明显降低,差别有统计学意义(P0.05或P0.01)。模型对照组肝细胞排列紊乱,细胞肿胀,胞浆疏松化,细胞变性,炎细胞浸润明显;肾小球萎缩,肾小管上皮细胞肿胀、变性或坏死,灶状小管萎缩,肾间质呈现明显的纤维化病变。给予党参水提物后,高剂量组肝细胞变性明显改善,炎性浸润显著减轻;肾小球萎缩明显缓解,肾小管上皮细胞肿胀、变性减轻,肾间质纤维化病变也明显缓解。结论:党参水提物对D-半乳糖致衰老模型小鼠肝、肾损伤具有一定的保护作用,其作用机制可能是通过减轻肝、肾细胞DNA损伤,减缓衰老致肝、肾组织结构退行性病变,达到延缓衰老的作用,而更深入的机制探讨尚需进一步研究。     

薏苡茎、叶提取物的急性毒性

目的:探讨薏苡茎、叶的水提物和乙醇提物对小鼠的急性毒性反应,测定半数致死量LD50及最大耐受量(MTD)。方法:实验前禁食不禁水16 h,SPF级KM小鼠74只,雌雄各半,分提取物组和空白对照组;灌胃,定时密切观察,记录毒性反应和死亡情况。若有小鼠死亡,则将死亡小鼠解剖,肉眼观察心、肝、脾、肺、肾、脑、胃、小肠等脏器变化,14 d观察期结束后,将每组存活的小鼠处死进行解剖,按照上述同样方法对主要脏器大体病理变化进行肉眼观察。结果:小鼠未出现明显的中毒症状,亦未出现死亡。结论:小鼠对薏苡的叶水提物(叶水提),叶乙醇提物(叶醇提),茎水提物(茎水提),茎乙醇提物(茎醇提)的最大耐受量分别是42.08,34.80,39.52,32.64 g·kg-1,均5 g·kg-1,由此可见叶水提、叶醇提、茎水提、茎醇提在季度试验提示该药是较安全的。     

小鼠脾淋巴细胞模型在中药复方免疫活性物质筛选中的应用研究

目的:观察四物汤等6个方剂不同提取物对小鼠离体脾淋巴细胞转化增殖能力的影响,探讨小鼠脾淋巴细胞模型在中药复方免疫活性成分筛选中的应用.方法:制备四物汤、四君子汤、六味地黄汤、玉屏风散、桂枝汤、龙胆泻肝汤等6个方荆的水提物、水提醇沉物、醇提物,选择其没有明显细胞毒性的浓度范围,在96孔板中分别与小鼠正常的和经PMW诱导的小鼠脾淋巴细胞共同孵育,以MTT法检测细胞转化增殖情况.结果:四物汤上述三种提取物、四君子汤与六味地黄汤水提物和水提醇沉物、龙胆泻肝汤水提物能明显增强经PMW诱导的小鼠脾淋巴细胞转化增殖能力(P<0.05或P<0.01);桂枝汤醇提物能明显押制经PMW诱导的小鼠脾淋巴细胞转化增殖能力(P<0.01);仅有四物汤水提物能明显增强小鼠正常脾淋巴细胞转化增殖能力(P<0,01),其活性明显较PMW诱导组低(P<0.01).上述方荆刺激淋巴细胞转化增殖的效应具有提取物和浓度的差异性.结论:在中药复方免疫活性物质的筛选中,丝裂原刺激下的小鼠脾淋巴细胞模型作用稳定,应用时注意选择没有明显细胞毒性的药物浓度.     

蛇床子提取物的镇静催眠作用

目的:比较蛇床子不同提取物的镇静催眠作用。方法:蛇床子用水、乙醇、石油醚分别提取制备,观察折合生药相当剂量水提物和等剂量挥发油、醇提物、总香豆素对小鼠自主活动和对戊巴比妥钠催眠剂量小鼠入睡潜伏期和睡眠时间的影响。结果:蛇床子醇提物、总香豆素能显著减少小鼠自主活动(P<0.05),延长小鼠睡眠时间(P<0.05,P<0.001),醇提物作用更为显著;蛇床子水提物、挥发油对小鼠自主活动、睡眠潜伏期和持续睡眠时间与空白对照组比较,无统计学意义。结论:初步确定蛇床子醇提物、总香豆素具有明显的镇静催眠作用,以醇提物作用较强。     

松节藻醇提物对正常小鼠抗氧化活性的影响

目的 研究松节藻醇提物对正常小鼠抗氧化活性的影响.方法 通过单细胞微凝胶电泳法检测松节藻醇提物对H2O2诱导的正常小鼠淋巴细胞DNA损伤的防护作用.分别采用黄嘌呤氧化酶法、DTNB直接法、TBA硫代巴比妥酸法检测小鼠血清中的超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性和丙二醛(MDA)的量.结果 松节藻醇提物对H2O2诱导的正常小鼠淋巴细胞DNA损伤具有一定的防护作用,并且能升高小鼠血清中SOD和GSH-Px活性.降低MDA的量.结论 松节藻醇提物具有一定的抗氧化活性.     

黄连解毒汤全方和不同极性部位的活性筛选

目的:研究比较黄连解毒汤全方水提液体系、水提液体系经有机溶剂梯度萃取后不同极性部位中指标性成分的变化,通过药效学筛选,探讨黄连解毒汤改善脑缺血、益智作用的有效部位及其化学组成,为该方的精制分离提供实验依据。方法:黄连解毒汤全方经水煎煮得水提液(部位Ⅰ),水提液浓缩后以石油醚、乙酸乙酯和水饱和正丁醇梯度萃取,得到石油醚萃取物(部位Ⅱ)、乙酸乙酯萃取物(部位Ⅲ)、水饱和正丁醇萃取物(部位Ⅳ)、残留水层上清液(部位Ⅴ)、残留水层沉淀(部位Ⅵ),以栀子苷、黄芩苷、巴马汀、小檗碱、黄芩素和汉黄芩素6种成分为对照,应用RP-HPLC确定各萃取物中6种指标性成分的含量;选用鼠源肾上腺髓质嗜铬细胞瘤PC-12细胞活性跟踪筛选,MTT法测定黄连解毒汤及各萃取部位对低糖DMEM和氯化钴诱导的PC-12细胞缺糖缺氧损伤的影响。结果:部位Ⅴ中各指标性成分含量较高,且6种指标性成分的比例与部位Ⅰ相似;部位Ⅰ,Ⅴ对PC-12细胞的缺糖缺氧损伤保护作用明显。结论:部位Ⅴ为黄连解毒汤改善脑缺血、益智作用的有效部位。     

玉竹水提物对衰老模型小鼠线粒体DNA含量的影响

目的:从氧自由基和肝细胞线粒体DNA(mtDNA)的含量,研究玉竹抗衰老的可行性和可能的作用机制.方法:5%D-半乳糖皮下注射建立衰老小鼠模型,同时灌胃给予玉竹水提物,正常对照组和模型组给予等体积生理盐水.检测肝细胞mtDNA的相对含量、血清SOD活性及MDA含量作比较.结果:玉竹水提物能够降低衰老状态下小鼠肝细胞mtDNA相对含量及血清MDA含量,提高血清SOD活性(P<0.01).结论:玉竹水提物具有减轻D-gal诱导亚急性衰老动物模型的氧化损伤,保护肝细胞mt DNA,从多方面延缓机体衰老的作用.