慢性综合应激对大鼠海马CA3区nNOS和BDNF表达及行为学表现的影响

目的：观察慢性综合应激引起的大鼠海马CA3区的病理变化及相应的行为学改变，探讨抑郁的发病机制。方法：观察在应激的不同时程内，Wistar大鼠海马CA3区神经元型一氧化氮合成酶(nNOS)和脑源性神经营养因子(BDNF)蛋白表达的动态变化，同时观察大鼠行为学改变。结果：经慢性应激11d，海马CA3区nNOS蛋白表达增加，BDNF蛋白表达减少，探究行为减少，修饰行为受到抑制，排便量增加；应激21d，nNOS蛋白表达有逐渐降低的趋势，BDNF蛋白表达几乎消失，大鼠表现为抑郁状态。结论：慢性综合应激可能通过损伤大鼠海马引起大鼠的抑郁状态，提示脑损伤可能在抑郁发病机制中起重要作用，保护脑组织应成为抑郁新的治疗靶。     

Aβ_(1-40)对大鼠海马CA3区神经干细胞凋亡关系的实验研究

目的:研究Aβ_(1-40)对大鼠海马CA3区神经干细胞凋亡的关系。方法:急性分离新生Wistar大鼠海马CA3区神经干细胞,并采用膜片钳技术提取新生Wistar大鼠海马CA3区神经干细胞,分别记录加入不同时间点可溶性Aβ_(1-40)后,利用PCR技术,观察神经干细胞凋亡的情况。结果:Aβ_(1-40)对新生大鼠海马CA3区神经干细胞明显的凋亡作用。但与空白对照组相比其增殖细胞数明显减少,凋亡明显增多。Aβ_(1-40)对新生大鼠海马CA3区神经干细胞增殖具有一定影响,Aβ_(1-40)组与空白对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:Aβ_(1-40)可引起新生大鼠海马CA3区神经干细胞凋亡。Aβ_(1-40)诱发的神经干细胞凋亡很可能是钾离子通道中Kv2.1亚型表达下降所引起的级联反应。     

外源性胆囊收缩素对大鼠学习记忆的影响及相关机制的研究

目的 探讨大鼠海马注射CCK－8对其光辨别学习记忆的影响。方法 采用核团微量注射和放射免疫分析的方法。结果（1）海马CA3区注射CCK－8,大鼠光辨别学习能力明显提高;海马CA3区注射L－365＋CCK－8,大鼠光辨别学习能力明显减弱;（2）大鼠海马CA3区注射CCK－8,海马谷氨酸转运体功能明显增强;海马CA3区注射L－365＋CCK－8,海马谷氨酸转运体功能明显减弱。结论 CCK－8可促进大鼠的学习记忆,这可能是通过CCK－B受体而实现的;谷氨酸转运体可能参与了这一过程。     

脑缺血-再灌注后海马迟发性神经元死亡的实验研究

目的：用重复脑缺血－再灌注小鼠模型的海马切片观察迟发精神元死亡的形态学特点。方法：用重复双侧颈总动脉夹闭方法制作不完全脑缺血－再灌注动物模型。于造模后24h、72h、7d取材，HE染色及原位DNA末端标记法观察海马切片的病理改变。结果：造模后7d海，海马锥体细胞出现广泛的细胞坏死，以CA1区最明显。使用原位DNA末端标记法，在坏死神经元的邻近部位以及CA2，CA3区，齿状回可见部分膜结构完整的神经细胞核内出现特征性阳性颗粒，为细胞核内DNA链断裂所引起的凋亡细胞。结论：海马神经元的迟发性死亡表现为坏死与凋亡共存现象，海马CA1段锥体细胞的病理改变以坏死为主，齿状回颗粒细胞的改变以凋亡为主。对于迟发性神经元死亡的原因，生物学过程，及与神经系统退行性变的关系进行了初步探讨。     

Aβ25-35诱导阿尔茨海默病模型大鼠海马神经元NT3及trkC的表达

观察Aβ_25-35诱导阿尔茨海默病（Alzheimer disease, AD）模型大鼠海马神经营养素3（neurotrophin-3,NT3）及其受体trkC的表达,并探讨其与AD的关系。方法：30只雄性Wistar大鼠随机分为对照组和模型组。采用立体定向下双侧海马注射Aβ_25-35建立AD模型,对照组大鼠采用相同方法注射等量生理盐水。2周后,用水迷宫实验测试大鼠学习和记忆功能;然后处死,光镜下观察海马组织结构,免疫组织化学法检测NT3和trkC蛋白的表达。结果：NT3与其受体trkC在两组大鼠海马各区表达变化不同。AD组大鼠海马CA1、CA2、CA3区NT3免疫反应阳性细胞数少于对照组,差异有统计学意义,尤以CA1和CA3区较为明显（P＜0.01）,而CA4区和hilar区NT3免疫反应阳性细胞数以及海马各区trkC免疫反应阳性细胞数在两组之间差异无统计学意义（P＞0.05）。结论：海马神经元NT3的表达含量减少而非其受体trkC的下调与AD模型大鼠学习和记忆功能损害相关,提示补充外源性NT3可有助于减轻Aβ_25-35的神经元毒性,从而改善其学习和记忆功能。     

慢性铝中毒对大鼠海马CA3区ChAT阳性神经元的影响

目的：从慢性铝中毒大鼠海马CA3区胆碱乙酰转移酶（Choline Acetytransferase,ChAT）变化的角度,探讨铝的神经毒性作用机制。方法：40只4～5月龄SD大鼠,随机分为铝中毒组和正常对照组,采用尼氏染色及ChAT免疫组化染色,计数阳性细胞,用细胞形态学计量方法测量ChAT阳性产物的平均光密度。结果：铝中毒组大鼠海马CA3区ChAT阳性神经元减少,合成的乙酰胆碱（Acetychdine,Ach）也减少。结论：铝可对大鼠海马CA3区ChAT阳性神经元产生神经毒性作用。     

p38MAPK在Aβ25-35诱导AD大鼠不同脑区的表达

目的：探讨p38在Aβ25-35诱导阿尔茨海默病（AD ）大鼠嗅球及海马的表达差异及其在AD的可能机制。方法：将SD大鼠随机分为阴性对照组、痴呆组、抑制剂组和溶媒对照组。采用Aβ25-35单次侧脑室注射诱导AD大鼠模型,应用Y-迷宫观察大鼠的学习与记忆能力变化,免疫组化法检测嗅球、海马CA1区p-p38在活体的表达。结果：AD大鼠的学习及记忆功能在造模后第7d和第14d受到损害,与阴性对照组及抑制剂组比较差异有统计学意义;造模4d后痴呆组海马CA1区及嗅球出现明显的p-p38表达,在不同时间点痴呆组及溶媒对照组p-p38阳性细胞数分别明显高于阴性对照组及抑制剂组,抑制剂组p-p38的表达在各时间点较痴呆组及溶媒对照组明显下降;在各时间点每组海马CA1区p-p38水平均高于嗅球区;p-p38在两部位的表达规律相似,但海马CA1区对损伤的敏感性要高于嗅球,SB203580可部分减少Aβ25-35引起的海马CA1区及嗅球损害。结论：Aβ25-35诱导的大鼠脑内p38表达可在海马CA1区及嗅球,但是CA1区更明显,p38抑制剂可减轻这种损害,有望成为治疗AD的药物。     

海马不同地区域缺血时损伤和hsp70mRNA表达差异

目的：探讨缺血再灌注后鼠脑海马CA1区选择性易损伤和迟发神经元死亡现象,以及hsp70mRNA差异表达的可能机制。方法：观察鼠前脑缺血再灌注时,海马CA1区、CA3区及齿状回锥体细胞在组织学变化;以及原位杂交技术检测各区hsp70mRNA的诱导表达。结果：缺血再灌注7d后海马CA1区锥体细胞缺失明显,而CA3区及齿状回未见明显形态学变化。CA1区hsp70mRNA的诱导较其余两区迟,而持续时间较长。结论：在缺血早期加强或在缺血后期抑制hsp70mRNA的诱导,有可能保护CA1区锥体细胞。     

红藻氨酸致痫大鼠海马区神经元凋亡的动态变化

目的探讨红藻氨酸(kainic acid,KA)诱导的大鼠癫痫状态海马神经元的形态学变化、凋亡情况及抗痫药物的神经保护作用.方法90只Wistar大鼠随机分为对照组、KA组和卡马西平(CBZ)组,后两组再按癫痫发作后1 h、4h、12h、24h、48h和72h不同时点分为6个亚组.KA注射后,观察大鼠癫痫发作后的行为学变化;采用HE染色法观察大鼠癫痫状态海马CA1、CA3区神经元形态学改变;采用原位细胞凋亡检测法观察癫痫状态海马CA1、CA3区神经元凋亡情况.结果KA注射后,大鼠出现严重的惊厥;在癫痫发作后12h,海马CA1区、CA3区开始出现凋亡细胞[CA1区:KA组(6.53±1.36)个,CBZ组(5.85±1.68)个;CA3区:KA组(9.58±1.63)个,CBZ组(7.36±1.27)个],48h凋亡细胞达到峰值(P＜0.01)[CA1区:KA组(42.263±3.28)个,CBZ组(35.39±2.36)个;CA3区:KA组(57.64±12.76)个,CBZ组(38.37±13.65)个].经CBZ干预后凋亡细胞明显减少(P＜0.05).结论癫痫发作后的迟发性神经元死亡很可能是由凋亡引起的,CBZ可抑制癫痫状态海马神经元凋亡.     

痫样放电与海马CA3区神经元死亡的关系

目的：定量研究大鼠杏仁核注射海人酸所致的痫样放电与海马CA3区神经元死亡的关系。方法：以深部脑电图监测Ⅳ级痫样放电的持续时间,以HE染色观察记数存活神经元,以TUNEL染色观察记数凋亡神经元。通过相邻切片的HE染色和TUNEL染色估算坏死神经元数。结果：痫样放电导致凋亡为主的,伴有坏死的CA3神经元死亡;放电的持续时间越长,神经元存活数越少,坏死和凋亡的神经元数目越多。结论：随着Ⅳ级放电持续时间的延长,海马CA3存活细胞呈剂量依赖性地减少,坏死和凋亡细胞都呈剂量依赖性地增加。     

中药复方962胶囊对老年大鼠海马神经生长因子及其受体表达的影响

目的 我们以往的实验证明：中药复方962胶囊（含何首乌、石菖蒲等六味中药）能显改善老年大鼠学习记忆功能。本研究观察962胶囊对自然衰老大鼠模型海马区神经生长因子（NGF）及其受体TrkA表达的影响,探讨962胶囊改善学习记忆功能的作用机理。方法 雌性Wistar大鼠,老年为TrkA表达的影响,探讨962胶囊改善学习记忆功能的作用机理。方法 雌性Wistar大鼠,老年为22月龄,青年为5月龄。962胶囊高剂量1.8g/kg,962胶囊低剂量0.9g/kg,每日灌胃给药一次,连续灌胃2个月,ABC法行NGF和TrkA免疫组化染色。VISILOG5.0图像分析系统对组织切片进行分析。海马CAI区锥体细胞层连续摄取3个视野,这3个视野包括了整个CAI区,记数3个视野内总阳性细胞数量、阳性细胞总面积（象素单位）及阳性细胞灰度积分值（灰度单位）。海马CA2区连续摄取2个视野,海马CA3区连续摄取2个视野,海马CA4区摄取齿状回包含的1个视野,包括了完整的CA2、CA3、CA4区;结果（1）老年大鼠海马CA1、CA2、CA3、CA4区NGF和TrkA阳性细胞数,阳性细胞总面积和阳性细胞灰度积分值较青年对照组明显减少,以CA2、CA3区的减少最严重。（2）962胶囊能提高老年大鼠海马CA1、CA2、CA3、CA4区NGF和TrkA阳性细胞数量,阳性细胞总面积和阳性细胞灰度积分值,962胶囊高剂量组基本恢复青年对照组水平。结论 老年大鼠神经生长因子（NGF）及其受体TrkA在海马区表达明显减少,可能与其学习记忆能力下降有关;962胶囊能够明显促进老年大鼠海马区NGF及受体TrkA表达,可能是改善其学习记忆功能的药理学基础。增强内源性神经营养物质的表达对老年性痴呆的治疗有重要意义。     

注射Aβ25-35后大鼠海马超微结构及caspase-3表达的改变

目的：探讨大鼠双侧海马注射Aβ25-35后海马组织形态、超微结构及caspase-3表达的改变.方法：采用Aβ25-35双侧海马注射的阿尔茨海默病（AD）大鼠模型,光镜及透射电镜观察海马组织结构,免疫组化法观察caspase-3蛋白的表达.结果：苏木素伊红（HE）染色显示,模型组大鼠海马CA1-CA4区及齿状回神经元数量较对照组明显减少,可见较多的神经细胞胞质浓染,核固缩;透射电镜下,模型组海马CA1区神经元较少,可见部分神经细胞膜皱缩,胞体缩小,核膜完整,核染色质电子密度增强;海马区Caspase-3蛋白的表达明显增加.结论：Aβ25-35可在体内诱导大鼠海马神经元凋亡.     

海马CA3区θ~γ神经振荡模拟刺激对大鼠空间认知能力的影响

目的：探讨海马CA3区θ~γ神经振荡模拟交替刺激对大鼠空间认知能力的影响及其机制。方法：依据迷宫电击回避实验结果将实验大鼠分为快回避反应组和普通回避反应组;利用在体脑深部刺激方法,模拟快回避反应组内生θ~γ神经振荡刺激普通回避反应大鼠海马CA3区,即为模拟刺激组。利用Y迷宫电击回避实验检测模拟刺激对大鼠空间认知能力的影响;利用小波包提取方法分析模拟刺激后大鼠海马CA3区θ~γ神经振荡相位-幅度耦合情况;利用蛋白质印迹法检测大鼠海马组织N-甲基-D-天冬氨酸受体2B（NR2B）亚型、突触后致密区95（PSD-95）的表达。结果：与普通回避反应组比较,模拟刺激组电击回避训练达标所需时间、达标所需测试次数、正确反应时间、错误反应次数均明显减少,正确反应率明显提高（均P<0.01）;同时,模拟刺激组海马CA3区θ~γ神经振荡多个频段（3~5?Hz与30~34、38~42、44~48 Hz;5~7?Hz与42~46、44~48、54~58?Hz）耦合度明显高于普通回避反应组（均P<0.05）;另外,模拟刺激组海马NR2B亚型及PSD-95表达量显著增加（均P<0.05）。结论：大鼠海马内生θ~γ神经振荡模拟交替刺激明显提高了普通回避反应大鼠空间认知能力,而这种空间认知能力的提高可能是由PSD-95调控的NR2B亚型介导的突触可塑性增强引起。     

大鼠脑缺血再灌流期海马内缩胆囊素的动态变化

本实验采用免疫组化技术，研究了脑缺血及再灌流各阶段大鼠海马内缩胆囊素（CCK）的变化，再灌流后6～24h，海马CCK阳性神经元有所增多，再灌1天后CCK阳性细胞有所减少，至第4～7天时CCK阳性神经元减少更明显，脑缺血性改变于再灌流6h以前呈现加重趋势，1天后乃逐渐改善，至第4～7天时CA2～4区的缺血变化显著减轻，而在CA1区，随着再灌流期延长，其缺血性变化不仅不改善，反而加重直至部分锥体细胞死亡。提示：CCK的大量释放可能与脑缺血再灌流神经损害有关。     

红藻氨酸致痫大鼠海马区神经元凋亡的动态变化

目的探讨红藻氨酸(kainicacid,KA)诱导的大鼠癫痫状态海马神经元的形态学变化、凋亡情况及抗痫药物的神经保护作用。方法90只Wistar大鼠随机分为对照组、KA组和卡马西平(CBZ)组,后两组再按癫痫发作后1h、4h、12h、24h、48h和72h不同时点分为6个亚组。KA注射后,观察大鼠癫痫发作后的行为学变化;采用HE染色法观察大鼠癫痫状态海马CA1、CA3区神经元形态学改变;采用原位细胞凋亡检测法观察癫痫状态海马CA1、CA3区神经元凋亡情况。结果KA注射后,大鼠出现严重的惊厥;在癫痫发作后12h,海马CA1区、CA3区开始出现凋亡细胞[CA1区:KA组(6.53±1.36)个,CBZ组(5.85±1.68)个;CA3区:KA组(9.58±1.63)个,CBZ组(7.36±1.27)个],48h凋亡细胞达到峰值(P<0.01)[CA1区:KA组(42.263±3.28)个,CBZ组(35.39±2.36)个;CA3区:KA组(57.64±12.76)个,CBZ组(38.37±13.65)个]。经CBZ干预后凋亡细胞明显减少(P<0.05)。结论癫痫发作后的迟发性神经元死亡很可能是由凋亡引起的,CBZ可抑制癫痫状态海马神经元凋亡。     

钙调神经磷酸酶抑制剂对Aβ1－42所致阿尔茨海默病大鼠学习记忆及细胞凋亡的影响

目的：探讨钙调神经磷酸酶抑制剂对β-淀粉样蛋白（Aβ1－42）所致阿尔茨海默病（AD）大鼠学习记忆及海马区细胞凋亡的影响及可能作用机制。方法36只SD大鼠随机分为AD模型组、FK506组及对照组,每组12只。 AD模型组和FK506组采用Aβ1－42海马注射建立AD大鼠模型,FK506组以钙调神经磷酸酶抑制剂他克莫司（ FK506）干预。用Morris水迷宫检测大鼠学习记忆能力,原位末端凋亡法（TUNEL）检测凋亡细胞,实时定量PCR（RT-PCR）、免疫组化检测海马区促凋亡蛋白（Bad）、细胞凋亡蛋白酶-3（Caspase-3）的表达。结果与对照组相比,AD模型组大鼠学习记忆能力明显减退（P＜0．01）,海马CA1区神经元细胞凋亡率增高（ P＜0．05）,而FK506可改善AD大鼠的学习记忆能力,并能减少海马CA1区神经元细胞凋亡率（P＜0．05）;Bad基因转录及其蛋白表达在AD模型组与FK506组中无明显差异（P＞0．05）,而FK506可显著减少AD大鼠海马区Caspase-3的表达（P＜0．05）。结论抑制钙调神经磷酸酶激活可改善AD大鼠的学习记忆能力。 AD的发病机制可能为,活化的钙调神经磷酸酶可能通过介导Bad去磷酸化而激活Caspase-3,最终导致细胞凋亡。钙调神经磷酸酶抑制剂可通过阻断该途径来治疗AD。     

自发性癫痫大鼠海马区谷氨酸转运体GLAST表达下调

[目的]通过对照实验探讨自发性癫痫大鼠（spontaneously epilepsy rats,SER）与正常Wistar大鼠海马区胶质细胞型谷氨酸转运体GLAST蛋白的表达情况,以期发现其与遗传性癫痫发病的关系。[方法]利用聚合酶链反应（PCR）扩增SER的特异性基因片段,筛选出SER;利用免疫荧光定位GLAST蛋白的表达,并应用免疫组织化学技术,检测GLAST蛋白在SER及正常Wistar大鼠海马内的表达情况。[结果]GLAST蛋白在SER海马的齿状回（DG）表达与正常Wistar大鼠相比明显减少（GLAST的表达为Wistar：52.67±11.5,SER：39.39±9.48,P〈0.05）,在海马CA1和CA3区表达差异无显著性意义（CA1区为Wistar：48.56±10.6,SER：45.84±7.20;CA3区为Wistar：43.29±10.6,SER：36.73±6.50,P〉0.05）。[结论]SER自发性癫痫可能与海马DG区GLAST蛋白表达下降有关;GLAST表达下降可能是由SER基因位点的突变引起的。     

血管性痴呆大鼠海马一氧化氮合酶阳性神经元的变化

目的：观察血管性痴呆大鼠海马神经元型一氧化氮合酶（nNOS)阳性神经元的变化。方法：采用改良的Pulsinelli4-血管阻断（4－VO）方法建立大鼠血管性痴呆模型,用免疫组化法研究大鼠海马nNOS的表达的变化。结果：与正常对照组比较,血管性痴呆大鼠海马CA1区和CA3区nNOS阳性神经元数目明显减少。结论：血管性痴呆大鼠海马nNOS阳性神经元的数目减少,与血管性痴呆的形成有关。     

天敌应激对大鼠海马CA3区锥体细胞的损害作用

目的探讨天敌应激对大鼠海马CA3区神经元的损害作用及其神经病理学机制.方法以猫为天敌应激源,将28只SD大鼠分为4组:单次应激组、2周持续应激组、4周持续应激组及对照组.采用Nissl、Golgi染色法及透射电镜,观察CA3区锥体细胞数量及形态变化;采用TUNEL法观察凋亡神经元.结果单次、2周、4周应激组的CA3区锥体细胞数(62.17±8.16,44.33±12.45,43.17±4.49)均较对照组(75.33±14.19)显著减少(P＜0.01).应激组大鼠CA3区锥体细胞树突长度变短,分支节点数减少.应激组的TdT平均灰度均较对照组显著下降(P＜0.01),而平均面密度明显升高(P＜0.01).应激组锥体细胞超微结构发生凋亡特征性改变.结论天敌应激可导致大鼠海马CA3区锥体细胞树突萎缩和神经元丢失;神经元凋亡是锥体细胞受损的神经病理学发生机制之一.     

大鼠海马结构及其CCK神经元在学习记忆中的作用研究

目的通过毁损海马结构不同区域造成学习记忆减退模型,探讨海马结构及神经递质CCK神经元在学习记忆中的作用。方法SD大鼠48只,随机分成4组1双侧海马穹窿伞横断组;2海马CA3区锥体细胞KA损毁组;3实验对照组;4正常对照组。以大鼠被动回避反应和Morris水迷宫试验为指标测定实验动物学习记忆能力,采用免疫组织化学技术观察海马结构CCK神经元的变化。结果经两种方式毁损海马结构不同区域干扰海马传导通路后,大鼠学习记忆能力明显障碍。且经1~4W观察,学习记忆功能无明显恢复。在双侧隔海马伞横断组和海马CA3区锥体细胞KA损毁组均伴有CCK神经元质和量的改变,但以海马CA3区锥体细胞KA损毁组尤为突出,除表现为数量减少外,细胞的损伤性改变较双侧隔海马伞横断组明显。结论海马CA3区注入海人酸后引起的学习记忆障碍程度较海马穹窿伞横断所引起的严重。海马CA3区KA注射后除引起CCK神经元数量减少外,尚伴有CCK神经元的损伤,而双侧海马穹窿伞横断后CCK神经元改变主要是数量减少,神经元损伤不明显。海马功能的完整不仅依赖于结构的完整,同时也依赖于各种神经递质的参与和神经递质质和量的正常。