探讨SPC在诱肝癌HepG2细胞凋亡中的作用机制

目的 研究水飞蓟宾-磷脂酰胆碱复合物(Silybin-phosphatidylcholine Compound,SPC)诱导肝癌HepG2细胞凋亡作用及其机制.方法 不同浓度SPC处理肝癌HepG2细胞.通过MTT法、细胞形态学观察、流式细胞仪和激光共聚焦显微镜观察SPC时HepG2细胞的生长抑制作用及其细胞凋亡的影响.结果 SPC可抑制HepG2细胞的增殖.其GI50为46.8μg/ml;50μg/ml的SPC作用HepG2细胞24h后,细胞出现早期调亡的形态;75μg/ml、100μg/ml的SPC对HepG2细胞凋亡率分别为(17.22±3.45)%和(25.50±5.72)%;50μg/ml、75μg/ml、100μg/ml的SPC作用于HepG2细胞24h后,细胞内的Ca2+浓度显著升高(P<0.05,P<0.01).结论 SPC能够诱导肝癌细胞系HepG2细胞凋亡,其机制与SPC升高细胞内Ca2+浓度有关.     

水飞蓟宾-磷脂酰胆碱复合物诱导HepG2细胞凋亡研究

目的研究水飞蓟宾-磷脂酰胆碱复合物（Silybin-phosphatidylcholine Compound,SPC）诱导肝癌HepG2细胞凋亡作用及其机制。方法不同浓度SPC处理肝癌HepG2细胞,通过MTT法、细胞形态学观察、流式细胞仪和激光共聚焦显微镜观察SPC对HepG2细胞的生长抑制作用及其细胞凋亡的影响。结果SPC可抑制HepG2细胞的增殖。其GI50为46．8μg/ml;50μg／ml的SPC作用HepG2细胞24h后,细胞出现早期调亡的形态;75μg／ml、100μg／ml的SPC对HepG2细胞凋亡率分别为（17．22&#177;3．45）％和（25．50&#177;5．72）％;50μg／ml、75μg／ml、100μg／ml的SPC作用于HepG2细胞24h后,细胞内的Ca^2＋浓度显著升高（P〈0．05,P〈0．01）。结论SPC能够诱导肝癌细胞系HepG2细胞凋亡,其机制与SPC升高细胞内Ca^2＋浓度有关。     

Fas配体对HepG2细胞凋亡的影响

细胞凋亡 (apoptosis)与肿瘤的发生、增殖与转移有着较为密切的关系 ,而Fas Fas配体 (FasLigand ,FasL)被认为是传导细胞凋亡信号的“死亡信号传递分子”。其中FasL主要存在于免疫活性细胞 ,通过与靶细胞膜Fas结合 ,导致靶细胞凋亡。为研究FasL在肝癌细胞凋亡过程中的作用 ,我们首先采用ELISA法对慢性乙型肝炎、肝硬化与肝癌患者血清中Fas及可溶性FasL(sFasL)水平进行了初步检测 ,结果显示肝癌患者血清中sFas明显升高 ,而FasL的浓度又明显低于慢性肝炎及肝硬化者 ,提示在肝癌的发生中 ,FasL及Fas与肝癌细胞凋亡有重要关系。我们…     

NDRG2对肝癌细胞HepG2凋亡的诱导作用

目的：探讨NDRG2对肝癌细胞HepG2凋亡的诱导作用。方法：用RT-PCR获取NDRG2基因。测序判断正确后，将其克隆入含绿色荧光蛋白(GFP)基因的真核表达载体pIRES2-EGFP中，并转染NDRG2表达阴性的HepG2细胞。用光镜观察转染细胞的形态变化；荧光显微镜观察NDRG2蛋白的定位；流式细胞仪分析细胞周期的改变；透射电镜进一步观察细胞超微结构的改变。结果：获得了NDRG2基因，成功地构建了pIRES2-EGFP-NDRG2真核表达载体。转染HepG2细胞后，细胞生长受抑，结构破坏并死亡。荧光显微镜观察到NDRG2在胞质中表达，流式细胞仪检测出现G1期阻滞和凋亡峰，透射电镜观察到典型的细胞凋亡特征。结论：NDRG2基因具有诱导HepG2细胞凋亡的作用，其机制有待进一步研究。     

人参皂苷Rh4诱导肝癌细胞HepG2的凋亡及分子机制

目的:探讨人参皂苷Rh4对人肝癌HepG2细胞凋亡的作用及机制。方法:采用MTT比色法测定不同浓度(10、20和40μmol/L)人参皂苷Rh4对人肝癌HepG2细胞活力的抑制作用;用流式细胞术检测定细胞凋亡率;通过Hoechst 33258和TUNEL染色观察人参皂苷Rh4诱导人肝癌HepG2细胞凋亡的形态学变化;Western blot法检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、caspase-3和caspase-9的表达情况。结果:人参皂苷Rh4能够明显促进人肝癌HepG2细胞的凋亡,且呈剂量依赖性;TUNEL和Hoechst 33258染色实验结果表明,人参皂苷Rh4作用24 h后,细胞呈现明显皱缩、肿胀、破裂等凋亡形态;Western blot分析结果表明,随着人参皂苷Rh4给药浓度的增加,抗凋亡蛋白Bcl-2表达量逐渐下降,而促凋亡蛋白Bax、cleaved caspase-3和caspase-9的表达逐渐升高。结论:人参皂苷Rh4可诱导人肝癌HepG2细胞凋亡,其作用机制可能与下调Bcl-2以及上调Bax、cleaved caspase-3和caspase-9蛋白表达有关。     

SD118-2对人HepG2细胞凋亡影响及机制探讨

目的观察化合物SD118-2对人HepG2细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响。方法取对数生长期人HepG2细胞,分为对照组和给药组。给药组分别给予7 mg/L SD118-2处理12、24和48 h,对照组给予相同浓度DMSO。用MTT法检测细胞增殖率,DAPI荧光染色法观察SD118-2处理后细胞形态,流式细胞仪AnnexinⅤ-FITC/PI双标法检测细胞凋亡率及周期阻滞,用流式细胞仪JC-1染色法检测线粒体膜电位(ΔΨm),Western blot检测凋亡相关蛋白BCL-2、BAX、PARP和C-PARP表达。结果 SD118-2呈时间依赖性抑制人HepG2细胞生长、降低线粒体膜电位、诱导细胞凋亡、阻滞细胞G2期;抗凋亡蛋白BCL-2表达呈时间依赖性减少,促凋亡蛋白BAX、C-PARP表达呈时间依赖性增加;SD118-2对正常肝脏细胞增殖几乎无影响。结论化合物SD118-2具有诱导人HepG2细胞凋亡的作用,并能使细胞周期进程发生变化。     

牛蒡子苷诱导人肝癌HepG2细胞凋亡的实验研究

目的：通过牛蒡子苷对肿瘤细胞的体外实验，探讨牛蒡子苷是否对人肝癌细胞（HepG2）具有生长抑制及诱导凋亡作用。方法：HepG2细胞培养液中加入不同浓度的牛蒡子苷，培养72 h，观查HepG2细胞的增殖率；倒置显微镜及投射电子显微镜观察HepG2细胞的形态变化；流式细胞仪（FCM）检测HepG2细胞周期及凋亡率；TUNEL法检测HepG2细胞凋亡率；免疫细胞化学检测HepG2细胞的增殖凋亡相关蛋白(Bax、Bcl-2)表达。结果： 牛蒡子苷抑制HepG2细胞生长；阻滞HepG2细胞周期于G0/G1期并诱导细胞凋亡(P＜0.05)；通过下调Bcl-2蛋白表达（P＜0.01），上调Bax蛋白表达（P＜0.05）诱导HepG2细胞凋亡。结论： 牛蒡子苷对体外培养的HepG2细胞生长有抑制作用,其作用机制之一是通过诱导细胞凋亡。     

低表达miR-21对苦参碱诱导的肝癌HepG2细胞凋亡的影响

目的:探讨miR-21低表达能否增强苦参碱(matrine,MAT)对肝癌细胞的促凋亡作用。方法:实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测不同浓度MAT作用HepG2细胞后miR-21的表达情况。流式细胞术检测miR-21低表达对MAT诱导的细胞凋亡的影响;RT-qPCR和Western blot检测miR-21低表达对MAT诱导的细胞凋亡中Bc1-2和Bax mRNA和蛋白表达水平的影响。结果:miR-21表达量随MAT作用浓度的增加而增加;miR-21低表达可促进MAT诱导的细胞凋亡,并促进Bax mRNA和蛋白的表达(P0.05),而抑制Bcl-2 mRNA和蛋白的表达(P0.05)。结论:miR-21低表达可通过抑制Bcl-2和促进Bax的表达来增强MAT诱导的HepG2细胞凋亡。     

丙型肝炎病毒核心区蛋白对HepG2细胞凋亡的影响

已有越来越多的证据表明肝细胞和外周血淋巴细胞凋亡在丙型肝炎的发生和慢性化过程中起着重要作用。ＨＣＶ核心区 (ＨＣＶ Ｃ)具有较强的免疫调节功能 ,但ＨＣＶ Ｃ蛋白究竟是促进细胞凋亡还是抑制细胞凋亡目前还有争论。目前尚未见有关ＴＲＡＩＬ(ＴＮＦｒｅｌａｔｅｄａｐｏｐｔｏｓｉｓｉｎｄｕｃｉｎｇｌｉｇａｎｄ)所介导细胞凋亡在丙型肝炎致病过程中所起作用的研究报道。本实验主要研究ＨＣＶ Ｃ蛋白对ＨｅｐＧ2细胞凋亡的影响。通过基因重组技术构建包括ＨＣＶ Ｃ的重组真核表达质粒 ,将重组真核表达质粒经脂质体介导稳定转染肝癌细…     

氧化应激诱导HepG2肝癌细胞凋亡的研究(英)

目的：直接暴露细胞于活性氧能诱导发生凋亡，本文研究氧化应激诱导HepG2肝癌细胞的死亡及其机制。方法：暴露细胞于2 mmol/L过氧化氢产生氧化应激，用DNA凝胶电泳检测细胞凋亡，用荧光染色法检测细胞线粒体膜电位变化，Western blotting检测细胞浆中细胞色素c变化，fluorometric assay kit检测caspase活性变化。结果：氧化应激作用于HepG2细胞后12 h开始发生凋亡；氧化应激作用后4 h，细胞线粒体膜电位明显下降；胞浆中细胞色素c浓度呈时间依赖性增高；氧化应激作用8 h、12 h后细胞内caspase-3、caspase-9活性分别升高6.7及3.6倍，但caspase-8活性无变化。结论：氧化应激能诱导HepG2肝癌细胞发生凋亡，其途径与线粒体通路及caspase激活有关。     

乙型肝炎病毒核壳蛋白对HepG2细胞凋亡的影响

目的初步探讨乙型肝炎病毒野生型核壳蛋白和L60V、197L变异核壳蛋白影响HepG2细胞凋亡的分子机制。方法将构建的野生型核壳蛋白融合表达载体（pEGFP—WT）,L60V变异核壳蛋白（pEGFP—V60）和197L变异核壳蛋白（pEGFP—L97）表达载体HepG2阳性细胞株复苏培养;Western blot检测各核壳蛋白表达;TNF—α、Act—D诱导各种HepG2细胞株凋亡,48h采用流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测NF—kB信号传导通路中IKK—α、IKB—α、NF—kB P65蛋白表达与caspase-8、caspase-3蛋白表达情况。结果Western blot检测pEGFP—WT组、pEGFP—V60组和pEGFP—L97组核壳蛋白表达基本相同;流式细胞术检测显示,与pEGFP—C1细胞株相比。48h时pEGFP—WT、pEGFP—V60和pEGFP．L97表达细胞株的细胞凋亡率均明显偏低（P〈0．01）;4组细胞株IKK—α、IkB-α、NF—kB P65蛋白表达水平无明显差异,而pEGFP—WT组caspase-8、caspase-3蛋白表达水平明显低于pEGFP—V60和pEGFP—L97组,且三组表达均明显低于pEGFP—C1组。结论乙型肝炎病毒野生型和L60V、197L变异核壳蛋白影响HepG2细胞凋亡可能与核壳蛋白影响细胞内caspase-3,8表达有关。     

GSTP1上调对奥沙利铂诱导人肝癌细胞株HepG2凋亡的影响

目的:探讨过表达GSTP1后HepG2细胞对奥沙利铂(oxaliplatin,OXA)敏感性的影响及其相关机制。方法:采用腺病毒载体转染人肝癌细胞株HepG2,获得过表达GSTP1的HepG2细胞;实验分为空白对照组(control组)、载体组(vehicle组)、过表达GSTP1组(Ad-GSTP1组)、OXA组、OXA+vehicle组和Ad-GSTP1+OXA组;MTT法和流式细胞术检测Hep G2细胞的存活率和凋亡率;Western blot法检测Hep G2细胞中GSTP1、Akt、mTOR、p-Akt和p-mTOR的蛋白水平。结果:OXA剂量依赖性地降低HepG2细胞的存活率(P0.05);腺病毒转染后Hep G2细胞的GSTP1蛋白表达增加;基础状态下,过表达GSTP1可降低HepG2细胞的存活率,促进细胞凋亡,抑制Akt和mTOR磷酸化水平(P0.05);给予OXA处理后,上调GSTP1表达增强了OXA降低HepG2细胞存活率的作用,凋亡率进一步增加,Akt和mTOR蛋白的磷酸化水平进一步下降,与加药组相比差异有统计学显著性(P0.05)。结论:上调GSTP1表达可增强OXA促进Hep G2细胞凋亡的作用,其机制可能与Akt/mTOR通路有关。     

敲低Aurora-A抑制HepG2人肝癌细胞增殖并促进其凋亡

目的 探讨敲低Aurora-A对HepG2人肝癌细胞增殖和凋亡的影响.方法 设计Aurora-A短发夹RNA(shRNA)片段,构建和包装Aurora-A shRNA慢病毒载体,转染HepG2细胞,实时定量PCR检测Aurora-A mRNA表达,Western blot法检测Aurora-A蛋白及磷酸化水平,噻唑蓝(...     

光敏化姜黄素对人肝癌细胞HepG2的增殖影响

目的：研究姜黄素的光敏化效应并探讨光敏化姜黄素对人肝癌细胞株HepG2细胞的增殖和凋亡的影响。方法：采用人肝癌细胞株HepG2进行研究。细胞用不同浓度的姜黄素（2.5μmol/L,5μmol/L,10μmol/L,20μmol/L,40μmol/L,80μmol/L,160μmol/L）孵育2 h后,用0.4 J/cm2剂量的紫光照射,光照的功率为10 mW。利用MTT法测定不同浓度的姜黄素对HepG2细胞的抑制作用,观察其紫光光敏化效应。在选择的姜黄素剂量下,分别用不同剂量的紫光照射,检测能量密度改变后光敏化姜黄素对细胞的杀伤作用。最终选定在20μmol/L浓度下,姜黄素用0.2 J/cm2紫光照射其对细胞的杀伤作用。利用Hoechst33342染色从形态学上在观察光敏化姜黄素对HepG2细胞的促凋亡效应,采用流式细胞仪定量检测光敏化姜黄素的凋亡率。结果 ：姜黄素在紫光下具有光敏化效应,IC50从单独作用的92.49μmol/L降到27.06μmol/L,且这种效应在低浓度姜黄素低剂量的能量密度下更加明显。形态学和流式细胞仪检测到光敏化姜黄素的促凋亡效应,且凋亡率是同剂量姜黄素作用的3倍。结论：紫光照射可明显增强低剂量姜黄素对HepG2的细胞毒性,并可显著诱导细胞凋亡。     

家蝇幼虫抗茵肽粗提物对人肝癌HepG2细胞凋亡、钙离子浓度及线粒体膜电位变化的影响

本文从肿瘤细胞凋亡及作用机制的角度出发初步探讨了家蝇幼虫抗菌肽粗提物对人肝癌HepG2细胞的影响.采用Hoechst 33258荧光染色法在荧光显微镜下观察家蝇抗菌肽对HepG2细胞形态学的影响.并通过流式细胞术分别观察家蝇抗菌肽粗提物对HepG2细胞凋亡、钙离子浓度及线粒体膜电位变化的影响.Hoechst 33258荧光染色法结果显示家蝇抗菌肽粗提物作用于HepG2细胞48h后能够引起细胞核发生核凝聚、染色质趋边化、核碎裂等凋亡形态学的改变;流式细胞仪检测结果显示家蝇抗菌肽粗提物能够诱导HepG2细胞发生凋亡、线粒体膜电位下降、细胞内钙离子浓度增加的现象.因此,我们推测家蝇抗菌肽可能通过增加HepG2细胞内钙离子,降低线粒体膜电位,进而诱导细胞凋亡的发生.     

Runx3对人肝癌HepG2细胞增殖、凋亡及侵袭的影响

目的探讨siRNA干扰Runx3对人肝癌Hep G2细胞增殖、凋亡和侵袭能力的影响。方法以人肝癌Hep G2细胞为研究对象,构建Runx3-siRNA,转染入细胞。将细胞分为对照组、脂质体组、NC-siRNA组和Runx3-siRNA组。用RT-PCR法检测Runx3 mRNA表达,用Western blot检测Runx3蛋白表达。用MTT法、流式细胞法和Transwell小室法观察Runx3对Hep G2细胞增殖、凋亡和侵袭的影响。结果 Runx3-siRNA可抑制Hep G2细胞的增殖(P0.05);Runx3-siRNA可促进Hep G2细胞凋亡(P0.05);Runx3-siRNA可抑制Hep G2细胞的侵袭(P0.05)。结论Runx3基因在肝癌的发生发展中发挥一定的促进作用,有可能成为肝癌治疗的新靶点。     

凋亡素诱导HepG2细胞凋亡过程中Mcl-1 mRNA和蛋白水平的变化及意义

目的: 探讨凋亡素诱导肝癌细胞HepG2凋亡过程中Mcl-1 mRNA和蛋白水平的变化及其意义。方法: 经脂质体介导将pCDNA3.0-VP3转入HepG2细胞内,48 h后采用Western blotting检测凋亡素、Mcl-1和细胞色素C,实时定量RT-PCR检测细胞内的Mcl-1 mRNA。结果: VP3基因成功地转入HepG2细胞内并稳定表达凋亡素。与空白对照相比,表达凋亡素的细胞出现Mcl-1 mRNA含量减少(0.09%±0.00% vs 0.41%±0.14%, P<0.05),细胞内Mcl-1水平下降(0.43%±0.01% vs 0.90%±0.04%, P<0.01),线粒体释放细胞色素C增加(0.98%±0.02% vs 0.62%±0.03%, P<0.01)。结论: 凋亡素诱导HepG2细胞凋亡过程中存在细胞内Mcl-1 mRNA和蛋白水平的下降,以及线粒体细胞色素C的释放增加。凋亡素诱导的细胞凋亡可能与其下调细胞内Mcl-1 mRNA与蛋白水平有关。     

线粒体在细胞凋亡中的作用及分子机制

本文综述了线粒体在细胞凋亡的启动和调控方面的最新进展。细胞受凋亡刺激，Bcl-2家族BH3蛋白(Bim，Bad，Bid等)和其他可能的途径将凋亡信号转入线粒体中，与Bcl-2家族凋亡诱导蛋白共同调节，诱导释放线粒体凋亡蛋白细胞色素c、caspase的二级线粒体激活蛋白Smac、凋亡诱导蛋白、内核酸酶G和Omi/HtrA2等，进而通过caspase依赖途径和非依赖途径诱导细胞凋亡。     

Lovastatin对肝癌HepG2细胞作用后基因差异表达的初步研究

目的： 用cDNA芯片观察lovastatin作用前后HepG2细胞的差异表达基因。 方法： 20 μmol/L的lovastatin作用于HepG2细胞18 h，各提取实验组与对照组细胞总RNA，用cDNA直接标记法制备探针，进行杂交，杂交信号经扫描后，用软件分析基因表达情况。应用RT-PCR验证部分差异表达基因。 结果： Lovastatin作用后表达上调的基因有30个，表达下调的基因有11个，涉及信号转导、肿瘤免疫、细胞周期等方面，RT-PCR结果符合基因芯片结果。 结论： 用基因芯片筛选出的lovastatin作用后的肝癌细胞差异表达基因为深入研究他汀类药物的抗肿瘤机制提供重要的理论依据。     

基因芯片筛选HepG2与HepG2.2.15细胞中的差异表达基因

目的 探讨HepG2细胞及HepG2.2.15细胞中差异表达的基因并对其基因表达谱进行生物学信息分析.方法 用Trizol一步法提取HepG2细胞及HepG2.2.15细胞的总RNA,并纯化mRNA,反转录合成荧光分子(Cy3/Cy5)标记的cDNA探针,与基因芯片杂交;采用LuxScan3.0图像分析软件对芯片图像进行分析,把图像信号转化为数字信号,最后以差异为2倍的标准来确定差异表达基因.结果 在54614个基因表达谱的筛选中,发现有4462个基因表达水平显著上调,2592个基因表达水平显著下调.结论 HBV基因组及其表达产物对于肝细胞基因表达谱有显著影响,可能参与了肝癌的发生发展.