用血清药理学方法观察芎芍胶囊对兔胸主动脉平滑肌细？…

目的：采用血清药理学方法观察芎芍胶囊对内皮素（ＥＴ）致兔胸主动脉平滑肌细胞（ＳＭＣ）增殖凋亡的影响。方法：分离正常兔胸主动脉ＳＭＣ,并传代培养,用ＥＴ造成胸主动脉ＳＭＣ增殖模型。给正常兔灌胃芎芍胶囊混悬液１０天,制备含药血清,采用噻唑蓝（ＭＴＴ）比色法、流式细胞术及琼脂糖凝胶电泳法观察其对ＳＭＣ增殖凋亡的影响。结果：ＥＴ能明显促进ＳＭＣ增殖,芎芍胶囊含药血清可减少Ｓ＋Ｇ２期ＳＭＣ所占比例,对ＥＴ所     

芎芍胶囊含药血清对人脐静脉内皮细胞PCNA表达的影响

目的通过观察芎芍胶囊含药血清对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖细胞核抗原(PCNA)表达的影响,探讨芎芍胶囊促内皮细胞增殖的分子机制。方法利用血清药理学方法制备芎芍胶囊含药血清,在体外干预培养HUVEC。MTT法检测芎芍胶囊对HUVEC增殖的影响,采用RT-PCR法测定PCNA的mRNA表达,ELISA法检测培养液中PCNA的蛋白含量。结果芎芍胶囊低、中、高剂量含药血清均有促进HUVEC细胞增殖的作用(P0.01);RT-PCR和ELISA法检测结果显示芎芍胶囊各剂量含药血清均有显著地促进PCNA的mRNA表达和蛋白表达的作用(P0.05),并具有明显的剂量依赖性。结论芎芍胶囊促进HUVEC增殖的作用机制可能与上调PCNA的表达密切相关。     

芎芍胶囊含药血清对人脐静脉内皮细胞VEGF、Ang-2基因表达的影响

目的:观察芎芍胶囊含药血清对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)VEGF、 Ang-2基因表达的影响,探讨芎芍胶囊促血管新生的作用机制.方法:芎芍胶囊高、中、低不同剂量含药血清作用于HUVEC,倒置相差显微镜观察细胞形态学变化,MTT法观察细胞增殖情况,RT-PCR法检测VEGF、Ang-2 mRNA的表达.结果:芎芍胶囊含药血清各剂量组均有促HUVEC增殖作用(P<0.01),高剂量组具有显著促进VEGF表达作用(P<0.01);而中、低剂量组作用不明显;高、中剂量组具有明显抑制Ang-2表达作用(P<0.05～0.01),低剂量组的作用不明显.结论:芎芍胶囊可促进VEGF的表达,降低Ang-2的表达,其促血管新生作用机制与此两条通路有关.     

加味桃核承气汤含药血清对胰岛素诱导兔血管平滑肌细胞增殖的抑制作用

目的:探讨加味桃核承气汤含药血清对胰岛素诱导兔血管平滑肌细胞增殖的抑制作用。方法:采用兔主动脉平滑肌细胞株(SMC),以胰岛素(RI)诱导SMC增殖,制备桃核承气汤不同配伍组方含药血清,MTT法观察各组对RI诱导SMC增殖的抑制作用,以罗格列酮及美迪康作为对照组,探讨各组在糖尿病大血管病变发生与发展中可能的作用。结果:RI诱导SMC增殖试验确定RI终浓度为300mu/L;加味桃核承气汤含药血清对RI诱导SMC增殖的抑制作用试验显示,活血 泻热通下组、桃核承气汤组、罗格列酮组增殖抑制作用十分显著(P<0.01),以活血 泻热通下组抑制率最高(39.8%)。美迪康组、泻热通下组及益气养阴组增殖抑制作用不明显(P>0.05)。结论:加味桃核承气汤可能通过抑制RI诱导SMC增殖作用抗糖尿病动脉粥样硬化所致的大血管病变,本方抑制平滑肌细胞增殖的有效成份可能存在于活血 泻热通下组中。     

芎芍胶囊含药血清对RAW264.7源性泡沫细胞胆固醇流出的影响

目的观察芎芍胶囊大鼠含药血清中脂质对RAW264.7巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇流出的影响。方法采用80 mg/L氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导巨噬细胞24 h,建立RAW264.7源性泡沫细胞模型,添加大鼠含药血清,将细胞分为对照组(正常巨噬细胞)、模型组(80 mg/L ox-LDL)、正常血清组(10%正常大鼠血清)及正常血清对照组(80 mg/L ox-LDL+10%正常大鼠血清)、辛伐他汀组(80 mg/L ox-LDL+10%辛伐他汀血清)、芎芍胶囊血清组(80 mg/L ox-LDL+10%芎芍胶囊血清)。通过油红O染色观察细胞内胆固醇分布;以胆固醇检测试剂盒检测正常血清组、辛伐他汀血清组、芎芍胶囊血清组血清总胆固醇(TC)及游离胆固醇(FC)含量,检测各组细胞内TC及FC含量。结果模型组细胞形态及染色结果符合泡沫细胞标准;正常血清组、正常血清对照组、辛伐他汀血清组、芎芍胶囊血清组细胞内均含有大量脂滴,且各组细胞内脂质着色无明显差异。与正常血清组比较,辛伐他汀血清、芎芍胶囊血清组TC差异均无统计学意义(P>0.05),辛伐他汀血清组FC含量升高(P<0.0...     

芎芍胶囊对兔实验性血管再狭窄血管胶原酶基因表达的影响

目的 观察芎芍胶囊对兔实验性血管再狭窄（RS）血管胶原酶基因表达的影响,探讨芎芍胶囊干预RS的机制。方法 采用球囊剥脱兔腹主动脉内皮结合高脂饲料方法建立实验性RS的模型,80只兔随机分层分组,分为8组,即正常对照组,单纯内皮损伤组,模型3天、2周、6周组,普罗布考对照组,芎芍胶囊小剂量、大剂量组,每只10只。采用RT-PCR方法、计算机图像分析仪,观察芎芍胶囊对再狭窄过程中血管胶原酶基因表达的影响,结合病理形态学和胶原的变化探讨芎芍胶囊改善血管重构预防RS的机理。结果 模型2周时管腔出现代偿性扩张,至6周时管腔却明显缩小,增殖指数明显升高。各用药组在抑制内膜增殖方面以芎芍大剂量组及普罗布考对照组尤为明显。模型2周时内膜胶原堆积不明显,但胶原总量增加,并达到高峰。6周时,内膜胶原逐渐堆积达到高峰。各用药组内膜胶原减少,中、外膜胶原总量减少,以芎芍大剂量组最明显。在正常对照及模型各组,基质金属蛋白酶-1（MMP-1） mRNA有弱表达,芎芍大剂量组与模型6周组比较差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 芎芍胶囊可明显增强MMP 1mRNA在损伤血管部位的表达,提示芎芍胶囊预防RS可能与上调MMP-1mRNA的表达,增加胶原的降解,减少胶原在血管壁的沉积有关。     

芎芍胶囊含药血清对人脐静脉内皮细胞中Ang-2及其受体Tie-2表达的影响

目的:探讨芎芍胶囊对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)促血管生成素-2(Ang-2)及其受体Tie-2的分泌和mRNA表达的影响,以阐明其促进血管新生的可能机制。方法:芎芍胶囊高、中、低剂量含药血清处理HUVEC,倒置相差显微镜观察细胞生长状态;流式细胞术和MTT法观测HUVEC的增殖情况;ELISA法检测HUVEC分泌Ang-2和Tie-2的水平;RT-PCR法检测Ang-2及Tie-2的mRNA表达。结果:芎芍胶囊高、中、低剂量含药血清均有促进HUVEC增殖和Ang-2及Tie-2的表达,以及增加S期细胞比例作用。结论:芎芍胶囊含药血清能促进HUVEC的增殖及Ang-2、Tie-2的表达,可能是其促进血管新生的机制之一。     

芎芍胶囊含药血清对人脐静脉内皮细胞增殖的影响

目的 研究芎芍胶囊含药血清对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）的增殖作用。方法 采用血清药理学和体外培养HUVEC的方法,通过倒置显微镜观察、MTT法和流式细胞术（FCM）检测芎芍胶囊高、中、低3个浓度含药血清对HUVEC增殖的影响。结果 MTT法检测结果显示高、中、低剂量的芎芍胶囊含药血清均有促进HUVEC增殖的作用,增殖率分别为54．14％、54．98％、33．77％;FCM法检测发现高、中、低剂量芎芍胶囊含药血清均可增加S期细胞比例,分别为52．14％、42．65％、37．08％;显微镜观察结果也显示各含药血清具有促进HUVEC增殖的作用。结论 芎芍胶囊能促进HUVEC的增殖,其促进细胞增殖的作用与浓度有一定的关系;提示芎芍胶囊的促血管新生作用可能是通过促进血管内皮细胞的增殖。     

丹芍化纤胶囊对体外活化HSCs增殖、凋亡及Fas/FasL途径的影响

目的:研究中药复方制剂丹芍化纤胶囊对体外活化肝星状细胞(HSCs)增殖、凋亡及Fas蛋白、caspase-3 mRNA表达的影响,探讨该药抗肝纤维化的作用机理.方法:制备丹芍化纤胶囊大鼠药物血清,分离培养大鼠HSCs,并分为小牛血清组、正常大鼠血清组、丹芍化纤药物血清组3组,分别加入含5%、10%、20%以上3种血清的DMEM培养基干预培养的HSCs,然后测定以下指标:MTT比色法测定原代HSCs增殖情况,TUNEL法测定传一代HSCs凋亡情况,免疫细胞化学SABC法测定传一代HSCs内Fas蛋白表达情况,荧光实时定量RT-PCR法检测传一代HSCs内caspase-3 mRNA表达情况.结果:丹芍化纤药物血清组较同浓度小牛血清组及正常大鼠血清组明显抑制HSCs增殖,促进HSCs凋亡,且活化的HSCs内Fas蛋白表达显著增多、增强,caspase-3 mRNA含量亦明显增加.同时,药物血清浓度越高,以上作用越明显,呈剂量依赖性.结论:丹芍化纤胶囊能显著抑制HSCs增殖,并通过增加活化HSCs内Fas蛋白及caspase-3 mRNA表达(即激活HSCs内Fas/FasL途径)诱导该细胞凋亡.     

冠心舒通胶囊含药血清对AGEs诱导大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响

目的:探讨冠心舒通胶囊含药血清对晚期糖基化终产物(AGEs)诱导血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖的影响及其可能机制。方法:分别以0.5g/kg、1g/kg、2g/kg剂量冠心舒通胶囊内容物对大鼠灌胃给药28d制备冠心舒通胶囊含药血清;以各剂量含药血清单独或联合体外制备的AGE-牛血清白蛋白(AGE-BSA)处理原代培养大鼠VSMCs,MTT法检测各处理组细胞增殖水平、RT-PCR检测细胞血小板源性生长因子-B(PDGF-B)mRNA表达水平、酶联免疫吸附法(ELISA)检测培养上清PDGF-B浓度。结果:40mg/L终浓度AGE-BSA显著增强VSMCs增殖水平(P<0.05),0.5g/kg、1g/kg、2g/kg剂量冠心舒通胶囊含药血清对正常VSMCs生长未见显著影响(P>0.05),但显著抑制AGE-BSA诱导的VSMCs增殖(P<0.05),作用具有明显的剂量依赖性。AGE-BSA诱导VSMCs PDGF-B表达与分泌显著增强(P<0.05),1g/kg、2g/kg剂量冠心舒通胶囊含药血清可有效抑制AGE-BSA这一作用(P<0.05),0.5g/kg剂量血清对AGE-BSA这一作用则未见明显影响(P>0.05)。结论:冠心舒通胶囊可剂量依赖性抑制AGEs诱导的VSMCs增殖,作用机制与抑制AGE诱导的PDGF-B表达与分泌有关。     

抗纤软肝颗粒药物血清对肝星状细胞整合素信号及凋亡的影响

目的:探讨抗纤软肝颗粒药物血清对肝星状细胞增殖、凋亡的影响及整合素信号通路的下游信号分子FAK在其中的作用。方法:将传代培养的大鼠肝星状细胞系(HSC-T6)与中药复方抗纤软肝颗粒药物血清(5%、10%、20%)共同培养48h后,应用MTT法测定细胞增殖;应用流式细胞仪测定细胞凋亡;采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测FAK mRNA的表达。结果:抗纤软肝颗粒药物血清,均能显著抑制HSC-T6增殖,20%药物血清组作用最强(P<0.05);流式细胞仪测定结果显示抗纤软肝颗粒药物血清均可诱导HSC凋亡(P<0.05);抗纤软肝颗粒药物血清能够使HSC的FAK mRNA的表达下调。结论:抗纤软肝颗粒能够抑制HSC增殖及诱导凋亡HSC。其作用可能与其抑制整合素信号通路下游信号分子FAK mRNA的表达有关。     

季德胜蛇药抗四氯化碳致小鼠肝纤维化的作用及机制研究

目的: 观察季德胜蛇药对四氯化碳(CCl₄)致小鼠肝纤维化的拮抗作用,探讨其抗纤维化的作用机制。方法: ICR小鼠48只随机分为正常对照组、模型组、季德胜蛇药(0.25,0.37 汪g·kg^-1)2组。除正常组外各组小鼠均以40%CCl₄ sc共5周。自造模日起,各治疗组小鼠每日分别给予季德胜蛇药ig,正常对照组及模型组小鼠每天灌胃等量容积蒸馏水。5周后,放射免疫法检测小鼠血清透明质酸(HA)和层黏蛋白(LN)水平;Masson三色染色法观察肝组织病变。制备季德胜含药兔血清,不同体积分数的含药血清培养肝星状细胞(HSC),CCK-8法检测HSC的增殖,流式细胞仪检测HSC凋亡。结果: 季德胜蛇药0.25,0.37 g·kg^-1组小鼠肝组织纤维化程度及计分均较模型组明显减轻(P<0.05);季德胜蛇药0.25 g·kg^-1组血清HA,LN水平均明显低于模型组(P<0.05,P<0.01),且0.37 g·kg^-1组均低于0.25 g·kg^-1组(P<0.01);与对照组比较,以10%和12.5%季德胜蛇药含药血清培养的HSC细胞的增殖率明显降低(P<0.05,P<0.01),而细胞凋亡率显著增加(P<0.01)。结论: 季德胜蛇药能抑制HSC的增殖和促进HSC凋亡,具有一定的抗肝纤维化作用。     

芎芍胶囊对兔实验性动脉粥样硬化血管重构的影响

目的 研究芎芍胶囊对实验性兔动脉粥样硬化(AS)模型血管重构的影响,并探讨其可能的机制。方法 采用4Fogarty导管剥脱损伤腹主动脉内皮后继喂高脂饲料的方法,复制兔节段性AS模型。术后随机分为8组,即模型3天组、2周组、6周组,单纯内皮损伤组,普罗布考组,芎芍胶囊小剂量组、大剂量组及正常对照组。除正常对照组及单纯内皮损伤组外均予高脂饲料喂养,对腹主动脉病变最明显处标本作病理形态学检查,并利用计算机图像分析系统观察动脉损伤后血管重构相关指标的变化及药物对其的影响并进行内膜增殖与血管重构的相关性分析。结果 球囊损伤腹主动脉内皮后,随时间延长,动脉内膜逐渐增厚,模型6周组与模型2周组及内皮损伤组比较差异有显著性(P<0．01),芎芍胶囊大剂量与普罗布考组可明显减少内膜最大厚度(MIT)及内膜面积(IA),与模型6周组比较差异有显著性(P<0．01);随内膜增厚,动脉出现早期代偿性扩张,模型2周组内弹力膜围绕面积(IELa)、外弹力膜围绕面积(EELa)及管腔最小直径(MLD)、管腔面积(LA)均较正常组明显增加(P<0．01),至模型6周时,随内膜进一步增厚,IELa、EELa反而有所缩小,血管代偿性扩张不足,管腔明显缩窄,MLD缩小(P<0．01),各药物组均可增加MLD、LA,与模型6周组比较差异有显著性(P<0．01)。结论 单纯内皮损伤可能是病理性血管重构的始动因素之一,高脂血症可加重这一病理改变;内膜增殖和病理性血管重构共同参与了内皮损伤后AS管腔狭窄的病理过程;芎芍胶囊通过抑制球囊损伤后的内膜增殖,干预病理性血管重构,发挥防治AS作用。     

南蛇藤提取物含药血清对小鼠肝癌Hepa1-6细胞的增殖能力和VEGF-c表达水平的影响

目的:制备南蛇藤提取物(Celastrus orbiculatus extracts,COE)兔含药血清,初步研究其对小鼠肝癌Hepa1-6细胞株的增殖能力及血管内皮生长因子-c(VEGF-c)表达水平的影响。方法:取新西兰白兔,以20 mg·kg-1.d-1南蛇藤提取物ig,按通法制备含药血清。设立低、中、高剂量组(分别含有10%,20%,30%的南蛇藤提取物含药血清),作用小鼠肝癌Hepa1-6细胞,同时设阴性对照组及5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-Fu)阳性对照组,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测含药血清对细胞增殖的影响,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测细胞培养上清VEGF-c的含量。结果:形态学上,3组COE含药血清均使细胞发生典型的凋亡改变;MTT结果显示COE中、高剂量组的含药血清能抑制Hepa1-6细胞增殖,并呈明显的时效关系;ELISA结果表明COE含药血清作用24 h后,中、高剂量组VEGF-c水平降低,与对照组相比有显著性差异。结论:COE含药血清能够有效地抑制小鼠肝癌Hepa1-6细胞的增殖,并降低细胞VEGF-c的表达水平。     

钩藤散对NIH-3T3细胞衰老模型增殖与凋亡的影响

目的: 观察钩藤散对NIH-3T3细胞衰老模型增殖与凋亡的影响。方法: NIH-3T3细胞接种在含10%胎牛血清的DMEM培养至20代,然后分为年轻、空白、模型3个组,传至30代时, 用H₂O₂处理,β-半乳糖苷酶染色试剂盒染色,观察衰老细胞形态、衰老指征,确认衰老模型是否成功建立;用钩藤散(17,8.5,4.25,2.15 g ·kg^-1)ig SD大鼠,每天2次,连续给药3 d, 于末次ig 1 h后麻醉、腹主动脉采血,制备含药血清;用钩藤散含药血清处理衰老模型,观察衰老细胞形态、衰老指征、增殖与凋亡等指标。结果: 模型组细胞较对照组形态有显著改变,细胞衰老比例明显增加(P<0.05),因此H₂O₂氧化应激方法可成功建立细胞衰老模型;钩藤散含药血清能明显减少细胞形态的改变、改善衰老指征、促进细胞增殖(P<0.01)、降低细胞凋亡(P<0.01),尤其10倍剂量组最为明显。结论: 钩藤散能有效促进细胞增殖,降低细胞凋亡,从而防止衰老。     

中药双龙丸对血管平滑肌细胞血小板衍化生长因子—A及单 …

目的：探讨中药双龙姒干预动脉粥样硬化的分子学作用机制,主要是对血小板衍化生长因子－Ａ（ＰＤＧＦ－Ａ）、单核细胞超化蛋白－１（ＭＣＰ－１）ＭＲＮＡ表达的影响。方法：采用培养家兔动脉粥样硬化细胞模型,用高脂血清造成动脉粥样硬化细胞模型,用中药血清药理学方法将药物血清作用于细胞模型,采用逆转录－聚合酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）方法,观察双龙丸对ＰＤＧＦ－Ａ、ＭＣＰ－１ ｍＲＮＡ表达水平的影响。结果：高脂血     

赤芍川芎有效部位对兔动脉粥样硬化基质金属蛋白酶的影响

目的 观察芎芍胶囊（XSC,赤芍川芎有效部位）对兔动脉粥样硬化模型中基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases, MMPs)表达水平的影响。     

健脾化瘀方含药血清对人结肠癌细胞LoVo凋亡的影响

目的:探讨健脾化瘀方含药血清对人结肠癌细胞LoVo凋亡的影响。方法:①应用MTT法检测健脾化瘀方含药血清对人结肠癌细胞LoVo的增殖抑制作用;②运用TUNEL法和AnnexinV/PI法检测LoVo细胞的凋亡率。结果:①健脾化瘀方含药血清高浓度(20%)可抑制LoVo细胞的增殖(P<0.01);②健脾化瘀方含药血清作用细胞48h后可以诱导细胞凋亡。结论:健脾化瘀方含药血清能抑制结肠癌细胞LoVo的增殖能力,并诱导细胞凋亡。