ICU多药耐药鲍曼不动杆菌耐药监测分析

目的 分析重症监护病房(ICU)多药耐药鲍曼不动杆菌(MDR-AB)耐药性及耐药基因.方法 对分离自ICU送检痰标本的5株鲍曼不动杆菌进行药敏试验,采用聚合酶链反应(PCR)及测序技术进行耐药基因分析.结果 5株鲍曼不动杆菌对对β-内酰胺类、喹诺酮类药物耐药,均检出C、D类β-内酰胺酶基因ADC和OXA-23,及外膜蛋白CarO突变.结论应采取有效措施控制鲍曼不动杆菌的传播,加强耐药性监测,防止鲍曼不动杆菌院内扩散及耐药性变迁.     

耐碳青霉烯类抗生素鲍曼不动杆菌产β内酰胺酶研究

目的 了解鲍曼不动杆菌对13种抗生素耐药性及β内酰胺酶基因携带情况,为临床合理用药及控制医院感染提供依据.方法 收集临床分离鲍曼不动杆菌共80株,其中亚胺培南耐药鲍曼不动杆菌(imipenem resistant acinetobacter baumannii, IRAB)50株,亚胺培南敏感株(imipenem sensitive acinetobacter baumannii, ISAB)30株.采用琼脂稀释法检测上述细菌对13种抗菌药的MIC,三维试验检测AmpC酶,EDTA纸片协同试验检测金属酶表型.PCR检测OXA-23、OXA-24、OXA-51、OXA-58、AmpC、IMP-1、IMP-4、VIM-2编码基因.结果 50株IRAB中MIC50>128 mg/L的抗菌药有阿米卡星、环丙沙星、哌拉西林-他唑巴坦、头孢哌酮、头孢西丁、磺胺甲口恶唑-甲氧苄啶,MIC50在32～128 mg/L的抗生素有美罗培南、头孢哌酮-舒巴坦、头孢吡肟、头孢他啶,MIC50<8 mg/L的抗生素有左氧氟沙星和多黏菌素B.对30株ISAB,MIC50<8 mg/L的药物有美罗培南、阿米卡星、头孢哌酮-舒巴坦、头孢他啶、头孢吡肟和多黏菌素B.IRAB和ISAB中AmpC酶表型阳性的分别为42株(84%)和9株(30%),金属酶表型检测全部阴性.IRAB中PCR检测到36株OXA-23阳性(72%)、45株AmpC阳性(90%),ISAB中PCR检测到4株OXA-23阳性(13.3%)、20株AmpC阳性(66.7%),IRAB与ISAB相比,OXA-23阳性检出率差异有统计学意义(P<0.01),而AmpC阳性率差异无统计学意义(P>0.05).80株鲍曼不动杆菌中OXA-51均为阳性.结论 OXA-23是我院耐亚胺培南鲍曼不动杆菌携带的主要β内酰胺酶基因.     

多重耐药鲍曼不动杆菌OXA-23基因与qacE△1基因检测的研究

目的对本院分离的多重耐药鲍曼不动杆菌(MRAB)OXA-23和qacE△1耐药基因进行检测分析。方法收集2009年1月至2010年12月分离的85株多重耐药鲍曼不动杆菌,用聚合酶链反应(PCR)方法检测OXA-23和qacE△1耐药基因并测序,序列与基因库比对。结果 85株耐药菌中OXA-23、qacE△1基因的阳性率依次为55.3%、81.2%。其中58株耐亚胺培南MRAB OXA-23、qacE△1基因的阳性率为75.86%、84.48%;而其余27株亚胺培南敏感MRAB两个基因的阳性率分别为11.11%、74.07%。结论 OXA-23基因存在与鲍曼不动杆菌耐亚胺培南密切相关,qacE△1基因检测结果提示这些菌株81.2%携带Ⅰ类整合子,是本组细菌多重耐药表型的主要原因之一。     

ICU鲍曼不动杆菌碳青霉烯酶基因型研究

目的分析重症监护病房(ICU)鲍曼不动杆菌耐药情况,研究其碳青霉烯酶基因型的流行情况。方法收集2016-2017年ICU分离得到的108株鲍曼不动杆菌。采用K-B纸片扩散法进行药物敏感试验。采用PCR法检测7种碳青霉烯酶基因,包括OXA-23、OXA-24、OXA-51、OXA-58、IMP-1、IMP-4和VIM-2。结果 108株鲍曼不动杆菌中碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌(CRAB)的检出率从2016年的60.0%(24/40)上升到2017年的82.4%(56/68)。CRAB对多黏菌素B未见耐药(0.0%,0/80),对其他常见的抗菌药物耐药率均在96%左右。而非CRAB的耐药率均小于15%,与CRAB差别明显。碳青霉烯酶基因OXA-51的检出率为100.0%(108/108);OXA-23基因的检出率为63.0%(68/108),其中非CRAB未检出OXA-23基因(0/28),CRAB的OXA-23基因检出率为85.0%(68/80);其他OXA-24、OXA-58、IMP-1、IMP-4和VIM-2基因均未检出。结论 ICU的CRAB检出率上升明显且耐药现象严重;OXA-23基因在CRAB对碳青霉烯类药物耐药机制中起主要作用。     

泛耐型鲍曼不动杆菌耐药机制的探讨

目的了解泛耐型鲍曼不动杆菌(pan-drug resistantAcinetobacter baumannii,PDRAB)的耐药性和产耐药酶的情况,以及介导碳青霉烯酶的基因型及外膜蛋白的改变。方法收集临床分离的PDRAB 68株,用三维试验测定菌株产耐药酶的情况;用琼脂稀释法测定最低抑菌浓度(M IC);用PCR法检测OXA-23基因和IMP-1基因;用SDS-PAGE检测外膜蛋白。结果以头孢三嗪(CRO)为底物,68株PDRAB中单产AmpC酶4株,同时产AmpC酶和ESBL酶1株,产可水解头孢三嗪但不能被克拉维酸(CA)和氯唑西林(CLO)抑制的酶的17株,不分解CRO的46株;以亚胺培南(IMP)为底物,所有PDRAB均产可水解亚胺培南的酶,但不能被EDTA、CA和CLO抑制。M IC结果示PDRAB株对包括IMP在内的常用抗菌药物均高度耐药。68株PDRAB均扩增出OXA-23基因,而IMP-1基因均为阴性。与鲍曼不动杆菌敏感株(S株)相比,PDRAB株和仅亚胺培南敏感株(M株)缺失了分子量约27 000处的蛋白质条带,但在31 000处出现一条新的蛋白质条带;与M株相比,有12株PDRAB在约33 000处出现蛋白质条带的缺失。结论我院分离的68株PDRAB携带OXA-23型碳青霉烯酶基因,大多数存在外膜蛋白的缺失或改变,这些改变可能共同介导了细菌在多重耐药前题下继发的对碳青霉烯类药物的耐药。     

多重耐药鲍曼不动杆菌碳青霉烯酶耐药基因和同源性分析

目的分析多重耐药鲍曼不动杆菌碳青霉烯酶耐药基因型和医院感染鲍曼不动杆菌同源性。方法收集四川省人民医院重症监护病房(ICU)分离的鲍曼不动杆菌复合群76株,用OXA-51基因扩增法鉴定。用Vitek 2 Compact全自动微生物分析系统进行药敏试验,同时用PCR技术分析其产碳青霉烯酶相关耐药基因类型,对其中确定为医院感染的19株鲍曼不动杆菌和5株物体表面的鲍曼不动杆菌用重复序列聚合酶链反应(Rep-PCR)的DiversiLab系统进行同源性分析。结果 76株菌株均显示多重耐药,全部检出携带OXA-51、OXA-23基因,未检出OXA-24、OXA-58、VIM、IMP-1、IMP-4、SIM、NDM-1耐药基因。DiversiLab系统将19株医院感染鲍曼不动杆菌和5株物体表面的鲍曼不动杆菌分为4个亲缘性不同的克隆组及9个亚克隆组。结论该院鲍曼不动杆菌多重耐药现象严重,OXA-23基因可能是其耐碳青霉烯类抗生素的主要原因。克隆组1为该院鲍曼不动杆菌医院感染的主要流行株。     

鲍曼不动杆菌对亚胺培南耐药机制研究

目的了解鲍曼不动杆菌对亚胺培南的耐药性及耐药机制。方法琼脂稀释法对62株鲍曼不动杆菌进行药敏检测,对其中20株亚胺培南耐药的鲍曼不动杆菌进行耐药机制研究。酶三维试验检测ESBLs和AmpC酶,PCR扩增和测序分析检测碳青霉烯酶VIM、IMP、OXA-23和OXA-24,SDS-PAGE方法研究外膜蛋白表达情况,利血平协同抑制试验检测膜外排机制。结果62株鲍曼不动杆菌中,亚胺培南耐药25株,占41%;20株亚胺培南耐药菌中,ESBLs和AmpC酶阳性株分别为10株(50%)和20株(100%),PCR扩增VIM、IMP和OXA-24均阴性;OXA-23基因扩增显示19株(95%)阳性,PCR产物并经序列分析证实为OXA-23;与敏感株相比,部分菌株存在22、29、33kD的外膜蛋白缺失;利血平不能降低亚胺培南对鲍曼不动杆菌的MIC值。结论产OXA-23型β-内酰胺酶是本院鲍曼不动杆菌对亚胺培南耐药的重要原因,产AmpC酶合并外膜蛋白缺失与鲍曼不动杆菌对亚胺培南耐药有密切关系。     

鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类抗生素耐药机制研究

目的研究鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类抗生素的耐药机制。方法用Etest法和微量肉汤稀释法测定11种抗生素对30株亚胺培南耐药的鲍曼不动杆菌的最低抑菌浓度(M IC值),三维实验法测定β-内酰胺酶表型,用PCR扩增9种β-内酰胺酶编码基因。结果11种抗菌药物中,除多粘菌素B耐药率为23.3%,环丙沙星的耐药率为87.7%,其他抗生素的耐药率均在90%以上。以头孢曲松作为底物,30株不动杆菌中单产ESBLs的33.3%(10/30),单产AmpC酶的3.3%(1/30),同时产ESBLs和AmpC酶的23.3%(7/30),产可水解头孢曲松但不能被克拉维酸和氯唑西林所抑制的酶的26.7%(8/30),未检测到产酶的13.3%(4/30)。VIM-1、VIM-2、OXA-24、CTX-M-2、IMP-1、VEB-1编码基因均阴性。27株菌检测到OXA-23、PER-1和AmpC编码基因中的2种或3种,测序证实与GenBank相应序列同源性均在98%以上。26号菌的PER-1序列与GenBank中登录的铜绿假单胞菌PER-1序列(AZ21957)相比,在第617位核苷酸发生了突变(A→C),该序列已在GenBank登录(登录号:DQ341275)。结论鲍曼不动杆菌的耐药性与其产生OXA-23、PER-1和AmpC酶密切相关。     

重症监护病房中多重耐药鲍曼不动杆菌耐药基因型及同源性分析

目的分析22株重症监护病房(ICU)中多重耐药鲍曼不动杆菌耐药表型,耐药基因型及基因同源性。方法菌株鉴定采用Vitek-32细菌鉴定仪,药物敏感试验采用K-B法。三维试验检测ESBLs和AmpC酶,协同试验检测金属酶(MBL)。PCR检测各类β-内酰胺酶类、氨基糖苷类抗菌药耐药基因及喹诺酮类相关gyrA基因。脉冲场凝胶电泳(PFGE)进行基因同源性分析。结果 (1)对亚胺培南耐药率最低为4.5%,头孢哌酮/舒巴坦耐药率较低为22.7%,对其他所测抗菌药耐药率均大于90%。(2)产AmpC酶21株占95.5%;产ESBLs和MBL各5株,分别占22.7%。(3)100%携带AmpC酶基因、TEM-1型广谱β-内酰胺酶基因、aacA4氨基糖苷乙酰转移酶基因;aacC1、aadA1型氨基糖苷乙酰转移酶基因各占95.5%;有gyrA型DNA旋转酶基因突变;各1株检测到OXA-23型碳青霉烯酶基因、PER型ESBLs基因和aphA1型氨基糖苷乙酰转移酶基因,分别占4.5%;未检测到SHV型β-内酰胺酶基因、VEB型ESBL基因I、MP型和VIM型金属酶基因、OXA-24型碳青霉烯酶基因。(4)PFGE结果显示20株出现完全相同条带,具有高度同源性,另2株各自为独立株。结论 22株多重耐药鲍曼不动杆菌中存在一个克隆流行株,携带AmpC酶基因、TEM-1型β-内酰胺酶基因及aacA4、aacC1、aadA1型氨基糖苷类修饰酶基因,高产AmpC酶,治疗应首选亚胺培南。     

阴沟肠杆菌Ⅰ类整合酶基因及质粒AmpC酶基因检测

目的明确我院临床分离的阴沟肠杆菌中Ⅰ类整合酶基因(int Ⅰ 1)、qacE△1-sul Ⅰ基因和质粒AmpC酶基因(AmpC MIR、AmpC DHA)存在状况.方法采用ATB药敏试验板微量肉汤法测定临床分离的20株阴沟肠杆菌对20种抗菌药物的敏感性,采用聚合酶链反应(PCR)技术检测耐药基因.结果该20株菌呈现多重耐药,对亚胺培南和美罗培南均敏感,对阿莫西林、阿莫西林/克拉维酸、头孢噻吩和头孢西丁完全耐药,头孢吡肟和复方新诺明的耐药率分别为25.0%和85.0%,对氨基糖苷类抗生素的耐药率在60.0%～90.0%之间,其余的耐药率在80.0%～95.0%之间.int Ⅰ 1、qacE△1-sul Ⅰ、MIR和DHA基因的阳性株数(%)分别为19株(95.0%)、17株(85.0%)、17株(85.0%)、1株(5.0%).结论我院临床分离的阴沟肠杆菌多重耐药严重,int Ⅰ 1、qacE△1-sulⅠ和MIR基因携带率很高.在阴沟肠杆菌中检出intⅠ 1、qacE△1-sulⅠ以及质粒型AmpC MIR基因在我国大陆均属首次报道.     

多重耐药鲍曼不动杆菌中β内酰胺酶基因的检测

目的调查多重耐药鲍曼不动杆菌中8内酰胺类耐药基因的流行状况。方法收集2012年8月至2013年2月江苏大学附属医院和镇江市第一人民医院住院患者标本中分离得到的多重耐药鲍曼不动杆菌菌株。应用K—B纸片扩散法检测多重耐药鲍曼不动杆菌对抗菌药物的敏感性。应用PCR法检测口内酰胺类耐药基因。结果47株多重耐药鲍曼不动杆菌除对头孢哌酮-舒巴坦,米诺环素和氨苄西林-舒巴坦的耐药率相对较低外,对其他抗菌药物的耐药率均较高。β内酰胺类耐药基因TEM、ADC、OXA-23和0XA51的阳性率分别为91．5％（43株）、93．6％（44株）、93．6％（44株）和95．7％（45株）。结论多重耐药鲍曼不动杆菌对8内酰胺类抗生素耐药可能与8内酰胺类耐药基因的表达相关。     

鲍曼不动杆菌的耐药性及β-内酰胺酶耐药基因的研究

目的了解临床分离的鲍曼不动杆菌耐药性及β-内酰胺酶耐药基因的存在类型。方法用美国BD公司Phoenix-100型全自动细菌鉴定药敏系统鉴定细菌及做药敏试验,用聚合酶链反应（PCR）方法检测5种常见β-内酰胺酶耐药基因。采用随机引物PCR扩增对菌株进行分型。结果 50株鲍曼不动杆菌对多粘菌素B全部敏感,,而对其余18种抗生素耐药率为52%-100%,其中24株为泛耐药菌株,共分为8种基因型,B型菌株为主要的流行株,所有菌株均检出TEM-1基因,46株检出AmpC基因,31株检出0XA-24基因、21株检出0XA-23基因,7株检出IMP基因。结论临床分离的鲍曼不动杆菌主要以引起危重病人的呼吸道感染为主,对18种临床常用抗生素耐药率高,对头孢菌素类高度耐药并且存在克隆传播,同时携带多种耐药基因是本院鲍曼不动杆菌对β-内酰胺酶类抗菌药物耐药的主要原因。     

院内鲍曼不动杆菌耐药谱分析及相关β-内酰胺酶基因分布情况调查

目的对南京中医药大学附属医院院内分离出来的鲍曼不动杆菌进行各类β-内酰胺酶基因的检测,探讨这些基因的分布特点,研究鲍曼不动杆菌的耐药机制。方法收集2014年1月～12月期间医院内分离的200株鲍曼不动杆菌,最低抑菌浓度(MIC)法测定其对抗生素的敏感性;PCR法检测A类β-内酰胺酶基因SHV,GES,TEM;B类β-内酰胺酶基因VIM,IMP;C类β-内酰胺酶基因AmpC和D类β-内酰胺酶基因OXA-51,OXA-23,OXA-24,OXA-58在菌株中的分布。结果200株鲍曼不动杆菌中116株为多重耐药株,其对常用抗生素的耐药率超过70%;其中52株携带TEM,携带率为26.0％,135株携带SHV,携带率为67.0％,7株检出GES,携带率为3.5%;170株携带VIM-1,携带率为85.0%,12株检出IMP-1,携带率为6.0％;150株携带AmpC,携带率为75.0%;190株携带OXA-51,携带率为95.0%,165株携带OXA-23,携带率为82.5%,2株携带OXA-58,携带率为1.0％,所有菌株未检出OXA-24。结论携带β-内酰胺酶基因是鲍曼不动杆菌的主要耐药机制之一,携带率最高的基因为OXA-51,OXA-23,AmpC,VIM-1和SHV,携带率均超过60％,说明鲍曼不动杆菌的耐药是A,B,C,D四类β-内酰胺酶基因协同作用的结果。     

产AmpC酶铜绿假单胞菌对亚胺培南耐药机制的研究

目的研究产AmpC酶的铜绿假单胞菌对亚胺培南耐药的分子机制。方法2003-2007年从临床标本中分离到铜绿假单胞菌220株，采用三维试验筛选产8内酰胺酶（包括AmpC酶）的铜绿假单胞菌，应用多重PCR检测产AmpC酶的铜绿假单胞菌质粒携带的AmpC耐药基因，应用荧光定量RT—PCR的方法检测染色体AmpC酶基因和oprD2基因的表达情况。结果共检出40株产口内酰胺酶的菌株，其中产AmpC酶、ESBLs、金属酶（MBL）和未知酶型铜绿假单胞菌的构成比分别是62．5％（25／40）、20％（8／40）、7．5％（3／40）和10％（4／40）。25株产AmpC酶菌株均有不同程度AmpC酶基因表达量升高，其中，仅1株细菌携带DHA质粒型AmpC酶基因，12株菌oprD2基因表达量减低，这些菌株均对亚胺培南耐药，13株菌oprD2基因表达量正常，其中仅5株菌对亚胺培南耐药；7株菌（占产AmpC酶菌株的28％，不产金属酶）的酶粗提物能微弱水解IPM，这7株菌AmpC酶基因的表达量均有明显升高，其中5株菌同时伴有oprD2基因表达量降低。结论铜绿假单胞菌产生的AmpC酶可做弱水解亚胺培南，且其水解亚胺培南可能与AmpC酶产生量有一定关系；产AmpC酶铜绿假单胞菌对亚胺培南耐药的原因可能是细菌AmpC酶表达量增加和oprD2表达量减低两者共同作用的结果。     

重症监护病房泌尿系感染产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌基因分析

目的了解重症监护病房（ICU）泌尿系感染产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）大肠埃希菌的耐药性和基因型。方法收集2006年2月至8月从ICU中段尿培养中分离的20株产ESBLs的大肠埃希菌进行6种β-内酰胺酶基因的检测。结果20株菌中检出TEM基因11株（55％），CTX-M-1基因10株（50％），CTX-M-9基因3株（15％），SHV基因2株（10％），OXA-1基因1株（5％），OXA-10基因未检出。结论我院ICU泌尿系感染大肠埃希菌产ESBLs基因主要是TEM和CTX-M-1基因，其次为CTX-M-9和SHV基因，OXA-1基因阳性率低，而OXA-10基因未检出。     

H7N9患者感染碳青霉烯耐药鲍曼不动杆菌的同源性分析

目的 探讨H7N9患者感染碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌菌株的同源性及传播机制.方法 收集自H7N9感染患者、同期ICU病房其他患者及环境中分离的多重耐药鲍曼不动杆菌;采用K-B纸片法测定菌株对常规药物的敏感性;脂稀释法测定其对多粘菌素B的MIC;EDTA协同试验测定金属酶表型;采用PCR法测定耐药基因;PFGE法分析菌株的流行病学特征.结果 临床分离株与环境分离株具有相似的药敏谱,均对阿米卡星和多粘菌素B敏感,对其他抗菌药物耐药,包括碳青霉烯类药物;金属酶表型试验为阴性;所有菌株均扩增出OXA-23和OXA-51基因;PFGE电泳分析显示H7N9患者分离株与其他患者分离株及环境分离株为同一克隆.结论 H7N9患者所感染的多重耐药鲍曼不动杆菌为院内感染菌株,对碳青霉烯类药物耐药主要由OXA-23基因介导.     

产β-内酰胺酶革兰阴性杆菌的筛选和耐药性分析

目的以多重耐药革兰阴性菌为对象,检测β一内酰胺酶表型,了解其耐药特性和分布特点。方法采用纸片扩散初筛法、扩散确证法、头孢西丁三维试验、甘露聚糖结合凝集素（MBL）的协同试验进行确证;采用法国梅里埃API生化鉴定试条或经VITEK一2鉴定系统将细胞鉴定到种;药敏试验用琼脂纸片扩散（K—B）法,经wH0一NET5．0软件进行统计学分析,分析其耐药特性。结果多重耐药革兰阴性杆菌口一内酰胺酶总检出率为26．4％（80／302）,主要由产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）引起,占16．56％（50／302）;其次为ESBLs＋AmpC引起,占6．62％（zo／302）;ESBLs＋AmpC＋MOL引起,占1．66％（5／302）,单独由AmpC引起的仅占0．66％（2／302）,有3株未能定型占0．99％（3／30z）。多重耐药革兰阴性杆菌对临床常用抗生素的总体耐药率最低的为阿米卡星（18．99％）、其次为亚胺培南（20．0％）,头孢哌酮／舒巴坦（21．7％）、哌拉西林／他唑巴坦（21．89％）;最高的为氨苄西林（98．33％）,其次为氨苄西林／舒巴坦（83．33％）、头孢曲松（76．25％）、头孢西丁（63．64％）及头孢噻肟（60．50％）等,大部分细菌呈多重耐药性。结论产多种6-内酰胺酶的革兰阴性菌具有多重耐药。     

广州地区多重耐药铜绿假单胞菌相关耐药基因的研究

目的探讨广州地区临床分离的多重耐药铜绿假单胞菌相关耐药基因。方法采用纸片扩散法进行药敏试验,聚合酶链反应（PCR）对多重耐药铜绿假单胞菌进行β-内酰胺酶相关基因和氨基糖苷类修饰酶基因检测,并对耐药基因进行测序。结果38株铜绿假单胞菌对多黏菌素B耐药率是0%,对其余抗菌药物耐药率均〉50%,氨基糖苷类修饰酶基因ant（2″）-Ⅰ、ant（3″）-Ⅰ、aac（6′）-Ⅰ、aac（6′）-Ⅱ和aac（3）-Ⅱ基因阳性率分别为21.1%、39.5%、28.9%、31.6%和21.1%,未检出aac（3）-Ⅰ基因;β-内酰胺酶基因OXA-10、TEM-1、DHA-1、PER-1和IMP-1基因阳性率分别为42.1%、18.4%、10.5%、7.9%和31.6%,未检出CTX-M-9基因和VIM基因;另外OprD2基因缺失率达60.5%。结论广州地区多重耐药的铜绿假单胞菌携带多种β-内酰胺酶和氨基糖苷类修饰酶基因,应引起高度重视。