直立倾斜试验对儿童晕厥患者的临床应用

目的观察直立倾斜试验对儿童晕厥患者的诊断应用价值。方法对32例不明原因晕厥患儿进行直立倾斜实验的结果进行回顾性分析。结果32例患儿中阳性23例,占71.88%,基础实验阳性9例,占28.12%,异丙肾上腺素诱发14例,占43.75%。结论直立倾斜试验对儿童血管迷走性晕厥的诊断有重要临床应用价值,加用异丙肾上腺素可提高试验的阳性率。     

直立倾斜试验对恶性血管迷走性晕厥的诊断价值及治疗

晕厥是常见的综合征,30%～60%经各方面检查不能明确病因,可能属于神经介导的反射性的,短暂的低血压及心动过缓所致.神经介导的晕厥中常见的为血管迷走性晕厥.有人认为是心源性猝死的一种潜在原因.有报道心源性晕厥一年病死率为30%,非心源性晕厥者为12%,而不明原因者为6%.为了估价这种可能性和检测血管迷走性心源停搏的特征,本试验对32例原因不明晕厥者采用直立倾斜试验方法作诱发试验,以识别恶性血管迷走性晕厥,并进行药物治疗评价.     

冬凌草甲素对急性单核细胞白血病细胞株THP-1的作用研究

目的探讨冬凌草甲素对急性单核细胞白血病细胞株THP-1的抗白血病效应及其作用机制。方法以急性单核细胞白血病细胞株THP-1为研究对象,应用改良四甲基偶氮唑盐法测定4、6、8μmol/L浓度冬凌草甲素处理72 h后THP-1细胞的增殖抑制率,以及计算2、4、6、8、10μmol/L冬凌草甲素处理24、72、120 h后的细胞生存率并绘制生长曲线;显微镜下观察4、6、8μmol/L冬凌草甲素处理24 h后THP-1细胞的形态学变化;采用流式细胞术检测0、4、6、8μmol/L冬凌草甲素处理24 h后THP-1细胞凋亡率;采用Western blot法检测6μmol/L冬凌草甲素处理THP-1细胞0、12、24 h后Akt/m TOR、Raf/MEK/ERK细胞信号转导通路的变化,以及凋亡调节蛋白Bcl-2和Bax的变化。结果 14、6、8μmol/L冬凌草甲素处理72 h后细胞增殖抑制率分别为(20.02±11.15)%、(45.99±12.76)%、(86.39±9.18)%,与4μmol/L冬凌草甲素比较,6、8μmol/L冬凌草甲素处理后细胞增殖抑制率均升高,差异均有统计学意义(P0.05或P0.01);冬凌草甲素处理72 h后细胞半抑制浓度为(6.12±1.48)μmol/L;细胞生长曲线显示,冬凌草甲素对THP-1细胞的生长抑制作用呈时间和浓度依赖性。2冬凌草甲素处理24 h后,THP-1细胞出现凋亡,形成凋亡小体,浓度越高细胞凋亡小体形成越多。30、4、6、8μmol/L冬凌草甲素(分别设为对照组及4、6、8μmol/L组)处理24 h后,THP-1细胞凋亡率分别为(3.7±1.1)%、(16.2±3.3)%、(30.1±4.3)%、(49.5±6.7)%,对照组与各浓度组凋亡率比较差异均有统计学意义(P0.05或P0.01);与4μmol/L组比较,6、8μmol/L组凋亡率均升高,差异均有统计学意义(P0.05)。4经Western blot法检测6μmol/L冬凌草甲素处理THP-1细胞24 h后可抑制细胞内Akt/m TOR、Raf/MEK/ERK信号转导通路的活化,并下调Bcl-2、上调Bax的表达。结论冬凌草甲素通过抑制Akt/m TOR、Raf/MEK/ERK信号转导通路的活化,以及调节凋亡调节蛋白Bax和Bcl-2的表达而发挥抗白血病效应。     

直立倾斜试验诊断不明原因晕厥的价值

目的探讨直立倾斜试验在不明原因晕厥诊断中的价值。方法不明原因晕厥患者366例,均行直立倾斜试验检查。结果直立倾斜试验阳性252例,阳性率68．9％;直立性不耐受综合征类型中以血管迷走性晕厥多见,其次为体位性心动过速、直立性低血压;血管迷走性晕厥中血管减压型比例女性高于男性（P〈O．05）;年龄≥60岁15例患者中直立倾斜试验阳性10例,均表现为血管迷走性晕厥;13例发生假性晕厥。结论直立倾斜试验阳性者并非为反射性晕厥,直立位3～45min发生晕厥的阳性患者,须结合年龄、性别及病史确诊是体位性晕厥或反射性晕厥。     

不明原因晕厥病人行直立倾斜试验的护理

对２０例不明原因晕厥病人在直立倾斜试验中实施护理,确保了该项检查的安全性。护理体会是：试验前介绍试验的程序,停药、备足抢救物品;试验中严密观察病人反应,监护心电和血压变化,针对心脏抑制型或血管抑制型进行相应护理和用药;试验后告知病人检查结果及预防护理措施。     

不明原因晕厥患者直立倾斜试验反应特点

目的探讨不明原因晕厥(UPS)患者直立倾斜试验(HUTT)的反应特点。方法2005-01～2006-09在我院就诊或住院的UPS或接近晕厥患者170例,男性64例,女性106例,年龄3～70岁,平均(23.18±15.40)岁,其中儿童(<18岁)88例。比较HUTT阳性与阴性患者的特点,调查阳性患者反应类型与性别、年龄的关系及不同类型阳性反应患者HUTT期间血流动力学的变化。结果①对HUTT结果有显著影响的因素为年龄和HUTT期间的心电图变化。②血管抑制型和混合型在男女性别间比较差异无统计学意义(P>0.05),但在成人(≥18岁)和儿童(<18岁)组间比较差异有统计学意义(P<0.05),血管抑制型和心脏抑制型多见于儿童。③HUTT阳性者心律失常事件发生率较阴性者高,常见窦性心律不齐、窦性心动过缓、窦性心动过速、交界性心律和逸搏。④基础倾斜试验(BHUT)晕厥发作平均时间为(21.61±10.64)min,舌下含服硝酸甘油倾斜试验(SNHUT)晕厥发作平均时间为舌下含服硝酸甘油后(5.58±2.68)min。结论①儿童较成人易于发生阳性反应,以血管抑制型和心脏抑制型居多。②HUTT期间出现心电图变化者阳性反应发生的可能性增加,尤其是窦性心律不齐和窦性心动过缓出现时要警惕阳性反应的发生。     

直立倾斜试验的倾斜时程探讨

目的:探讨直立倾斜试验的倾斜时程。方法:对418例受检者先行基础直立倾斜试验,对其中286例阴性者,再行舌下含化硝酸甘油激发直立倾斜试验,然后对二者阳性病例的倾斜时程资料回顾性统计分析。结果:基础直立倾斜试验的阳性率是31.58%(132/418),其倾斜时程<25 min者占阳性病例的90.91%(120/132),26~30 min者仅占9.09%(12/132),二者共占100.00%(132/132)。舌下含化硝酸甘油激发直立倾斜试验的阳性率是65.73%(188/286),其倾斜时程<10 min者占阳性病例的75.53%(142/188),11~20 min者占24.47%(46/188),二者共占100.00%(188/188)。结论:基础与舌下含化硝酸甘油激发直立倾斜试验的倾斜时程上限分别以30 min与20 min为宜。     

直立倾斜试验评估晕厥类型的价值

直立倾斜试验(head-up tilt testing,HUT)现已广泛用于鉴别临床晕厥患者[1-3],并成为确诊血管迷走性晕厥(vasovagalsyncope,VVS)的金标准。HUT的临床价值研究显示     

直立倾斜试验诊断血管迷走性晕厥的价值

目的研究直立倾斜试验（ＨＵＴ）诊断血管迷走性晕厥的价值。方法６７例原因不明的晕厥患者、２０例正常对照组行ＨＵＴ时,并采用特异性及敏感性较高的静滴异丙肾上腺素重复试验。观察心率、收缩压、舒张压变化。结果４３例阳性患者中,血管抑制性晕厥３１例（３１／６７）,混合性晕厥１２例。患者组,基础早搏时与阳性时的心率、收缩压、舒张压之间有高度显著性差异（Ｐ＜０００１）。静滴异丙肾上腺素敏感性６４％,特异性８５％。结论静滴异丙肾上腺素重复倾斜试验对诊断血管迷走性晕厥具有重要价值。     

急性单核白血病细胞系THP-1细胞MLL-AF9融合基因沉默对p27表达的影响

目的 研究急性单核细胞白血病细胞系THP-1细胞MLL-AF9融合基因沉默对p27表达及转录调控的影响.方法 选择THP-1细胞特有的MLL-AF9融合基因为靶基因,设计并俣成MLL-AF9小干扰RNA(siRNA)片段.应用脂质体转染.方法 将MLL-AF9 siRNA导入细胞,通过流式细胞术检测siRNA转染效率,用RT-PCR法比较转染前后MLL-AF9 mRNA表达水平的变化,Western blot检测MLL-AF9蛋白水平沉默效果,比较细胞周期抑制蛋白p27表达变化,利用染色质免疫沉淀(Chromatin Immunoprecipitation,ChIP)技术研究MLL-AF9融合蛋白是否与p27启动子结合.结果 转染MLL-AF9siRNA后THP-1细胞MLL-AF9 mRNA相对表达水平(0.31±0.07)较对照组(1.25±0.13)明显受抑(P＜0.01),p27 mRNA表达水平(0.84±0.12)较对照组(0.35±0.03)明显上调(P＜0.01),应用ChIP结合PCR扩增的.方法 分析发现MLL-AF9融合蛋白可与THP-1细胞p27基因启动子区域的DNA片段结合.结论 MLL-AF9融合基因沉默后可使p27表达上调,其机制可能为MLL-AF9基因沉默解除了MLL-AF9融合蛋白与p27启动子的结合,从而恢复p27基因的表达.     

Comparative uptake of grepafloxacin and ciprofloxacin by a human monocytic cell line, THP-1

The present study was designed to compare the uptake of grepafloxacin by a human monocytic cell line, THP-1, with that of ciprofloxacin. THP-1 cells were incubated with 20 μg/ml of either drug, and the entry of the drugs into the cells was determined using a velocity gradient centrifugation technique and HPLC assay. Antibiotic uptake by the cells was expressed as the ratio of the intracellular to the extracellular drug concentration (IC/EC). Grepafloxacin entered THP-1 cells readily within 5 min, and at steady-state (37°C; 60 min), the IC/EC ratio of grepafloxacin (11.9 ± 1.7; n = 13) was about 2.4-fold higher than that of ciprofloxacin (5.0 ± 1.3; n = 13). The ratios decreased at low incubation temperature (4°C), in paraformaldehyde-treated dead cells, and at low extracellular pH (pH 6.0), but were not influenced by high extracellular pH (pH, 9.0). Characterization of fluoroquinolone uptake suggests that these drugs penetrate the THP-1 membrane by passive diffusion, and also, in part, via an active transport system. We also examined the uptake of the two fluoroquinolones in phorbol 12 myristate 13-acetate (PMA)-stimulated adherent THP-1 cells (THP-1 macrophages). The IC/EC ratios for both fluoroquinolones in the THP-1 macrophages were significantly higher than those in the THP-1 monocytes. Further the uptake of three other fluoroquinolones, levofloxacin, tosufloxacin, and sparfloxacin, by THP-1 monocytes was examined in comparative studies. The IC/EC ratio of grepafloxacin was comparable to that of sparfloxacin and significantly higher than that of the other fluoroquinolones. Our results indicate that grepafloxacin exhibits better intracellular accumulation than ciprofloxacin and other fluoroquinolones in human monocytic and macrophage-like cells. Received: June 1, 2000 / Accepted: August 1, 2000     

沉默DOT1L基因对急性单核细胞白血病细胞THP-1增殖的影响

本研究旨在探讨DOT1L基因对人白血病THP-1细胞增殖的影响。针对DOT1L mRNA的第732-752靶位点设计并合成shRNA,构建pLKO-Tet-On条件性干扰载体,制备慢病毒并感染THP-1细胞,用强力霉素(Dox)诱导干扰载体表达;应用RT-PCR的方法验证干扰效率;采用改良MTT法检测干扰DOT1L基因后对THP-1细胞增殖能力的影响;用细胞集落形成实验观察干扰后细胞集落形成的能力;用流式细胞术分析细胞周期的变化。结果表明:THP-1细胞干扰后DOT1L基因的表达显著降低;DOT1L基因的表达下调抑制了细胞的增殖能力、集落形成能力并将细胞周期阻滞在G0/G1期。结论:利用shRNA靶向干扰DOT1L基因的表达,可以有效抑制人急性单核细胞白血病细胞THP-1的增殖。     

辛伐他汀对急性单核细胞白血病SHI-1细胞增殖和凋亡的影响

本研究探讨辛伐他汀(simvastatin,SIM)对急性单核细胞白血病SHI-1细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制。用MTT法检测不同浓度SIM作用不同时间对SHI-1细胞生长的抑制作用;实验分为阴性对照及辛伐他汀处理组(终浓度分别为5、10、20μmol/L),处理48小时后,用流式细胞仪检测细胞凋亡及周期分布;半定量RT-PCR法检测caspase-3、BCL-2mRNA的表达;Western blot法检测caspase-3、BCL-2蛋白表达。结果表明,辛伐他汀对SHI-1细胞的生长有明显抑制作用,且呈时间与剂量依赖性。与对照组相比,辛伐他汀处理SHI-1细胞48小时后,各浓度组S期细胞百分比明显增多,5μmol/L辛伐他汀处理SHI-1细胞能明显阻滞细胞周期进程,但不能诱导细胞凋亡。细胞中BCL-2mRNA表达随辛伐他汀浓度增加而下降,caspase-3mRNA表达随辛伐他汀浓度增加而增高(p<0.05)。SHI-1细胞中BCL-2蛋白表达随辛伐他汀浓度升高而降低,caspase-3蛋白表达随辛伐他汀浓度升高而增加(p<0.05)。结论 :辛伐他汀能抑制SHI-1细胞增殖并诱导其凋亡,其机制可能与其下调BCL-2和上调caspase-3表达有关。     

西罗莫司抑制急性髓系白血病细胞株Kasumi-1增殖的研究

目的探讨不同浓度西罗莫司对急性髓系白血病细胞株Kasumi-1增殖、凋亡和细胞周期的影响。方法 MTT法检测西罗莫司对Kasumi-1细胞增殖的影响,流式细胞术检测西罗莫司对Kasumi-1细胞凋亡和细胞周期的变化,免疫荧光法观察西罗莫司处理前后Kasumi-1细胞核形态变化。结果不同浓度的西罗莫司均能抑制Kasumi-1细胞的增殖,促进其凋亡,并使细胞阻滞在G0/G1期。Kasumi-1细胞对西罗莫司表现为剂量依赖性,并在100 ng/mL左右达到最大效应。结论西罗莫司能够显著抑制Kasumi-1细胞增殖,并对凋亡起促进作用。     

二甲双胍对急性单核细胞白血病细胞株THP-1增殖、分化和凋亡的影响

目的:探讨二甲双胍(metformin)对体外培养的急性单核细胞白血病细胞株THP-1细胞增殖、分化和凋亡的影响,并分析其可能的作用机制。方法:用不同浓度的二甲双胍分别对THP-1细胞进行体外干预,24 h、48 h后用CCK-8法检测细胞的增殖情况;20 mmol/L二甲双胍干预24 h后用Annexin V/7-AAD双标记法分析细胞凋亡情况;流式细胞术检测细胞表面分化抗原CD11b、CD14的变化;实时定量PCR检测BCL-XL、BAX、BIM、Caspase-3mRNA表达的变化。结果:CCK-8法检测显示二甲双胍对THP-1细胞增殖具有显著的抑制作用,且作用呈时间和剂量依赖性;20 mmol/L二甲双胍干预THP-1细胞24 h后,流式细胞术检测结果显示CD11b、CD14阳性细胞率无明显变化(P0.05);Annexin V/7-AAD标记的流式细胞术检测显示,实验组和对照组早期凋亡细胞比例分别为(2.02±0.85)%和(4.46±1.33)%,晚期凋亡细胞比例分别为(1.43±0.83)%和(3.31±0.59)%,在实验组明显高于对照组(P0.05);20 mmol/L二甲双胍诱导THP-1细胞过程中BCL-XL、BIM表达无明显变化,BAX、Caspase-3表达显著增加(P0.01)。结论:二甲双胍能有效抑制THP-1细胞增殖并促进细胞凋亡,但对THP-1细胞分化无明显影响,其促进凋亡机制可能与上调BAX及Caspase-3基因有关。     

辛伐他汀对人急性单核细胞白血病SHI-1细胞PI3K/AKT通路的影响

本研究探讨羟甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶抑制剂辛伐他汀对人急性单核细胞白血病株(SHI-1)细胞增殖和凋亡的影响及PI3K/AKT通路变化。取对数生长期细胞,实验分为阴性对照组和辛伐他汀处理组(终浓度分别为5、10、15μmol/L),培养24、48、72 h。采用MTT法观察SHI-1细胞增殖能力;流式细胞术测定SHI-1细胞凋亡指标变化;PCR芯片研究SHI-1细胞PI3K/AKT通路84个特异性基因mRNA的差异表达。结果表明,辛伐他汀对SHI-1细胞有明显抑制增殖和促凋亡作用,呈时间与剂量依赖性。15μmol/L辛伐他汀处理SHI-1细胞24、48、72h,细胞增殖抑制率分别为26.82%、47.09%、63.92%,细胞早期凋亡率分别为5.73%、13.25%、15.59%。与对照组相比,15μmol/L辛伐他汀处理SHI-1细胞48 h组中有39个基因表达发生改变,其中26个基因表达下调、13个基因表达上调。结论:辛伐他汀能抑制SHI-1细胞增殖并诱导其凋亡,其诱导凋亡机制可能与辛伐他汀调节PI3K/AKT通路相关基因的表达有关。     

Evaluation of the activity of antimicrobial agents against Legionella pneumophila multiplying in a human monocytic cell line, THP-1, and an alveolar epithelial cell line, A549

The intracellular activity of three antimicrobial agents, erythromycin, clarithromycin, and ciprofloxacin, against Legionella pneumophila was examined in the human monocyte-derived cell line, THP-1, and the human alveolar epithelial cell line, A549. L. pneumophila multiplied by three- to four-log in THP-1 and by two- to three-log in A549 after 48-h incubation. The activity of the two macrolides was markedly greater in A549 than in THP-1, while ciprofloxacin exhibited similar activity in both cell lines. The intracellular concentrations of the two macrolides were markedly higher in A549 than in THP-1, while those of ciprofloxacin were almost equal in both types of cell lines. The intracellular activity of antimicrobial agents and the intracellular growth of L. pneumophila vary with different types of host cells. Received: May 31, 2000 / Accepted: August 22, 2000     

甾醇类新药NSC67657诱导THP-1细胞分化及ICAT蛋白在细胞分化中的作用研究

目的 研究新的甲磺酸甾醇类药物NSC67657对白血病细胞的诱导分化作用及可能机制.方法 采用MTT法分析在不同浓度NSC67657作用下THP-1细胞的增殖水平,通过细胞表面分化抗原的检测,观察不同药物浓度、不同作用时间处理的THP-1细胞分化程度,并对完全分化细胞做形态学分析.通过RT-PCR和Western blot方法观察药物作用细胞前后β-catenin相关蛋白1(ICAT)基因和蛋白的表达情况;构建pDsRed-ICAT真核表达载体,测序后转染THP-1细胞,筛选阳性克隆,并做表达验证.采用流式细胞术,瑞特染色和超微结构观察,分析重组质粒转染细胞在药物处理前和处理24 h后THP-1细胞的分化情况.结果 通过比较可见药物处理后的THP-1细胞增殖明显受抑;细胞表面分化抗原CD14的表达水平随药物处理时间的延长和药物浓度的升高而增加,结合增殖分析,以10 μmol/L药物、连续诱导5 d为宜,细胞分化可达到90%以上.形态学观察验证了THP-1细胞在NSC67657的作用下向单核系分化.真核表达载体构建成功,电转后THP-1细胞ICAT基因和蛋白表达升高.药物作用前后,重组质粒转染THP-1细胞CD14的表达与对照组比较无明显差异;通过瑞特染色和超微结构观察,发现药物作用重组质粒转染THP-1细胞24 h后,细胞仍处初级分化阶段.结论 NSC67657可诱导THP-1细胞向单核系分化,并激活ICAT基因的表达,但仅是该基因的高表达并不 足以诱导THP-1细胞分化,也不会增加THP-1细胞对NSC67657 药物作用的敏感性.     

Adaptation of a human monocytic leukemia cell line (THP-1) in a protein-free chemically defined medium

We have adapted a human monocytic leukemia cell line [THP-1c12(+)] so that it can proliferate in a completely protein-free chemically defined medium of an equal mixture of Dulbecco's modified Eagle's minimum essential medium and Ham's F12. This cell line was designated as THP-1c12(-). When a sufficient number of THP-1c12(-) cells was seeded in culture, the maximum cell density after 6 days of culture was 1 X 10(6)/ml with a doubling time of 30 hr. Transferrin showed a slight stimulative effect on the growth of THP-1c12(-) cells, but insulin did not. The surface profile of THP-1c12(-) was the same as that of THP-1c12(+), which possessed Mol. Mo5, LeuM3, My9 and Ia-like antigens as well as a large number of Fc receptors. Phagocytic ability with respect to IgG-coated sheep red blood cells was evident in both THP-1c12(+) and THP-1c12(-) cells. A small percentage of THP-1c12(-) cells retained the ability to reduce nitroblue tetrazolium when stimulated with 12-tetradecanoyl-phorbol-13-acetate. Culture supernatant from THP-1c12(-) stimulated the incorporation of 3H-thymidine into its own cells, suggesting an autocrine mechanism by which the growth of THP-1c12(-) cells is induced in a protein-free medium.