单宁酸对高糖及AGEs引起肾小球系膜细胞增殖和Ⅳ型胶原生成的影响

目的观察单宁酸(tannic acid,TA)对高糖及糖化终产物(AGEs)引起的肾小球系膜细胞(GMC)增殖和Ⅳ型胶原生成的影响。方法体外培养肾小球系膜细胞,分别用高浓度葡萄糖(30 mmol/L)、不同浓度AGEs(25、50、100、200及400 mg/L)处理,同时用不同浓度单宁酸(10、20、40及80μmol/L)进行干预,设立相应对照组,于不同时间段(24、48 h)用MTT法检测肾小球系膜细胞的增殖情况,ELISA法检测培养48 h后条件培养基中Ⅳ型胶原的含量。结果葡萄糖及AGEs均能明显促进系膜细胞增殖和Ⅳ型胶原的生成,与对照组比较具有显著差别。单宁酸可明显抑制高糖或AGEs引起的系膜细胞增殖,能减少Ⅳ型胶原的生成,并呈一定浓度依赖关系。结论单宁酸能抑制高糖或AGEs引起的GMC增殖,并能减少Ⅳ型胶原生成。     

洛伐他汀对人肾小球系膜细胞转化生长因子-β_1和细胞外基质的影响

目的　观察他汀类药物对人肾小球系膜细胞转化生长因子 β1 (TGF β1 )表达及纤维连接蛋白、层粘连蛋白和Ⅳ型胶原分泌的影响 ,探讨其在糖尿病肾病防治中的意义。方法　于体外培养人胎肾小球系膜细胞 ,观察低糖 ( 5 6mol/L)和高糖( 3 0mol/L)环境下系膜细胞TGF β1 mRNA的表达 ,并检测细胞培养液中TGF β1 、纤维连接蛋白、层粘连蛋白和Ⅳ型胶原的含量。分别在培养液中加入洛伐他汀、西拉普利及洛伐他汀 +西拉普利 ,观察不同时间和不同药物浓度下细胞培养液中上述指标浓度的变化 ,并检测洛伐他汀和 /或西拉普利刺激 48h后对系膜细胞TGF β1 mRNA表达水平的影响。结果　高糖可刺激肾小球系膜细胞过度增殖 ,细胞培养液中TGF β1 、纤维连接蛋白、层粘连蛋白和Ⅳ型胶原浓度升高 ,TGF β1 mRNA表达明显增加。加入洛伐他汀和西拉普利后 ,细胞增殖明显抑制 ,细胞上清液中TGF β1 、纤维连接蛋白、层粘连蛋白和Ⅳ型胶原浓度下降 ,TGF β1 mRNA表达亦显著降低。联用洛伐他汀和西拉普利对系膜细胞TGF β1 表达的抑制作用较单独用药更强。结论　高糖可促进系膜细胞TGF β1 表达和基质蛋白的分泌 ,洛伐他汀和西拉普利均能一定程度地逆转上述现象 ,提示他汀类药物有直接抑制系膜细胞TGF β1 表达和基质蛋白分泌的?     

高糖条件对大鼠肾小球系膜细胞外基质表达的影响

目的　观察高糖环境对大鼠肾小球系膜细胞分泌细胞外基质成分中透明质酸、层粘连蛋白、Ⅳ型胶原表达的影响 ,为临床治疗糖尿病肾病提供一定的实验依据。方法　 (1 )采用酶联免疫吸附试验测定经体外不同浓度高糖条件下培养的大鼠肾小球系膜细胞HA、LN、Ⅳ型胶原的表达 ;(2 )利用四甲基偶氮唑蓝比色法动态观察不同葡萄糖浓度对GMC增殖的作用。结果　高糖浓度抑制GMC增殖 ,此抑制作用和糖浓度成正相关。在高糖环境下 4 8～ 72hGMC分泌HA、LN、Ⅳ型胶原活性明显增加 ,其分泌表现为逐渐升高的趋势 ,并在 1W内维持较高水平 ,各组间差异显著。证实ECM的增加不依赖于细胞增殖状态 ,对照组则处于一个较稳定的状态 ,说明高糖对GMC分泌ECM有明显的促进作用。结论　细胞外高葡萄糖环境抑制GMC增殖 ,且呈浓度依赖性 ,高糖环境中GMC产生ECM的含量明显增加 ,所以ECM过度积聚可能参与肾小球硬化的发生     

高糖条件对大鼠肾小球系膜细胞外基质表达的影响

目的 观察高糖环境对大鼠肾小球系膜细胞分泌细胞外基质成分中透明质酸、层粘连蛋白、Ⅳ型胶原表达的影响，为临床治疗糖尿病肾病提供一定的实验依据。方法 (1)采用酶联免疫吸附试验测定经体外不同浓度高糖条件下培养的大鼠肾小球系膜细胞HA、LN、Ⅳ型胶原的表达；(2)利用四甲基偶氮唑蓝比色法动态观察不同葡萄糖浓度对GMC增殖的作用。结果 高糖浓度抑制GMC增殖，此抑制作用和糖浓度成正相关。在高糖环境下48～72h GMC分泌HA、LN、Ⅳ型胶原活性明显增加，其分泌表现为逐渐升高的趋势，并在1W内维持较高水平，各组间差异显著。证实ECM的增加不依赖于细胞增殖状态，对照组则处于一个较稳定的状态，说明高糖对GMC分泌ECM有明显的促进作用。结论 细胞外高葡萄糖环境抑制GMC增殖，且呈浓度依赖性，高糖环境中GMC产生ECM的含量明显增加，所以ECM过度积聚可能参与肾小球硬化的发生。     

吡格列酮对高糖培养的肾小球系膜细胞单核细胞趋化蛋白-1表达和合成的影响

目的观察过氧化物酶体增殖物激活受体激动剂-吡格列酮对肾小球系膜细胞单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）表达和合成的影响,探讨其肾脏保护机制。方法体外培养肾小球系膜细胞,随机分组为正常对照糖（NG组）、高糖（HG组）及高糖＋不同浓度吡格列酮（P1、P2、P3组）。培养48小时后收集各组细胞及上清液,应用RT-PCR方法检测细胞MCP-1mRNA含量,采用ELLSA法检测细胞上清液中MCP-1蛋白浓度。结果 （1）肾小球系膜细胞可表达及合成MCP-1;（2）与NG组比较,高糖刺激后肾小球系膜细胞MCP-1mRNA表达以及细胞上清液中MCP-1蛋白含量显著增高（P〈0.05）;（3）加入吡格列酮干预后,肾小球系膜细胞MCP-1mRNA表达以及细胞上清液中MCP-1蛋白含量显著下降,且呈现浓度依赖性。结论吡格列酮可抑制肾小球系膜细胞MCP-1mRNA表达和蛋白合成,且呈现剂量依赖性,该作用可能与其肾脏保护部分有关。     

雷公藤内酯醇对高糖时人肾小球系膜细胞MC P-1表达的影响

目的探讨高糖及雷公藤内酯醇（TP）对人肾小球系膜细胞单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）表达的影响。方法将培养的人肾小球系膜细胞分为6组：正常对照组（5 mmol/L 葡萄糖）、高糖组（30 mmol/L 葡萄糖）、甘露醇组（5 mmol/L 葡萄糖＋25 mmol/L甘露醇）、TP甲组（30 mmol/L 葡萄糖＋5μg/L TP）、TP 乙组（30 mmol/L 葡萄糖＋10μg/L TP）、TP丙组（30mmol/L 葡萄糖＋15μg/L TP）,分别在24 h、48 h、72 h采用 RT-PCR法检测TP对高糖条件下系膜细胞内 MCP-1 mRNA 及蛋白表达的影响。结果高糖组人肾小球系膜细胞 MCP-1 mRNA及蛋白较正常对照组增加,且差异有显著性（P＜ 0.01）;TP各组比高糖组有明显下降（P＜ 0.01）;不同浓度的TP对高糖诱导的系膜细胞 MCP-1的表达抑制程度不同（P ＜ 0.05）。结论 TP可抑制高糖诱导的人肾小球系膜细胞 MCP-1的表达,且呈时间、剂量依赖关系,其可能对延缓糖尿病肾病中肾小球硬化有一定作用。     

高糖对大鼠肾小球系膜细胞LPA3（edg-7）表达影响及姜黄素的干预作用

目的探讨高糖对大鼠肾小球系膜细胞增殖及其LPA3（edg-7）表达和姜黄素的干预作用。方法体外培养大鼠肾系膜细胞,同步后采用高浓度的葡萄糖（30mmol/l）联合不同浓度姜黄素进行干预处理。应用MqT测量高糖及不同浓度姜黄素干预后肾小球系膜细胞增殖活力。应用RT-PCR检测正常培养及高糖作用后大鼠肾小球系膜细胞LPA3（edg-7）的表达及不同浓度姜黄素对其表达的影响。结果高糖促进大鼠系膜细胞增殖,上调LPA3（edg-7）的表达。姜黄素可抑制高糖刺激引起的系膜细胞增殖,下调LPA3（edg-7）表达。当姜黄素浓度大于或等于10／μmol／L时,系膜细胞增殖明显受到抑制（P〈0．05）,且表现为浓度依赖性。在基础状态下,系膜细胞表达一定量的LPA3（edg-7）,经高糖刺激后,LPA3（edg-7）基因表达上调;姜黄素可下调高糖刺激引起的LPA3（edg-7）mRNA高表达,当姜黄素浓度为20μmol／L时能明显下调高糖刺激引起的系膜细胞LPA3（edg-7）基因表达（P〈0．05）,且随其浓度增高,抑制作用有增强趋势。结论姜黄素能抑制高糖刺激大鼠肾系膜细胞增殖并可下调高糖刺激引起的LPA3（edg-7）基因表达。LPA3（edg-7）基因表达与肾小球系膜细胞增殖成正相关,下调LPA3（edg-7）表达,可能为姜黄素抑制肾小球系膜细胞增殖的作用途径之一。     

肾胺酶减轻高糖诱导的足细胞损伤

目的:探讨肾胺酶对高糖诱导的足细胞损伤的减轻作用及可能机制。方法:利用体外培养的小鼠足细胞,分为对照组(5 mmol/L D-葡萄糖)、甘露醇组(5 mmol/L D-葡萄糖+25 mmol/L甘露醇)、高糖组(30 mmol/L D-葡萄糖)与肾胺酶处理组(重组肾胺酶蛋白60μg/mL预处理6 h+30 mmol/L D-葡萄糖)。48 h后收集细胞,实时定量PCR法测定Ⅳ型胶原α、转化生长因子β1(transforming growth factorβ1,TGF-β1)及单核细胞趋化因子1(monocyte chemoattractant protein 1,MCP-1)的mRNA表达水平;酶联免疫吸附试验测定Ⅳ型胶原α、TGF-β1、MCP-1蛋白表达水平、凋亡相关蛋白caspase-3活性和细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1(cyclin-dependent kinase inhibitor 1,p21)活性。结果:与对照组相比,高糖组足细胞Ⅳ型胶原α、TGF-β1、及MCP-1表达水平显著增高,caspase-3活性增加并伴有p21活性增加(P0.05);与高糖组相比,肾胺酶处理组足细胞Ⅳ型胶原α、TGF-β1、和MCP-1表达水平下调,caspase-3活性和p21活性下调(P0.05)。结论:肾胺酶可减轻高糖诱导的足细胞损伤,可能与其抗炎、抗纤维化、抗凋亡和降低p21的活性有关。     

罗格列酮对高糖时人肾小球系膜细胞单核细胞趋化蛋白-1表达的影响

【目的】探讨高糖对人肾小球系膜细胞（HRMC）单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）表达的影响，以及过氧化物酶增殖体激动剂罗格列酮对其影响及作用机制。【方法】将HRMC分为三组处理：①正常对照组（糖浓度5．5mmol／L）；②高糖（30mmol／L）组；③高糖加罗格列酮（5μmol／L，10μmol／L）组。用反转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）方法检测MCP-1mRNA表达，用EIISA方法测定细胞上清MCP-1蛋白浓度。【结果】高糖刺激系膜细胞后MCP-1mRNA表达明显升高，蛋白浓度增加，加入罗格列酮后MCP-1表达明显下降。且随罗格列酮浓度增大，作用更明显。【结论】高糖刺激HRMC，其MCP-1表达增强，可能是糖尿病肾病（DN）发病机制中的一个重要途径。罗格列酮能抑制MCp-1mRNA表达及蛋白合成，说明其具有抑制炎症的作用，在预防DN的发生发展中可能有重要意义。     

体外培养肾小球系膜细胞转化生长因子β1和血管紧张素Ⅱ表达与过氧化物酶体增殖物激活受体α激动剂的影响

目的:观察过氧化物酶体增殖物激活受体α(Peroxisome proliferators-actived receptor-alpha,PPARα)激动剂对体外培养的肾小球系膜细胞的作用。方法:实验于2005-12/2006-05在泸州医学院附属医院传染免疫实验室完成。实验分组:将培养的大鼠HBZY-1肾小球系膜细胞株分为6组,将高糖作为刺激因子,PPARα激动剂WY14643作为干预因素。分别设①正常组:5.6mmol/L葡萄糖。②高糖组:30mmol/L葡萄糖;③高糖 10,100,500μmol/LWY14643组:30mmol/L葡萄糖 10,100,500μmol/L WY14643。④高糖 WY14643溶剂组:30mmol/L葡萄糖 250μmol/L二甲亚砜 250μmol/L无水乙醇。实验评估:①采用反转录-聚合酶链反应半定量法测定各组肾小球系膜细胞PPARαmRNA和血管紧张素ⅡmRNA表达。②采用免疫细胞化学法检测各组转化生长因子β1蛋白表达。结果:①肾小球系膜细胞PPARαmRNA表达:高糖组肾小球系膜细胞PPARα表达低于正常组(分别为0.21±0.14,0.97±0.25),差异有显著性意义(t=7.742,P<0.05);10,100,500μmol/L WY14643组肾小球系膜细胞PPARα表达高于高糖组(分别为0.52±0.06,0.92±0.22,0.94±0.34,0.21±0.14),差异有显著性意义(t=4.438,7.182,7.213,P<0.05)。②转化生长因子β1表达和血管紧张素ⅡmRNA表达:高糖组肾小球系膜细胞转化生长因子β1、血管紧张素ⅡmRNA表达高于正常组(分别为25.76±0.24,16.43±0.38;0.79±0.23,0.46±0.13),差异有显著性意义(t=4.029,3.563,P<0.05);10,100,500μmol/LWY14643组肾小球系膜细胞转化生长因子β1、血管紧张素ⅡmRNA表达低于高糖组(分别为20.18±0.15,18.59±0.37,16.46±0.31,25.76±0.24;0.43±0.16,0.21±0.09,0.19±0.05,0.79±0.23),差异有显著性意义(P<0.05)。结论:转化生长因子β1、血管紧张素Ⅱ是糖尿病肾病发病的重要致病因子;PPARα激动剂减少转化生长因子β1、血管紧张素Ⅱ的表达可能与其增加PPARα的表达有关。     

益气养阴活血方对肾小球系膜细胞增殖及ERK通路的影响

目的 观察益气养阴活血方含药血清对高糖条件培养的大鼠肾小球系膜细胞增殖及胞外信号调节激酶(ERK)通路的影响.方法 制备益气养阴活血方和福辛普利含药血清.将大鼠肾小球系膜细胞分为正常对照组、高糖培养组、高糖培养+福辛普利含药血清组和高糖培养+三个不同浓度益气养阴活血方含药血清组.培养6 h、12 h、24 h、48 h、72 h后用Western-blot法对系膜细胞中磷酸化ERK1/2(pERK1/2)的表达进行半定量分析,用4-甲偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖.结果 与正常对照组相比,高糖组早期(24 h、48 h)能显著促进系膜细胞增殖,福辛普利和高浓度中药含药血清组均可抑制高糖引起的系膜细胞增殖(P<0.05),两组间无统计学差异(P>0.05).高糖刺激6 h后系膜细胞中pERK1/2蛋白的表达即明显增高,24 h达到高峰,后逐渐减弱,福辛普利和不同浓度中药含药血清干预后,pERK1/2蛋白水平显著下降(P<0.05),中药组和西药组间无统计学差异(P>0.05).结论 益气养阴活血方能抑制肾小球系膜细胞增殖和ERK通路的磷酸化,这可能是其临床肾脏保护作用机制所在.     

血管紧张素Ⅱ对肾小球系膜细胞MCP-1表达的影响

目的观察血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）对大鼠肾小球系膜细胞单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）mRNA表达和蛋白合成的影响,并讨论其机制。方法试验分组：10%小牛血清MEM（含糖5.6 mmol/L,未加其他刺激因素）为对照组（C组）;A1组、A2组和A3组分别在培养液中加不同浓度AngⅡ（10-9mol/L、10-7mol/L和10-5mol/L）。培养48 h后收集各组细胞和细胞上清液,RT-PCR检测肾小球系膜细胞MCP-1mRNA表达,采用ELISA检测培养细胞上清中MCP-1蛋白的浓度。结果①肾小球系膜细胞可表达及合成MCP-1;②与C组比较,A1组、A2组和A3组肾小球系膜细胞MCP-1mRNA表达增强（P〈0.01）;③与C组比较,A1组、A2组和A3组细胞培养上清液MCP-1浓度明显增高（P〈0.01）;④与A1组比较,A2和A3组系膜细胞MCP-1mRNA明显增强,上清液MCP-1浓度显著升高（P〈0.01）,其中以A2组最明显。结论 AngⅡ可刺激肾小球系膜细胞MCP-1mRNA表达和蛋白合成增加,并具有一定的浓度依赖性。     

姜黄素对肾小球系膜细胞过氧化物酶体增殖物激活受体γ基因表达的影响

目的：观察姜黄素对肾小球系膜细胞过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPAR-γ）mRNA基因表达水平的影响。方法：将高浓度葡萄糖液及不同浓度的姜黄素液与肾小球系膜细胞共孵育,用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法,检测各组细胞PPAR-γ mRNA表达强度。结果：单纯高浓度葡萄糖组肾系膜细胞PPAR-γ mRNA表达量（0.394±0.026）显著低于正常对照组（0.995±0.016）,P〈0.01;当姜黄素的浓度达100mg/L时,其PPAR-γ mRNA积分吸光度比值为0.701±0.04,高于高浓度葡萄糖＋姜黄素（25mg/L）组（0.541±0.018）,显著高于高浓度葡萄糖＋姜黄素（6.25mg/L）组（0.432±0.024）,P〈0.01。结论：姜黄素拮抗高浓度葡萄糖对肾系膜细胞PPAR-γ基因表达的抑制作用,上调PPAR-γ mRNA的表达水平。     

不同浓度人羊膜匀浆上清液培养大鼠许旺细胞的增殖

背景：许旺细胞是周围神经修复过程的重要细胞,而研究发现人羊膜细胞分泌的多种细胞因子能够促进许旺细胞增殖。目的：观察不同浓度人羊膜匀浆上清液对鼠许旺细胞（RSC96）生长的影响。方法：使用含体积分数20%胎牛血清的高糖DMEM培养基原代培养RSC96细胞株,传代至第2代用于实验研究。根据人羊膜匀浆上清液在培养基中的不同体积分数（0,10,15,20,25%）分组。结果与结论：人羊膜匀浆上清液的总蛋白浓度为675 mg/L,表皮生长因子、碱性成纤维生长因子和血管内皮生长因子浓度分别为（470.625±2.546）,（4.121±0.026）和（0.172±0.002） ng/L。在培养第1-7天,10%和15%人羊膜匀浆上清液组的增殖率大于20%和25%人羊膜匀浆上清液组（P 0.05）。提示人羊膜匀浆上清液低浓度时（10%和15%）具有促进RSC96增殖作用,高浓度时（20%和25%）抑制RSC96增殖。     

解毒通络保肾法抑制糖尿病肾病炎症发病机制的研究

目的:研究中药解毒通络保肾胶囊对糖尿病(DM)大鼠肾脏病变的保护作用及其机制。方法:将实验动物分为正常对照组、DM组、解毒通络保肾胶囊中药实验组和苯那普利阳性对照组。检测各组第12周的血糖、尿素氮、血肌酐、尿白蛋白排泄率(UAER)、血脂、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)含量和肾脏肥大指标的变化,应用RT-PCR检测MCP-1mRNA,免疫组化检测肾内纤维连接蛋白(FN)和Ⅳ型胶原(ColⅣ)蛋白、PCNA蛋白、NF-κBp65蛋白、MCP-1蛋白、ED-1蛋白表达水平。结果:中药实验组较DM组血糖水平显著降低(P<0.01),UAER明显减少(P<005),尿素氮和血肌酐水平下降,肾脏肥大指标改善(P<0.01);明显降低AngⅡ含量,PCNA、FN和ColⅣ蛋白表达显著低于DM组(P<001)。RT-PCR结果表明,DM大鼠肾皮质MCP-1mRNA表达升高,中药实验组MCP-1mRNA低于DM组(P<0.05)。结论:解毒通络保肾胶囊对DM肾脏病变有保护作用,其机制可能是通过减少肾组织中AngⅡ含量,下调DM大鼠NF-kB,减少MCP-1表达,从而抑制肾内炎症的反应。     

Effect of Misoprostol on Mesangial Cell Growth and Collagen Metabolism

Independent of etiology, progressive chronic renal failure is characterized by accumulation of mesangial matrix and collagenous materials leading to glomerular sclerosis and closure. Pharmacologic intervention aimed at ameliorating this process has significant potential for substantial clinical benefit. We, therefore, assessed the effect of misoprostol on glomerular mesangial cell growth and collagen metabolism. Studies were carried out using a rat glomerular mesangial cell line cloned in our laboratory. At the concentration tested (1 &mgr;M), neither misoprostol nor prostaglandin E(2) had any effect on glomerular mesangial cell proliferation. Misoprostol did not change the absolute synthesis rates for collagen or total protein when measured by (14)C-proline incorporation into protein-associated hydroxyproline and proline respectively. However, the amount of collagen extruded into the medium, as a percentage of protein synthesis, was decreased by 10% in misoprostol-treated cells (p = 0.042). In addition, collagen breakdown was 26% greater in misoprostol-treated cultures (p = 0.044). Misprosotol had no such effects on cell cultures subjected to mechanical stress applied as continuous stretch-relaxation cycles. These results indicate that misoprostol influences mesangial cell collagen metabolism by increasing the rate of endogenous breakdown and decreasing collagen export outside the cell. Misoprostol has no effect on mesangial cell proliferation.