中药脊髓I号对脊髓损伤大鼠背根节CGRP表达的影响

为研究在脊髓损伤后服用中药脊髓I号 (SCI)对背根节 (DRG)神经元降钙素基因相关肽 (CGRP)表达的影响 ,探讨SCI促进脊髓修复再生效应的机制 ,用免疫细胞化学法和定量图像分析法 ,检查了SCI对Wistar大鼠下胸髓半横断损伤诱发的局部DRG神经元CGRP表达的影响。结果发现 :①脊髓半横断引起同侧首、尾向各 3个DRG内CGRP表达的明显和持续性下调 ;②损伤后投给SCI冲剂 ,可以明显减轻、但不能完全阻止脊髓损伤诱发的CGRP表达下调 ;③损伤后投给中药补阳还五汤 ,或用大剂量的氢化可的松治疗 ,不能减轻脊髓损伤诱发的CGRP表达下调 ;④在服用SCI大鼠脊髓的损伤区 ,显示有明显的修复再生。提示 :CGRP表达程度与脊髓损伤及其修复再生的情况相关 ;SCI可能通过对CGRP mRNA基因表达的调节 ,激发损伤脊髓组织的修复再生。     

中药脊髓Ⅰ号对脊髓损伤大鼠背根节CGRP表达的影响

为研究在脊髓损伤后服用中药脊髓I号(SCI)对背根节(DRG)神经元降钙素基因相关肽(CGRP)表达的影响,探讨SCI促进脊髓修复再生效应的机制,用免疫细胞化学法和定量图像分析法,检查了SCI对Wistar大鼠下胸髓半横断损伤诱发的局部DRG神经元CGRP表达的影响.结果发现:①脊髓半横断引起同侧首、尾向各3个DRG内CGRP表达的明显和持续性下调;②损伤后投给SCI冲剂,可以明显减轻、但不能完全阻止脊髓损伤诱发的CGRP表达下调;③损伤后投给中药补阳还五汤,或用大剂量的氢化可的松治疗,不能减轻脊髓损伤诱发的CGRP表达下调;④在服用SCI大鼠脊髓的损伤区,显示有明显的修复再生.提示:CGRP表达程度与脊髓损伤及其修复再生的情况相关;SCI可能通过对CGRP-mRNA基因表达的调节,激发损伤脊髓组织的修复再生.     

一氧化氮合成酶神经化学重塑在脊髓损伤大鼠下尿路功能障碍中的机制及应用

目的 观察完全性脊髓损伤(SCI)大鼠下尿路传入神经一氧化氮合成酶(NOS)的表达及鞘内注射NOS抑制剂对SCI大鼠膀胱测压参数的影响.方法 ①选取SD大鼠24只,随机分为正常对照A组、SCI 1周组、SCI 4周组和SCI 8周组(n=6),SCI1周组、SCI 4周组和SCI 8周组大鼠横断胸10脊髓节段建立完全性SCI模型,免疫组织化学法检测各组大鼠L6～S1脊髓节段神经型NOS(nNOS)和诱导型NOS(iNOS)的表达.②另选取SD大鼠16只,随机分为正常对照B组(n=9)和损伤组(n=7),损伤组大鼠横断胸10脊髓节段建立完全性SCI模型4周后,两组大鼠分别鞘内注射0.1 mL生理盐水、1μmol nNOS抑制剂和1μmoliNOS抑制剂,观察给药前后两组大鼠膀胱测压参数的变化.结果 ①SCI 1周组和SCI 4周组大鼠脊髓后角nNOS阳性表达细胞数[(5.5±2.7)/视野和(10.3±7.9)/视野]显著大于正常对照A组[(2.0±1.5)/视野](P＜0.05),SCI 8周组大鼠脊髓前角nNOS阳性表达细胞数[(6.7±1.5)/视野]显著大于正常对照A组[(4.3±1.5)/视野](P＜0.05).②损伤组大鼠鞘内注射nNOS抑制剂后最大膀胱测压容积[(1.58±0.94)mL]显著大于给药前[(1.06±0.70) mL] (P ＜0.05).结论 脊髓水平一氧化氮可能不参与正常排尿反射过程,一氧化氮相关的神经化学递质的可塑性改变与SCI后自主排尿反射的触发有关,鞘内注射药物调节脊髓水平神经化学递质的表达为SCI后下尿路功能障碍的治疗提供了新思路.     

碱性成纤维细胞生长因子与脊髓损伤

脊髓损伤(spinal cord injury，SCI)后，受损神经元的保护与存活是近年来神经科学界研究的重点。许多研究表明，碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor，bFGF)在体内能促进受损伤神经元的存活和突起生长，体外也能促进损伤神经元的修复与再生。本文拟就bFGF的分子结构，在脊髓中的分布，脊髓损伤后的表达变化及其可能的作用机制及bFGF在脊髓损伤实验性治疗中的研究现状，综述如下。     

电针对脊髓损伤后神经生长相关蛋白GAP-43表达的影响

目的 探讨电针治疗对脊髓损伤(SCI)组织GAP-43表达水平的影响.方法 用Allen氏改良撞击法制作鼠脊髓损伤模型.44只成年Wistar鼠随机分为11组:正常对照组、SCI后第2,4,7,14,28天组和电针(SCI后电针治疗)第2,4,7,14,28天治疗组,每组4只.用HE染色观察损伤脊髓组织病理变化,免疫组化染色检测GAP-43阳性细胞,用免疫印记(western blot)检测脊髓损伤中GAP-43的变化.结果 GAP-43在正常成年鼠脊髓中微量表达,SCI后表达增加,且电针治疗组较SCI组表达差异有显著性(P＜0.01).术后7 d时,SCI组的GAP-43表达达到高峰,14 d时降至接近初始水平,但电针治疗组GAP-43表达仍维持较高水平.结论 电针可增强损伤脊髓组织GAP-43表达水平,促进损伤脊髓神经元再生和修复,对脊髓损伤起保护作用.     

脊髓损伤后反应性星形胶质细胞的分离培养及多能性鉴定

目的探讨脊髓损伤(SCI)后反应性星形胶质细胞(RAS)的多能性,为其对SCI的临床治疗提供理论依据。方法成年大鼠SCI后,分离培养脊髓内RAS;对分离培养的细胞以及诱导分化后细胞行细胞免疫荧光鉴定;在培养RAS的培养基中添加5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU),观察分离培养的细胞的增殖情况。结果分离培养的细胞可同时表达胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和巢蛋白(nestin),诱导分化细胞可表达微球相关蛋白2(MAP-2)、受体相互作用蛋白(RIP)和GFAP,培养基中添加BrdU培养一段时间后细胞球可表达BrdU。结论体内分离培养的成体大鼠SCI后的RAS具有多能性及自我更新潜能,可能作为内源性神经干细胞修复损伤脊髓。     

移植修复脊髓损伤的实验研究方法进展

脊髓损伤(Spinal cord injury,SCI)可因各类事故、运动、暴力等造成，患者常有截瘫等后遗症，生活不能自理。如何促进SCI后的神经再生和功能恢复，治愈截瘫，一直是医学界一大难题。近年来，采用移植方法修复受伤脊髓的实验研究取得了较大进展。周围神经、胚胎中枢神经、多种细胞都被证实能够改善脊髓损伤部位的微环境，促进损伤脊髓的再生和修复；不同移植方法也对实验结果造成影响，现就此进行综述。     

大鼠脊髓损伤后脊髓NOS表达变化研究

目的 观察大鼠脊髓损伤不同时间段一氧化氮合成酶（NOS）的表达变化，证实一氧化氮（NO）在创伤后神经元死亡中的作用和意义。方法 采用NYU大鼠脊髓损伤模型，将体重300－350g的成年Wistar大鼠42只，分为伤后24h、48h、72h、7d、14周、6周7组，每组各6只，应用辅酶Ⅱ黄递酶（NADPH－d)组织化学染色法，观察脊髓不同损伤时间段NOS表达的变化。结果 脊髓损伤后不同时间段NADPH－d阳性标记不同，在损伤晚期星形胶质细胞也出现阳性标记。损伤引起的前角神经元NOS表达与神经元的死亡相一致。结论 NO在创伤后神经元的死亡中起了重要作用，脊髓损伤后胶质细胞中诱导性NOS的表达可能是胶质细胞对损伤或神经元坏死的一种反应。     

胶质细胞源性神经营养因子对脊髓损伤后皮质脊髓束再生的保护作用

目的:观察外源性胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)对大鼠损伤脊髓皮质脊髓束再生的影响.方法:利用Nystrm法制备大鼠胸髓压迫损伤模型.蛛网膜下腔置管至损伤局部,连续1周给予GDNF.应用辣根过氧化物酶 (HRP)顺行追踪技术和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、神经中丝(NF)免疫组化活性的变化来评价外源性GDNF对伤区皮质脊髓束和轴突再生的影响.结果:脊髓损伤后4周GDNF治疗组GFAP表达较对照组明显减少,NF标记轴突数显著多于对照组,皮质脊髓束部分再生并通过损伤区至远端0.5 cm.结论:外源性GDNF局部给药能减少胶质细胞增生,促进脊髓损伤大鼠皮质脊髓束轴突再生和神经骨架蛋白的修复.     

硫酸软骨素酶ABC对大鼠脊髓损伤后硫酸软骨素蛋白多糖与胶质纤维酸性蛋白表达的影响

目的探讨硫酸软骨素酶ABC对严重脊髓损伤(SCI)大鼠硫酸软骨素蛋白多糖(CSPGs)及胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达的影响。方法制作大鼠脊髓横断伤模型,60只大鼠随机分为对照组10只、损伤组25只和治疗组25只。治疗组给予硫酸软骨素酶ABC髓鞘浸润治疗。用免疫荧光组织化学观察脊髓CSPGs的表达;用免疫荧光组织化学及Western-blot方法观察脊髓GFAP的表达。结果 SCI后星形胶质细胞明显活化增殖,CSPGs和GFAP的表达明显增加(P<0.05);治疗组脊髓CSPGs和GFAP的表达均较损伤组减少,差别均有统计学意义(P<0.05)。结论硫酸软骨素酶ABC能够裂解CSPGs,改善SCI区的微环境,改善GFAP蛋白的表达,是修复SCI,促进神经再生的机制之一。     

中药对脊髓损伤大鼠背根神经节c-Jun表达的影响

应用荧光免疫组化法及激光扫描共聚焦显微镜技术,探索中药脊髓I号促进大鼠损伤脊髓修复再生的机制。结果表明,服用脊髓I号后脊髓损伤侧背根节神经元的c-Jun表达明显上调;脊髓损伤侧背根节神经元的细胞核呈完整形态的数量明显增多。提示脊髓I号可能通过对c-Jun基因表达的调节,激发损伤脊髓组织的修复再生。     

中药对脊髓损伤大鼠背根神经节c-Jun表达的影响

应用荧光免疫组化法及激光扫描共聚焦显微镜技术 ,探索中药脊髓Ⅰ号促进大鼠损伤脊髓修复再生的机制。结果表明 ,服用脊髓I号后脊髓损伤侧背根节神经元的c Jun表达明显上调 ;脊髓损伤侧背根节神经元的细胞核呈完整形态的数量明显增多。提示脊髓Ⅰ号可能通过对c Jun基因表达的调节 ,激发损伤脊髓组织的修复再生     

二甲胺四环素对大鼠脊髓损伤后iNOS表达及细胞凋亡的影响

目的探讨大鼠脊髓损伤后应用二甲胺四环素(minocycline)对诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达及细胞凋亡的影响.方法成年大鼠随机分为脊髓损伤后应用二甲胺四环素的治疗组(A组)和应用生理盐水对照组(B组),损伤后不同时间点取材,用HE染色观察损伤脊髓组织病理变化;用免疫组化染色检测iN-OS的表达变化;原位末端标记法(TUNEL法)标记凋亡细胞;采用开放场地试验BBB评分和斜板试验,评价神经功能.结果HE染色镜检发现脊髓组织病理学改变A组明显轻于B组.A、B两组均发现凋亡细胞及iNOS表达,神经细胞凋亡指数及iNOS表达均为B组＞A组(P＜0.05).治疗组神经功能改善优于B组.结论二甲胺四环素能抑制大鼠脊髓损伤后iNOS表达及细胞凋亡.     

神经损伤与再生中GAP-43mRNA表达和蛋白合成的实验研究

目的：研究周围神经损伤与再生过程中生长相关蛋白（Growth-associated protein,GAP-43)mRNA表达和蛋白质合成的变化规律。方法：建立大鼠坐骨神经中段钳夹损伤模型，用原位杂交和免疫组化技术观察大鼠腰髓和背根神经节的GAP－43mRNA表达和蛋白质合成变化。结果：大鼠坐骨神经损伤后，腰髓腹角运动神经元和感觉神经元GAP－43mRNA表达和蛋白质合成增强。结论：周围神经损伤与再生中GAP-43mRNA表达显著增强，神经再生完成后表达减弱，表明GAP－43在神经再生过程中起重要作用。     

血小板衍生生长因子对糖尿病脊髓损伤大鼠功能恢复的研究

Background Prospective mortality study revealed that mortality was elevated in diabetes compared to US rates in chronic spinal cord injury (SCI). Our study was conducted to investigate the platelet-derived growth factor (PDGF) of astrocyte expression changes in spinal cord injury on streptozotocin (STZ)-induced diabetic rats. Methods Thirty male SD rats were randomly divided into 3 groups: spinal cord injury group, diabetic spinal cord injury group and sham operation control group. We employed streptozotocin (STZ)-induced diabetic Sprague-Dawley rats for four weeks and used a weight-drop contusion SCI model. Rats were sacrificed on day 7 after induction of spinal cord injury model. The immunohistochemistry and western blot analysis of were used to detect the PDGF expression level. BBB was also used to evaluate the neurological recovery level of the rats. Results 7 days after acute spinal injury, the diabetic spinal injury group showed the slower recovery speed in motor function as lower BBB score. We also found the PDGF positive astrocytes number and light density were significantly more high and intensive in SCI group than the diabetic SCI group (P<0.05). Conclusion PDGF as an important factor for the recovery of neurological function after acute spinal injury and the hyperglycemia in diabetic rats could depress the expression of PDGF in injured spinal cord, which may help to explain the slower recovery and higher mortality in diabetes after spinal cord injury.     

脊髓损伤后胶质纤维酸性蛋白的表达及其意义

目的：研究脊髓损伤（SCI）后脊髓组织星形胶质细胞中胶质纤维酸性蛋白（GFAP）表达的变化，探讨反应性胶质化在脊髓损伤中的作用。方法：SD大鼠25只，随机分成5组（n＝5）；正常对照组，伤后1天组，伤后4天组，伤后7天组和伤后14天组，用免疫组织化学染色及图像分析的方法观察星形胶质细胞中GFAP的表达，和大量综合行为评分法（CBS）对各级大鼠神经功能评分。结果：SCI后星形胶质细胞中GFAP的表达与对照组比较明显增高（P＜0．01），1－14天内呈进行性增高趋势，损伤各组的CBS1－14天内呈降低趋势，两指标有显著的相关性（r=-0.775,P＜0．001）。结论：SCI后星形胶质细胞通过其反应性胶质化对脊髓的再生和自身修复起着重要作用。     

大鼠脊髓半切损伤后突触分化诱导基因产物SynDIG1的表达增强

目的 探讨大鼠脊髓半切损伤后(spinal cord injury, SCI) 突触分化诱导基因产物(synapse differentiation induced gene 1,SynDIG1)的表达变化及意义.方法 SD大鼠随机分成对照组和脊髓损伤组(n=75),切断大鼠脊髓一半作为实验模型,只咬除椎板而不损伤大鼠脊髓作为对照模型.在手术后7、14、21、28、35天采集损伤区域的脊髓组织,用免疫荧光和免疫印迹技术检测各组各时间点SynDIG1的蛋白表达,并且与半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)、神经生长蛋白43(GAP-43)等神经元特异性标志物做免疫荧光双标技术检测.结果 在脊髓损伤后第7天就发现神经元有SynDIG1表达,在第28天达到高峰,随后维持在较高水平.通过免疫荧光双标技术发现脊髓损伤后SynDIG1与GAP-43存在共表达.结论 脊髓损伤后中期神经元大量表达SynDIG1,激活了神经生长因子,促进神经元再生,有利于神经系统的修复.     

慢性渐进性压迫对大鼠行为功能及脊髓bcl-2和bax基因表达的影响

目的:观察脊髓慢性受压后实验动物的行为功能与bcl_2和bax基因表达的变化。方法:以30只Wistar大鼠为受试对象,采用大鼠后路渐进性脊髓压迫模型,然后进行联合行为评分(CBS)、常规病理和免疫组化,用原位末端标记法(TU ENL)检测凋亡基因bcl_2和bax的表达。结果:免疫组化示实验组bax阳性细胞数明显增多,且CBS升高(P<0.05)。TUENL结果示对照组有极少量散在的凋亡标记阳性细胞,而实验组则出现大量的阳性细胞,凋亡指数高。结论:脊髓受压促进大鼠脊髓神经元合成bax蛋白,从而影响实验动物的行为功能。