PDTC对ox-LDL诱导的THP-1巨噬细胞脂质蓄积和胆固醇流出的影响

目的研究核因子-κB(NF-κB)抑制剂二硫代氨基甲酸吡咯烷（PDTC）对THP-1巨噬细胞脂质蓄积和胆固醇流出的影响。方法 60 nmol/L PMA孵育THP-1巨噬细胞24 h后,分为3组：对照组、氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）组（100 μg/mL）和PDTC组（100 μg/mL ox-LDL+50 μmol/L PDTC）。用油红O染色观察细胞内脂质蓄积情况,高效液相色谱分析法检测细胞内胆固醇水平,用液体闪烁计数法观察细胞内胆固醇的流出。 结果 PDTC抑制ox-LDL诱导的THP-1巨噬细胞脂质蓄积,明显降低细胞内总胆固醇、游离胆固醇和胆固醇酯的含量,增加载脂蛋白A-Ⅰ(apoA-Ⅰ)介导的胆固醇流出,但对HDL介导的胆固醇流出无明显影响。结论 PDTC抑制ox-LDL诱导的THP-1巨噬细胞脂质蓄积,促进apoA-Ⅰ介导的胆固醇流出。     

血红素氧化酶-1抑制氧化低密度脂蛋白诱导的THP-1源性巨噬细胞血凝素样氧化低密度脂蛋白受体-1的表达

目的：探讨氧化低密度脂蛋白（OX-LDL）诱导的血红素氧化酶（HO）-1对THP-1源性巨噬细胞血凝素样氧化低密度脂蛋白受体（LOX）-1表达的影响。方法：不同浓度（0．0、25．0、50．0、100．0mg／L）OX-LDL刺激THP-1源性巨噬细胞;Westernblot检测H0-1蛋白表达。用10gmol／LZnPPIX（HO．1抑制剂）和CoPPIX（HO．1诱导剂）干预THP．1源性巨噬细胞12h后,再用100mg／LOX-LDL刺激24h;用RT-PCR和Westernblot分别检NLOX-1mRNA和蛋白表达。结果：OX-LDL组可上调HO．1蛋白表达,呈明显剂量．效应关系（P〈0．01）。CoPPIX组LOX．1mRNA和蛋白表达较100mg／LOX．LDL组明显下降（P〈0．01）。结论：OX-LDL可上调THP-1源性巨噬细胞HO-1的表达;诱导HO-1的高表达可抑制THP一1源性巨噬细胞LOX．1的表达。     

MicroRNA155通过下调清道夫受体表达抑制巨噬细胞泡沫化形成

 探讨microRNA-155(miR-155)对巨噬细胞泡沫化过程的影响及机制。【方法】 实时定量PCR检测miR-155的表达,Western Blot方法检测巨噬细胞A类清道夫受体SR-A和B型清道夫受体CD36的表达,激光共聚焦显微镜观察miR-155对THP-1结合、摄取DiI标记氧化型低密度脂蛋白(DiI-oxLDL)能力的影响。【结果】 80μg/mL的氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)时间依赖性地诱导巨噬细胞miR-155表达上调。过表达miR-155抑制SR-A和CD36的表达,同时巨噬细胞结合、摄取DiI-oxLDL的能力明显降低。而反义-miR-155则明显上调SR-A和CD36的表达,同时巨噬细胞结合、摄取DiI-oxLDL的能力明显增强。【结论】 MiR-155通过降低巨噬细胞SR-A和CD36的表达抑制巨噬泡沫细胞的形成。     

白藜芦醇对H2O2诱导的THP-1源性巨噬细胞氧化损伤的影响

目的 探讨白藜芦醇(Res)对H2O2诱导的THP-1源性巨噬细胞氧化损伤的影响.方法 采用H2O2处理培养THP-1源性巨噬细胞,造成氧化应激模型.不同终度的Res预作用THP-1源性巨噬细胞组1 h后加入300 μmol/L H2O2作用24 h.应用MTT比色法检测细胞存活率,黄嘌呤氧化法检测超氧化物歧化酶(SOD)的活力,硫代巴比妥酸比色法检测丙二醛(MDA)含量.结果 与空白对照组比较,不同浓度H2O2处理THP-1源性巨噬细胞24 h后,THP-1源性巨噬细胞的存活率呈剂量依赖性下降(P<0.05).Res预处理组的细胞存活率均高于模型组(300 μmol/L H2O2)(P<0.05),且以40 μmol/L Res作用效果最佳.40~100 μmol/L Res预处理组与模型组相比,MDA的含量明显减少,SOD的活力升高(P<0.05).结论 Res可减轻H2O2对THP-1源性巨噬细胞的损伤程度,其机制可能与其抗氧化作用有关.     

应激性肾上腺素对THP-1源性巨噬细胞TGF-β1与SR-AI mRNA表达的影响

目的 探讨心理应激时肾上腺素对THP-1源性巨噬细胞TGF-β1与SR-AI mRNA表达的影响。方法 不同浓度肾上腺素（1pmol／L～1μmol／L）处理THP-1源性巨噬细胞24h，运用逆转录多聚酶链反应检测其TGF-β1与SR-AI mRNA表达。结果 1～10nmol／L的肾上腺素对受试基因mRNA的表达与相应对照组比较差异无显著性意义（P〉0．05）。而100nmol／L及1μmol／L的肾上腺素下调TGF-β1 mRNA水平和上调SR-AI mRNA水平，与各自对照组比较差异均有显著性意义（P〈0.05）。结论 一定浓度的肾上腺素可下调THP-1源性巨噬细胞TGF-β1 mRNA水平，上调其SR-AI mRNA水平。     

吡格列酮对THP-1源性巨噬细胞胆固醇流出调节蛋白ABCA1,ABCG1及SR-BⅠ表达的影响

目的:探讨吡格列酮对THP-1源性巨噬细胞ATP结合盒转运蛋白A1 (ABCA1)、ATP结合盒转运蛋白G1(ABCG1)及B族Ⅰ型清道夫受体(SR-B Ⅰ)表达的影响及可能作用机制.方法:Real time PCR及Westernblot检测不同浓度吡格列酮(1,10,20,30 μmol/L)作用24 h,THP-1源性巨噬细胞ABCA1,ABCG1及SR-BⅠmRNA和蛋白的表达.使用过氧化物酶体增殖物激活型受体γ(PPARγ)特异性拮抗剂GW9662(2 μmol/L)阻断吡格列酮(10 μmol/L),24 h后检测THP-1源性巨噬细胞ABCA1,ABCG1及SR-B Ⅰ mRNA和蛋白的表达.结果:吡格列酮可浓度依赖性增高24 h THP-1源性巨噬细胞ABCA1,ABCG1及SR-BⅠ mRNA和蛋白的表达,GW9662可显著抑制吡格列酮诱导的THP-1源性巨噬细胞ABCA1,ABCG1及SR-BⅠ mRNA和蛋白表达的增高(P＜0.05).结论:吡格列酮激动PPARγ上调THP-1源性巨噬细胞胆固醇流出调节蛋白ABCA1,ABCG1及SR-BⅠ基因的表达.     

穗花杉双黄酮激活PPAR-α/γ抑制THP-1源性巨噬细胞向M1型极化

目的 探讨穗花杉双黄酮调节体外诱导的M1型巨噬细胞极化的相关机制。方法 设实验组、溶媒对照组和无药对照组,实验组：不同浓度的（5、10 μmol/L）穗花杉双黄酮干预用联合脂多糖及重组人干扰素-γ诱导的M1型巨噬细胞;溶媒对照组：溶媒3‰DMSO;无药对照组：不加穗花杉双黄酮处理。显微镜下观察细胞形态学;通过ELISA检测干预后细胞上清液L-6、IL-10、TNF-α、TGF-β各自的表达水平;通过CCK-8法检测计算出穗花杉双黄酮对细胞的安全浓度;通过分子对接建模确定穗花杉双黄酮的靶蛋白,利用RT-qPCR、Western blot检测L-6、IL-10、TNF-α、TGF-β、PPAR-α/γ、Arg-1、Fizz1基因和蛋白表达。结果 穗花杉双黄酮干预后可以阻止被诱导引起的THP-1细胞向M1极化;穗花杉双黄酮可下调M1极化时高表达的IL-6、TNF-α的mRNA,上调M2型主要标志细胞因子IL-8和TGF-β的mRNA表达（P<0.05）,同时上调M1极化状态下的细胞内Arg1和Fizz1蛋白的表达（P<0.05）。随着穗花杉双黄酮浓度的增加和作用时间的延长,其抑制细胞的增殖效果增强（P<0.05）,且高浓度具有杀伤作用。穗花杉双黄酮可与PPAR-α/γ关键靶点蛋白活性位点非共价结合并激活该蛋白。结论 穗花杉双黄酮可通激活PPAR-α/γ,恢复Arg-1、Fizz1基因表达,抑制巨噬细胞向M1型分化。     

PCSK9 siRNA对THP-1源性巨噬细胞CD36?SR-A1及SR-B1表达的影响

目的:研究前蛋白转换酶枯草溶菌素9(PCSK9) siRNA对THP-1源性巨噬细胞CD36?SR-A1及SR-B1表达的影响?方法:以THP-1源性巨噬细胞为研究对象,应用Lipofectamine 2000转染不同浓度PCSK9 siRNA进THP-1源性巨噬细胞中,RT-PCR及Western blot筛选出最有效的siRNA,再转染入THP-1源性巨噬细胞,24 h后加入ox-LDL处理24 h,采用油红O染色检测细胞内脂质蓄积情况,RT-PCR分析细胞CD36?SR-A1及SR-B1表达?结果:浓度为80 nmol/L的PCSK9 siRNA基因沉默效应最佳;油红O染色结果表明ox-LDL组细胞内脂质蓄积情况最为明显,PCSK9 siRNA转染组次之;PCSK9 siRNA转染组CD36 mRNA表达水平相对于ox-LDL组降低(P < 0.05),而ox-LDL组和PCSK9 siRNA转染组SR-A1及SR-B1 mRNA表达无明显差异?结论:PCSK9可能通过影响摄取脂质的细胞膜表面受体CD36表达,参与动脉粥样硬化的发生发展?     

氧化低密度脂蛋白对THP-1巨噬细胞CD36表达的影响

目的：观察氧化低密度脂蛋白（oxLDL）对THP—1巨噬细胞CD36表达和细胞胆固醇流人的影响，探讨CD36在巨噬细胞胆固醇流人中的作用？方法：用50mg／LoxLDL分别孵育THP—1巨噬细胞不同时间（0、12、24、36和48h），采用逆转录-聚合酶链式反应（RT—PCR）和Western印迹分别检测CD36 mRNA和蛋白质的表达；用油红O染色观测细胞内脂质蓄积情况；用液体闪烁计数法检测[^3H]胆固醇流人。结果：50mg／L oxLDL孵育THP-1巨噬细胞不同时间（0、12、24、36和48h），THP—1巨噬细胞CD36 mRNA及蛋白质表达上调，油红O染色可见细胞内脂滴逐渐增加，液体闪烁计数发现THP—1巨噬细胞胆固醇流人增加，分别为23．5％、27．8％、39．7％、44．1％和49．7％。结论：oxLDL可使THP-1巨噬细胞CD36表达上调，并使细胞胆固醇流人增加。     

黄连降脂合剂对AS大鼠气体信号分子H_2S调控的影响

目的观察黄连降脂合剂对AS大鼠气体信号分子硫化氢(H2S)调控的影响,并探讨黄连降脂合剂抗动脉粥样硬化(AS)的作用机制。方法采用高脂饲料喂养联合大剂量维生素D3腹腔注射复制大鼠动脉粥样硬化模型。随机分为正常组、模型组、黄连降脂合剂组、氟伐他汀组。12周以后酶法检测血脂,HE染色观察腹主动脉病理变化情况,采用去蛋白法检测H2S含量。结果正常组几乎无表达,中药组和氟伐他汀组组与模型组比较明显升高(P0.01);中药组与氟伐他汀组比较,H2S水平升高明显(P0.05)。结论黄连降脂合剂可能通过上调H2S的水平,从而防治AS形成。     

NF-κB途径介导Chemerin抑制THP-1源性巨噬泡沫细胞ABCAl表达和降低胆固醇外流

目的观察脂肪因子Chemerin是否调节胆固醇流出和巨噬泡沫细胞脂滴蓄积,以及对巨噬泡沫细胞ATP结合盒转运子A1(ATP-binding cassette transporter A1,ABCA1)和酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶-1(Acyl-CoA:choles-terol acyltransferase-1,ACAT1)表达和NF-κB活化的影响。方法佛波酯(phorbol myristate acetate,PMA)诱导THP-1单核细胞分化为巨噬细胞,随后加入胆固醇和ox-LDL培养促进巨噬细胞转化为巨噬泡沫细胞,免疫荧光染色检测巨噬细胞表面抗原CD68的表达,油红O染色后观察泡沫细胞形态,脂肪因子Chemerin干预巨噬泡沫细胞,应用液体闪烁计数仪检测胆固醇流出变化,油红O染色观察细胞内脂滴变化,实时PCR和Western blot检测ABCA1及ACAT1mR-NA和蛋白表达水平。Sandwich ELISA法检测巨噬泡沫细胞NF-κB活化情况。实时PCR检测NF-κB抑制剂四氢化吡咯二硫代氨基甲酸酯(PDTC)预处理后,Chemerin再干预时ABCA1表达的变化。结果 Chemerin抑制巨噬细胞内胆固醇流出,促进脂滴蓄积,下调ABCA1mRNA和蛋白的表达,增加NF-κB活化,差异有统计学意义(均P<0.05),且ABCA1mRNA表达与Chemerin浓度呈负相关,r=-0.936(P<0.05),NF-κB活化程度与ABCA1mRNA表达呈负相关,r=-0.917(P<0.05),但Chemerin对ACAT1mRNA和蛋白的表达无明显影响,PDTC预处理能够逆转ABCA1mRNA表达抑制。结论 Chemerin下调ABCA1mRNA和蛋白的表达,抑制THP-1巨噬泡沫细胞内胆固醇外流,增加细胞内脂滴蓄积,NF-κB活化可能是Chemerin抑制ABCA1mRNA表达的信号通路之一。     

宫颈癌细胞培养上清液诱导THP-1巨噬细胞M2表型

目的：研究宫颈癌细胞培养上清液诱导并维持THP-1巨噬细胞M2表型的作用。方法：培养宫颈癌 细胞系HeLa细胞至第3天,收集细胞培养上清液用以检测肿瘤相关细胞因子（IL-4、IL-6及IL-10）及生长因 子（ANG -2、HGF、VEGF）分泌情况。将培养至对数生长期的巨噬细胞分为空白对照组（Mθ组）、M2细胞诱导组（M2组）以及HeLa细胞培养上清液处理组（Mθ+sHeLa组）。其中M2组予以20ng/mLIL-4、20ng/mLIL-10处理 使其向M2细胞极化,Mθ+sHeLa组加入50%HeLa细胞培养上清液处理培养3d。随后,利用流式细胞术检测 各组细胞表面HLA-DR、CD163、CD206的变化;同时,收集细胞培养上清液并检测其中相关细胞因子、生长 因子及TGF-β3的含量。最后,采用流式细胞术及Westernblot检测巨噬细胞中JAK-STAT6信号通路的变化。 结果：HeLa细胞培养上清液中IL-6、HGF、VEGF含量较多。经过HeLa细胞培养上清液处理后的巨噬细胞表面 CD163和CD206含量升高（ P ＜0.05）。相较于Mθ组,M2组及Mθ+sHeLa组的巨噬细胞培养上清液中的相关细胞 因子（IL -4、IL-6及IL-10）、生长因子（ANG -2、HGF、VEGF）及TGF-β3含量升高（ P ＜0.05）。去除HeLa细胞培 养上清液后48h后,相较于Mθ组,Mθ+sHeLa组分泌相关细胞因子、生长因子及TGF-β3含量升高（ P ＜0.05）。 流式细胞术及Westernblot结果显示,与Mθ组比,Mθ+sHeLa组的pSTAT6水平升高（ P ＜0.05）。结论：HeLa 细胞培养上清液可通过激活JAK-STAT6信号通路诱导的THP-1巨噬细胞向M2表型的极化促进肿瘤的生长和血 管生成。     

黄芩苷对高脂诱导HepG2细胞脂肪沉积及SIRT1相关因子表达的影响

目的 研究黄芩苷(Baicalin,BA)对游离脂肪酸(FFA)诱导HepG2细胞脂肪沉积的影响及机制研究.方法 选用0.75mmol/L的FFA体外诱导HepG2细胞24h,建立体外脂肪沉积模型.将细胞分为正常组、模型组、黄芩苷低、中、高剂量组.利用油红O染色及GPO-PAP酶法检测各组细胞内甘油三酯(TG)含量的变...     

谷氨酸转运体-1在H2S保护PC12细胞对抗化学性低氧损伤中的作用

目的探讨谷氨酸转运体-1（GLT-1）在硫化氢（H2S）保护PC12细胞对抗化学性低氧损伤中的作用。方法应用化学性低氧模拟剂氯化钴（CoCl2）处理PC12细胞建立化学性低氧损伤模型作为研究对象。实验分为6组,正常对照组：未经任何药物处理的PC12细胞;CoCl2处理组：PC12细胞用600μmol/L的CoCl2处理24h或48h;H2S单独处理组;H2S预处理组：400μmol/L NaHS（H2S的供体）提前30min作用PC12细胞,然后与CoCl2一起再作用24h或48h;DHK（一种GLT-1抑制剂）单独处理组;DHK阻断组：在NaHS预处理前30min,给以400μmol/L DHK,然后按H2S预处理组继续处理。应用蛋白免疫印迹法（Western bolt）检测GLT-1蛋白表达;CCK-8比色法测定细胞存活率;Hoechst33258核染色法检测细胞凋亡的形态学改变及数量改变;罗丹明123（Rh123）染色及荧光显微镜照相测定线粒体膜电位（MMP）。结果 600μmol/L CoCl2处理PC12细胞24h可使GLT-1表达明显减少;在CoCl2处理PC12细胞前应用400μmol/L NaHS预处理30min能明显地阻断CoCl2对GLT-1表达的抑制作用;400μmol/L的GLT-1抑制剂DHK能阻断H2S保护PC12细胞对抗CoCl2诱导的损伤作用,使细胞存活率降低,凋亡细胞数量及MMP丢失增多。结论上调GLT-1表达可能是H2S保护PC12细胞对抗CoCl2损伤的作用机制之一。     

硫化氢对大鼠内毒性急性肺损伤炎性反应及单免疫球蛋白白介素-1相关蛋白表达的影响

目的 探讨吸入硫化氢（hydrogen sulfide,H₂S）对脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）诱导人肺泡上皮A549细胞炎性反应及单免疫球蛋白白介素-1受体相关蛋白（single immunoglobin IL-1 receptor related protein,SIGIRR）表达的影响。方法 雄性SD大鼠40只分4组,每组10只。正常小鼠组;H₂S吸入组：仅吸入H₂S 80mg/m³ 6h;ALI模型组：腹腔注射15mg/kg LPS;ALI+H₂S吸入组：腹腔注射15mg/kg LPS 1h后即吸入H₂S 80mg/m³ 6h,实验结束处死大鼠,观察肺组织病理学改变;ELISA法测肺组织匀浆及血浆中TNF-α及IL-1β水平;Western blot法检测肺组织SIGIRR蛋白表达水平。结果 与正常大鼠及吸入H₂S组比较,ALI模型组大鼠出现典型急性肺损伤病理改变,肺损伤评分升高（P<0.05）,肺组织匀浆及血浆中TNF-α及IL-1β水平增加（P <0.05）;而给予吸入H₂S后,可减轻大鼠肺损伤程度（P<0.05）,肺组织匀浆及血浆中TNF-α及IL-1β水平下降（P<0.05）,且与ALI模型组相比,给予吸入H₂S后可上调肺损伤大鼠肺组织内SIGIRR的表达。结论 吸入H₂S对内毒素性急性肺损伤大鼠具有保护作用,抑制肺组织匀浆及血浆中炎性因子产生,促进负调控分子SIGIRR表达是可能的分子机制。     

电针丰隆穴对高脂血症患者血脂水平及对巨噬细胞ABCA1表达的影响

目的 探究电针丰隆穴对高脂血症患者的降脂疗效及对巨噬细胞与人血清共培养ATP结合盒转运子A1（ATP binding cassette transporter A1,ABCA1）表达的影响。方法 将120例辨证为痰浊阻遏证高脂血症患者,随机分为电针组、药物组与对照组,每组40例。电针组予以电针针刺丰隆穴治疗;药物组予以口服血脂康治疗;对照组不予以特殊处理。观察治疗前后及治疗后3个月、6个月3组患者总胆固醇（total cholesterol,TC）、三酰甘油（triacylglycerol,TG）、高密度脂蛋白胆固醇（high-density lipoprotein cholesterol,HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（low-density lipoprotein cholesterol,LDL-C）水平的变化;分别采用RT-PCR法和免疫印迹法检测3组患者巨噬细胞ABCA1 mRNA及其蛋白的表达水平。结果 药物组和电针组总有效率均高于对照组（P＜0.05）。药物组和电针组治疗后TG、TC、LDL-C水平均较治疗前显著下降（P＜0.05）,两组治疗前后TG、TC、LDL-C水平降低程度显著大于对照组（P＜0.05）,两组TG、TC、LDL-C水平差值比较,差异均无统计学意义（P＞0.05）。电针组治疗后3个月、6个月TC、TG、LDL-C水平与治疗后比较,差异均无统计学意义（P＞0.05）,药物组治疗后3个月、6个月TC、TG、LDL-C水平均较治疗后显著上升（P＜0.05）;两组治疗后、治疗后3个月、6个月TC、TG、LDL-C水平仍显著低于对照组（P＜0.05）。药物组、电针组ABCA1 mRNA及蛋白表达水平均明显高于对照组（P＜0.05）;两组间ABCA1 mRNA及蛋白表达水平比较,差异无统计学意义（P＞0.05）。结论 电针丰隆穴可降低高脂血症患者TC、TG、LDL-C水平,且疗效较药物组稳定,可促进巨噬细胞ABCA1 mRNA和蛋白的表达,促进胆固醇逆转运,降低巨噬细胞胆固醇负荷,减轻炎症反应,从而防治动脉粥样硬化性心脑血管疾病。     

胰高血糖素样肽-1受体激动剂改善高果糖饮食诱导的胰岛素抵抗大鼠肝脏脂质沉积机制研究

背景 非酒精性脂肪性肝病发病率逐年升高但无特效药物,临床和基础研究显示降糖药物胰高血糖素样肽-1(GLP-1)受体激动剂能改善肝脏脂质沉积,但具体机制不明确。目的 探讨GLP-1受体激动剂改善高果糖诱导的胰岛素抵抗大鼠肝脏脂质沉积的机制。方法 2016年1—4月选取Wistar大鼠36只随机分为对照（ND）组和造模组,ND组给予普通饲料、造模组给予高果糖饲料喂养,8周后行高胰岛素-正葡萄糖钳夹实验证实造模组胰岛素抵抗形成,继续将造模组大鼠随机分为高果糖（HFD）亚组和高果糖+艾塞那肽（HFD+Ex）亚组,HFD+Ex亚组给予艾塞那肽注射液腹部皮下注射4周后,观察糖脂水平、胰岛素抵抗、肝脏脂质沉积、β-catenin表达和核转位以及脂质合成通路因子的变化。进一步用转染技术在HepG2细胞用小干扰RNA抑制β-catenin的表达观察细胞脂质沉积和脂质合成通路相关因子的变化,将HepG2细胞用25 mmol/L果糖和100 nmol/L exendin-4处理,未转染的细胞用作对照,全部细胞分为正常对照（Con）组、高果糖（HF）组、高果糖+exendin-4(HF+Ex4)组、高果糖+e...