溶质载体家族22成员14和精子相关抗原6在特发性弱精子症患者精子中的表达

目的:探讨溶质载体家族22成员14(SLC22A14)和精子相关抗原6(SPAG6),在特发性弱精子症患者精子中的表达情况。方法:收集精子库合格捐精者(正常对照组)和特发性弱精子症患者(弱精子症组)各50例精子样本,采用非连续密度梯度离心纯化精子,分别用RT-PCR和Western印迹检测SLC22A14、SPAG6 mRNA及蛋白的表达。结果:RT-PCR检测结果显示,弱精子症组的SLC22A14、SPAG6 mRNA表达均显著低于正常对照组(SLC22A14:0.53±0.10 vs 0.77±0.08,t=12.834,P0.01;SPAG6:0.52±0.10 vs 0.77±0.06,t=13.755,P0.01),Western印迹检测结果显示,弱精子症组的SLC22A14和SPAG6蛋白表达量同样均显著低于正常对照组,分别为(SLC22A14:0.55±0.10 vs 0.80±0.09,t=12.884,P0.01;SPAG6:0.56±0.09 vs 0.78±0.09,t=12.257,P0.01)。结论:在特发性弱精子症患者中SLC22A14和SPAG6表达降低可能是导致弱精子症的重要原因之一。     

健康男性和弱精子症患者精液精子中GP130的表达

目的观察在正常和活动力低下的人精液精子中白细胞介素-6(IL-6)及其受体(IL-6R)和GP130的表达差异。方法收集活动力正常的人精液精子和A、B级精子低于20％的弱精子症患者的精液精子,采用逆转录-聚合酶链反应 (RT-PCR)和免疫细胞化学的方法检测IL-6及其受体和GP130的表达水平。结果与活动力正常的精液精子比较, GP130在活动力低下患者精液精子的表达显著降低(P<0．01),本实验未检测到IL-6和IL-6R在人精液精子的表达。结论精液精子GP130的表达减少与人精子活动力低下相关,提示GP130表达减少可能是精子活动力低下的原因之一。     

TEKT4蛋白在特发性弱精子症患者精子中的表达

目的:探讨TEKT4蛋白在特发性弱精子症发生机制中的作用。方法:采用非连续密度梯度离心分离和纯化特发性弱精子症患者和正常男性精子,采用RT-PCR和Western印迹方法,从mRNA和蛋白水平检测TEKT4的表达及其差异。结果:RT-PCR结果表明,TEKT4 mRNA在特发性弱精子症患者精子中的表达水平与正常男性相比显著降低(0.59±0.13 vs 0.75±0.15,t=4.325,P<0.05);Western印迹结果与RT-PCR结果一致,TEKT4蛋白在特发性弱精子症患者精子中的表达水平与正常男性相比亦显著降低(0.48±0.14 vs 0.69±0.13,t=5.939,P<0.05)。结论:特发性弱精子症患者精子中TEKT4表达水平显著降低,可能是导致弱精子症发生的重要环节之一。     

SEPT4蛋白在特发性弱精子症患者精子中的表达

目的:探讨SEPT4蛋白在特发性弱精子症发生机制中的作用。方法:采用非连续密度梯度离心分离和纯化精子,免疫细胞化学技术检测SEPT4在特发性弱精子症患者和正常男性精子中的定位及表达变化,同时用RT-PCR和W estern印迹技术,从基因和蛋白水平检测SEPT4的表达及差异。结果:免疫细胞化学表明,SEPT4定位于精子环并且在特发性弱精子症患者精子中的表达显著低于正常男性(94.75±19.95vs111.51±17.57,t=3.452,P<0.01);RT-PCR显示,特发性弱精子症患者精子中SEPT4 mRNA的表达水平与正常男性相比显著降低(0.56±0.15vs0.71±0.16,t=3.521,P<0.05);W estern印迹结果与RT-PCR结果一致,SEPT4蛋白在特发性弱精子症患者精子中的表达亦显著低于正常男性(0.48±0.20vs0.77±0.18,t=5.872,P<0.05)。结论:SEPT4在特发性弱精子症患者精子中的表达水平显著降低,可能是导致弱精子症发生的原因之一。     

麻疹实验室诊断中病毒抗原与RNA检测的对比研究

目的：单克隆抗体检测麻疹病毒抗原与一步法RT-PCR检测麻疹病毒RNA在实验室诊断中的对比。方法收集疑似麻疹患者咽拭子标本。出疹3 d后血清抗麻疹病毒IgM抗体阳性者咽拭子纳入对比试验。用荧光标记的鼠抗麻疹病毒单克隆抗体检测标本中麻疹病毒抗原成份;用一步法RT-PCR结合Taqman技术检测麻疹病毒RNA成份。结果82份疑似麻疹患者抗麻疹病毒IgM抗体阳性率81.71%（67/82）。67例确诊病例标本单克隆抗体间接免疫荧光阳性率88.06%（59/67）;一步法RT-PCR结果阳性率98.51%（66/67）。结论麻疹病毒RNA的一步法RT-PCR结合Taqman检测敏感性高于其抗原的间接免疫荧光检测。     

人前列腺干细胞抗原在前列腺组织中的表达

目的：克隆人前列腺干细胞抗原(PSCA)基因，并利用半定量逆转录聚合酶链反应(RT—PCR)对其组织表达谱进行分析。方法：从人前列腺癌组织提取总RNA，利用RT—PCR技术扩增出人PSCA基因编码区序列，并通过半定量RT—PCR方法检测6例人新鲜正常前列腺组织、16例前列腺增生组织及11例前列腺肿瘤组织中PSCA基因表达水平。结果：序列测定表明，克隆获得的369bp片段与文献报道的人PSCA基因编码区cDNA序列一致，PSCA为前列腺组织特异表达，在前列腺癌组织中的表达明显高于前列腺增生及前列腺正常组织。结论：PSCA是一种新的前列腺肿瘤标记物。     

肿瘤-睾丸抗原在胃癌组织中的表达

目的 检测8种肿瘤-睾丸抗原(CTA)基因mRNA在胃癌组织及相应癌旁组织中的表达.方法 用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测55例胃癌患者的癌组织和相应癌旁组织中8种CTA基因mRNA的表达,30例非肿瘤患者胃黏膜组织作为对照.结果 55例胃癌组织中,表达MAGE-A1、MAGE-A3、CT9、CT10、NY-ESO-1、SSX-1、SSX-2、SXX-4基因的阳性率分别是60.0%(33/55)、30.9%(17/55)、34.5%(19/55)、12.7%(7/55)、10.9%(6/55)、23.6%(13/55)、3.6%(2/55)和27.3%(15/55),而相应的癌旁组织均为阴性.非肿瘤患者胃黏膜组织未见此8种CTA基因的表达.8种CTA基因的表达与患者年龄、性别、肿瘤大小、分化程度、幽门螺旋杆菌感染及TNM分期无明显相关(P>0.05).结论 多种CTA基因在胃癌中呈特异性高表达,为胃癌的免疫治疗提供了新的潜在的靶位.     

电压依赖性阴离子通道基因在人精子中的表达及其临床意义

目的:筛选与精子活力相关的基因。方法:将活力正常者与弱精子症者精子cDNA与Affymetrix全基因组芯片进行杂交,筛选出差异表达基因。RT-PCR分析该基因在人体不同组织及精子中的表达,并比较该基因在活力正常和活力低下的人精子中表达的差异。结果:芯片结果分析筛选出差异表达基因:电压依赖性阴离子通道(VDACs)基因。VDACs包括VDAC1、VDAC2、VDAC33个亚型,它们均在人精子中表达。与活力正常组精子VDAC2相对表达量(0.803±0.043)比较,VDAC2在弱精子症组精子的相对表达量(0.568±0.036)显著降低(P<0.01)。结论:VDAC2的表达减少可能与精子中活力降低有关。     

PCA3在前列腺癌患者前列腺按摩后尿液中的表达

目的检测PCA3在前列腺癌（PCa）患者前列腺按摩后尿液中的表达情况，并讨论其临床意义。方法从56例PCa患者、23例良性前列腺增生（BPH）患者和9例健康男性志愿者（对照组）前列腺按摩后初始尿液中分离细胞，采用RT—PCR方法检测其中PCA3的表达情况。结果BPH和对照组未见PCA3阳性表达，而PCa患者PCA3阳性率为81．3％（39／48），两者差异具有统计学意义（P〈0．01）。结论前列腺按摩后尿液中PCA3的检测有望成为早期诊断PCa的一种较敏感的方法，也有望成为PCa治疗后监测的一种方法。     

用SYBR Green I实时逆转录-聚合酶链反应定量检测人、小鼠精子中CatSper1 mRNA

目的：建立并优化SYBR GreenI实时RT-PCR体系,定量检测人、小鼠成熟精子中的CatSper1 mRNA。方法：用TRIzol分别提取人、小鼠成熟精子中的总RNA,逆转录后用SYBR GreenI实时PCR定量检测CatSper1 mRNA。SYBR GreenI实时PCR采用普通PCR试剂,加入SYBR GreenI染料,优化退火温度、Mg^2＋浓度及上、下游引物比例,并在PCR循环时采用四步法以消除引物二聚体的影响。优化完成后用不同浓度的精子cDNA为模板做标准曲线,以检测SYBR GreenI实时PCR的扩增效率。结果：定量检测CatSper1 mRNA的SYBR GreenI实时PCR体系适宜退火温度、Mg^2＋浓度及上、下游引物比例分别为63℃、3.0mmol/L和1∶1,四步法中采集荧光的温度为88℃。优化后用人和小鼠精子cDNA为模板做标准曲线分别为Y=-3.402log（X）＋25.99和Y=-3.409log（X）＋24.09,扩增效率分别为96.8%和96.5%,可定量检测人、小鼠成熟精子中的CatSper1 mRNA。结论：用普通的逆转录及PCR系统和试剂,建立了一种方便、廉价、可靠的SYBR GreenI实时荧光定量RT-PCR系统,可用于人、小鼠精子中CatSper1 mRNA定量检测。     

外周致密纤维1在人精子中的表达差异及其意义

目的:比较外周致密纤维1(ODF1)在健康男性和弱精子症患者精子中的表达差异。方法:根据WHO标准,收集正常男性和弱精子症患者的精液标本各20份,Percoll非连续梯度离心法分离精子,收集95%Percoll以下和57%与76%Percoll层之间的精子,以排除生精细胞和白细胞的污染;采用逆转录-多聚酶链式反应(RT-PCR)和Western印迹方法,从mRNA和蛋白水平检测ODF1的表达。结果:RT-PCR结果表明,与正常男性组相比,ODF1在弱精子症患者精子中的mRNA表达水平显著降低(2.79±0.28vs1.35±0.25,P<0.05);免疫印迹与RT-PCR结果一致,与正常男性组相比,弱精子症患者精子中的ODF1蛋白的表达亦显著降低(3.64±0.34vs1.44±0.26,P<0.05)。结论:ODF1在弱精子症患者精子中的表达显著降低,提示其可能与精子活动力低下有关。     

腺苷酸环化酶和磷酸二酯酶在人成熟精子的表达及临床意义

目的:比较腺苷酸环化酶(AC)和磷酸二酯酶(PDE)在活动力正常和活动力低下的人精子表达的差异。方法:收集活动力正常的人精子和a、b级精子低于20%的弱精子症患者的精子,提取总RNA,采用反转录多聚酶链式反应(RTPCR)的方法检测AC和PDE亚型mRNA的表达水平;采用酶联免疫吸附法测定两组样本环磷酸腺苷(cAMP)和环磷酸鸟苷(cGMP)的含量。结果:与活动力正常的精子比较,可溶性腺苷酸环化酶(sAC)表达和cAMP含量在活动力低下的患者精子显著降低(P均<0.01),而磷酸二酯酶4C(PDE4C)的表达显著增加(P<0.01);腺苷酸环化酶3(ACIII)的表达和cGMP的含量在活动力正常和活动力低下的精子差异无显著性(P>0.05)。结论:精子sAC的表达减少和PDE4C的表达增加是精子活动力低下的原因之一。     

正常人类精子电压依赖性钙通道类型的分子生物学鉴别

目的:利用分子生物学技术对正常人类精子中电压依赖性钙通道的类型进行鉴别。方法:根据WHO标准用计算机辅助精液分析筛选出5例正常精子标本(前向运动精子>60%,活率>80%),混合后用上游法对精子进行优化。采用RT-PCR检测人类精子中电压依赖性钙通道的α亚单位。结果:α1A和α1D未检测出,而其他α亚单位,如α1H、α1G、α1E、α1B、α1C均有表达。结论:在正常人类精子中电压依赖性钙通道显著表达T型或非L型RNA,在精子运动和精子顶体反应中,细胞外的钙离子内流可能是通过T型或非L型电压依赖性钙通道介导的。     

Chromatin Packing in Normal and Teratozoospermic Human Ejaculated Spermatozoa

Normal shaped (oval) and teratozoospermic spermatozoa have been compared by several techniques, including the use of "in vitro" S-S agents, cytofluorometry determination of DNA, total proteins, and ultracytochemical analysis of the presence and localization of SH proteins present in human sperm nuclei. A close relationship between S-S stability and chromatin packing is inferred from the differential sensitivity to S-S reduction agents exhibited by normal sperm nuclei which shows a lower Feulgen reactivity and special distribution of SH proteins compared to teratozoospermic cells. Both, S-S stability and chromatin packing are higher in normal sperms.     

实验性精索静脉曲张对青春期大鼠睾丸、附睾精子结合抗原11 mRNA及其蛋白异构体表达的影响

目的:研究实验性左侧精索静脉曲张(ELV)对青春期大鼠睾丸和附睾中精子结合抗原11(SPAG11)mRNA及其蛋白异构体SPAG11E表达的影响,并探讨其与精索静脉曲张导致男性不育的关系。方法:40只SD大鼠随机分为ELV2周组、4周组,假手术对照2周组、4周组,每组10只。ELV组行部分结扎左肾静脉建立青春期SD大鼠ELV模型,假手术对照组仅显露左肾静脉过程,但不结扎。应用RT-PCR和免疫组化法(n=5)检测SPAG11 mR-NA及SPAG11E蛋白在ELV2周组和ELV4周组及各自对照组大鼠双侧睾丸、附睾中的表达变化。结果:RT-PCR结果显示,SPAG11基因376bp的特异扩增产物仅见于大鼠附睾组织中。免疫组化结果显示,SPAG11E蛋白主要与睾丸生精上皮的圆形和长形精子细胞的顶体泡和顶体、睾丸间质细胞的胞质相结合;在附睾管上皮主细胞胞质和顶部静纤毛中表达。对RT-PCR的相对吸光度值和免疫组化的灰度值进行统计学分析显示:①左侧附睾ELV2周和4周组SPAG11 mRNA和SPAG11E蛋白的表达与各自右侧组及各自对照组比较均有显著减弱(P<0.05或P<0.01);左侧附睾ELV4周组SPAG11mRNA与SPAG11E的表达较ELV2周组显著减少(P<0.05或P<0.01);右侧附睾ELV4周组SPAG11E的表达也较ELV2周组显著减少(P<0.01);②两实验组双侧睾丸SPAG11E蛋白的表达与相应对照组比较均未见明显差异(P>0.05),且在ELV2周组和ELV4周组之间该蛋白的表达也无显著性差异(P>0.05)。结论:SPAG11是特异表达于附睾的基因,在大鼠睾丸和附睾中均可见其蛋白异构体SPAG11E免疫阳性反应,其定位及表达水平具有细胞特异性和区域特异性,而且SPAG11 mRNA及SPAG11E蛋白在ELV模型鼠附睾中的表达发生了明显变化,这提示SPAG11不仅可能在大鼠精子发生、成熟过程中发挥重要作用,还可能与精索静脉曲张所致的男性不育相关。     

Ultrastructure of Human Spermatozoa in the Presence of the Spermicide Nonoxinol-9 and a Vaginal Contraceptive Containing Nonoxinol-9

The effect of nonoxinol-9, a potent non-ionic, surface-active spermicide and of the vaginal contraceptive Patentex oval containing this spermicide, on human sperm ultrastructure were studied by transmission electron microscopy. Pooled human semen was mixed either with nonoxinol-9 to give a final concentration of 1.25 or 0.05% or with Patentex oval (final concentration of the spermicide nonoxinol-9 1.25%). Saline containing no spermicidal agent served as control. After incubation at 37 degrees C for 10 min., the washed sperm pellet was processed for electron microscopy. Human spermatozoa from control experiments showed a normal ultrastructure whereas significant changes occurred after the addition of nonoxinol-9 or Patentex oval to human semen. The plasma membrane and the acrosomal membrane complex were removed. The nuclear membrane was swollen, showed breaks, discontinuities and an enlarged submembranous space. Different stages of nuclear chromatin decondensation were observed. In the middle piece, the bi-laminar membrane of the mitochondria appeared as a mono-layer membrane. The normal cristae were destroyed, the mitochondriae were empty or contained fine granular material. The observed irreversible severe membrane alterations cause an immediate devitalization of the spermatozoa and support the effectiveness of the spermicide nonoxinol-9 and the vaginal contraceptive Patentex oval.     

人类精子表面附睾蛋白激酶抑制剂Eppin和精囊凝固蛋白Semenogelin的相互作用研究

目的:探讨人类精子表面一种附睾蛋白激酶抑制剂Epp in和精囊凝固蛋白Sem enogelin(Sg)的相互关系。方法:①用抗Epp in的抗体与精子和精浆中Epp in蛋白进行免疫沉淀反应;②免疫荧光法在精浆和精子表面共同显色定位;③重组Epp in(rEpp in)和重组精囊凝固蛋白Sg(rSg)共同孵育,用抗Epp in抗体或抗Sg抗体进行免疫共沉淀;④W estern印迹检测rEpp in和rSg相互作用;⑤放射性125I-rSg与rEpp in结合达饱和后,用未标记的rSg竞争性结合分析;⑥放射性125I-rSg直接与印迹膜上的rEpp in行放射性自显影。结果:人精子表面蛋白Epp in与精囊蛋白Sg发生特异性结合,Sg分子结构中的半胱氨酸残基Cys-239是唯一的结合位点,Cys-239的还原及羧甲基化将阻碍125I-rEpp in与rSg的结合。结论:Epp in与Sg的结合是靠分子结构中二硫化键的参与。在人类射精后的精子表面,精囊蛋白Sg结合在精子表面的Epp in上。     

Calcitonin in Human Seminal Plasma and its Localization on Human Spermatozoa

We determined the calcitonin (CT) levels in peripheral plasma and in seminal fluid of 15 normal human subjects: the concentration of the hormone in seminal fluid was about 30 times higher than the concentration found in peripheral plasma. We also studied the localization of calcitonin on human spermatozoa by means of an indirect immunofluorescent technique, using an anti-human CT rabbit serum and a fluorescein-isothiocyanate conjugated goat anti-rabbit immunoglobulins serum. A bright fluorescence was observed at the middle piece and neck, while the tail's principal piece was weakly stained. With an anti-human CT rabbit serum pre-absorbed with human CT no fluorescent staining was detectable. These findings demonstrate that calcitonin is localized onto spermatozoa and suggest a potential role for calcitonin in the calcium dependent-mechanisms of spermatozoa.     

热休克蛋白90在人精子冻融前后的表达及其意义

目的　研究热休克蛋白 90 (HSP90 )在人精子中的定位及其在冻融前后的变化。方法　应用间接免疫酶细胞化学技术定位HSP90在人精子中的部位 ,联合使用计算机图像分析技术对 2 0例正常男性的精液进行冻融前后精子HSP90表达的定量差异研究。结果　HSP90定位于人精子的体部与尾部。图像分析共识别冻融前精子43 6个 ,冻融后精子 484个。冻融前精子HSP90表达的平均灰度值和积分灰度值分别为 69.2 9± 11.16和 692 5 .73± 3 184.84,冻融后精子HSP90表达的平均灰度值和积分灰度值分别为 61.3 6± 10 .72和 5 75 7.41± 2 3 15 .2 4,两者相比均有极显著差异 (P <0 .0 1)。结论　冻融后精子HSP90的表达量出现较为明显的下降 ,这种下降可能是精子在冻融后运动特性改变的基础