基因功能研究中线粒体定位方法的比较

目的：比较和选择最佳细胞线粒体定位方法及其适用范围。方法：采用免疫细胞化学，免疫组织化学，荧光免疫细胞和化学和活细胞培养法对不同细胞系和癌细胞的线粒体定位方法进行比较。结果：几种线粒体定位方法各有其特征和适用范围，但均具很高的特异性。结论：免疫组化法可用于组织中（即体内）细胞线粒体的显示；免疫细胞化学，荧光免疫细胞化学和活细胞培养法可用于体外基因功能研究中培养细胞的线粒体定位。     

体外培养技术及其在头颈部鳞状细胞癌研究中的应用

 头颈肿瘤占全身肿瘤的5 % ,其中90 %是恶性肿瘤。头颈肿瘤具有独特的特征,如癌前病变易于识别;上气消化道(upperaerodigestivetract)肿瘤常位于体表,较易监测;流行病学资料显示能从肿瘤发生的部位和分期来预测局部和远处转移情况;原发肿瘤易复发并有继发其他部位肿瘤的危险性;另外,头颈部肿瘤是用化学药物预防肿瘤复发的理想模型。头颈肿瘤的这些特点决定了其在人体肿瘤研究中所具有的重要地位。当前,尽管头颈部鳞状细胞癌研究已取得重大进展,但随着研究的广泛和深入,出现愈来愈多待解决的问题。较多证据表明,体外培养技术的应用可望为头颈部鳞状细胞癌发生发展机制的阐明和防治带来新契机。本文将介绍这一领域的进展。1　体外培养技术概述体外培养(InVitroculture)是指从体内取出组织或器官摹拟体内生理环境,在无菌、适当温度和一定营养条件下,使之生存和生长并维持其结构和功能的方法。包括细胞培养(CellCulture)、组织培养(TissueCulture)和器官培养(OrganCulture)。组织培养和细胞培养并无严格区别。培养过程中,不论培养物是组织还是细胞都要生活在人工环境中,长期的培养易导...     

利用基因芯片法探索人前列腺癌细胞PC-3 M在裸鼠体内淋巴道转移相关基因

背静与目的：前列腺癌是欧美国家最常见的一种男性恶性肿瘤，近年来在我国该病也有明显上升趋势。目前认为肿瘤转移是由于一部分肿瘤细胞在肿瘤生长过程中发生基因水平的变化而改变性质变成“转移克隆的细胞”，这部分细胞能突破机体防御系统最终到达远处组织器官形成转移灶。本实验旨在探索人前列腺癌细胞PC-3M在裸鼠体内淋巴道转移的相关基因，为进一步研究前列腺癌淋巴道转移机制打下一定的基础。方法：将PC-3M细胞原位接种于裸鼠体内两个月后分别从原发灶和淋巴结转移灶分离肿瘤细胞，通过体外侵袭和粘附实验，比较两者体外侵袭和粘附能力的差异，并应用基因芯片技术，检测两细胞在转移相关基因丰度水平上的差异。结果：淋巴结转移灶分离的肿瘤细胞的体外侵袭及粘附能力显著高于原发灶内分离的肿瘤细胞，大约分别为后者的2．5倍和1.5倍；而且前者在一些转移相关基因丰度水平上明显高于后者，这些基因按其编码产物的属性和功能可划分为：①编码降解细胞外基质（ECM）的蛋白水解酶包括组织蛋白酶、基质金属蛋白酶；②编码转录因子家族成员；③编码参与肿瘤细胞异质性粘附的分子；④编码细胞表面受体。结论：原发灶内的前列腺癌细胞和淋巴结转移灶内的肿瘤细胞在侵袭和粘附能力上存在显著差异，经鉴定的差异表达分子可能在前列腺癌细胞由原发灶迁移到远处组织器官的转移过程中发挥重要作用。     

丹参酮ⅡA诱导HL—60细胞凋亡

在以往对丹参酮ⅡＡ诱导分化和抗癌作用研究的基础上，进一步研究丹参酮ⅡＡ诱导ＨＬ－６０细胞凋亡，以探讨其抗癌作用机理。方法：应用体外细胞培养技术，以１－１０μｇ／ｍｌ丹参酮ⅡＡ作用于培养的ＨＬ８０细胞５天后，进行光镜，电镜，琼脂糖凝胶电泳及流式细胞仪的观察和分析。     

人肺癌细胞体外培养及其应用

人癌细胞体外培养是研究癌变机理和癌细胞生物学特性的重要方法。在肺癌细胞培养方面,1955年Frisch首先报告了肺腺癌患者胸水细胞建成的MABEN细胞系,1962年国内何申也报道了人肺鳞癌细胞系。随后,又有众多关于肺癌细胞建系的报道。本文就近年来人肺癌细胞体外培养技术的改进和应用研究两方面作一综述。一、人肺癌细胞体外培养(一)材料和方法肺部原发癌、转移癌,恶性渗液,淋巴结活检,骨髓穿刺及其它转移部位切取的癌组织标本均可用作体外培养的     

第二届流式细胞术应用研讨会召开

由B·D公司举办的第二届流式细胞术应用研讨会于lop年12月Ic目一门日在上海召开，到会代表有200余名。会上B·D公司的技术顾问陈潭作了“分子免疫学的进展”，泰国流式细胞学会主席Kye作了“健康和疾病的细胞因子”的专题讲座。大会报告的论文有四篇，涉及的内容有：流式细胞术在血液病学中分型的应用，外周血干细胞移植，癌基因产物和多药耐药基因的检测，粘附分子的检测，人类染色体流式分析及分选，测定网织红细胞及LAK／TIL细胞的亚群分析，细胞凋亡的检测，正常人淋巴细胞亚群检测，钙离子测定等。近年来由于仪器的硬。软件有很大…     

骨巨细胞瘤中单核基质细胞的分离培养及其性质研究

目的对骨巨细胞瘤中单核基质细胞的性质和来源进行探讨。方法体外分离培养8例骨巨细胞瘤的单核基质细胞，用胶原酶分离方法和差速贴壁法分离纯化细胞，将分离培养的骨巨细胞瘤单核基质细胞与狗股骨薄磨片共培养，观察骨巨细胞瘤单核基质细胞的噬骨能力、TRAP染色和RT—PCR检测降钙素受体（CTR）和细胞核因子KB受体活化因子（RANK）。结果利用酶消化的方法可以获得较高纯度的单核基质细胞；TRAP染色阳性；体外培养具有噬骨能力；采用RT—PCR方法可检测到降钙素受体和细胞核因子KB受体活化因子。结论利用胶原酶-Ⅱ消化的方法结合差速贴壁方法可以获得较纯的单核基质细胞，可用于生化和分子生物学研究，是进行骨巨细胞瘤细胞学研究的细胞来源。     

CML细胞和K562细胞诱导TCR Vβ亚家族T细胞克隆性增殖和杀伤性的研究

目的：了解CML细胞和K562细胞体外诱导CML细胞特异性T细胞的TCRVβ亚家族利用、克隆性培殖和杀伤性情况。方法：采用混合淋巴细胞／白血病细胞培养法(MLTC)体外将CML细胞和K562细胞与脐血和成人外周血MNC混合培养和扩增，运用RT—PCR—基因扫描技术分析其TCRVβ亚家族的利用和克隆性特点，以及应用间接荧光单抗标记技术和LDH法分析诱导增殖的T细胞免疫表型和杀伤性。结果：CML细胞和K562细胞可以诱导出呈寡克隆或寡克隆趋势生长的Vβ亚家族T细胞，并具有识别和杀伤CML细胞的功能。结论：CML细胞和K562细胞可在体外诱导出异体CML细胞特异性CTL，该CTL可能为优势表达的Vβ亚家族克隆性T细胞。     

肿瘤细胞分泌物抑制树突状细胞的生成和功能

目的：探讨肿瘤细胞对人单个核细胞源树突状细胞（dendritic cells,DC）的生成和功能的影响。方法：培养外周血单个核细胞源DC，体系中加入人肝癌细胞系H7402，结肠癌细胞系HCT－8及正常人骨髓基质细胞系HFCL的培养上清液，以正常培养体系为对照。应用流式技术检测DC的细胞表面标志及吞噬功能；通过[^3H]－TdR掺入法检测DC激活同种异体T淋巴细胞活化的能力。结果：H7402和HCT－8细胞培养上清液作为条件培养的DC，低表达CD1a抗原、共刺激分子（CD86）及MHC-Ⅱ类分子，与对照及基质细胞组比较有明显差异。DC成熟也受到抑制。此外，DC对葡聚糖（Dextran）的吞噬功能下降，对同种异常T淋巴细胞激活的能力较低。结论：肿瘤细胞分泌的某些物质可抑制DC的生成及其相关功能，这可能是肿瘤细胞逃避机体免疫监视的机制之一。     

上皮细胞在体外的转化

人类大部分恶性肿瘤是起源于上皮组织的癌瘤,因此,体外上皮细胞的培养和转化对了解其生物学特性和探讨癌变机理是重要的。 一、体外培养上皮细胞概况 组织培养的研究已有近百年的历史。七十年代以来,组织培养工作发展十分迅速,目前世界上已建立的各种细胞系和细胞核至少有数千种以上。但是,以往培养的细胞大多为纤维细胞,上皮细胞的培养却廖廖无几。从三十至八十年代以来,人们研究了上皮细胞在体外的培养,培养的上皮细胞其种属来源有人、     

卵巢癌细胞和脐血树突状细胞融合瘤苗抗肿瘤免疫效应的初步研究

目的：将脐血来源的树突状细胞（DC）与人卵巢癌细胞株SKOV3细胞相融合，获得SKOV3/DC融合细胞，分析其生物学特性及体外诱导抗卵巢癌肿瘤免疫的能力.方法：1）将用PKH26红色荧光染料标记脐血来源的DC后，聚乙二醇法（PEG）融合DC与人卵巢癌细胞株SKOV3细胞，流式细胞仪分选融合细胞.2）应用细胞培养技术、流式细胞术及光学显微镜检测SKOV3/DC的生长特性和形态学特征 四甲基偶氮唑蓝（MTT）法观察融合细胞体外刺激混合淋巴细胞反应的能力及诱导特异性肿瘤免疫的能力.结果：1）DC和SKOV3按10∶1比例融合，融合率约为8.5%.融合细胞可在体外缓慢增殖，CA125抗原及CD1a、CD80、CD86、HLA-DR、MHC-Ⅰ分子表达阳性.2）SKOV3/DC在体外能有效的激发混合淋巴细胞增殖反应，可明显激活细胞毒性T淋巴细胞（CTL），对卵巢癌细胞株SKOV3有特异性杀伤效应.结论：利用PEG法制备的SKOV3/DC融合细胞兼具两种亲本细胞的部分特性，在体外能够诱导特异性抗肿瘤免疫.本研究将SKOV3/DC作为肿瘤疫苗，为其在卵巢癌主动免疫治疗研究中的进一步应用打下了基础.     

甲基硒酸对人高转移大细胞肺癌细胞株L9981增殖和凋亡作用及其分子机制的初步研究

背景与目的 已有的研究表明硒具有防癌作用和抑制乳腺癌、前列腺癌细胞株增殖的作用，但有关甲基硒酸（MSA）是否具有抗肺癌的作用目前尚不清楚。本研究的目的是探讨MSA对人高转移大细胞肺癌细胞株L9981是否具有生长抑制及诱导凋亡的作用，并对其分子机制作初步探讨。方法应用体外细胞培养技术，以MSA处理L9981细胞株，应用台盼蓝计数法、克隆形成实验和流式细胞术检测MSA处理L9981细胞株前后细胞株体外增殖、克隆形成和凋亡水平的变化。应用流式细胞术检测MSA处理L9981细胞株前后细胞周期、细胞周期相关蛋白和凋亡相关蛋白表达水平的变化。结果①MSA在大于0．5μmol／L的浓度时可显著抑制L9981细胞株的增殖（P〈0．05），细胞被阻滞于G0／G1期。②MSA浓度在2．5μmol／L时可诱导L9981细胞株进入凋亡（P〈0．05）。③MSsA在5μmol／L时可明显抑制L9981细胞株的克隆形成能力（P〈0．05）。④MSA能显著上调P53、P21、Fas、FasL和Bax蛋白表达水平。结论①MSA可显著抑制人高转移大细胞肺癌细胞株L9981的体外增殖和克隆形成能力，并诱导细胞凋亡；②MSA的抗肺癌作用可能与其调控肺癌细胞株L9981细胞周期和细胞凋亡相关基因表达有关。     

华蟾素对MGC-80-3细胞生长及凋亡影响的实验研究

目的：观察华蟾素对细胞生长及凋亡的影响。方法：应用体外细胞培养技术，MTT测定。集落形成试验，电镜观察及DNA琼脂糖凝胶电泳等方法。结果：华蟾素对MGC-80-3细胞的生长有显著抑制作用。能抑制细胞的集落形成，MTT法测定，其IC50约为0.16μg/ml;电镜下观察到细胞呈凋亡特征；琼脂糖凝胶电泳显示DNA呈梯状降解。结论：华蟾素能抑制MGC-80-3细胞生长，药物作用方式在较高浓度时以细胞毒作用为主，在较低浓度时以诱导细胞凋亡为主，诱导细胞闻过则喜亡是华蟾素抗肿瘤的重要方式之一。     

书评

肺癌，原则和实践(Lung Cancer, Principles and Practice) 第二版 主编：H.I. Pass, J.B. Mitchell, D.H. Johnson, A.T. Turrisi, J.D. Minna Lippincott Williams & Wilkins 出版，2000 由美国5位著名学者主编137位专家共同编写的《肺癌，原则和实践》一书的第二版是一本内容丰富、基础研究和临床实践相结合的好书。书刚出版已经为很多刊物引证。特别值得推荐给国内同行。 本世纪初肺癌的发病率在发达国家逐渐增高，到世纪的后半在发展中国家也开始增高。根据世界卫生组织2000年的年报，1999年全世界每年死于肺癌的人达到1?193?000(其中男性860?000，女性333?000)，占全世界总死亡的2.1％，居癌症死亡的首位。我国卫生部疾病控制中心发布的统计资料表明：1999年癌症已占我国城市居民死亡原因的首位，其中肺癌排在第一位。所以，肺癌的防治成了一个受到广泛关注的问题。 本书共分十篇，第一篇为肺癌的生物学，特别包括了肺癌发生发展中基因的调控和在防治中的作用；第二篇是病因学、流行病学、普查、早期发现和预防；第三篇为病理学；第四篇为临床表现、诊断、分期和预后；第五篇为手术治疗；第六篇为放射治疗；第七篇为化学治疗；第八篇为小细胞肺癌；第九篇为姑息治疗及其他；第十篇为统计学和临床试验的设计。本书的第一个特点是基础和临床预防、治疗及预后的判断紧密结合，其中包含了很多鲜为人知的新资料；第二是临床资料翔实、具体、客观。因此可为广大肺癌研究者和临床医师参考。(孙燕)     

胎儿肝脏中低分子抑瘤物对肿瘤细胞体外作用的初步研究

胎儿肝脏中低分子抑瘤物对肿瘤细胞体外作用的初步研究白海，吴祖泽兰州军区总医院（兰州７３００５０）我们以往工作表明，在人胎肝中存在着一类低分子抑瘤物［１，２］。作者应用细胞生物学方法对其作了进一步研究。材料与方法（一）人肿瘤细胞系：人肝癌细胞株用第二军...     

宫颈癌细胞株survivin mRNA表达的分子信标检测

目的：探讨宫颈癌细胞株中survivin mRNA表达分子信标荧光显像的检测。方法：体外培养宫颈癌细胞株HeLa和SiHa，滴加100nM的survivin mRNA分子信标，荧光显微镜下观察荧光强度，并用western blot及免疫组化方法对其表达进行验证。结果：两种Survivin mRNAMB在HeLa和SiHa中观察到了强荧光信号，且SiHa荧光信号强于Hela。结论：分子信标技术可成功检测宫颈癌细胞survivin mRNA的表达，为宫颈癌的早期诊断提供了又一可能的手段。     

《癌转移──基础研究与临床应用》

《癌转移──基础研究与临床应用》一书是根据第八届国际专家会议资料汇编的．该会每两年举办一次，由世界著名学者就某一专题进行讨论．此次的主题是癌转移的研究。本书包括29篇报道分列为6大类即：概念、遗传方面与模型，分子机制和侵袭的调节与转移；生长因子、血管形成、微     

人异柠檬酸脱氢酶1（IDH1）R132 H突变型脑胶质瘤细胞的原代培养及鉴定

目的：建立简单、方便、高效的异柠檬酸脱氢酶1（IDH1）突变型胶质瘤原代细胞体外培养方法,为研究IDH1突变型脑胶质瘤提供细胞模型。方法：样本组织取自低级别脑胶质瘤手术患者,采用组织块法行原代细胞培养,倒置显微镜下观察细胞形态特点;瘤组织应用苏木精－伊红染色法（HE ）和免疫组织化学染色确定胶质瘤病理类型以及级别;原代细胞提取基因组行碱基序列测序以鉴定IDH1突变类型;采用MTT法绘制生长曲线,检测IDH1突变型细胞的体外增殖特性。结果：成功建立WHOⅡ级IDH1 R132H突变型人脑星形胶质细胞瘤细胞株,并可传代。结论：应用合适的方法以及培养液,可以培养出IDH1 R132H突变型人脑胶质瘤原代细胞。     

分子影像技术在肿瘤细胞凋亡的研究现状及进展

摘 要：细胞凋亡是由多种基因调控的主动性细胞死亡过程。通过放疗、化疗等手段诱导肿瘤细胞凋亡是各种抗肿瘤治疗的主要机制之一。分子影像学可以在细胞和分子水平上对活体内细胞凋亡的生物过程和某些疾病的发生机制进行定性、定量、实时监测。分子影像学技术主要包括PET、SPECT、MRI、超声成像、光学成像。全文主要对分子影像技术在肿瘤细胞凋亡的应用进行综述。     

外周血淋巴细胞体外扩增后不同保存条件下存活率的变化

目的：应用流式细胞术初步研究人外周血淋巴细胞在体外经扩增培养后所得的CIK细胞在不同保存条件下存活率的变化。方法：按CIK细胞培养方法体外扩增培养3例恶性肿瘤患者外周血淋巴细胞，收获细胞后计算效应细胞浓度，然后将效应细胞分别放置于4℃和25℃下保存，于细胞收获后的不同时间点应用碘化丙啶（PI）对两种存放条件下的细胞进行染色并应用流式细胞仪器检测计算细胞存活率。结果：3名患者效应细胞初始存活率分别为98．8％、95．5％和97．1％，细胞浓度分别为7．4×10^7／ml、5．8×10^7／ml和10．4×10^7／ml，在4℃保存条件下存活率明显降低的时间点分别为102h、60h和84h，25℃保存条件存活率明显降低的时间点则分别为48h、24h和24h。结论：4℃条件比25℃条件更适合于保存效应细胞，效应细胞初始存活率低者以及细胞浓度较高者其细胞存活率下降的比较明显。