灯盏乙素对缺氧缺血性新生大鼠脑缺氧诱导因子-1α和水通道蛋白9表达水平的影响

目的：研究灯盏乙素对缺氧缺血性脑损伤（HIBD）新生大鼠脑缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）和水通道蛋白9（APQ9）表达水平的影响。方法：建立HIBD新生大鼠模型，将新生7日龄SD大鼠随机分为假手术组（sham组）、缺氧缺血组（HIBD组）、灯盏乙素高、中和低剂量组、地塞米松阳性对照组。于缺氧缺血7 d后，观察大鼠体质量增长率，脑组织HE染色观察脑组织病理改变，测定脑含水量，免疫荧光法检测脑HIF-1α蛋白表达，逆转录-多聚酶链反应（RT-PCR）法检测脑HIF-1α、APQ9mRNA表达，ELISA法检测脑caspase-3活性。结果：灯盏乙素能显著升高HIBD大鼠体质量增长率，降低脑组织含水量，抑制脑组织HIF-1α和AQP9mRNA表达，降低脑caspase-3活性。结论：灯盏乙素可减轻HIBD大鼠脑组织水肿，降低HIF-1α和AQP9表达，抑制神经细胞凋亡，发挥脑保护作用。     

神经生长因子对新生大鼠缺氧缺血脑皮质保护作用的实验研究

目的探讨缺氧缺血脑损伤对新生大鼠缺氧缺血脑损伤(HIBD)脑皮质NO含量,fasL蛋白表达的影响,及神经生长因子(NGF)对新生大鼠HIBD的干预治疗作用以及有关分子机制。方法建立HIBD动物模型后分NO含量测定组,fasL免疫组化测定组。每组又分为神经生长因子干预组、生理盐水对照组,假手术组,根据检测需要,在缺氧缺血后24h、3d、7d作脑皮质匀浆NO含量测定,fasL蛋白免疫组化SP法测定。结果假手术组、生理盐水组、NGF干预组脑皮质匀浆NO含量(pmol/L)测定依次为24h(4128±356)、(15963±432)、(12315±429);3d(4201±362)、(30122±459)、(5305±426);7d(4082±342)、(5126±428)、(4636±349)。FASL蛋白表达阳性率24h(805±358)、(1222±611)、(2108±512);3d(821±311)、(877±590)、(1350±422);7d(801±280)、(833±289)、(827±284)。结论新生大鼠HIBD后,结扎侧脑皮质NO含量增高,fasL蛋白的表达增高,神经生长因子能减少NO的产生量,抑制fasL蛋白的表达,对缺氧缺血脑皮质有保护作用。     

安宫牛黄丸对脑外伤后血脑屏障损伤及脑水肿作用机制的研究

目的系统地分析安宫牛黄丸对脑外伤后血脑屏障损伤及脑水肿的影响，阐明其作用的分子机制，揭示其开窍醒脑的机理，为临床合理应用及进一步开发利用其治疗脑外伤后所致脑水肿提供依据。方法以Feeney法建立大鼠闭合性脑损伤模型，同绕脑外伤性脑水肿中血脑屏障损伤的主要环节，探讨安宫牛黄丸对脑损伤后脑含水量、BBB通透性以及神经细胞突触数量的影响，系统地分析安宫牛黄丸对血脑屏障损伤及脑水肿的影响，阐明其作用的分子机制，揭示其开窍醒脑的机理。结果与假手术组比较，模型组损伤侧脑含水量及脑皮质EB含量明显增加（P〈0．01）。与模型组比较，安宫牛黄丸组损伤侧脑含水量及脑皮质EB含量明显降低（P〈0．05）。与假手术组比较，模型组损伤侧脑皮质电镜下突触密度显著性降低（P〈0．01），与模型组比较，安宫牛黄丸组损伤侧脑皮质电镜下突触密度明显增加（P〈0．05）。结论安宫牛黄丸可减轻脑水肿、保护血脑屏障、降低毛细血管通透性、提高脑组织对缺血、缺氧的耐受性，从而保护脑组织。     

奥拉西坦对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤后AQP-4表达的影响

目的:探讨奥拉西坦对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤后AQP-4表达及脑水肿的影响.方法:将120只Wistar大鼠采用随机分组的方法分为假手术组,HIBD组和奥拉西坦干预组.除假手术组以外的两组大鼠均需制备缺氧缺血模型.每组再根据标本采集时间的不同随机分为6h组、12h组、24h组、3d组和5d组,每亚组8只.各组给药情况如下:将奥拉西坦用生理盐水稀释成0.3mg/mL,干预组于HIBD后即刻给予腹腔注射奥拉西坦2mg/kg,每24h给药一次,假手术组及HIBD组不做处理.在各时间点取样测定各组大俗的脑组织含水量和AQP-4的表达情况.结果:三组大鼠在各个时间点的脑组织含水量均表现为假手术组最低,HIBD组最高,奥拉西坦干预组居中,与HIBD组相比奥拉西坦干预组在各采样时间点AQP-4免疫阳性细胞的平均灰度值均明显偏高(P＜0.01).结论:奥拉西坦可在一定程度缓解脑水肿,提高AQP-4的表达量,提示其缓解脑水肿的机制可能为通过促进AQP-4蛋白的表达实现.此外本次研究还发现AQP-4表达与脑组织含水量呈正相关.     

基于NOD2/RIP2/NF-κB信号通路研究柚皮素对新生大鼠缺血缺氧性脑损伤的保护作用

目的探讨柚皮素对新生大鼠缺血缺氧性脑损伤的保护作用及其机制。方法 96只7日龄新生SD大鼠,随机分为4组,假手术组(Sham)、缺血缺氧性脑损伤组(HIBD)、柚皮素低剂量组(50 mg·kg^-1)、柚皮素高剂量组(100 mg·kg^-1)。术后48 h对各组新生大鼠进行神经功能缺陷评分,HE染色观察各组新生大鼠脑组织病理学改变,干湿重法检测各组新生大鼠脑含水量,免疫印迹法测定缺血缺氧侧脑组织NOD2、RIP2、NF-κB蛋白的表达,酶联免疫吸附法检测TNF-α、IL^-1β的水平。结果与模型组比较,柚皮素低、高剂量组神经行为学指标评分下降,病理学损伤减轻,新生大鼠脑含水量明显减少(P<0.05);Western blot检测显示,与模型组比较,柚皮素低、高剂量组新生大鼠脑组织NOD2、RIP2、NF-κB蛋白表达下调(P<0.05);ELISA检测显示,柚皮素低、高剂量组TNF-α和IL^-1β在脑组织中含量低于模型组(P<0.05)。结论柚皮素对新生大鼠缺血缺氧性脑损伤有保护作用,其机制可能与柚皮素下调NOD2、RIP2、NF-κB蛋白的表达,并减少TNF-α、IL^-1β的分泌有关。     

CH03对脑缺血再灌大鼠BBB的保护作用及其机制的初步研究

目的探讨CH03对MCAO模型大鼠BBB的保护作用及其机制,以期寻找有效的治疗中风的药物及相关靶点。方法采用大脑中动脉内线栓法建立MCAO脑缺血模型,通过伊文氏蓝渗漏法观察BBB通透性、利用电镜观察神经血管单元的超微结构,从形态学和结构上考察了CH03对缺血后BBB损伤的保护作用;采用WB,RT-PCR和免疫组化对BBB组成中内皮细胞间的紧密连接、星形胶质细胞和基膜进行检测;并采用ELISA试剂盒对脑缺血后炎症级联反应及继发的自由基进行检测。结果 EB渗漏实验结果表明,模型组BBB通透性显著增加,CH03各剂量组明显逆转这一作用(P<0.01);电镜观察皮层神经血管单元的超微结构表明,CH03中、高剂量组能够显著减轻神经元固缩,胞质、胞核电子密度显著降低,星形胶质细胞足突的肿胀、内皮细胞的反应性增大及毛细血管变形减轻;染色结果显示,CH03中、高剂量组显著降低水通道蛋白-4(AQP4)、增加闭锁小带蛋白(ZO-1)和咬合蛋白的表达(P<0.01);RT-PCR和免疫荧光技术观察到CH03各剂量组均可逆转脑缺血再灌引起的基质金属蛋白酶-9(MMP9)的表达增加,并且MMP9与神经元特异性核蛋白(NeuN)共定位。ELISA检测炎性因子结果表明,CH03各剂量组可明显降低TNF-α、增加IL-10的表达;增加组织总谷胱甘肽过氧化物酶、总超氧化物歧化酶和总过氧化物酶活性,降低丙二醛(MDA)的含量。提示CH03对BBB结构具有保护作用。讨论 CH03显著改善MCAO模型大鼠BBB的通透性并可以改善细胞毒性脑水肿;保护BBB与增加紧密连接相关蛋白的表达、降低AQP4表达而减轻脑水肿、降低MMP9的表达而减小对细胞外基底膜的降解作用等有关;CH03也可通过增加抗氧化酶活性、减少神经炎症损伤而保护BBB完整性。     

芍药苷对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤中脑细胞凋亡的影响

目的 观察芍药苷对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)中脑细胞凋亡的影响,并探讨其脑保护的作用机制.方法 30只7日龄SD大鼠,随机均分成假手术组、缺氧缺血模型组、芍药苷低、中、高剂量治疗组.通过结扎左颈总动脉和吸入8%低氧混合气制备缺氧缺血性脑损伤(HIBD)动物模型.假手术组不进行缺氧缺血处理,各组新生鼠均于缺氧缺血后48 h处死,取大脑皮层及海马区组织进行HE染色及TUNEL法凋亡细胞检测.结果 假手术组大鼠的大脑皮层及海马区组织、细胞形态正常;缺氧缺血模型组的大脑皮层及海马区组织水肿,细胞周围间隙增宽,胞体肿胀变圆、变大、胞浆染色变浅;各芍药苷组的神经元细胞胞体肿胀及组织水肿情况较缺氧缺血模型组明显好转.假手术组的大脑皮层及海马CA1区未见凋亡细胞;缺氧缺血模型组的可见较多凋亡细胞;各芍药苷组的凋亡细胞较相应时点缺氧缺血模型组的减少,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 芍药苷能减轻新生大鼠HIBD时的脑病理损伤,抑制大鼠HIBD时的脑细胞凋亡,对新生大鼠HIBD脑损伤具保护作用.     

水通道蛋白4mRNA在大鼠蛛网膜下腔出血后脑水肿中的表达及尼莫地平对其表达的影响

目的：研究大鼠蛛网膜下腔出血后脑组织AQP4mRNA的表达及脑含水量的变化以及应用尼莫地平对AQP4mRNA表达的影响。方法：健康成年大鼠60只,随机分为对照组、假手术组、SAH组、尼莫地平组,建立蛛网膜下腔出血模型,分别在6h、1d、3d、5d、7d个时间点断头取脑,测定脑含水量,并用RT-PCR法检测AQP4mRNA表达。结果：SAH组脑含水量及脑组织内AQP4在6h后即增加,随时相递增,3d达到高峰,较假手术组及尼莫地平组明显增高（P＜0.05）。结论：大鼠蛛网膜下腔出血后脑水肿的程度与AQP4的表达成正比,这表明AQP4在蛛网膜下腔出血性脑水肿的病理生理中起着非常重要的作用。尼莫地平可以下调AQP4mRNA的表达,从而减轻脑水肿的程度。     

丹参注射液对新生鼠缺氧缺血性脑损伤神经细胞的保护作用研究

目的:研究丹参注射液对新生鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)神经细胞的保护作用。方法:复制HIBD动物模型,将60只SD新生鼠随机分为假手术、模型和丹参注射液高、中、低剂量组,在HIBD后48h应用免疫放射分析法测定血清烯醇化酶(NSE)浓度,硫代巴比妥酸法测定血和脑组织丙二醛(MDA)的含量,Western blot检测脑组织转录因子肌细胞增强因子2A(MEF2A)和突触素Ⅰ(Synapsin-1)的蛋白表达量。结果:模型组小鼠HIBD后48h血清NSE、MDA浓度和脑组织MDA含量较假手术组显著升高(P<0.01);丹参注射液治疗后血清NSE、MDA浓度和脑组织MDA含量较生理盐水组明显下降,且呈一定的量效关系(P<0.01)。Western blot检测表明HIBD后48h模型组中MEF2A的蛋白表达量显著高于假手术组(P<0.01);而HIBD后48h模型组Synapsin-1的蛋白表达量显著低于假手术组(P<0.01)。丹参注射液治疗后MEF2A的蛋白表达量明显低于模型组,Synapsin-1的蛋白表达量显著高于模型组,且呈一定的量效关系(P<0.01)。结论:丹参注射液可降低新生鼠缺氧缺血性脑损伤后血清NSE、MDA浓度和脑组织MDA含量,抑制脑损伤后MEF2A基因表达,并抑制Synapsin-1的蛋白表达下调,从而对神经细胞有保护作用。     

高压氧对缺氧缺血新生大鼠脑组织神经可塑性相关蛋白的影响

目的研究高压氧(HBO)对缺氧缺血新生大鼠脑组织神经相关蛋白(GAP-43)和神经生长抑制因子(Nogo-A)的影响,探讨HBO对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)的保护作用及机制。方法7日龄Wistar大鼠24只随机分为3组:正常对照组(CON组),HIBD组和HBO组,每组各8只,HBO组于缺氧缺血1h后行HBO处理,每日1次,连续7d。各组分别于17日龄时处死取材。苏木素-伊红(HE)染色观察脑组织病理改变,免疫组织化学方法检测3组大鼠大脑皮层GAP-43蛋白和Nogo-A表达。结果HBO组病理改变较HIBD组减轻。GAP-43表达:平均灰度值HIBD组较正常对照组明显降低(P<0.05),HBO组较HIBD组明显降低(P<0.05)。Nogo-A表达:平均灰度值HIBD组较正常对照组降低(P<0.05),HBO组较HIBD组明显增加(P<0.05)。结论HBO治疗可以通过增加缺氧缺血新生大鼠脑组织GAP-43蛋白和降低Nogo-A的表达,发挥其对脑损伤的保护作用。     

Memantine对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的影响

目的：研究美金胺(Memantine)对新生大鼠缺氧、缺血性脑损伤(HIBD)脑保护作用及机制。方法：应用新生7日龄Wistar大鼠随机分为假手术组、HIBD组、Memantine治疗组,采用结扎左侧颈总动脉并吸入8％O2 92％N2混合气体制成新生大鼠HIBD动物模型。于HIBD后即刻腹腔注射Memantine 20mg/kg或等量生理盐水,48h后处死,用放射免疫法测血清NSE水平,用硝酸还原酶法测血清NO水平．用H-E染色观察脑组织病理变化。结果：Memantine可使脑组织病理改变明显减轻,可降低血清中NSE浓度．可降低血清中NO浓度。结论：Memantine对脑缺氧缺血损伤具有脑保护作用;Memantine通过阻断NMDA受体减少毒性NO的生成,是其脑保护作用可能机制之一。     

黄体酮对大鼠局灶性脑缺血后血脑屏障的保护

目的研究黄体酮对局灶性脑缺血后血脑屏障的保护作用。方法将48只老年大鼠随机分为假手术组（Sham）、脑缺血组（Ischemia）、安慰剂组（Vehicle）、黄体酮组（PROG）,每组12只,其中6只用来进行梗死体积测定,6只用来测定血脑屏障连接粘附分子-A（junctional adhesion molecule-A,JAM-A）。利用大脑中动脉栓线阻断法（middle cerebral artery occlusion,MCAO）造成大鼠局灶性脑缺血损伤模型,通过氯化四唑（tetrazolium chloride,TTC）染色测定梗死体积,应用Western blot技术检测JAM-A蛋白水平的表达。结果黄体酮能有效减少脑梗死体积和血脑屏障的破坏;黄体酮能在蛋白水平阻断JAM-A的下调。结论黄体酮能通过阻断JAM-A的下调减少脑缺血后血脑屏障的破坏,减小脑梗死体积。     

选择性COX-2抑制剂NS398干预后对HIBD新生大鼠海马CA1区存活锥体细胞计数的变化

目的研究新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)时应用选择性COX-2抑制剂NS398干预后海马CA1区存活锥体细胞计数的变化。方法于制备新生大鼠左脑的HIBD模型前30min,应用腹部注射NS39820mg/kg,同时建立未注射HIBD组及对照组,于HIBD后7d,测试左侧海马CA1区存活锥体细胞数。结果统计学比较,HIBD组CA1区存活锥体细胞计数显著低于对照组;NS398干预组存活锥体细胞数显著高于HIBD组。结论应用选择性COX-2抑制剂NS398可以减少新生鼠HIBD时锥体细胞缺失。     

新生大鼠缺氧缺血性脑损伤AQP-4表达及依达拉奉治疗效果的研究

目的：探讨新生大鼠缺氧缺血性脑损伤（hypoxic-ischemic brain damage,HIBD）后脑组织水通道蛋白-4（AQP-4）的表达变化及依达拉奉（edaravone）对其治疗效果的影响。方法：将7日龄Wistar大鼠120只随机分为3组：假手术组、缺氧缺血模型组（HIBD组）及依达拉奉治疗组,每组各40只。每组根据处死的时间不同又分5个亚组：6、24h、3、5、7d组,每亚组各8只,各组分别于不同时间点处死动物,测脑组织含水量,并采用免疫组化方法检测AQP-4的表达。结果：AQP-4在缺氧缺血6h即增强,3d达高峰,5～7d逐渐降低（P〈0.01）;治疗组各时间点AQP-4表达水平较HIBD组明显降低（P〈0.01）。结论：AQP-4参与了HIBD脑水肿的发生发展过程,依达拉奉可降低AQP-4的表达,从而减轻脑水肿,这可能是其脑保护作用机制之一。     

炎性细胞因子在大鼠缺氧缺血性脑损伤中含量变化及其意义

目的:检测SD大鼠脑缺氧缺血后脑组织中IL-1、IL-6和IL-8 mRNA的表达,探讨IL-1、IL-6和IL-8在大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)中变化规律及其作用。方法:通过结扎左颈总动脉致大鼠脑急性缺血,后给8%氧气 92%氮气的混合气体致脑急性缺氧,建立大鼠脑急性缺血缺氧模型,在3个时相点采用rt-PCR方法测定假手术组、HIBD组脑组织中IL-1、IL-6和IL-8 mRNA含量变化。结果:HIBD组大脑皮质内IL-1和IL-8含量3d达到峰值,随后逐渐降低;大脑皮质内IL-6含量1d达到峰值,随后逐渐降低。缺血脑半球IL-1、IL-6和IL-8 mRNA含量较假手术组明显增高(P<0.05),且随着时间延长其表达量增加。结论:在大鼠急性缺氧缺血性脑损伤中,脑皮质内IL-1、IL-6和IL-8表达增强,IL-1、IL-6和IL-8参与了脑缺血缺氧后炎症反应的启动、发展过程。     

司来吉兰治疗血管源性脑水肿的实验研究

目的观察司来吉兰对大鼠血管源性脑水肿(VBE)的治疗作用。方法60只Wistar大鼠随机分正常、脑水肿、脑水肿甘露醇、脑水肿司来吉兰共4组。用腹腔注射苯肾上腺素的方法制成VBE模型,然后分别股静脉注射甘露醇、腹腔注射司来吉兰到大鼠腹腔,通过远红外线水分分析仪分别测定各组脑灰、白质水分含量百分比。用Evan's blue(EB)测定血脑屏障(BBB)的通透性。结果司来吉兰组同甘露醇组相比对降低BBB通透性及大脑白质水分含量均有显著效果(P<0.01),对灰质的脱水作用无显著性差异(P>0.05)。甘露醇组也可降低灰质、白质水肿,但对灰、白质无特异性差异,降低BBB通透性差。结论VBE中BBB的通透性改变与单胺氧化酶活性有关,单胺氧化酶抑制剂司来吉兰对VBE尤其对脑白质水肿有选择性治疗作用。     

神经生长因子对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤后脑组织Fas/FasL表达的影响

目的探讨神经生长因子对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤后(HIBD)脑组织Fas/FasL表达的影响。方法新生7d Wistar乳鼠120只随机分为3组,每组40只:A组(假手术组),B组(缺血缺氧组),C组[缺血缺氧+神经生长因子(NGF)]干预组。每组根据处死时间不同又分为5个亚组:6h组,12h组,24h组,48h组,72h组,每组各8只。建立HIBD模型,C组在缺血缺氧后即刻给予腹腔注射NGF(50μg·kg-1·d-1)1次/d,连续3d。各组在不同的时间点取脑组织,假手术组也在相应时间点取脑组织,并用免疫组织化学法测定Fas及FasL含量。结果①Fas的表达:A组脑组织在各个时间点均无或有少量表达;B组脑组织在各个时间点均有Fas的表达,且24～48h为表达高峰,以后逐渐下降;C组脑组织在各个时间点均有Fas的表达,但均较B组表达减少。3组各时间点比较差异均有统计学意义(P<0.01)。②FasL的表达:A组脑组织各个时间点均无表达或有弱表达;B组脑组织在各个时间点都有表达,且24～48h为表达高峰,以后逐渐下降;C组脑组织在各个时间点均有FasL的表达,但均较B组表达减少。3组各时间点比较差异均有统计学意义(P<0.01)。结论①新生大鼠HIBD后6,12,24,48,72h脑组织Fas及FasL表达增加,可能与脑缺氧缺血损伤后神经组织的凋亡有关;②NGF治疗后可明显减少新生大鼠HIBD后脑组织Fas及FasL的表达,从而减少脑组织缺氧缺血损伤后凋亡的发生。     

褪黑素对新生鼠缺氧缺血性脑损伤表达NF-κB的影响

目的：探讨褪黑素（melatonin,MT）对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的神经保护作用及作用机制。方法：新生健康7日龄Wistar大鼠120只,随机分为3组：假手术组（40只）、缺氧缺血模型组（40只）、MT治疗组（40只）,参照经典方法建立新生大鼠缺氧缺血性脑损伤（HIBD）模型,MT治疗组于模型制作完成后立刻注射MT10mg/kg1次于腹腔内,脑损伤组则于腹腔内注射等量的0.9%氯化钠注射液。各组分别于手术后6、24、48、72 h取脑组织切片,免疫组织化学方法检测核因子-κB（NF-κB）的表达.结果：与假手术组相比,缺氧缺血组NF-κB表达随时间的变化增加显著（P〈0.01）。与缺氧缺血组相比较,MT治疗组NF-κB表达在12,24,48h三个时间点中下降显著（P〈0.01）。结论：MT对HIBD后海马区神经细胞具有保护作用,其作用机制可能与抑制NF-κB在海马区的持续活化有关。