美洲大蠊多肽提取物对SMMC-7721细胞凋亡及Bcl-2和Bax蛋白表达的影响

目的：研究美洲大蠊多肽提取物诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡及其分子机制。方法：采用不同质量浓度的美洲大蠊多肽提取物作用于SMMC-7721,以Cell Counting Kit-8（CCK-8）法检测细胞抑制率;Hoechst33342/PI与Annexin V-FITC/PI双染法相结合检测SMMC-7721细胞的凋亡;蛋白免疫印迹（Western blotting）法检测细胞凋亡相关因子Bcl-2和Bax蛋白表达。结果：不同质量浓度的美洲大蠊多肽提取物可抑制SMMC-7721细胞的增殖,诱导其凋亡,呈一定的量效关系;Western Blot法显示Bax表达增多,Bcl-2蛋白表达减少,Bcl-2/Bax比值降低。结论：美洲大蠊多肽提取物可明显诱导SMMC-7721细胞凋亡,抑制其增殖,其机制可能与下调Bcl-2蛋白表达,上调Bax蛋白表达,降低Bcl-2/Bax比值有关。     

牡荆素对人肝细胞癌SMMC-7721细胞的增殖抑制作用及其机制的影响

目的: 研究牡荆素(vitexin)对人肝癌细胞SMMC-7721的增殖抑制作用, 并初步探讨其作用机制。方法: 体外培养人肝癌细胞SMMC-7721, 分别采用MTT法和Hoechst33258核染色法检测牡荆素对人肝癌细胞SMMC-7721活力的影响以及观察细胞形态学变化;流式细胞仪检测细胞凋亡率和线粒体膜电位(ΔΨm) 变化;蛋白免疫印迹法检测p53、Bcl-2、Bax等相关凋亡蛋白水平的表达情况。结果: 牡荆素培养人肝癌细胞SMMC-7721 48, 72, 96 h后能明显抑制细胞增殖, 呈时间-剂量依赖性(P<0.05), 其IC₅₀分别是150.37, 116.24, 90.19 μmol·L^-1。牡荆素作用于人肝癌细胞SMMC-7721 72 h后, 以浓度依赖性方式增加细胞凋亡率、降低线粒体膜电位(ΔΨm) 以及上调p53、Bax、Caspase-3等相关促凋亡蛋白的表达, 下调Bcl-2抗凋亡蛋白的表达。结论: 牡荆素能抑制人肝癌细胞SMMC-7721增殖诱导凋亡, 呈时间-剂量依赖性, 其作用机制可能通过依赖P53途径下调Bcl-2, 上调Casepase-3、Bax、P53、PARP等基因表达, 进而诱导凋亡有关。     

姜黄素对肝癌SMMC-7721细胞增殖和凋亡的影响及其机制研究

目的研究姜黄素对肝癌SMMC-7721细胞增殖和凋亡的影响及其机制研究。方法选取肝癌细胞系SMMC-7721(50株),根据处理方式的不同分为对照组、姜黄素组。细胞计数试剂盒(CCK-8)方法检测两组细胞的增殖,流式细胞仪检测两组细胞的凋亡。比色法检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白(caspase)-3酶的活性,用Western印迹方法检测Bax、Bcl-2蛋白的表达。结果姜黄素组的细胞增殖率低于对照组(P<0.05)。姜黄素组的细胞凋亡率高于对照组(P<0.05)。姜黄素组的caspase-3酶的活性高于对照组(P<0.05)。姜黄素组的Bax表达高于对照组,Bcl-2的表达低于对照组(P<0.05)。结论姜黄素能诱导SMMC-7721细胞凋亡,其机制可能与caspase活性升高、Bax表达增加、Bcl-2表达减少有关。     

大萼香茶菜甲素通过线粒体途径诱导HL-60白血病细胞凋亡

目的：观察大萼香茶菜甲素（macrocalyxinA,MA）体外诱导HL-60细胞凋亡,并探讨其作用机制。方法：不同浓度的MA与HL-60细胞进行培养,采用MTT比色法观察其对HL-60细胞增殖的抑制作用;细胞形态学、DNA含量、DNA梯度电泳及细胞周期分析、Annexin—V／PI双标记和Hoechst 33258荧光染色等分析其促细胞凋亡效应;流式细胞术和RT-PCR分别检测Bcl-2、Bax、P53、Fas、线粒体膜蛋白（Ap02．7）、线粒体跨膜电位（AWm）与Bcl-2、Bax、P53、caspase-3 mRNA变化水平,研究其促凋亡机制。结果：MA呈现作用时间和剂量依赖性地抑制HL-60细胞增殖和活力;HL-60细胞经MA作用后,Wright—Giemsa染色和Hoechst荧光染色后细胞出现典型的凋亡小体,细胞阻滞于G0／G1期,DNA片段化,亚二倍体明显增高,Annexin—V／PI标记升高;MA诱导HL-60细胞凋亡过程中,Bcl-2、Fas、P53表达无明显变化,Bax、线粒体膜蛋白（Apo2．7）、caspase-3表达显著增加,Bax／Bcl-2比值升高,龇下降。结论：MA能抑制HL-60细胞增殖和细胞活力、诱导细胞凋亡,其机制通过上调Bax基因和Bax／Bcl-2比值,使线粒体膜电位下降、膜通透性增高,最终使caspase-3激活而促进凋亡。     

葛根素保护双氧水诱导的SH-SY5Y细胞凋亡

目的探讨葛根素对双氧水(H_2O_2)诱导的SH-SY5Y细胞凋亡的保护作用及其机制。方法建立体外神经元损伤模型,MTT法观察细胞存活率;Hoechst 33342染色观察细胞核改变;JC-1染色检测细胞线粒体膜电位的改变;酶活性检测线粒体caspase-3和caspase-9的变化;Western blot检测细胞中Bcl-2、Bax、p-Akt、Akt蛋白的表达。结果与H_2O_2模型组相比,葛根素预处理能明显改善H_2O_2诱导的SHSY5Y细胞存活率下降(P<0.05),缓解H_2O_2引起的线粒体膜电位的下降(P<0.01),抑制caspase-3和caspase-9的酶活性(P<0.01),减少H_2O_2诱导的细胞凋亡。此外,葛根素还促进细胞内p-Akt、Bcl-2蛋白表达,抑制Bax蛋白表达,而这种作用能被PI3K/Akt的抑制剂LY294002所抑制。结论葛根素可保护H_2O_2诱导的SH-SY5Y细胞凋亡,这种保护作用可能是通过激活PI3K/Akt信号通路实现的。     

吡唑啉酮衍生物镉(Ⅱ)配合物诱导食管癌细胞凋亡与Bax和Bcl-2的关系

目的 研究吡唑啉酮衍生物镉(Ⅱ)配合物(Ls-17)对人食管癌细胞(Eca-109)的凋亡诱导作用及对细胞Bax和Bcl-2蛋白表达的影响.方法 MTT法检测Ls-17对Eca-109细胞的增殖抑制作用,流式细胞术检测细胞凋亡、周期分布变化及线粒体膜电位的改变,caspase活性法检测caspase-3和9的变化,Western blot法分析Bax和Bcl-2蛋白的表达.结果 Ls-17对Eca-109细胞增殖抑制的IC50值为25.12 mg·L-1,使细胞周期阻滞在G2/M期而导致细胞凋亡;能降低线粒体膜电位水平并激活caspase-3和9,使Bax/Bcl-2的比值增大.结论 Ls-17能够抑制Eca-109细胞增殖和诱导细胞凋亡,其机制可能与下调Bcl-2的表达,使Bax/Bcl-2的比值升高有关.     

新型金属铜络合物对SMMC-7721细胞增殖与凋亡的影响

目的研究新型金属铜络合物(N-Cu)在体外对人肝癌SMMC-7721细胞增殖与凋亡的影响及其作用机制。方法将不同浓度的N-Cu(0.3～24μmol.L-1)作用于体外培养的SMMC-7721细胞,应用MTT法检测细胞生长抑制率,FCM法检测细胞周期及凋亡率,RT-PCR和Western blot法检测细胞中Bcl-2、Bax、Caspase-3 mRNA和蛋白表达的变化。结果 N-Cu可明显抑制SMMC-7721细胞的增殖,呈明显的量效与时效关系。随着药物浓度的增加,G0/G1期的细胞比率上升,G2/M和S期细胞比率下降,并促进凋亡率增加。N-Cu可上调细胞中Bax、Caspase-3基因及蛋白的表达,抑制Bcl-2基因及蛋白的表达,且均呈剂量依赖性。结论一定浓度的N-Cu可抑制SMMC-7721细胞的增殖并诱导其凋亡,阻滞细胞周期于G0/G1期。上调Bax、Caspase-3基因及蛋白的表达,降低Bcl-2/Bax比值,可能是其诱导细胞凋亡的重要机制。     

栀子苷抗H_2O_2诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的实验研究

目的探讨栀子苷对氧化应激诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)凋亡的抑制作用及可能机制。方法体外培养的HUVEC细胞用不同浓度的栀子苷药物预处理24h后,加入终浓度为500μmol·L-1H2O2氧化损伤12h。荧光染色法观察细胞内DNA损伤情况,流式细胞术检测细胞凋亡率和线粒体膜电位的变化,Western blot检测Bcl-2和Bax蛋白的表达,酶免法测定caspase-3蛋白酶的活性,Real-time PCR检测超氧化物歧化酶(Mn-SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)的mRNA表达。结果与模型组相比,不同浓度栀子苷(12.5、25、50mg·L-1)可以明显改善H2O2对细胞内的DNA氧化损伤,降低细胞凋亡率,下调Bax蛋白表达,逐步恢复Bcl-2/Bax表达比例和线粒体膜电位的改变,降低caspase-3蛋白酶活性,上调细胞内Mn-SOD和GPx的表达,但对Bcl-2的表达无影响。结论栀子苷可以抑制H2O2诱导的HUVEC细胞凋亡,其机制可能与调节线粒体应激途径和发挥抗氧化损伤功能有关。     

苯甲醛左氧氟沙星席夫碱诱导人肝癌细胞凋亡作用

目的研究苯甲醛左氧氟沙星席夫碱化合物对人肝癌SMMC-7721细胞凋亡的诱导作用。方法用不同浓度的(S)-1,8-(2-甲基亚乙氧基)-6-氟-7-(4-甲基-哌嗪-1-基)-3-[S-苄基硫基-4-(对硝基苯甲叉基氨基)-1,2,4-均三唑-3-基]-喹啉(1-H)-4-酮(M18)与SMMC-7721细胞、人乳腺癌细胞MB-231、人结肠癌细胞HCT-116、人肝癌细胞HEPG-2和小鼠骨髓间充质干细胞体外培养。MTT法检测M18对各种细胞的生长抑制作用;Hoechst 33258荧光染色法、TUNEL法检测细胞凋亡变化;高内涵活细胞成像系统测定细胞线粒体膜电位(△ψm)变化;Western blot方法测定caspase-3、p53蛋白表达量的改变,以及细胞色素C在线粒体内外的分布。结果 M18在4~32μmol·L-1的浓度范围内能明显抑制SMMC-7721细胞、MB-231细胞、HCT-116细胞、HEPG-2细胞增殖,呈浓度、时间依赖关系,作用于细胞24 h的IC50值分别为8.65、9.37、12.74和9.40μmol·L-1;左氧氟沙星盐酸盐作用于SMMC-7721细胞24 h的IC50值为735.10μmol·L-1,M18作用于骨髓间充质干细胞24 h的IC50值为38.96μmol·L-1;不同浓度M18作用人肝癌SMMC-7721细胞24h,细胞凋亡率高于对照组(P<0.05)。M18作用于SMMC-7721细胞后,细胞线粒体膜电位降低,与对照组相比差异有统计学意义;M18明显增加SMMC-7721细胞的p53和caspase-3蛋白表达量,其中caspase-3活性裂解片段增加明显;M18作用使细胞线粒体内细胞色素C明显减少,胞质内细胞色素C明显增加。结论苯甲醛左氧氟沙星席夫碱能够诱导人肝癌细胞凋亡,作用与线粒体凋亡通路有关。     

N-4-(二氯乙基)丁胺-1,8-萘酰亚胺对人肝癌HepG2细胞的抑制作用及其机制研究北大核心CSCD

目的体外评价N-4-(二氯乙基)丁胺-1,8-萘酰亚胺(XHH)对Hep G2细胞的抑制作用及其作用机制。方法采用MTT法检测细胞增殖,高内涵筛选分析仪结合Annexin V-FITC/Hoechst33342,PI/Hoechst33342和Rh123/Hoechst33342双染色法检测细胞形态及膜电位;免疫荧光法检测caspase-3,caspase-9,Bcl-2,Bax的表达水平。结果 XHH能抑制Hep G2细胞增殖,诱导细胞凋亡,降低线粒体膜电位,提高Bax/Bcl-2,使caspase-3,caspase-9表达增加。结论 XHH具有较好的抗Hep G2肿瘤细胞作用,可通过线粒体途径诱导细胞凋亡。     

General gambogic acids inhibited growth of human hepatoma SMMC-7721 cells in vitro and in nude mice

AIM: To study the inhibitory effect of general gambogic acids (GGA) on transplantation tumor SMMC-7721 in experimental animal model and SMMC-7721 cells in vitro. METHODS: Anti-tumor activity of GGA in the experimental transplantation tumor SMMC-7721 was evaluated by relative tumor growth ratio. Cell morphology was observed with inverted microscope and electron microscope. Cell proliferation was measured by MTT assay and the telomerase activity was determined by PCR. RESULTS: In vivo study indicated that GGA (2, 4, and 8 mg/kg, iv, 3 times per week for 3 weeks) displayed an inhibitory effect on the growth of transplantation tumor SMMC-7721 in nude mice compared with the normal saline group (P<0.01). At the concentrations of 0.625-5.0 mg/L, GGA remarkably inhibited the proliferation of SMMC-7721 cells in vitro. GGA 2 mg/L dramatically changed morphology of SMMC-7721 cells and inhibited the telomerase activity in SMMC-7721 cells. CONCLUSION: GGA had inhibitory effect on the growth of SMMC-7721, which might be related to its inhibition of telomerase activity.     

三磷酸腺苷对国人食管癌Eca-109和肝癌SMMC-7721细胞增殖的影响

目的研究三磷酸腺苷(ATP)对人食管癌细胞株Eca-109和人肝癌细胞株SMMC-7721细胞增殖的影响。方法采用MTT法测定ATP、腺苷(ADO)和三磷酸尿苷(UTP)抑制肿瘤细胞增殖的作用,W rights-G iem sa染色观察细胞形态学的改变。结果ATP(0.03~0.3 mmol.L-1)和ADO(0.1~0.3 mmol.L-1)可不同程度地抑制Eca-109和SMMC-7721的增殖,ATP对两株肿瘤细胞增殖的抑制作用均强于ADO。ATP和ADO对Eca-109细胞的最大抑制率分别为86.36%和29.88%,IC50分别为0.056和0.823 mmol.L-1;对SMMC-7721细胞的最大抑制率分别为82.06%和52.84%,IC50分别为0.218和0.517 mmol.L-1。UTP对Eca-109细胞有很弱的抑制增殖作用,最大抑制率仅为18.27%;对SMMC-7721无抗增殖作用。两株细胞经高浓度(0.3 mmol.L-1)ATP处理后,部分SMMC-7721细胞形态出现了明显的凋亡特征,而Eca-109细胞凋亡特征不明显。结论ATP具有较强的抗Eca-109细胞增殖作用,其抗增殖作用主要由ATP自身所致,代谢产物ADO也具有一定的作用;而对于SMMC-7721细胞,ATP可能较大程度地通过降解为ADO而发挥抗增殖作用。     

20(S)-原人参二醇对SMMC-7721细胞体内外作用的研究

目的观察不同剂量的20(S)-原人参二醇(Protopanaxadiol,PPD)在体内外对人肝癌细胞株SMMC-7721抗肿瘤作用。方法建立人肝癌裸鼠皮下移植瘤模型,观察20(S)-原人参二醇的肿瘤抑制作用。MTT比色法检测20(S)-原人参二醇对SMMC-7721细胞的增殖抑制作用,Ho-echst33342核染色观察细胞凋亡形态学改变,采用FITC-An-nexinⅤ/PI双染流式细胞术分析凋亡情况,同时检测Caspase-3活性。结果在体内,PPD可抑制SMMC-7721细胞裸鼠异种移植瘤生长;在体外,PPD对SMMC-7721细胞的增殖具有明显的抑制及诱导其凋亡作用,呈时间和剂量依赖性,Hoechst33342核染色可见凋亡小体,同时伴有Caspase-3活性的增加。结论20(S)-原人参二醇在体内外均可抑制SMMC-7721细胞增殖,并诱导其凋亡,其机制可能通过活化Caspase-3诱导细胞凋亡而发挥抗肿瘤作用。     

Redifferentiation of human hepatoma cell induced by 6-(p-chlorophenyl)-3-[1-(p-chlorophenyl)-5-methyl-1 H-1,2,3-triazol-4-yl]-s-triazolo[3,4-b]-1,3,4-thiadiazole (TDZ)

6-(p-Chlorophenyl)-3-[1-(p-chlorophenyl)-5-methyl-1 H-1,2,3-triazol-4-yl]-s-triazolo[3,4-b]-1,3,4-thiadiazole (TDZ) is a derivative of various substituted s-triazolo[3,4-b]-1,3,4-thiadiazoles, which are associated with diverse pharmacological activities. However, the antitumor activity of TDZ is not well understood. To evaluate its role on tumor cell lines, we have examined the effect of TDZ on two tumor lines: human hepatoma cell (SMMC-7721) in vitro and Sarcoma180 tumor (S180) in vivo. The cytotoxicity of TDZ on human hepatoma cells was assessed using the MTT assay. The inhibition on tumor growth was evaluated by means of trypan blue exclusion test in vitro, and using a Sarcoma180 tumor (S180) animal model in vivo. A scanning electronic microscope was used to discover the morphological changes on cell surface, cell electrophoresis was employed to determine the changes of cell surface negative charges, and alpha-fetoprotein was applied as a biomarker of hepatoma. The effect of TDZ on DNA synthesis was determined by a [3H]-thymidine incorporation assay, and cell cycle distribution by flow cytometry. The IC50 value of TDZ on SMMC-7721 cells was 52.9 microg/ml (48 h). However, TDZ could inhibit the growth of SMMC-7721 cells at concentrations far lower than the IC50 value. Treated with the same low concentrations of TDZ, microvilli on the surface of SMMC-7721 cells decreased obviously, electrophoresis rate of cells reduced from 2.14 microm ms(-1) x V(-1) x cm(-1) of control to 1.54 and 1.56 microm x s(-1) x V-1 x cm(-1), the content of AFP dropped from 205.14 +/- 6.41 ng x mg(-1) Pr to 115.68 +/- 3.47 and 78.57 +/- 2.35 ng mg(-1) Pr, and the DNA replication was inhibited by 26.8% and 45.2%. These results indicated that TDZ may inhibit proliferation of cancer cells by reversing SMMC-7721 cells malignant phenotypic characteristics and inducing redifferentiation. Flow cytometry showed that TDZ-treated cells resulted in a higher proportion of cells in S phase compared with untreated cells, and only when the concentration reached 64 microg/ml, the apoptosis could happen at the rate of 4.2%. Detection of the inhibition of Sarcoma 180 tumor growth in vivo showed that TDZ reduced the tumor weight and 69.08% of the growth was inhibited. TDZ could inhibit the proliferation of tumors in vitro and in vivo; the possible antitumor mechanism might be inducing redifferentiation at a lower dosage on vitro.     

丹参多酚酸盐体外抗肿瘤作用研究

目的:研究丹参多酚酸盐体外抗肿瘤的作用,探讨其可能机制。方法:采用MTT比色法测定注射用丹参多酚酸盐体外对人肝癌细胞株SMMC-7721细胞、人肺腺癌细胞株SPC-A-1细胞、B淋巴瘤细胞株Raji细胞和急性粒细胞白血病细胞株HL-60细胞4种肿瘤细胞株增殖的影响;采用流式细胞仪检测细胞周期的改变及细胞凋亡情况;采用吉姆萨染色及吖啶橙荧光染色观察细胞形态变化。结果:注射用丹参多酚酸盐对SMMC-7721、SPC-A-1、Raji、HL-60细胞增殖均有显著的抑制作用,且呈时间和剂量依赖关系;可诱导SMMC-7721细胞阻滞于S期继而发生细胞凋亡;可观察到细胞逐渐凋亡形态。结论:注射用丹参多酚酸盐有较强的体外抗肿瘤作用,可能是通过作用于细胞周期、诱导肿瘤细胞凋亡来发挥的。     

白藜芦醇对人肝癌细胞株SMMC-7721增殖和凋亡的影响

目的观察白藜芦醇对人肝癌细胞株SMMC-7721增殖和凋亡的影响,并初步探讨其机制。方法用MTT法检测白藜芦醇对SMMC-7721细胞增殖影响的量效与时效关系;应用流式细胞术（FCM）检测细胞凋亡率;比色法测定caspase-3酶活性。结果白藜芦醇（50、100、200μmol·L^-1）处理SMMC-7721细胞48h,呈浓度依赖性抑制SMMC-7721细胞增殖且诱导其凋亡;100μmol·L^-1白藜芦醇处理细胞24、48或72h显著抑制SMMC-7721细胞增殖并诱导其凋亡,且呈时间依赖性。白藜芦醇（50、100、200μmol·L^-1）处理SMMC-7721细胞48h,呈浓度依赖性增加SMMC-7721细胞caspase-3活性。结论白藜芦醇可抑制人肝癌细胞株洲C-7721的增殖,诱导细胞凋亡,其机制与增强细胞内caspase-3活性有关。     

亚硝酸钠对人肝癌细胞增殖与凋亡的影响

目的探讨亚硝酸盐对人肝癌细胞增殖和凋亡作用。方法用不同浓度的亚硝酸钠处理人肝癌SMMC-7721细胞不同时间,用MTT分析细胞增殖,荧光显微镜下观察细胞分裂指数和凋亡率,RT-PCR分析c-myc mRNA变化,Westernblot分析缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)蛋白表达。结果亚硝酸钠诱导SMMC-7721细胞增殖和凋亡呈双相剂量效应,亚硝酸钠在低浓度时(20～200 mg.L-1),刺激细胞增殖,抑制细胞凋亡,在高浓度时(>800 mg.L-1),抑制增殖,促进凋亡。20～200 mg.L-1亚硝酸钠处理细胞可以明显增加c-myc mRNA和HIF-1α蛋白表达。结论亚硝酸钠在一定浓度范围内刺激SMMC-7721细胞增殖,但是超过一定剂量则诱导细胞凋亡。     

三氧化二砷对人肝癌细胞生长及其尿型纤溶酶受体表达的体外研究

目的:体外研究三氧化二砷(As2O3)对人肝癌细胞株SMMC-7721生长及其表达尿型纤溶酶受体(uPAR)的影响。方法:SMMC-7721在不同浓度的As2O3作用不同时间后,采用MTT法检测细胞增殖能力,流式细胞仪检测细胞周期,实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析As2O3对uPARmRNA表达的影响,并设立不加As2O3的对照组。结果:As2O3对SMMC-7721细胞的生长呈明显的抑制作用,且呈时间、浓度依赖性;与对照组比较,As2O3实验组G0/G1期细胞比例明显降低,G2/M期细胞比例提高(P<0.05),uPARmRNA表达量明显减少(P<0.01)。结论:As2O3能有效抑制肝癌细胞株SMMC-7721的生长,下调uPARmRNA的表达可能是其作用机制之一。     

蛇莓中齐墩果酸对肝癌细胞SMMC-7721的抑制作用

目的:探讨蛇莓中齐墩果酸(OA)对人肝癌SMMC-7721细胞增值的抑制作用.方法:建立人肝癌SMMC-7721细胞体外培养模型.MTT法检测不同浓度OA对人肝癌SMMC-7721细胞的影响.结果:与对照组比较,药物组在24h对肝癌细胞具有明显的抑制作用(P<0.05),并在48h内随着浓度的增加,抑制率增加.结论:O...