胶乳增强免疫比浊法测定KL-6的方法学评价

目的对胶乳增强免疫比浊法(LEIA)检测唾液酸化糖链抗原(KL-6)进行方法学评价,判断其能否满足临床要求。方法在贝克曼库尔特AU5421全自动生化分析仪上利用LEIA法检测血清KL-6,参考美国临床实验室标准化协会(CLSI)的标准化评价方案评价LEIA法检测血清KL-6的精密度、回收率、线性范围、抗干扰性、稳定性等指标。结果 LEIA法检测血清KL-6在(50~5000)U/ml范围内线性良好(y=0.9923 x-0.0776,r~2=0.9981),线性范围内偏差10%;高、低浓度样本批内不精密度评价变异系数CV分别为2.60%、2.63%,日间不精密度评价变异系数CV分别为3.13%、4.07%;平均回收率为100.4%;总胆红素≤200mg/l、血红蛋白≤6g/L、脂肪乳≤5%,对该法无明显干扰;试剂在仪器内(2~8)℃的条件下放置,至少可保存稳定29d;与化学发光法比较,回归方程为y=0.9581 x+14.3206,r~2=0.9989,两法高度相关(P0.01)。结论在全自动生化分析仪上利用LEIA法测定KL-6操作简便、快速,检测结果准确可靠、重复好、线形范围较宽,与化学发光法比较有良好的相关性,符合临床实验室要求。     

磁分离酶联免疫法检测AFP

目的建立检测甲胎蛋白(AFP)的磁分离酶联免疫法(Magnetic affinity immunoassay,MAIA)。方法采用双抗体夹心法,用异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate,FITC)和碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,AP)分别标记识别不同表位的两种抗AFP单克隆抗体(mAb)4A3和5H7,以偶联羊抗FITC mAb包被的免疫磁珠作为固相载体,单磷酸酚酞(phenolphthalein monophosphate,PMP)做显色底物,建立检测AFP的MAIA法。结果成功实现了用MAIA法对AFP的定量检测,其检测灵敏度0.2 IU/ml,线性范围0.2-510 IU/ml,批内CV5.5%-9.3%,批间CV1.6%-9.7%。添加回收率101.4%-104.9%,稀释回收率78.3%-123%。与雅培AxSYM及i2 000的检测结果对比,相关系数分别为0.984和0.985。结论MAIA法的性能优于现有的ELISA和RIA试剂盒,接近进口同类试剂的水平,有助于为市场提供一种高质量而价廉的AFP测定试剂盒。     

颗粒增强免疫透射比浊法测定甲胎蛋白方法学评价

目的对定量测定甲胎蛋白(AFP)的颗粒增强免疫透射比浊法(PETIA)进行方法学评价。方法应用OLYMPUS AU5400全自动生化分析仪定量测定AFP,探讨该检测方法的精密度、试剂开瓶稳定性、检测下限、敏感性、线性范围、干扰和准确性;并与SIEMENS CENTAUR电化学发光法(ECLIA)定量测定临床新鲜血清AFP的结果进行相关性分析,同时对其参考区间进行验证。结果 29.95和132.25 ng/mL的新鲜血清测定的批内变异系数(CV)分别为1.67%和1.52%;天间CV分别为7.17%和7.84%;测定下限和敏感性分别为0.52和0.53 ng/mL;5.4～256 ng/mL范围内其测定的线性相关系数(r2)达0.999 4,回归方程为Y=1.014X+1.063 3;高、低水平浓度的定值质控血清测定的相对偏差分别为5.96%和8.40%,远小于卫生部临床检验中心AFP室间质评能力比对试验(PT)评价标准的"靶值±20%";107例临床病例测定结果与SIEMENS化学发光分析仪测定的结果相关性良好,YECLIA=1.138 7XPETIA+2.835 3(r2=0.992 1);一定程度的溶血、黄疸及脂血对该测定无明显干扰;20名健康体检者AFP测定结果均处于厂家推荐的参考区间内。结论 PETIA测定AFP可作为一种简便易行、快捷价廉、准确可靠的临床常规检测方法,特别适合于健康体检时大规模筛查。     

CENTAUR全自动化学发光免疫分析仪性能评价

目的:评价CENTAUR全自动化学发光免疫分析仪性能。方法:通过对不同浓度样品甲状腺激素(T4)、人绒毛膜促性腺激素(HCG)、甲胎蛋白(AFP)含量的测定,对仪器进行精密度、灵敏度、干扰、回收试验。结果:批内CV均小于4%,批间CV均小于5%;T4、HCG、AFP回收率分别为98.7%～103.5%、100.5%～103.4%、97.8%～104.1%,灵敏度分别为3.4nmol/L、2.7mIU/mL、1.4ng/mL;无样品间的交叉污染。结论:该仪器主要指标结果准确,精密度好、灵敏度高、干扰小,具有较好应用前景.     

荧光酶免定量测定甲胎蛋白的临床评价

目的通过ELISA、FEIA和TRFIA三种方法定量测定甲胎蛋白的比较,重点评价生物梅里埃公司全自动荧光酶标免疫分析系统(VIDAS)测定甲胎蛋白的临床应用价值。方法将同一份混合血清分别用ELISA、FEIA和TRFIA法每天测定2次,连续测14d。计算比较批内变异系数和批间变异系数。将高、中、低值60份血清分别用上述三种方法进行检测,比较相关性。将同一份高值混合血清进行6倍比稀释后分别用ELISA、FEIA和TRFIA检测进行线性分析。结果FEIA测混合血清批内为CV3.4%,批间CV4.9%。ELISA测混合血清批内CV为7.6%,批间CV9.1%。TRFIA测混合血清批内为CV2.3%,批间CV2.7%。FFIA法检测与ELISA、TRFIA法检测结果高度相关(r值分别为0.942和0.986)。ELISA、FEIA和TRFIA在各自的线性范围内线性良好。结论TRFIA变异系数最小,其次分别是FEIA和ELISA。三种方法高度相关,可供临床使用。表1VIDAS和ELISA检测混合血清的批内和批间变异结果比较检测结果FEIA批内批间ELISA批内批间TRFIA批内批间AFP(ng/ml)67.0±2.366.2±3.261.2±4.761.3±5.665.9±1.565.2±1.8CV(%)3.44.97.69.12.32.7     

免疫透射比浊法测定抗链球菌溶血素O和类风湿因子

目的建立免疫透射比浊法测定ASO、RF的方法。方法用免疫透射比浊法测定ASO、RF,并对其重复性、准确性、线性范围、相关性实验、干扰实验加以评价。结果高、中、低三种浓度ASO和RF批内CV分别为2.8%,2.9%,3.1%和3.0%,3.2%,3.3%;批间CV为3.9%,4.1%,4.1%和4.1%,4.3%,4.4%;线性范围分别为30～800U/L,10～90U/L;平均回收率分别为100.5%和100.1%。与特种蛋白仪测定结果具有很好的相关性(P＜0.05)。一定程度的溶血、脂血、黄疸对ASO、RF的测定无明显干扰。结论免疫透射比浊法的精确度好,快速,灵敏,与免疫散射比浊法有很好的相关性,可以作为测定ASO、RF的常规方法。     

两种磁分离酶联免疫法检测血清甲胎蛋白

目的改进磁分离酶联免疫法(MEIA)。方法采取预加微量标本、将磁铁置于微孔条侧壁和扣除上清液A值法,改良MEIA并建立了"差异磁分离酶联免疫法"(differential magnetic enzyme immunoassay,DMEIA)。求DMEIA法的线性范围、回归方程、变异系数(CV),比较了MEIA和DMEIA配对检测100份血清AFP结果差异。结果 DMEIA法检测AFP的回归方程Y=3.94X+16.45,r=0.992,线性范围5～500ng/mL,批内CV=7.7%,批间CV=8.5%;DMEIA法和MEIA法测定血清AFP值差异无统计学意义(t检验,P0.05),直线回归方程Y=3.418X+70,r=0.981,两法相关良好;检测原倍高浓度AFP时DMEIA法未出现(MEIA法出现)hook效应。结论 DMEIA法可克服hook效应,可用普通微孔板和酶标仪比色,可省去洗涤步骤,检测AFP结果(500ng/mL时)与MEIA法无明显差异。     

差异磁分离酶联免疫法检测血清甲胎蛋白的研究

目的 改进磁分离酶联免疫法(MEIA).方法 采取预加微量标本、将磁铁置于微孔侧壁和扣除上清液A值法,改进MEIA建立了差异磁分离酶联免疫法(DMEIA).求DMEIA回归方程、线性范围、变异系数(CV),比较DMEIA和全自动电化学发光法(ECLIA)配对检测100份血清AFP结果差异.结果 DMEIA检测AFP的回归方程Y=3.94X+16.45,r=0.992,线性范围5～500 ng/ml,批内CV=7.7%,批间CV=8.5%;DMEIA和ECLIA测定血清AFP值差异无统计学意义(t检验,P>0.05);检测原倍高浓度AFP时(21 460～501 690 ng/ml)两法均未出现hook效应.结论 DMEIA可基本克服hook效应,可用普通微孔板和酶标仪比色,可省去洗涤,检测AFP结果接近ECLIA,但线性范围小于ECLIA.     

贝克曼DXI-800化学发光免疫分析仪性能评价

目的评价DXI-800化学发光免疫分析仪的性能。方法采用DXI-800化学发光免疫分析仪检测甲胎蛋白（AFP）、糖链抗原125（CA125）、CA153,对该仪器的精密度、准确度、线性试验及携带污染率进行测试。结果 DXI-800化学发光免疫分析仪的批内精密度变异系数（CV）分别为3.15%、2.58%、1.92%,批间精密度CV分别为4.29%、3.65%、2.4%。AFP、CA125、CA153检测的相对偏差分别为3.45%、2.66%、-2.61%。其线性回归系数大于0.99,相关性良好。各测定项目的携带污染率均小于2%,属于可接受范围。结论 DXI-800化学发光免疫分析仪具有良好的准确性、重复性和线性。     

甲胎蛋白与CA 19-9双标记时间分辨荧光免疫分析法的建立

目的建立钐(Sm3+)标记抗甲胎蛋白(AFP)单克隆抗体(单抗)和铕(Eu3+)标记抗糖类抗原19-9(CA19-9)单抗的双标记时间分辨荧光免疫分析(TrFIA)法。方法将抗AFP单抗与抗CA19-9单抗混合包被96孔板作为捕获抗体,用Sm3+标记抗AFP单抗、Eu3+标记抗CA19-9单抗作为检测抗体,建立同步检测AFP/CA19-9的TrFIA法。结果建立的TrFIA法检测AFP/CA19-9的灵敏度分别为0.3 ng/mL和2.5 U/mL。AFP分析内和分析间变异系数(CV)分别为2.6%～5.9%和4.3%～8.1%,CA19-9分析内和分析间CV分别为4.9%～5.6%和5.0%～6.3%。分别用建立的TrFIA法与Perkin-Elmer公司解离增强镧系荧光免疫分析(DELFIA)法同时测定血清样本,两法AFP与CA19-9的相关系数分别为0.99与0.98。结论建立的同步检测AFP与CA19-9的TrFIA法灵敏、简便、准确,有助于消化道肿瘤和睾丸癌等的辅助诊断。     

胶乳增强免疫透射比浊法测定全血糖化血红蛋白A1c

目的建立胶乳增强免疫透射比浊法测定全血中的糖化血红蛋白A1c.方法用免疫透射比浊法测定糖化血红蛋白A1c,并对其重复性、准确性、线性范围、相关性实验和干扰实验加以评价.结果高、低浓度的糖化血红蛋白A1c批内CV为3.2%和4.1%;批间CV为4.6%和5.8%,总CV分别为6.7%和4.6%.线性范围为2%～15%;平均回收率分别为106.7%和102.4%.与微柱法测定结果比较具有良好的相关性(P>0.05).一定程度脂浊和黄疸对测定无明显干扰,抗坏血酸对测定无影响.结论胶乳增强免疫透射比浊法测定糖化血红蛋白A1c具有较好精密度和准确度,并且快速、灵敏和可靠,适合临床实验室常规开展.     

胶乳增强免疫比浊法测定胃蛋白酶原Ⅱ的不精密度和线性观察

目的对胶乳增强免疫比浊法测定胃蛋白酶原Ⅱ(PGⅡ)进行初步方法学评价,为临床应用提供依据。方法依据美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)EP5-A及EP10-A2文件提供的方法,对胶乳增强免疫比浊法测定PGⅡ进行初步的评价。结果 PGⅡ的低值样本批内变异系数(CV)为2.05%、批间CV为1.60%、日间CV为3.92%、总CV为4.70%;高值样本批内CV为1.70%、批间CV为1.21%、日间CV为3.79%、总CV为4.32%。当PGⅡ浓度分别为9.6、24.7、39.8μg/L时,相对偏倚分别为-0.18、-0.47、-0.39μg/L,总不精密度分别为4.98%、2.39%、2.71%。测试间的携带污染差异无统计学意义(P>0.05)。线性回归方程为Y=0.975 7X-0.016 8,决定系数(R2)=0.998 7。结论胶乳增强免疫比浊法测定PGⅡ的精密度符合EP5-A文件标准,具有良好的重复性。线性、偏倚、总不精密度及抗交叉污染能力均达到EP10-A2文件标准,符合临床应用要求,适用于实验室常规测定。     

应用CLSI EP15-A2文件评价BNP和NT-proBNP测定的精密度性能

目的评价西门子ADVIA Centaur化学发光免疫系统检测B型利钠肽(BNP)和罗氏Cobas E601检测N末端B型利钠肽原(NT-proBNP)的精密度性能。方法使用美国临床与实验室标准化协会(CLSI)EP15-A2文件,选用5个不同浓度的BNP和NT-proBNP样本,每个样本每天批内重复测定4次,持续5天,计算批内不精密度(批内CV)和总不精密度(总CV),并与厂商声明的不精密度进行比较。结果 BNP浓度为30.6、70.3、452.2、1069.4、1736.8pg/mL时批内CV分别为2.3%、1.7%、1.8%、1.3%、1.1%,总CV分别为3.5%、3.2%、2.7%、2.6%、2.3%,均低于厂家声明的不精密度;NT-proBNP浓度为72.9、123.9、466.8、2123.9、4322.0pg/mL时批内CV分别为2.2%、1.3%、1.9%、1.2%、1.1%,总CV分别为2.9%、1.9%、2.3%、1.8%、1.5%,NT-proBNP浓度为72.9pg/mL时的不精密度虽高于厂商声明的不精密度,但小于经计算得到的验证值,说明与厂家声明的不精密度无差异,其他浓度均低于厂家声明的不精密度。结论化学发光免疫法测定BNP和电化学发光免疫法测定NT-proBNP测定的精密度性能良好,可满足临床要求。应用EP15-A2文件验证厂商声明的不精密度性能操作简便,经济实用。     

两种糖化血红蛋白分析方法的评价

目的对离子交换高压液相层析法与金标免疫渗滤法检测糖化血红蛋白进行方法学分析。方法用离子交换高压液相层析法(X)和金标免疫渗滤法(Y)测定糖化血红蛋白进行线性范围、回收率、精密度、干扰因素、相关性及参考范围的分析。结果离子交换高效液相色谱法(HPLC法)与金标免疫渗滤法(金标法)的线性范围分别为4.3%~17.0%和3.6%~12.5%,两种方法的回收率均为101.3%,批内、批间的变异系数(CV)均<5%;10.2%mmol/L三酰甘油、684μmol/L总胆红素和HbF对两种方法均无干扰。金标法测定糖化血红蛋白的结果较HPLC法明显偏低(P<0.01);回归方程Y=0.89X 0.24(r=0.94,P<0.01);HPLC法与金标法的参考范围分别为4.2%~6.7%和4.1%~6.4%。结论金标法与HPLC法相比,糖化血红蛋白检测结果明显偏低。     

流式荧光免疫法检测多肿瘤标志物的方法学评价

目的评价流式荧光免疫法在多肿瘤标志物定量测定中的可靠性。方法用流式荧光免疫法对试剂盒精密度、线性、携带污染率、抗干扰性等指标进行评价,同时将LuminexTM-100与Bio-Ekon SerozymeⅠ的结果进行比较。结果本方法化学性能的评价表明,批内变异系数(CV)均<10%,批间CV均<14%。线性良好(r>0.99)。携带污染率均<0.5%。血红蛋白(Hb)、胆红素(Bil)、三酰甘油(TG)对测定结果无显著干扰(P>0.05)。与Bio-Ekon SerozymeⅠ内分泌定量分析仪及配套试剂相关性良好(r>0.975)。对506名年龄在24~84岁健康体检人员标本用本方法进行多肿瘤标志物测定,正常参考值分别为甲胎蛋白(AFP)<15 ng/mL、糖类抗原125(CA125)<35 U/mL、癌胚抗原(CEA)<5 ng/mL、糖类抗原199(CA199)<35 U/mL、前列腺特异抗原(PSA)<4 ng/mL。结论本方法测定结果准确、可靠且操作简便、快速,适宜于临床检测推广。     

酶联荧光分析法测定肌钙蛋白I的临床应用

目的 探讨酶联荧光分析(ELFA)法测定肌钙蛋白I(cTnI)的临床应用。方法 分别采用ELFA法和化学发光免疫分析(CLIA)法测定血清样品中cTnI的浓度,对ELFA法进行精密度试验、线性试验、回收试验和干扰试验;并对ELFA法与CLIA法测定cTnI的结果进行相关性分析。结果 ELFA法测定cTnI浓度,高值(30.00μg/L cTnI)和低值(0.12μg/L cTnI)的批内变异系数(CV)分别为2.81%和1.62%,批间CV分别为5.67%和3.52%。ELFA法检测cTnI的可信检测范围为0.00~30.00μg/L。当总胆红素浓度小于450μmol/L,血红蛋白浓度小于1.5g/L,三酰甘油浓度小于7.0mmol/L时,ELFA法测定cTnI无干扰。ELFA法与CLIA法测定cTnI浓度具有良好的相关性(r=0.971)。结论 ELFA法具有较好的精密度、回收率和线性范围,与CLIA法具有较好的相关性,且检测快速简便,适用于急诊检验,能满足临床要求。     

化学发光法检测血清甲胎蛋白的方法学评价

目的对化学发光免疫分析法（CUA）测定甲胎蛋白（AFP）进行方法学评价。方法用CLIA测定178例血清的AFP值，同时也用酶联免疫吸附试验（ELISA）对AFP进行测定。结果CLIA测定AFP的灵敏度为1．3ng／mL，低、中、高浓度的批内CV分别为4．2％、2．3％、1．6％；批间CV分别为4．8％、3．2％、2．5％。回收率为96％～104％，理论值与实测值的回归方程为Y=0．1427＋0．9992X，相关系数r=0．9900（P〈0．001）。ROC曲线显示CLIA测定的敏感性和特异性均在90％以上，曲线下面积为0．992，显著高于ELISA法（P〈0．01）。结论CLIA是目前测定AFP较好的方法，适用于临床对AFP进行检测，可对原发性肝癌进行明确诊断。     

均相酶增强免疫法监测丙戊酸浓度及临床应用

目的探讨均相酶增强免疫(Emit)法监测丙戊酸的方法评价及其在癫痫患者中的临床意义。方法采用均相酶增强免疫法测定质控品和癫痫患者血清丙戊酸浓度,并对测定结果进行分析。结果均相酶增强免疫法测定丙戊酸的精密度;批内变异系数(CV)值为2.52%～5.70%,批间CV值为2.70%～4.85%;回收率为98.4%～105.4%,平均102.1%。210例癫痫患者391例次丙戊酸血药浓度测定中,205例次(52.4%)丙戊酸血药浓度在有效治疗范围(50～100mg/L)内;152例次(38.9%)血药浓度小于50mg/L;34例次(8.7%)血药浓度大于100mg/L。结论均相酶增强免疫法监测丙戊酸浓度简便、可行、快速,是一种理想的检测方法;合理设定丙戊酸有效血药浓度范围(50～100mg/L),临床治疗过程加强丙戊酸血药浓度监测,是保证疗效和安全的重要措施。     

EIA定量检测甲状腺球蛋白抗体和甲状腺微粒体抗体在临床中的应用

目的 探讨酶免疫法定量检测血清抗甲状腺球蛋白抗体(TG-Ab)和抗甲状腺微粒体抗体(TM-Ab)在临床应用价值.方法 采用酶免疫法(EIA)定量检测血清TG-Ab和TM-Ab,并对检测条件、干扰因素、精密度和准确度进行试验探讨.结果 EIA定量测定血清TG-Ab和TM-Ab分别在880IU/ml和665IU/ml以下线性良好,TG-Ab批内和批间CV分别为3.2%和7.1%;TM-Ab批内和批间CV分别为 3.9%和7.6%.测得平均回收率为TG-Ab:92.4%、TM-Ab:101.2%.血清标本4℃存放一周内,对测定结果 无影响.胆红素、血红蛋白在0.5g/L对测定无干扰,Hb浓度＞0.5g/L对TM-Ab产生正干扰.结论 EIA定量检测能较准确检测血清甲状腺自身抗体水平,操作简便,结果准确,符合临床常规使用要求,对自身免疫性甲状腺疾病的诊断、疗效观察及预后具有临床应用价值.     

化学发光免疫分析测定EB病毒衣壳抗原IgM抗体的方法学评价

目的　对化学发光免疫分析法 (chemiluminescentimmunoassay ,CLIA)测定EB病毒衣壳抗原的IgM抗体 (EBV VCAIgM)进行方法学评价 ,同时将其对儿童传染性单核细胞增多症 (infectiousmononucleosis,IM)的诊断准确性与传统的ELISA测定相比较。方法　在全自动CLIA仪上测定 88例血清标本 ,同时用ELISA法测定。结果　CLIA测定EBV VCAIgM的灵敏度为 0 .6 4U/ml;低、中、高浓度时的批内CV分别为 4 .1%、1.7%和 1.4 % ,批间CV分别为 4 .9%、2 .8%和 2 .4 % ;回收率为 93%～ 10 7% ,理论值与实测值间的回归方程为Y =0 .0 96 7 1.0 0 93X ,相关系数r =0 .9996 (P <0 .0 0 0 1) ;ROC曲线显示CLIA测定敏感性和特异性均在 90 %以上 ,曲线下面积为 0 .992 ,显著高于ELISA(P <0 .0 5 )。结论　CLIA是目前测定EBV VCAIgM较好的方法 ,适用于临床检测 ,可提高小儿IM诊断水平