小鼠白念珠菌性阴道炎局部组织中Th1/Th2因子的表达

目的：研究小鼠白念珠菌性阴道炎局部组织中Th1/Th2细胞因子的表达。方法：构建ICR小鼠白念珠菌性阴道炎模型,采用RT-PCR方法检测不同时间小鼠阴道局部组织中Th1/Th2细胞因子（IL-2/IL-4、IL-10、TGF-β1）的表达。结果：雌激素化组接种小鼠阴道局部组织中IL-2水平在早期显著升高,IL-4则轻度升高,但均很快开始下降。IL-10的水平在感染后期缓慢升高并保持在高水平,而TGF-β1在整个感染过程中均在高水平且高于其他因子。结论：IL-2在感染早期及IL-10在后期的高表达分别与其参与清除及维持白念珠菌感染有关。TGF-β1可能在阴道黏膜缺乏针对白念珠菌的明显细胞免疫时发挥重要作用。     

Toll 样受体2和4在抗孢子丝菌早期免疫阶段小鼠皮肤中的表达

目的 探讨小鼠皮肤Toll 样受体（TLR）2和TLR4在抗孢子丝菌早期免疫阶段的表达。 方法 实时荧光定量PCR检测BALB/c小鼠皮肤早期免疫阶段的TLR2和TLR4 mRNA表达水平,同时通过免疫组化检测两者蛋白表达水平。 结果 孢子丝菌分生孢子接种小鼠皮肤后,TLR2 mRNA转录水平在6 h后逐渐升高至对照组的18.8倍,24 h达高峰,为对照组的34倍;TLR4 mRNA转录水平在6 h内达高峰,为对照组的56.7倍,此后逐渐下降。免疫组化结果显示,孢子丝菌处理组小鼠皮肤角质形成细胞及巨噬细胞均可表达TLR2和TLR4蛋白,对照组不表达。血清中白细胞介素12及肿瘤坏死因子α在实验组和对照组的表达差异无统计学意义。 结论 TLR2和TLR4参与了小鼠皮肤角质形成细胞和巨噬细胞对孢子丝菌的识别,有助于免疫防御作用。     

不同免疫状态下小鼠白念珠菌性阴道炎局部组织中Th1/Th2因子的表达

目的：研究不同免疫状态下小鼠白念珠菌性阴道炎局部组织中Th1/Th2因子的表达。方法：构建ICR小鼠白念珠菌性阴道炎模型D组及地塞米松构建免疫抑制鼠模型G组；采用RT-PCR方法检测D、G、H组（未雌激素化组感染）不同时间局部阴道组织中Th1／Th2因子表达。结果：正常免疫组D组局部组织中IL-2在感染早期升高较为显著，而IL-10仅在后期有短暂的升高。TGF-β1则有持续较高水平的表达。免疫抑制组G组的IL-2水平则明显下降，而IL-4、m一10和TGF-β1则在接种后不同的时间点表达水平不同程度上高于D组。结论：IL-2在感染早期的高表达与其参与清除白念珠菌有关；IL-4、IL-10的表达增加明显提高小鼠对白念珠菌的易感染性。     

念珠菌性阴道炎模型小鼠阴道黏膜中CD11c+树突状细胞的变化

目的:研究白念珠菌感染后,小鼠阴道黏膜树突状细胞(DC)的变化。方法:8~10周龄ICR系小鼠,建立激素依赖型小鼠念珠菌性阴道炎模型,于感染后第2、4、7、14、21d取材,进行阴道灌洗液真菌载量分析及组织病理观察并用免疫组化方法检测小鼠阴道黏膜DC的变化。结果:实验组小鼠阴道灌洗液真菌载量显示,自接种后第2天起即有高水平的CFU计数,并持续到观察期末;阴道组织病理学检查可见大量菌丝附着黏膜表面和黏膜组织内,并有炎性细胞浸润;白念珠菌感染后小鼠阴道黏膜内CD11c DC平均光密度值明显高于对照组(P<0.05)。结论:白念珠菌感染后小鼠阴道黏膜CD11c DC的表达增高,CD11c DC可能参与宿主抗念珠菌感染的免疫机制。     

外阴阴道念珠菌病小鼠模型阴道组织趋化因子MCP-1和MIP-2 mRNA水平测定

目的 探讨趋化因子在白念珠菌性阴道炎模型小鼠阴道组织中的表达情况.方法 采用雌激素化小鼠念珠菌性阴道炎模型,另以雌激素化但未接种白念珠菌组、接种等量白念珠菌但未雌激素化组为对照组,动态观察小鼠阴道灌洗液的真菌生长情况,并在接种后不同时间随机摘取小鼠的阴道组织,半定量RT-PCR方法检测组织内单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、巨噬细胞炎性蛋白-2(MIP-2)mRNA的表达情况.结果 与未雌激素化的小鼠比较,雌激素化并接种白念珠菌小鼠阴道灌洗液自第2天开始即可发现念珠菌生长并持续到接种后21d,自第4天起阴道组织内有高水平的MCP-1 mRNA表达,并持续高于另外两组直到观察期末.3组小鼠的MIP-2 mRNA表达水平在接种后第2天明显高于完全阴性对照组,但以后各时间点3组间两两比较差异无统计学意义.结论 MCP-1 mRNA高水平表达可能与白念珠菌持续的阴道感染过程有关,而MIP-2在感染过程中的作用不明显.     

白介素-27在小鼠白念珠菌性阴道炎局部的表达及其意义

目的：了解小鼠白念珠菌性阴道炎阴道局部白介素-27（IL-27）的水平变化特点和在感染中的作用以及与小鼠机体免疫状况的关系。方法：建立免疫系统正常（A组）与免疫抑制雌激素化（B组）感染小鼠模型，另设未雌激素化免疫系统正常感染对照组（c组），用逆转录聚合酶链检测鼠模型阴道组织中IL-27p28mRNA水平的变化。结果：A组在感染后第4、第7和第14dIL-27p28mRNA的表达高于C组，差异有显著性（P〈0．01）；B组在感染后第7dIL-27p28mRNA的表达高于C组，差异有显著性（P〈0．01）。A组在第4和第14dIL-27p28mRNA的表达水平较B组高（P〈0．01）。A组和B组在感染的第2和第4dCFU与局部IL-27p28mRNA水平成负相关（P〈0．01或P〈0．05）。结论：阴道局部IL-27可能参与实验性小鼠白念珠菌阴道感染的发病，并起到一定的保护作用。免疫抑制状态下白念珠菌易感性的增加可能与IL-27局部组织含量减少有一定关系。     

白念珠菌对高糖环境下HaCaT细胞表达TLR2 mRNA的影响

目的观察在高糖环境下白念珠菌对人永生化角质形成细胞(Ha Ca T)表达TLR2mRNA的影响。方法分别在高糖和低糖DMEM培养基下共同培养Ha Ca T细胞与白念珠菌菌悬液,分别为高糖(HG)实验组,低糖(LG)实验组。并将两种培养基下未受白念珠菌感染的Ha Ca T细胞做对照,分别为HG对照组,LG对照组。观察Ha Ca T细胞与白念珠菌培养情况,并在第1h、6h、24h通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)的方法检测4组中TLR2 mRNA表达量的变化。结果在第1h、6h、24h,TLR2 mRNA表达量始终表现为LG实验组高于HG实验组,LG对照组高于HG对照组,且实验组高于对照组(P0.01)。HG实验组与LG实验组中TLR2mRNA均于第1h开始增多,6h达到高峰,到第24h均有所下降;且HG实验组在第24h与LG实验组相比下降得更明显(P0.01);而HG对照组与LG对照组则始终无明显改变(P0.01)。结论 Ha Ca T细胞感染白念珠菌后,高糖环境不利于角质形成细胞TLR2 mRNA的分泌,推测糖尿病患者易患白念珠菌感染性皮肤病与Ha Ca T细胞表达TLR2 mRNA减少有关。     

人类唾液在鼠口腔白念珠菌感染中作用的研究

目的:研究人类唾液在涎腺正常小鼠和口腔干燥症小鼠口腔白念珠菌感染中的作用。方法:采用局部接种的方法于涎腺正常小鼠和口腔干燥症小鼠建立口腔黏膜白念珠菌感染模型,在不同时间点,给予小鼠口腔无菌蒸馏水和不同性质的唾液刺激,3天后用平皿系列稀释法检测小鼠口腔组织菌落形成单位(CFU)数目并对舌表面白斑面积进行评分。结果:①在涎腺正常小鼠中,处理组口腔CFU与白斑面积评分明显低于对照组1、2、3(P<0.05)。②口腔干燥症小鼠,处理组口腔CFU与白斑面积评分明显低于对照组(P<0.05)。结论:人类唾液在白念珠菌黏附于鼠口腔黏膜及口腔白念珠菌病的发生中具有防御作用。     

基质细胞衍生因子-1及受体CXCR4在阴道念珠菌病小鼠模型中的表达

目的 检测基质细胞衍生因子-1（SDF-1）及其受体CXCR4在阴道念珠菌病小鼠模型阴道组织及腰引流淋巴结中的表达情况。方法 采用雌激素化阴道念珠菌病小鼠模型，雌性昆明小鼠（80只）随机分四组，A组（雌激素处理感染组）、B组（雌激素处理未感染组）、C组（未用雌激素处理感染组）、正常对照组（5只）。前三组又再分为接种白念珠菌后第2、4、7、14和21天组（各5只）。接种后不同时间点随机取小鼠阴道组织及腰淋巴结，以RT-PCR及免疫组化SABC法检测SDF-1及CXCR4 mRNA及蛋白水平的表达。结果 （1）RT-PCR：与正常小鼠相比，雌激素（B组）对SDF-1及CXCR4 mRNA表达无影响。①小鼠阴道组织：与B组相比，A组小鼠接种后各时间点均见SDF-1 mRNA表达明显增加（F ＝ 114.87，P < 0.01），第14天CXCR4 mRNA明显增加（t = 15.61，P < 0.01）；与正常小鼠相比，C组小鼠接种后第2，4， 7天，SDF-1 mRNA明显增加；第4 ~ 21天CXCR4 mRNA均明显增加。②腰淋巴结：与B组相比，A组小鼠接种后第2天和7 ~ 21天SDF-1 mRNA明显增加（F ＝ 865.62，P < 0.01），CXCR4 mRNA于各时间点表达均增加（F ＝ 161.30，P < 0.01）；与正常小鼠相比，C组小鼠接种后SDF-1 mRNA表达无明显改变（P > 0.05）；CXCR4 mRNA于第7天和14天明显增加（P < 0.05）。（2）免疫组化：A组小鼠阴道黏膜中SDF-1及CXCR4表达在接种后第2天即开始增加，第7天时达高峰，第14天和21天开始下降，但均明显高于对照组（P < 0.05）。结论 感染组小鼠阴道黏膜及腰淋巴结中SDF-1及CXCR4的mRNA及蛋白水平均明显升高。     

系统性白念珠菌感染小鼠IL-12和IL-23的表达

目的了解系统性白念珠菌感染小鼠IL-12和IL-23的表达特征,探讨IL-23在抗白念珠菌系统感染中的作用,并重新认识和评价IL-12的作用。方法通过尾静脉接种白念珠菌建立小鼠白念珠菌系统感染模型,观察小鼠肾脏的病理变化,RT-PCR法检测小鼠肾脏IL-23及IL-12mRNA的相对表达水平,平皿稀释法检测肾脏内菌落形成单位(CFU)。结果IL-12mRNA表达水平在初次感染后第1、3天明显升高(P<0.05),感染后第7天基本正常。IL-23mRNA水平在初次感染后的第1天无明显改变(P>0.05),感染后第3、7天明显升高(P<0.05),而再次感染中其mRNA始终呈现高表达(P<0.05)。结论IL-12和IL-23均参与I型免疫反应,有效抵御白念珠菌系统感染,IL-12可能在炎症反应的早期发挥重要作用,而IL-23可能在炎症反应的后期发挥重要作用。     

单核细胞趋化蛋白-1及其受体在阴道念珠菌病小鼠模型中的表达

目的 探讨单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)及其受体CC趋化因子受体2(CC chemokine receptor 2.CCR2)在小鼠阴道念珠菌病发病中的作用.方法 建立阴道念珠菌病小鼠模型.以RT-PCR及ELISA方法检测小鼠阴道及腰淋巴结中MCP-1及CCR2的表达.结果 与正常小鼠相比,雌激素对MCP-1及CCR2的表达无明显影响.所有感染组小鼠阴道组织MCP-1的mRNA和蛋白水平均明显升高,其CCR2 mRNA水平亦相应升高;与之相反,所有感染组小鼠的引流腰淋巴结MCP-1的浓度与基础水平相比无明显改变,而雌激素处理感染组小鼠CCR2在接种后7～21d明显升高.结论 MCP-1及其受体CCR2可能在局部刚道黏膜白念珠菌感染中起一定的作用.     

白念珠菌对角质形成细胞Toll样受体2表达的影响

目的:探讨白念珠菌和甘露聚糖对人角质形成细胞Toll样受体2(TLR2)表达的影响。方法:用白念活菌和甘露聚糖分别刺激培养的人角质形成细胞24h,然后用逆转录聚合酶链反应(RTPCR)检测细胞TLR2mRNA表达,免疫组化SP法检测TLR2蛋白表达,并进行半定量分析。结果:正常培养的人角质形成细胞有TLR2mRNA和蛋白表达,白念珠菌和甘露聚糖刺激角质形成细胞24h后,TLR2表达量没有统计学差异(P>0.05)。结论:角质形成细胞有TLR2mRNA和蛋白水平的组成性表达,白念珠菌和甘露聚糖对TLRR2表达均无明显影响,推测角质形成细胞表面可能存在多个识别念珠菌及其产物甘露聚糖的受体,TLR2只是其中之一。     

Candida albicans phospholipomannan triggers inflammatory responses of human keratinocytes through Toll-like receptor 2

Abstract:  The Toll-like receptors (TLRs) play an important role in the recognition of Candida albicans components and activation of innate immunity. Phospholipomannan (PLM), a glycolipid, is expressed at the surface of C. albicans cell wall, which acts as a member of the pathogen-associated molecular patterns family. In this study, we sought to clarify whether C. albicans -native PLM could induce an inflammation response in human keratinocytes and to determine the underlying mechanisms. Exposure of cultured human primary keratinocytes to PLM led to the increased gene expression and secretion of proinflammatory cytokines (IL-6) and chemokines (IL-8). PLM hydrolysed with β- d -mannoside mannohydrolase failed to induce gene expression and secretion of IL-6 and IL-8. PLM up-regulated the mRNA and protein levels of TLR2, whereas the mRNA level of TLR4 was not altered. Keratinocytes challenged with PLM resulted in the activation of NF-κB and mitogen-activated protein kinase (MAPKs) including p38. Anti-TLR2 neutralizing antibody, NFκB and p38MAPK inhibitors blocked the PLM-induced secretion of IL-6, IL-8 in keratinocytes, but no such effect was observed in pretreatment with anti-TLR4-neutralizing antibody and lipopolysaccharide inhibitor (polymyxin B). These data suggest C. albicans -native PLM may contribute to the inflammatory responses of cutaneous candidiasis in the TLR2-NF-κB and p38MAPK signalling pathway dependent manner.     

HIV-Protease inhibitors reduce cell adherence of Candida albicans strains by inhibition of yeast secreted aspartic proteases

Since the introduction of new anti-retroviral agents such as human immunodeficiency virus (HIV) protease inhibitors, oropharyngeal candidiasis is less often observed in acquired immune deficiency syndrome patients. Secretory aspartic proteases of Candida albicans, which have similarities to the HIV aspartic proteases, are pathogenicity factors that have been intensively investigated in recent years. The inhibitory effect of four different HIV aspartic protease inhibitors (ritonavir, saquinavir, indinavir, and nelfinavir), on the activity of different Candida albicans secretory aspartic proteases was demonstrated. These anti-retroviral agents were able to inhibit Candida albicans secretory aspartic proteases 1, 2, and 3 which are involved in Candida adherence. As a consequence of these results we used selected HIV protease inhibitors in an adherence assay of Candida cells to epithelial cells. Ritonavir and saquinavir inhibited adherence of Candida albicans under the chosen experimental conditions similarly to the in vitro results, whereas indinavir had no effect. This inhibition was shown to be concentration dependent. The specificity of these effects with respect to the secretory aspartic proteases was demonstrated by competitive binding experiments using purified recombinant secretory aspartic proteases. On the basis of these studies we conclude that lower rates of oropharyngeal candidiasis in individuals receiving potent anti-retroviral therapy could reflect not only an improvement in the immune system but also direct inhibition of Candida secretory aspartic proteases by HIV protease inhibitors.     

白念珠菌对角质形成细胞β防御素-2 mRNA表达的影响

目的 探讨白念珠菌及其菌体成分对人角质形成细胞β防御素-2表达的影响。方法 采用酶解、反复冻融、超声破碎和超速离心等方法制备真菌成分;用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测白念珠菌及其菌体成分刺激人角质形成细胞24h后β防御素-2mRNA表达。结果 正常培养的人角质形成细胞和角质形成细胞永生细胞系HaCaT均有β防御素-2mRNA的少量表达,白念珠菌、白念珠菌细胞壁提取物和纯甘露聚糖可以使β防御素-2mRNA表达增强(P值分别<0.01、0.05和0.01),而白念珠菌培养上清液和细胞浆提取物对β防御素-2表达无明显影响(P>0.05)。结论 白念珠菌可上调角质形成细胞β防御素-2mRNA的表达,甘露聚糖可能是起诱导作用的活性成分。角质形成细胞通过表达β防御素-2在皮肤黏膜的抗感染防御机制中发挥重要作用。